Ligamiento y Recombinación II

Base física de la recombinación

El cromosoma es la unidad de transmisión

en la meiosis

C. Bridges: cr. X asociado al color de los

ojos de Drosophila
N. Stevens yE. Wilson: determinación
cromosómica del sexo en insectos
 Experimentos de Creighton y Mc Clintock

1932: estudios de ligamiento en maíz. Evidencia

física de la recombinación. Demostración de
intercambio de segmentos entre cromosomas
homólogos con técnicas citogenéticas
 Experimentos de Creighton y Mc Clintock

Línea de maiz dihíbrida con el par de crs. 9

heteromórfico

Botón de tinción densa porción de otro cr.

 Experimentos de Creighton y Mc Clintock

Par 9: genes de color y tipo de

grano

C wx
c Wx

C= grano coloreado
c= grano blanco
wx= grano ceroso
Wx= grano amiláceo
 Experimentos de Creighton y Mc Clintock

Gametas esperadas:

Coloreado ceroso

C wx

c Wx

Blanco amiláceo
Experimentos de Creighton y Mc Clintock

Cromosomas resultantes del crossing-over

Experimentos de Creighton y Mc Clintock

Cromosomas resultantes del crossing-over

Experimentos de Creighton y Mc Clintock

Cruzamiento de prueba
¿Existen entrecruzamientos entre
cromátidas hermanas?
 Demostración de entrecruzamientos
entre cromátidas hermanas con técnicas
de tinción diferencial:

Cromosomas arlequín:
2 fases de síntesis en presencia de
bromodesoxiuridina, análogo de Timina. Se
tiñen los cromosomas (Giemsa + colorante
fluorescente). Las cromátides con el análogo
en ambas cadenas se tiñen más claro; aquellas
con una hebra original y otra con BdU se tiñen
más fuerte.
 Demostración de entrecruzamientos
entre cromátidas hermanas

Cromosomas arlequin
Comprobación estadística de la
existencia de ligamiento
Cálculo de chi cuadrado en un cruzamiento
de prueba de un dihíbrido

Planteo de hipótesis:

H0: segregación independiente

Las cuatro clases fenotípicas en la descendencia se encuentran
en proporciones iguales, de ¼ cada una. Valor de chi cuadrado
menor o igual al de tabla

H1: no se cumple la proporción de ¼ cada clase

Las proporciones observadas responden a otra causa. El valor
de chi cuadrado obtenido se aparta de las probabilidades. Valor
mayor al de tabla.
Cálculo de chi cuadrado en un cruzamiento
de prueba de un dihíbrido

Clases fenotípicas n observado n esperado (O-E)2/E

A- B- 45 65,25 6,28
A- bb 91 65,25 10,56
aaB- 86 65,25 6,60
aabb 39 65,25 10,56
Total 261 34,00

Grados de libertad = clases fenotípicas – 1 = 4-1 = 3

Para α = 0,05 Valor de tabla = 7,8147
No se cumple H0
¿Por qué no se cumple H0?

1- ¿hay una alteración en la segregación del gen A?

2- ¿hay una alteración en la segregación del gen B?

3- ¿ambos genes están ligados?
Cálculo de chi cuadrado para el gen A

Planteo de hipótesis:
H0: la segregación de los alelos del gen A responde
a lo esperado según leyes mendelianas (½ cada
una). Chi cuadrado menor o igual al de tabla

H1: no se cumple la proporción de 1/2 cada clase,

las proporciones observadas responden a otra
causa.
Chi cuadrado: se aparta de las probabilidades (valor
mayor al de tabla).
Cálculo de chi cuadrado para el gen A

Clases fenotípicas n observado n esperado (O-E)2/E

A- 45 + 91 = 136 130,5 0,0421

aa 86 + 39 = 125 130,5 0,0421
Total 261 0,0842

Grados de libertad = clases fenotípicas – 1 = 2-1 = 1

Para α = 0,05 Valor de tabla = 3,8415
Se cumple H0
Cálculo de chi cuadrado para el gen B

Planteo de hipótesis:
H0: la segregación de los alelos del gen B responde
a lo esperado según leyes mendelianas (½ cada
una). Chi cuadrado menor o igual al de tabla

H1: no se cumple la proporción de 1/2 cada clase,

las proporciones observadas responden a otra
causa.
Chi cuadrado: se aparta de las probabilidades (valor
mayor al de tabla).
Cálculo de chi cuadrado para el gen B

Clases fenotípicas n observado n esperado (O-E)2/E

B- 45 + 86 = 131 130,5 0,0038

bb 91 + 39 = 130 130,5 0,0038
Total 261 0,0076

Grados de libertad = clases fenotípicas – 1 = 2-1 = 1

Para α = 0,05 Valor de tabla = 3,8415
Se cumple H0
 Chi cuadrado de ligamiento

Chi cuadrado de ligamiento =

Chi cuadrado total – Chi del gen A – Chi del gen B
= 34 - 0,0842 – 0,0076 = 33, 9082

Grados de libertad = 3 - 1 - 1 = 1
Para α = 0,05 Valor de tabla = 3,8415
No se cumple H0
Los genes están ligados
Tabla de chi cuadrado
Análisis de una Filial 2
proveniente de F1xF1
 F1 x F1

Fenotipos

AB Ab aB ab
AB
Ab
aB
ab aabb
Fenotipos Genotipos
AABB + AABb + AaBB + AaBb
Aabb + Aabb
aaBB + aaBb
aabb
 Análisis de la F2

Fenotipo observado Genotipos

A-B- AABB,AABb,
AaBB, AaBb

A-bb AAbb, Aabb

aaB- aaBB, aaBb

aabb aabb

No se pueden identificar los 2 genotipos recombinantes

 Análisis de la F2

Parentales en repulsión (trans)

½r ½ (1-r) ½ (1-r) ½ r
AB Ab aB ab
½r AB
½ (1-r) Ab
½ (1-r) aB
½r ab aabb

aabb es una combinación nueva (recombinante)

aabb = ¼ r2
 Análisis de la F2
Parentales en repulsión (trans)
aabb es una combinación nueva (recombinante)

¼ r2 = aabb
total
r2 = aabb x 4
total

r = Ѵ aabb x 4
total
 Análisis de la F2

Parentales en repulsión (trans)

 Análisis de la F2

Parentales en acoplamiento (cis)

½ (1-r) ½ r ½ r ½ (1-r)
AB Ab aB ab
½ (1-r) AB
½r Ab
½r aB
½ (1-r) ab aabb

aabb es una combinación parental

aabb = ¼ (1-r)2
 Análisis de la F2
Parentales en acoplamiento (cis)
aabb es una combinación parental

¼ (1-r)2 = aabb
total
(1-r)2 = aabb x 4
total
1-r = Ѵ aabb x 4
total
r = 1 - Ѵ aabb x 4
total
 Análisis de la F2

Parentales en acoplamiento (cis)

 Frecuencias de recombinación
según las combinaciones parentales
Prueba de 3 puntos
 Prueba de 2 puntos:
cuando están muy alejados no se detectan dobles
crossing over

Pérdida de información entre ambos loci:

crossing over dobles entre A y C no se perciben
 Prueba de 3 puntos

Incorporación de un gen entre A y C

Prueba de 3 puntos
 Prueba de 3 puntos

Fenotipos Observados
triple salvaje 5.701
triple mutante 5.617
A-bbcc 388
aaB-C- 367
A-B-cc 1.412
aabbC- 1.383
A-bbC- 60
aaB-cc 72
15.000
Las clases recíprocas presentan frecuencias parecidas
Prueba de 3 puntos

Fenotipos Observados
triple salvaje 5.701
triple mutante 5.617
A-bbcc 388
rec. Simples A-B
aaB-C- 367
A-B-cc 1.412
rec. Simples B-C
aabbC- 1.383
A-bbC- 60
132 dobles rec.
aaB-cc 72

15.000
 Prueba de 3 puntos

Distancia A-B=
(388+367+132)/15.000*100= 5,91%

•Distancia B-C=
•(1.412+1.383+132)/15.000*100= 19,51%

* Distancia A-C=
(755*+2795*+2*132)/15.000*100=25,42%
 Mapa de ligamiento

Representación gráfica que determina el

locus en posición central y establece las
distancias
A B C

a b c

5,91cM 19,51cM
25,42cM
 Coeficiente de coincidencia

¿un entrecruzamiento en una determinada región

favorece o impide que se den más entrecruzamientos
en esa región?

Obs = 132/15000 = 0,0088

Esp = 0,059 * 0,195 = 0,0115
 Observados

Fenotipos Observados
triple salvaje 5.701
triple mutante 5.617
A-bbcc 388
aaB-C- 367
A-B-cc 1.412
aabbC- 1.383
A-bbC- 60
132 dobles rec.
aaB-cc 72

15.000
 Interferencia

I=1-c

+ : se observan menos entrecruzamientos dobles

que los esperados
- : se observan más entrecruzamientos dobles que
los esperados
0 : no hay interferencia
Técnicas de mapeo de genes
 Mapas de ligamiento: mapeo con
frecuencias de recombinación
- resume toda la información: orden y distancia
entre genes
- constituye el mapa de un grupo de ligamiento, e
incluye todos los genes que se localizan en un
cromosoma particular.
- se obtiene el mismo mapa genético sin importar
cuál de los progenitores aportó un alelo particular, y
no resultan modficados si la fase de ligamiento es
en acoplamiento o en repulsión (cis o trans).
Mapas cromosómicos por hibridación de
células somáticas

Fusión in vitro de 2 líneas celulares somáticas de

especies diferentes de mamíferos

Línea celular somática: células tumorales o células

modificadas por virus

Fusión celular por tratamiento con polietilenglicol

Mapas cromosómicos por hibridación de
células somáticas

Fusión de células de humano y ratón: pérdida de

cromosomas en las células híbridas.

Los cromosomas que se van perdiendo pertenecen

exclusivamente a uno de los conjuntos parentales.

En híbridos humano/roedor:
se pierden los humanos
 Mapas cromosómicos por hibridación de
células somáticas

Panel de líneas híbridas humano/ratón estables

Línea Proteína Cr.1 Cr.2 Cr.3 Cr.4 Cr.5 Cr.6 Cr.7 Cr.8 Cr.9 Cr.10 Cr.11 Cr.12 Cr.13 Cr.14 Cr.15 Cr.16 Cr.17 Cr.18 Cr.19 Cr.20 Cr.21 Cr.22 Cr.X Cr.Y

1 sí + + + + + + +

2 sí + + + + + + + +

3 no + + + + + + +

4 sí + + + + + + + +

5 no + + + + + +

6 sí + + + +

permite asociar uno o varios fenotipos con un cromosoma

particular
 Técnicas moleculares

Hibridación de sondas
 Técnicas moleculares

Secuenciación directa
 Técnicas moleculares

Secuenciación directa