MATERIALES

 Bata de laboratorio
 Gotero
 Calculadora
 Cámara fotográfica (Sony Xperia Tx)
 Planta de elodea
 Cinco tubos de ensayo con desprendimiento
 Bicarbonatos de sodio
 Colorantes de color (rojo, azul y verde)
 Papel aluminio
 Acuario o vaso de precipitados de 1000 cm3
 Una lámpara
 Microscopio
 Porta y cubreobjetos
 Una solución diluida de rojo fenol
 Un pitillo
 Mortero
 Tubo de ensayo de 50 cm3
 Tubo de ensayo de 10 cm3
 Pipeta pasteur con bomba
 Tubo capilar
 2 pipetas de 5 cm3 y 1 de 10 cm3
 Papel de cromatografía o papel Wattman No. 1 de 22 x 1,5 cm
 Ganchos o clips
 Hojas de espinaca fresca
 Acetona concentrada
 Agua destilada
 Éter de petróleo
 Solvente para la cromatografía: Acetona: éter de petróleo (10:90 por volumen)
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PROCEDIMIENTO
Bicarbonato Inyección de
Fotosíntesis y
de Sodio + aire para
Pigmentos Erlenmeyer
Azul de
Vegetales adicionar CO2
Bromotimol

Provisionar
Esperar por 1 erlenmeyer Inserción de
Lámpara
hora 1/2 con tapón Elodea
provisto

Cálculo de
Segundo Cromatografía Machacar
oxígeno
procedimiento Pigmentos Espinana
desprendido

Colocar en la En papel de
Revolver con
bureta con cromatografía Separar
acetona y éter
papel de inyectar componentes
de petroleo
celulosa pigmentos

Análisis y
Esperar por 30 Dejar secar y Elaboración de
anotación de
minutos calcular Rf informe
resultados

2
 FOTOSÍNTESIS Y PIGMENTOS VEGETALES

RESULTADOS

Para representar con mayor claridad el proceso de la fotosíntesis de las plantas y los pigmentos vegetales que
presentan, la sintetizamos con la siguiente fórmula:

6 CO2 + 6 H2O → C6H12O6 + 6 O2 + H2O

La fotosíntesis es un proceso en virtud del cual los organismos con clorofila, como las plantas verdes, las algas y
algunas bacterias, capturan energía en forma de luz y la transforman en energía química.

La fotosíntesis se realiza en dos etapas: una serie de reacciones que dependen de la luz y son independientes de la
temperatura, y otra serie que dependen de la temperatura y son independientes de la luz.

1. USO DEL DIÓXIDO DE CARBONO EN LA REACCIÓN OBSCURA DE LA FOTOSÍNTESIS Y TASA DE

PRODUCCIÓN DE OXÍGENO DE LAS PLANTAS
Primero tomamos un Erlenmeyer con tapón provisto de una pipeta graduada para medir el volumen del
desprendimiento de oxígeno, que contenía en su interior bicarbonato de sodio, luego se añadio azul de bromotimol,
que es un compuesto químico derivado del trifenilmetano utilizado para detectar el pH. A pesar de su nombre, el azul
de bromotimol puede adoptar diferentes colores. Puede ser de color amarillo o fucsia (sobre una solución ácida) y
verde o azul (en una solución básica).

Para reforzar la mezcla se sopló para expulsar CO 2, hasta que la solución se tornó de color amarillo (indicando que la
solución es ligeramente ácida).

Luego se incrustó una planta de Elodea, que reacciona fácilmente con el agua para realizar el proceso de fotosíntesis.
Se realiza en dos fases: en la fase oscura el CO 2 es fijado en un gran carbohidrato, la fijación del carbono C3 ocurre como el
primer paso del ciclo de Calvin en todas las plantas El ciclo de Calvin es el proceso en el cual el dióxido de carbono
se incorpora a la ribulosa-1,5-bisfosfato que acaba rindiendo una molécula neta de  glucosa, que la planta usa como
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energía (respiración mitocondrial) y como fuente de carbono, y de la cual depende la mayor parte de la vida en la
Tierra.

En la fase lumínica, el Erlenmeyer fue llevado cerca a una ventana, para que la luz solar más la ayuda de una
lámpara incandescente ubicada a un costado. En esta etapa la elodea reacciona con la luz producida por la lámpara y
las radiaciones solares para obtener energía química en forma de ATP,  a partir de la disociación de moléculas
de agua, formando oxígeno e hidrógeno. La energía creada en este proceso será posteriormente utilizada en la fase
obscura, para continuar con el proceso de fotosíntesis. La reacción se produce en los cloroplastos, específicamente
en los tilacoides en unidades llamadas fotosistemas.

Existen dos tipos de fotosistemas y funcionan gracias a los pigmentos que son los que se encargan de captar la  luz,
como las clorofilas a y b, o los carotenoides, los cuales absorben diferentes  longitudes de onda, formando así tanto al
fotosistema I, como al fotosistema II.

Fig. 1
Erlenmeyer con Elodea en su interior.
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Fig. 2
Lámpara.

Fig. 3
Tasa de producción de oxígeno
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En esta imagen se puede apreciar que la elodea desprendió 1,1 cm 3 de oxígeno, en un tiempo aproximado de 1 hora con
40 minutos. Inicio su recorrido desde los 3,1 cm 3, descendiendo hasta los 2 cm3.

2. EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES

Primeramente tomamos unas hojas de espinaca y cortamos en pedazos pequeños, luego colocamos en un mortero
con un poco de arena y trituramos.

Fig. 4
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Posteriormente trasladamos todo el material a un tubo de ensayo de 50 ml provisto de tapón, agregamos 4 ml de

acetona que es el solvente, debido a su polaridad será el que ascienda con mayor rapidez, su función principal es
extraer los pigmentos de la hoja de espinaca; se agitó con fuerza, dejamos reposar por aproximadamente 10 minutos
y agregamos 4 ml de agua destilada y agitamos nuevamente.

Fig. 5
 FOTOSÍNTESIS Y PIGMENTOS VEGETALES

Ulteriormente se agregó 3 ml de éter de petróleo a la mezcla y agitó repetidamente. Paso siguiente se dejó reposar
hasta que los solventes y los pigmentos se extrajeron completamente en la parte superior. El tejido vegetal quedo casi
blanco. El experimento se lo puede apreciar en la siguiente figura:

Fig. 6
 FOTOSÍNTESIS Y PIGMENTOS VEGETALES

Como se puede apreciar en la disolución, se formaron 4 fases. En la primera inferior se ubicó la arena por ser más
densa, enseguida los residuos de espinaca, más arriba agua destilada y por último los pigmentos vegetales.

Con una pipeta pasteur extrajimos la solución superior verde, evitando mezclar las dos capas. Con ello realizamos la
cromatografía.

REALIZACIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA
a) Tomamos una tira de papel de celulosa Wattman No. 1 de 22 x 1.5 cm, medimos dos cm desde la parte superior e
hicimos un pequeño trazo con lápiz.
b) Tomamos una bureta y le adicionamos éter de petróleo y acetona (eluyente).
c) En el papel de cromatografía untamos gotas del extracto de los pigmentos sobre el punto marcado.
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d) Sujetamos el papel de celulosa al corcho de la bureta y sumergimos con cuidado, sin tocar las paredes y sin que el
extracto toca la mezcla (acetona-éter de petróleo).
e) Dejamos correr la cromatografía por espacio de 20 minutos, la colocamos en un lugar libre de luz. Los pigmentos no
polares quedaron ubicados en la parte inferior, mientras que los apolares subieron por capilaridad a través del
solvente de cromatografía.
f) Finalmente con los trazos realizados con la ayuda de una regla milimetrada calculados en primer lugar la distancia
recorrida por la muestra problema, luego el recorrido de la fase móvil, para posteriormente conjeturar el coeficiente de
variación de cada mancha, arrojando los siguientes resultados:

Distancia recorrida por cada pigmento:

D1= 4,3 cm
D2= 6,8 cm
D3= 7,8 cm
D4= 15 cm

Distancia recorrida por la fase móvil:

D= 17,5 cm

Mediante la siguiente fórmula calculamos el coeficiente de variación de cada sustancia para determinar a que
pigmento corresponde:

Distancia recorrida por la sustancia

Rf :
Distancia recorrida por la fase movil

1- Pigmento Inferior (Polar)

Clorofila B
Color: Verde
Fórmula: C55H70O6N4Mg
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4,3
=0,25
17,5

2- Pigmento Inferior (Polar)

Clorofila A
Color: Verde Azulado
Fórmula: C55H72O5N4Mg

6,8
=0,39
17,5

3- Pigmento Inferior (Polar)

Xantofila
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Color: Amarillo

7,8
=0,45
17,5

4- Pigmento Superior (Apolar)

Caroteno
Color: Anaranjado

15
=0,86
17,5

Los resultados fueron comparados con “referencias de frente” encontrado en laboratorios similares; sin embargo no
existe un procedimiento en común para determinar con exactitud lo Rf más exactos.
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RESULTADOS DE LA CROMATOGRAFÍA

(CUESTIONARIO)
1. cuando el frente del solvente se ha movido hasta 1cm abajo del borde final del papel, remueva su
cromatograma y marque la localización de frente del solvente y seque el cromatograma al aire y en oscuridad
durante unos minutos.

2. Identifique las bandas de pigmentos, los beta carotenos podrían ser de color verde-anaranjado brillante
ubicados en la parte superior, las xantofilas son de color amarillo y pueden encontrarse en múltiplos bandas de
xantofilas, la banda más superior verde-azul es clorofila a y la inferior verde oliva clorofila b. indique cual fue el
pigmento mas no polar es decir cual tiene más afinidad por el solvente no polar?

En la cromatografía de papel realizada en laboratorio en la que se utilizó espinaca, se pudo identificar 4 bandas de
pigmentos; tales como:

Pigmento Coloración Polaridad

Clorofila b Verde fuerte Polar

Clorofila a Verde bajo Polar

Xantofilas Amarillo Polar

Carotenos Naranja No polar

Se puede identificar que el pigmento más no polar es el caroteno, por lo que tiene más afinidad por el solvente no polar.

3. Para los siguientes cálculos, delinee el perímetro y marque el centro de la mancha del pigmento inicial, este es
el punto de partida para todas las demás mediciones, también marque el punto superior del pigmento y frente
del solvente, registre sus datos en la tabla 8.1.
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Pigmento Distancia Distancia Rf

recorrida por la recorrida por la
fase móvil sustancia
Clorofila b 17.5 4.3 0.25
Clorofila a 17.5 6.8 0.34
Xantofilas 17.5 7.8 0.45
Carotenos 17.5 15 0.86
4. Calcule los valores de Rf de cada pigmento usando la siguiente formula

Distancia recorrida por la sustancia

Rf :
Distancia recorrida por la fase movil

Tabla 8.1

Pigmento Medición (mm) Valores Rf

Clorofila b 4.3 0.25

Clorofila a 6.8 0.34

Xantofilas 7.8 0.45

Carotenos 15 0.86

5. Sus resultados sugieren que las características químicas de estos pigmentos pueden diferir de acuerdo a su
color?. Explique su respuesta

Los pigmentos se localizan en diferentes organelos según el tipo de molécula y su función. La clorofila se encuentra
específicamente en las organelas vegetales llamadas cloroplastos, en las membranas internas o tilacoides. Asociados
con la clorofila, existen también en los cloroplastos otra clase de pigmentos denominados “accesorios” que forman parte
del complejo antena de la fotosíntesis, de color amarillo y amarillo-anaranjado, denominados xantófilas y carotenos,
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respectivamente. Estos pigmentos se alojan además en otros plástidos, dando el color característico de las flores o
frutos. Otros pigmentos son las antocianinas. Son pigmentos hidrosolubles que se hallan en las vacuolas de las células
vegetales y que otorgan el color rojo, púrpura o azul, dependiendo del pH vacuolar, a hojas, flores y frutas.

6. Explique las diferencias de solubilidad de los siguientes pigmentos de una explicación del color verde de las
hojas.

En laboratorio se pudo observar que la diferencia de solubilidad de los pigmentos en orden descendente es:

 Clorofila b
 Clorofila a
 Xantofilas
 Carotenos
El color verde de las hojas se debe a la clorofila, pigmento que da el color verde a los vegetales y que se encarga de
absorber la luz necesaria para realizar la fotosíntesis, proceso que transforma la energía luminosa en energía química.
La clorofila absorbe sobre todo la luz roja, violeta y azul, y refleja la verde. La gran concentración de clorofila en las hojas
y su presencia ocasional en otros tejidos vegetales, como los tallos, tiñen de verde estas partes de las plantas. En
algunas hojas, la clorofila está enmascarada por otros pigmentos. En otoño, la clorofila de las hojas de los árboles se
descompone, y ocupan su lugar otros pigmentos como las xantofilas y carotenos.

En general, el color que presenta un determinado tejido u órgano vegetal, depende del predominio de un pigmento o de
la combinación de varios de ellos. A simple vista el color verde es el mayoritario en las especies vegetales. Esta
coloración es debida a la presencia de dos de los principales pigmentos vegetales, la clorofila a y la clorofila b, que se
encuentran en prácticamente todas las plantas con semillas, los helechos, musgos y algas.
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DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Podemos decir que la fotosíntesis es un proceso químico que se lleva a cabo en las plantas, permitiendo gracias al
aprovechamiento de la energía solar en transformar un sustrato inorgánico en materia orgánica.

En la cromatografía de pigmentos vegetales se utilizó las hojas de espinaca, para mirar algunas de las sustancias
complejas que contiene. Siguiendo un proceso, separamos paso a paso algunos residuos de las hojas y dejamos que los
pigmentos vegetales queden separados en la última capa, luego con la ayuda de una pipeta Pasteur colocamos gotas de
los pigmentos en el papel de cromatografía y colocamos en una probeta con solvente para que este ascienda por el
papel llevando consigo las sustancias de la mezcla y separándolas según su polaridad.

Los resultados de la cromatografía pueden ser afectados por distintas causas que pueden causar error en los cálculos.
Como no colocar la suficiente muestra en el papel de cromatografía puesto que a la hora de separarse las sustancias no
podrían verse con bastante claridad o de no poder medir bien las distancias entre la fase móvil y la distancia recorrida por
la fase móvil.

Se presentó dificultad para encontrar una tabla de referencia para los cálculos realizados, por lo que se es necesario
guiarse mucho por los colores vistos en el papel de cromatografía.

Al hacer comparaciones con resultados de otros compañeros se notó que hay diferencia de resultados puesto que en
algunos sobresalen más colores que en otros.
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