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“Año de la Universalización de la Salud”

UNIVERSIDAD NORBERT WIENER

TEMA: Introducción a la cromatografía

DOCENTE: Mg. Elisa Sihuay Fernandez

FACULTAD: Farmacia y Bioquímica

ESCUELA: Farmacia y Bioquímica

ESTUDIANTE: Perez Palomino Paola

FECHA DE ENTREGA: 15-07-2020

2020
INDICE

Introducción…………………………………………………………….3

Objetivos…………….…………………………………………………..3

Marco Teórico…………….………………………………………….…4

Descripción de caso de estudio…..……………………………...……8

Resultados…………………………………………..……..11

Conclusiones………………………….…………………………………...13

Artículo científico………………………...………………………………..14

Referencias bibliográficas……………………………………………15
CROMATOGRAFIA

I. INTRODUCCION

La cromatografía, fue empleada originalmente con sustancias


coloreadas.
El rápido desarrollo de la cromatografía como herramienta analítica
sensible no ocurrió hasta 1931, cuando Kuhn, con Lederer y con
Winterstein, empleó la técnica para el análisis de pigmentos de plantas,
confirmando los primeros trabajos de Tsvet y su predicción de que
el caroteno no era una sola sustancia, sino una mezcla de varios
homólogos estrechamente relacionados. Al mismo tiempo, el tamaño de
las columnas empleadas fue aumentando para poder recuperar los
componentes separados. La técnica, por lo tanto, no era solo analítica
sino preparatoria.

II. OBJETIVOS:

 Conocer más acerca del tema y realizar correctamente los Rf.


 Realizar inoculaciones de muestras en placas cromatografías.
 Determinar el Rf de las distintas manchas desarrolladas en
Cromatografía de capa fina.

III. MARCO TEORICO

La cromatografía es una técnica sumamente empleada en


varias aéreas científicas debido a que permite la separación de una
mezcla de solutos, basándose esta separación en la diferente
velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a través de un
medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento.
Actualmente existen diversas técnicas de cromatografía, siendo
la cromatografía de capa fina (CCF) una de las más utilizadas debido
a que permite separaciones por reparto (aislar e identificar), filtración
sobre gel, adsorción e intercambio iónico en escalas de tiempo muy
corta, sin afectar la muestra a analizar. La cromatografía en capa
fina, es una técnica que se basa en la preparación de una capa,
uniforme de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual es de
vidrio. La fase móvil es un líquido y
la fase estacionaria es un sólido. La
fase estacionaria será un
componente polar y el eluyente
será por lo general menos polar
que la fase estacionaria de modo
que los componentes que se
desplacen con mayor velocidad
serán los menos polares.
La relación entre la distancia
recorrida por un compuesto y por el disolvente desde el origen, se
conoce como Rf, y se define por la siguiente fórmula:

Rf= Distancia recorrida por el compuesto


Distancia recorrida por el disolvente
La búsqueda del eluyente requiere probar con varios
disolventes de diferente polaridad o con mezclas. Para compuestos
pocos polares, que se desplaza con mucha facilidad, se debe utilizar
un disolvente apolar como el
hexano y en el caso de compuesto de polaridad media, mezclas de
hexano y acetato de etilo. Se debe tener una cámara de revelado
que servirá para visualizar aquellos compuestos que sean incoloros o
cuya separación sea difusa.

Placa Cromatografía con silicagel G-60: Es una placa de


vidrio de (20x20) cm con silicagel G-60, el cual es un absorbente que
funcionara como fase estacionaria en donde se inoculara el analito a
estudiar y se desplazara la fase móvil, seguidamente las iníciales G-
60 indican el nivel de granulometría del absorbente y dependiendo de
las características de la fase móvil este se desplazara con mayor
facilidad. (Abbott D. Et al. 1973).

Placas preparatorias del TLC. 

Disponible en: panish.desiccant-silicagel.com


Placa cromatografía con silicagel F-254: Posee el mismo
fundamento de la placa cromatografía de silicagel G-60, con la
diferencia de que posee Fluoresceína que es capaz de detectarse a
una longitud de onda de 254 Å, que al revelarse en luz ultra violeta,
permite localizar los compuestos del o los analitos a estudiar. (Abbott
D. Et al. 1973).

Estufa de secado: Para la activación de las placas se


introducen en una estufa en donde se secaran a una temperatura
entre (100- 105) °C durante 1 hora, de esta forma se elimina la
humedad de la placa y se deja lista para ser introducidas en las
cámaras de desarrollo. (Abbott D. Et al. 1973).

Estufa de laboratorio

Disponible en: https://www.instrumentodelaboratorio.info/


Cámara de desarrollo [cloroformo (1): benceno (2) y
Etanol (1): butanol (3): amonio (1)]: consiste en una cubeta en
donde se encuentra la fase móvil, en el interior de la cubeta debe
colocarse un papel de filtro, empapado de disolvente, que cubra las
paredes interiores de la misma, para conseguir que la atmosfera este
empapada del disolvente (fase móvil). El fondo de la cubeta se cubre
de disolvente hasta una altura de 0,5 a 1 cm luego se introduce la
placa, sin mover la cubeta, se deja que ascienda el disolvente unos
10 cm por encima del origen repartiendo los componentes que sean
afines a la fase móvil y a la fase estacionaria, se saca la placa y se
deja evaporar al ambiente. (Abbott D. Et al. 1973).

Cámara cromatografía

Disponible en: https://www.fishersci.es/


Cámara de revelado de vapores de Iodo: consiste en una
cámara con una cubeta que contiene en el fondo cristalitos de Yodo,
en el cual se introduce la placa cromatografica y se deja reposar unos
minutos. Los vapores de el yodo tiende a concentrarse alrededor de
los compuestos hacer analizados, por lo cual aparece una mancha
marrón oscura, sobre un fondo amarillo pálido, este método es uno
de los más utilizados para la revelación debido a su carácter no
destructivo.(Abbott D. Et al. 1973).

Vapores de yodo

Disponible en: https://www.franrzmn.com/

IV. DESCRIPCION DE CASO DE ESTUDIO


PROCEDIMIENTO 1
FE: Silicagel G-60 activa. 1 hora a 100 ° C grosor de la placa 0,25 mm.
Muestra: Colesterol 1,2 %
Fase móvil: Cloroformo (1): Benceno (2) Revelar cámara de vapores Yodo

Medir distancia recorrida por las


manchas. Desarrollar en cámara.

Calcular Rf de c/u
ellas.

PROCEDIMIENTO 2
FE: Silicagel F-254 activada por 1 hora a 100 °C, espesor de la placa
0,25mm

Muestra: Tinta roja (10 ml), tinta azul (10 ml), extracto de naranja (10
ml), extracto espinaca (10 ml) y extracto limón (10ml).

F.M: Butanol (3), etanol (1), Desarrollar en cámara de


revelado de luz ultra violeta
amonio (1)

Fuente del solvente 10 cm


Medir la distancia recorrida por
las manchas.

Hacer dibujo de placas.


V. RESULTADOS

Cuadro 1. Calculo de Rf de tinta roja, tinta azul, extracto de


naranja, extracto espinaca y extracto limón.

Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limón.
  V. yodo UV Luz visible Distancia Distancia Rf
recorrida recorrida
por el por el
compuesto frente (cm)
(cm)
1M-Tinta 1A negativo Verde Rosado 6 10 0,6
roja manzana
1B negativo Naranja Fucsia 6,5 10 0,65
intenso
1C negativo Naranja fucsia claro 7,25 10 0,725
intenso
1D Positivo Naranja ocre 8 10 0,8
intenso
2M- Tinta 2A negativo incoloro azul claro 5 10 0,5
azul
2B Positivo verde claro ocre 9,5 10 0,95
3M- 3A Positivo verde claro amarillo 4 10 0,4
Extracto
naranja
3B negativo azul claro incoloro 9,5 10 0,95
4M- 4A Positivo verde claro ocre 4 10 0,4
Extracto
espinaca
4B negativo azul claro incoloro 9,5 10 0,95
5M- 5A Positivo azul claro incoloro 1,5 10 0,15
Extracto
limón
5B negativo azul claro incoloro 2,75 10 0,275
5C negativo azul claro incoloro 9,5 10 0,95

Colesterol al 1,2%
Concentración color del distancia distancia Rf
compuesto recorrida de del recorrida
compuesto (cm) por el
frente (cm)
10 μl amarillo pálido 2,5 10 0,25
20 μl amarillo pálido 2,5 10 0,25
30 μl amarillo pálido 2,5 10 0,25
40 μl amarillo pálido 2,5 10 0,25
50 μl amarillo pálido 2,5 10 0,25

Cuadro 2. Calculo de Rf de colesterol al 1,2%.

En el primer cuadro Análisis de Tinta roja, tinta azul,


extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limón: El
análisis determino que los analitos estudiados están conformados por
varios compuestos, y se observó su capacidad de reacción en presencia
de Vapores de yodo (incoloro o amarillo pálido), color de su
Fluorescencia en presencia de rayos U.V y color frente a luz visible.
Asimismo los resultados de Rf en la gran mayoría de los compuestos
fueron distintos. Cabe destacar que se pudo observar que existe una
relación entre los analitos (extracto naranja, extracto espinaca y
extracto limón), debido a que en los resultados obtenidos sus
compuestos (3B, 4B Y 5C) arrojaron los mismo resultados en V.P de
yodo, rayos UV y color en presencia de luz visible, por lo cual se
pudiese tratar de el mismo compuesto.
En el segundo cuadro Análisis de colesterol al 1,2 %: se puede
comprobar que el cálculo de los Rf resultaron todos los mismos (0, 25),
el color (amarillo pálido) y distancia recorrida por el compuesto tampoco
varia, a pesar de que hubo un cambio de concentración para cada
recorrido. Al no haber ninguna variación podemos corroborar que no hay
presencia de sustancias extrañas.

VI. CONCLUSIONES

En la muestra analizada en la primera parte de la práctica el analito


de colesterol al 1,2% es una muestra pura y simple debido a que se
pudo observar que el analito está conformado por un solo compuesto
y que su Rf es el mismo para todas las concentraciones. Con respecto
a la segunda practica se determinó que los analitos estudiados son
sustancias complejas y no puras debido que están conformadas por
varios compuestos y poseen distintos Rf, seguidamente se pudo
observar que existe una relación entre los analitos (extracto naranja,
extracto espinaca y extracto limón), debido a que en los resultados
obtenidos sus compuestos (3B, 4B Y 5C) arrojaron los mismo
resultados en V.P de yodo, rayos UV y color en presencia de luz
visible, seguidamente para verificar la asertividad de esta relación se
sugiere la revisión de bibliografía en donde otros investigadores
hayan realizado pruebas con los analitos estudiados en práctica o
buscar en tablas los analitos estudiados con los mismos resultados en
práctica en libros o publicaciones acreditadas. Por último la CCF es un
análisis cualitativo de rápida manipulación y obtención rápida de
resultados lo cual según (Abbott D. Et al. 1973) se verifica que
permite una enseñanza mucho más fácil de la cromatografía, donde
esta otorga al estudiante una herramienta más para el análisis de
productos agrícolas.

ARTICULO CIENTIFICO
https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n0662_Cabib.pdf

COMENTARIO
Este artículo nos explica sobre cómo aplicar la cromatografía en papel a
la separación de enzimas. Se empezó por ensayar soluciones buffer como
solventes, luego se pasó a los gradientes de sulfato de amonio, en general con
poco éxito. Finalmente se utilizó el alcohol etílico en solución acuosa o en
mezcla con buffers, pudiéndose separar así las enzimas invertasa y
fosfoglucomutasa entre sí, y desdoblar la invertasa de levadura de cerveza en
dos fracciones. A raíz de la publicación de métodos sensibles para el revelado
de las proteínas en el papel, que ya hemos citado, se pudo extender este
trabajo a la separación de las proteínas del suero. Se llegó a separar con
relativa facilidad la albúmina de las globulinas y se efectuó un estudio
sistemático de la influencia de varios factores sobre estas separaciones.

VIDEO: LINK
 https://www.youtube.com/watch?v=g71IWP2O5pg

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Abbott, D. y Andrews, R. 1973. Introducción a la cromatografía.


Madrid, España, Alhambra. Pag 1; 33; 49-60.
Scheinvar, L. Et al, 2011. Estado del conocimiento de las especies
del Nopal (Opuntia spp.) Productoras de Xconostles silvestres y
cultivadas. Instituto de Biologia UNAM. (21 Oct 2013) [En línea]
http://www.biodiversidad.gob.mx/genes/centrosOrigen/Opuntia/I
nforme_Final/Informe%20final%20Opuntia.pdf
López Collantes, Sandro Joe. Aseguramiento De La Calidad En
Cromatografía De Gases. 2004.