SIGLO XVIII

La diferencia entre individuos se denotaba señalando diferencias en su

aspecto externo

Presencia de manchas

Remolinos en el pelaje

Color de capa

Alguna otra particularidad

FICHA DE IDENTIFICACION
Descripciones fenotípicas de ambos
flancos y de la cabeza del animal
CARÁCTER FUERA INFORMATIVO

VARIACION

POLIMORFISMO
 MARCADORES MORFOLOGICOS (AÑOS 60´)

Genes asociados a caracteres fenotípicos, fáciles de identificar

visualmente

 Número limitado

 Poco informativos

 Herencia compleja (herencia dominante/recesiva,

multigénicos, etc.)

 Ambiguos y subjetivos
 KARL LANDSTEINNER (1868 - 1943)

DESCUBRE LOS GRUPOS SANGUINEOS

CARACTERIZADOS POR ESTUDIOS SEROLOGICOS

MARCADORES GENETICOS

CARÁCTER HEREDABLE CON MULTIPLES ESTADOS

(alelos) EN CADA CARÁCTER (locus)
 POLIMORFISMO GENETICO

PRESENCIA SIMULTANEA DE DOS O MAS

1965 FORMAS DISCONTINUAS EN UNA
ESPECIE, DE TAL MANERA QUE LA
FORD
MENOS FRECUENTE DE ELLAS NO PUEDA
MANTENERSE POR MERA MUTACION.

1981 EXISTENCIA EN UNA MISMA POBLACION

CAVALLI SFORZA DE DOS O MAS ALELOS EN UN LOCI,
CADA UNO CON UNA FRECUENCIA
Y BODNER
APRECIABLE.
MARCADORES BIOQUÍMICOS

 ISOENZIMAS

 GRUPOS SANGUÍNEOS

 INMUNOGLOBULINAS
 1955 - ELECTROFORESIS EN GELES DE ALMIDON

Gel donde se observan los

patrones de bandas de dos
variedades de trigo diferentes.

Smithies, O. Zone electrophoresis in starch gels group variations in the

serum proteins in normal human adults. Biochem.J., 61, 629, 1955.
 1959 - ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA

Raymond y Weintraub . Acrylamide gel as a supporting médium for zone electrophroresis.

Science, 130, 711. 1959.
 MARCADORES BIOQUIMICOS

 EL NIVEL DE OBSERVACIÓN ES EL FENOTÍPICO (TIPIFICAN

PROTEÍNAS).
 ANALIZAN SÓLO LAS SECUENCIAS CODIFICANTES DE LOCI
ESTRUCTURALES, QUE CORRESPONDEN APROXIMADAMENTE AL
5% DEL GENOMA.

 LA FUNCIONALIDAD DE LAS PROTEÍNAS LIMITA EL GRADO DE

POLIMORFISMO.

 LAS MUESTRAS TIENEN QUE SER FRESCAS YA QUE LAS

PROTEÍNAS SE DETERIORAN CON FACILIDAD.
MARCADORES BIOQUÍMICOS

DESVENTAJAS:

 NO SE EXPRESAN EN TODOS LOS TEJIDOS.

 NO SE EXPRESAN EN TODAS LA EDADES.

 INFLUENCIADOS POR EL AMBIENTE.

 POCO POLIMÓRFICOS.

 BAJA REPRESENTACIÓN EN EL GENOMA

 SU AUTOMATIZACION EN OCACIONES RESULTA DIFICIL.

 MARCADORES GENÉTICOS

Advenimiento de técnicas moleculares en los años 80.

Métodos de detección de polimorfismos directamente a nivel de ADN

MARCADOR MOLECULAR ES UN SEGMENTO DE ADN

CON UNA UBICACIÓN FÍSICA IDENTIFICABLE Y CUYA HERENCIA GENÉTICA SE

PUEDE RASTREAR

UN MARCADOR PUEDE SER UN GEN O PUEDE SER ALGUNA SECCIÓN

DEL ADN SIN FUNCIÓN CONOCIDA.
CARACTERISTICAS DE LOS MARCADORES GENETICOS

Poseer herencia mendeliana sencilla. Codominante

Estar presentes en el individuo en el momento del nacimiento

Ser informativos o sea POLIMORFICOS

Estar distribuidos por todo en genoma

El análisis de los mismos no debe conllevar riesgo para el animal

La metodología empleada debe ser repetible, automatizable y estandarizable

 MARCADORES MARCADORES
BIOQUÍMICOS DE ADN

Muestras frescas, congeladas o

Sólo muestras frescas
conservadas en acohol,
parafina, etc.

Sólo muestras de sangre Cualquier clase de tejidos:

pelo, músculo, hueso, semen
dientes, etc
Número limitado de Número ilimitado de
marcadores marcadores

Moderado grado de Alto grado de

información información
 ADN nuclear

ADN codificante ADN no codificante

Copia única Copia múltiple Copia única Repetitivo

Genes ARNr Pseudogenes

estructurales ARNt
Histonas

Elementos repetidos en tandem

Elementos heterodispersos
Centrómeros Minisatélites

Telómeros Microsatélites
SINEs Transposones

LINEs
TIPOS DE SECUENCIAS UTILIZADAS EN MAMIFEROS

Codificantes.
Biparentales: loci autosómicos
No-codificantes.

Mitocondriales
Uniparentales
Cromosoma Y

Polimorfismos del cromosoma X.

HERENCIA DEL MATERIAL GENÉTICO EN MAMIFEROS

MADRE PADRE

CRÍA
 CIRCUITO DE LA MUESTRA

OBTENCIÓN DE EXTRACCIÓN OBTENCIÓN AMPLIFICACIÓN

LA MUESTRA DE ADN DEL ADN POR PCR

INTERPRETACIÓN DE ANÁLISIS A TRAVÉS DE VERIFICADO DEL

LOS RESULTADOS DISTINTOS METODOS PRODUCTO DE PCR
 EXTRACCIÓN DE ADN DE LA MUESTRA

LA EXTRACCIÓN ES EL PUNTO DE INICIO DE LA TECNOLOGÍA DEL ADN

Selección del material de donde podemos

aislar el ADN de interés

Selección del método adecuado para la

extracción del ADN
MATERIAL DE ORIGEN DE LA MUESTRA

SANGRE ENTERA TEJIDOS

BACTERIAS CULTIVOS CELULARES

ORINA HISOPADO BUCAL

PELO MANCHA HEMATICA

 AMPLIFICACION
DEL ADN

REACCION EN CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR)
 REACCION EN CADENA DE LA
POLIMERASA
¿Que ¿Cómo
necesito? funciona?
LA AMPLIFICACION PERMITE OBTENER UN GRAN NUMERO DE COPIAS
A PARTIR DE UNA CANTIDAD MINIMA DE ADN MOLDE

FRAGMENTO DE INTERES
 CEBADORES O PRIMERS

Los primers son los que dan especificidad a la PCR

 ¿COMO DETERMINO
EL GENOTIPO DE LA MUESTRA?

AMPLIFICACIÓN
POR PCR

ANÁLISIS A TRAVÉS
DE DISTINTOS
METODOS

DETERMINACION
DEL GENOTIPO
 VARIANTES DE PCR


PCR – RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism)

El amplificado obtenido del PCR, es incubado en un medio con una

enzima de restricción (ER).
 PCR - RFLP

ENZIMA HIPOTETICA
TAAT ALELO A
ATTA
TAAT
ATTA

ALELO a
PCR alelo especifica y anidada

PCR ALELO ESPECIFICA

Se realiza con cebadores que permiten solo la amplificación de un alelo en especial.

CEBADORES CEBADORES
DIRECTOS INVERSOS

PCR ANIDADA
 RAPDs (Random Amplified Polymorphic DNA)

 Fragmentos obtenidos por amplificación (PCR) al azar del ADN genómico

No se conoce la ubicación genómica de las bandas

 Utilidad en organismos de genoma desconocido: sondeo de variabilidad y

clonado de fragmentos variables para obtener polimorfismos de locus
conocido
PCR MICROSATELITES - MINISATELITES

Microsatelites O STR (SHORT TAMDEN REPEAT)

 MICROSATELITES O STR (SHORT TAMDEN REPEAT)

SON DE ELECCION LOS

DINUCLEOTIDICOS
PORQUE PRESENTAN
MENOS PROBLEMAS
CON EL SLIPPAGE QUE
CORE DE REPETICION
MAYORES
DIFERENCIAS ENTRE AMPLIFICACION DE UN LOCUS SIMPLE O
MULTIPLEX EN GEL DE POLIACRILAMIDA

MULTIPLEX LOCUS SIMPLE

¿CÓMO DETERMINARIAN EL GENOTIPO DE CADA INDIVIDUO?
SECUENCIADOR AUTOMÁTICO DE ADN
LOS FRAGMENTOS SE RESUELVEN POR ELECTROFORESIS CAPILAR.

A01 100224_M417_BTA5Run01 3727

A B 225 227 229 231 G H
8000 221.3 223.2 225.2 227.3 229.2 231.0 233.0 235.1
7000
Label: 229
6000

Varios marcadores se pueden amplificar 5000

4000

3000

y correr al mismo tiempo. 2000

1000

0
228.9

IGF1
G02 090319_M226_BTY_BTA5Run01 1458(A) 2243(B U)
A01 100408_M474_BTA5Run01 3731 (M)

700 A
170.6
B
173.1
C
175.3
D
177.3
E
179.3
180
181.1
182
183.3
184
185.2
I
187.2
J
189.2
190
191.5
192
193.6
A
198.0
B
200.0
C
202.0
204
204.0
E
206.1
208
208.0
G
210.2
212
212.1
214
214.1
216
216.0
218
218.1
220
220.2
222
222.1
224
224.0
226
226.0
P
228.0
Q
230.1
R
232.1
S
234.0

20000
600 Label: ?

500
10000

400 Label: ?

Label: 192
300 188.6
0
213.0
193.8 215.0
200 ETH10

100
B02 061116_BovRun01 He M 927
3000 A B C D E 180 182 184 I J 190 192
0 170.6 173.1 175.3 177.3 179.3 181.1 183.3 185.2 187.2 189.2 191.5 193.6

Label: 180
2000 Label: 184

1000

0
181.1
185.3
BM1824

Requieren de personal capacitado pues cada

marcador tiene un patrón particular.
PCR - SECUENCIACION

Conjunto de métodos y técnicas que permiten determinar el orden de los

nucleótidos (A, C, G y T) en una región del ADN.
PCR – SNP
Single Nucleotide Polymorphism / Polimorfismo de nucleótido simple
MICROARRAY

HIBRIDACION
VENTAJAS  GRAN NÚMERO DE SITIOS ANALIZADOS

 PEQUEÑO VOLUMEN DE MUESTRA REQUERIDO

 REPRODUCIBLE Y ROBUSTO

DESVENTAJAS  GRAN CONOCIMIENTO DEL SISTEMA A ANALIZAR

 COSTO RELATIVAMENTE ELEVADO

¿QUE UTILIDAD TIENEN LOS
MARCADORES GENETICOS?
 IDENTIFICACION INDIVIDUAL
 IDENTIFICACION DE PATOGENOS
 CARACTERIZACION DE ESPECIES
 CONSERVACION DE BIODIVERSIDAD GENETICA
 GENETICA DE POBLACIONES
 DETECCION DE ENFERMEDADES GENETICAS
 SEXADO EMBRIONARIO
 ANALISIS DE FILOGENIA
 GENETICA FORENSE (PATERNIDAD, IDENTIDAD)
 ADULTERACION DE ALIMENTOS
 ETC.
 IDENTIFICACIÓN GENÉTICA DE UN INDIVIDUO/MUESTRA
G01 060224_CTD_DogRun01 CTD7
87 89 91 93 95 97 99
500 86.2 88.2 90.2 92.2 94.1 96.2 98.2

400

300

200
MARCADOR 1 100

E02 060228_TC_EqDogRun01 CTD18

220 222 224 226 228 230 232 234 236 238 240
223.5 225.4 227.5 229.5 231.6 233.7 235.9 237.9 239.9 241.8 243.6
3000
229 239
2000

MARCADOR 2 1000

D01 060309_CT_DOG CT15

6000 192 194 196 198 200 202 204 206 208 210 212
191.4 193.1 195.1 197.1 199.2 201.2 203.3 205.2 207.1 209.3 211.6
5000
201
4000

3000

MARCADOR 3 2000 199

1000

B02 060309_CT_DOG CT2

227 229 231 233 235 237 239 241 243 245
600
232.0 233.8 235.6 237.6 239.4 241.2 243.2 245.2 247.2 249.0
500
235
400 245
300
MARCADOR 4 200

100

0
 ANALISIS DE PARENTEZCO: PATERNIDAD
MADRE BIOLÓGICA PADRE ALEGADO

136 / 144 140 / 148

7BTC 10nuRgoD_ voB_TC_702050 10E 01BTC 10nuRgoD_ voB_TC_702050 10H
1 271 861 461 061 651 251 841 441 041 631 CRÍA 671 271 861 461 061 651 251 841 441 041 631
71 4 .371 3 .961 0 .561 0 .161 8 .651 7 .251 7 .841 7 .441 9 .041 9 .631 2 .771 4 .371 3 .961 0 .561 0 .161 8 .651 7 .251 7 .841 7 .441 9 .041 9 .631 0003

441 631 00001 841 041

541 731 941 141
0002

0005
140 / 144 0001

0 0
071 061 051 041 071 061 051 041
21BTC 10nuRgoD_ voB_TC_702050 20B
4502HF 4502HF
671 271 861 461 061 651 251 841 441 041 631
2 .771 4 .371 3 .961 0 .561 0 .161 8 .651 7 .251 7 .841 7 .441 9 .041 9 .631 0009
0008
041 0007
441 141
0006
541
0005
0004
0003
0002
ALELO 0001
ALELO
PATERNO 071 061 051 041
0
MATERNO
4502HF
1 - NO EXCLUSIÓN DE PATERNIDAD

CRÍA

MADRE

PADRE
ALEGADO
2 - EXCLUSIÓN DE PATERNIDAD

CRÍA

MADRE

PADRE
ALEGADO
ANALISIS DE DIVERSIDAD: CONSERVACION

OVINO CRIOLLO
ARGENTINO
 ADULTERACION DE ALIMENTOS

ADN

IDENTIFICACIÓN DEL ORIGEN DE LOS COMPONENTES

DETERMINACION DE LA ESPECIE DE ORIGEN

(-)

PCR – RFLP

CITOCROMO B
(+) CITOCROMO OXIDASA I
DETECCION DE ENFERMEDADES