PRÁCTICA 7.

LIGAMIENTO Y ENTRECRUZAMIENTO
OBJETIVO
Analiza ligamientos, entrecruzamientos y mapas cromosómicos en organismos
representativos
FUNDAMENTO
Genes ligados
Cuando dos genes se ubican en el mismo par de cromosomas homólogos se
denominan genes ligados.
Fases de ligamiento
El ligamiento entre dos genes puede ser en Cis o trans dependiendo de como estén
combinados los alelos de cada uno de los genes. Por ejemplo si en el cromosoma
heredado del padre hay un alelo dominante de un gen y otro dominante del otro gen
el ligamiento es en FASE DE ACOPLAMIENTO, por ende en el cromosoma materno
si el individuo es heterocigota estarán los alelos recesivos de ambos genes.

En cambio cuando sobre uno de lo cromosomas hay un alelo dominante de un gen

y el otro gen está en forma recesiva, y al revés en el otro cromosoma los genes
están ligados en FASE DE REPULSION o sea en trans. Esto se grafica en el
siguiente equema.
Ligamiento
A su vez podemos clasificar al ligamiento en TOTAL o PARCIAL dependiendo de
que distancia los separe.
Cuánto más cerca están uno de otro menor es la probabilidad de que suceda un
crossing over entre ellos y por lo tanto tienden a heredarse en la misma combinación
o haplotipo que poseía el cromosoma materno o paterno de cada individuo que está
formando sus gametas. A esto se lo denomina LIGAMIENTO TOTAL.

Si en cambio la distancia que los separa es suficiente para permitir

entrecruzamientos entre ellos el ligamiento es PARCIAL.

Si la distancia que los separa es muy grande puede haber entrecruzamiento sin
que haya recombinación o nueva combinación de los alelos de los genes A y B.
Cuando hay ligamiento PARCIAL debemos considerar que en algunas células habrá
crossing over y recombinación y otras donde no lo haya. Por lo tanto el porcentaje
de gametas que tienen nuevas combinaciones o RECOMBINANTES siempre es
más bajo que el porcentaje de gametas con la combinación original o PARENTAL.
Propiedades del entrecruzamiento
• En un par de cromosomas homólogos pueden darse varios entrecruzamientos
durante la meiosis
• Un entrecruzamiento dado puede darse entre cualquier par de cromátidas no
hermanas
Calculo de recombinación de 2 genes
Abajo, podemos ver un cuadro de Punnet modificado que muestra los resultados
del cruzamiento entre nuestra mosca heterocigota doble y la mosca de prueba. Una
mosca hembra heterocigota doble produce cuatro tipos diferentes de óvulos, cada
uno de los cuales se combina con un espermatozoide de la mosca de prueba
masculina. En este cruzamiento se producen cuatro clases fenotípicas (basadas en
la apariencia) diferentes de descendientes, y cada una corresponde a un gameto
particular de la madre:

Las cuatro clases de descendientes no se producen en cantidades iguales, lo que

nos dice que los genes púrpura y vestigial están ligados. Como esperamos para los
genes ligados, las configuraciones de cromosomas parentales están
sobrerepresentadas en la descendencia, mientras que las configuraciones de
cromosomas recombinantes están subrepresentadas. Para medir el ligamiento
cuantitativamente, podemos calcular la frecuencia de recombinación (FR) entre los
genes púrpura y vestigial:
 𝑅𝑒𝑐𝑜𝑚𝑏𝑖𝑛𝑎𝑛𝑡𝑒𝑠
𝐹𝑟𝑒𝑐𝑢𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑚𝑏𝑖𝑛𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝑥100
𝐷𝑒𝑠𝑐𝑒𝑛𝑑𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
En nuestro caso, las clases de progenie recombinante son las moscas de ojos rojos
con alas vestigiales y las moscas de ojos púrpuras con alas largas. Podemos
identificar estas moscas como clases recombinantes por dos razones: una,
sabemos por la serie de cruzamientos que realizamos que deben haber heredado
un cromosoma de su madre que haya experimentado un suceso de recombinación;
y dos, son las clases subrepresentadas (relativo a las clases sobrerepresentadas
parentales).
Así, para el cruzamiento anterior, podemos escribir la ecuación como sigue:
151 + 154
𝐹𝑟𝑒𝑐𝑢𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑚𝑏𝑖𝑛𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝑥100 = 10,7%
1339 + 1195 + 151 + 154

La frecuencia de recombinación entre los genes púrpura y vestigial es de 10.7%.

Recombinación de 3 genes

Fuente: Fenotipos mutantes de Drosophyla. https://cgslab.com/phenotypes/

METODOLOGÍA
MATERIALES
− Internet
PROCEDIMIENTO
Ejercicio para detectar ligamiento y frecuencias de recombinación:

Considere un cruce entre los genotipos hipotéticos AABB x aabb a la F1,AaBb, se

le hace un cruce de prueba, suponiendo que los fenotipos obtenidos presentan
los siguientes valores:

Valores AaBb Aabb aaBb aabb Total

observados 140 38 32 150 360
Para comprobar si corresponde a un caso de ligamiento o de una
segregación independiente de dos genes se realiza un Chi cuadrado

Ho: El cruce de prueba de un dihíbrido resultara en una proporción

fenotípica de ¼ para cada fenotipo resultante.

Valores AaBb Aabb aaBb aabb Total

Observados 140 38 32 150 360

Esperados 90 90 90 90 90

(O-E)2/E (50)2/90 (-52)2/90 (-58)2/90 (60)2/90 X2cal = 135.19

Grados de libertad 4-1=3 ,X2t (3, 005) = 7.81

Al comparar el valor de X2 calculado con el valor de tabla (para tres grados de
libertad y un nivel de significación del 5%) observamos que las desviaciones
son altamente significativas.
¿Cuál es la causa responsable de esta discrepancia?
Se calcula X2 para el locus (A, a), y se observan los siguientes resultados:

Ho: Hubo segregación normal, por lo tanto del cruce de prueba de un heterocigoto
se espera ½ de cada clase fenotípica.

Valores Aa aa Total
Observados 140+38 = 178 32 +150=182 360
Esperados 180 180 360

(O-E)2/E (178-180)2/180 (182-180)2/180 X2cal= 0.044

Y para el locus (B b)

Ho: Hubo segregación normal, por lo tanto el cruce de prueba de un

heterocigoto se espera sea ½ de cada clase fenotípica.

Valores Bb bb Total
Obs. 140+32 = 172 38 +150=188 360
Esp. 180 180 360

(O-E)2/E (172-180)2/180+ (188-180)2/180 cal X2 .= 0.70

En el primer test realizado para comprobar la segregación conjunta se

observa que las discrepancias entre lo observado y lo esperado son
altamente significativas, entonces debe rechazarse la hipótesis de trabajo;
es decir, los genes no se encontraban en distintos cromosomas y por lo
tanto los genes no se distribuyeron independientemente.

Al realizar los otros dos test para comprobar la segregación de cada loci en
forma independiente, los resultados indican concordancia entre lo
esperado y lo observado, es decir, se hallan dentro de los límites de una
desviación normalmente esperada.

Al rechazar la hipótesis de la existencia de distribución independiente y

poder asegurar que no hubo distorsión en la segregación de los alelos de
los dos loci podemos atribuir los resultados observados al ligamiento. Por
ende, el locus A y el locus B se encuentran en el mismo cromosoma.

1) Chi-

cuadrado

conjunto

Grados de

libertad (gl):

4-1=3
X2 t (3, 0.05)= 7,81

2) Chi-cuadrado para comprobar anormalidades en la

segregación en ambos locus Locus A

Grados de libertad (gl): 2-1 =1
X2 t (1, 0.05)= 3,94

Locus B
Grados de libertad (gl): 2-1 =1
X2 t (1, 0.05)= 3,94

Conclusión
Si los locus A y B se encuentran en el mismo cromosoma:
¿Cuál es la relación de enlace en el dihíbrido?
Para contestar esta pregunta se debe considerar lo siguiente:

1) al ser un cruce de prueba, el individuo ab/ab (el probador) sólo producirá

gametas ab, por lo tanto las variaciones de la descendencia son debidas a
las diferencias en los gametos del dihibrido.

2) qué descendencia se encuentra en mayor proporción. En nuestro ejemplo

los descendientes de tipo AB/ab (140) y ab/ab (150). Esto indica que los
gametos Ab y ab, que fueron aportadas por el progenitor probado, se
encuentran en mayor proporción, por lo tanto son de tipo progenitor y
presentan la combinación original
del progenitor heterocigoto ya que provienen de las cromátidas que no
sufrieron recombinación.
Utilizando la notación para ligamiento:

Frecuencia de Recombinación
Proporción en que se forman las nuevas combinaciones de dos pares de
genes, en comparación a la suma de todas las combinaciones, se la conoce
como Frecuencia de entrecruzamiento o de recombinación.
Volviendo a los datos del ejemplo:

AB/ab Ab/ab aB/ab ab/ab Total

Observados 140 38 32 150 360
Del total, 70 (38+32) son combinaciones nuevas, lo que
representa una frecuencia de recombinación de 0,19 o 19%.
La frecuencia de recombinación se define como: Total de recombinantes
/Total de descendientes y se expresa como:
% de recombinación = (frecuencia de recombinación) 100

La frecuencia de recombinación entre los genes aumenta o disminuye a

medida que aumenta o disminuye la distancia de los genes y puede ser
utilizado para construir mapas génicos. Es decir, existe una relación entre
la frecuencia de recombinación entre los genes ligados y la distancia entre
los mismos en el cromosoma.

De acuerdo con lo anterior, por definición, un 1 por ciento de

recombinación es igual a una unidad de mapa (u.m.), también denominada
centimorgan (cM).

Los valores de recombinación pueden variar desde 0 a 50 por ciento con

distintos conjuntos de pares de genes. El límite inferior representa la
ausencia de recombinación entre dos pares de genes, mientras que el límite
superior representa un grado de recombinación igual a la transmisión
independiente.

0% < frecuencia de recombinación > 50% frecuencia de recombinación

unidades de mapa o centimorgan
Si entre dos genes existe más del 50% de recombinación, es necesario
utilizar otro método para calcular las distancias y el orden de los genes. Este
método se denomina cruce de tres puntos y consiste en adicionar un tercer
gen obteniendo diferentes productos meióticos o gametos.

¿por qué el porcentaje de recombinación nunca es del 100%?

La figura siguiente muestra los distintos tipos de gametos posibles a partir
de un trihíbrido en fase de acoplamiento:

ABC Abc ABc AbC

abc aBC abC aBc

A partir de un individuo trihíbrido con genes ligados se obtienen los siguientes

tipos de gametos:
1) 2 Gametos tipo progenitor: con la combinación original de los genes del
progenitor.
2) 2 Gametos tipo recombinantes en Zona I: son las resultantes de un
entrecruzamiento a la izquierda del marcador o gen central.
3) 2 Gametos tipo recombinantes en Zona II: como producto de un
entrecruzamiento a la derecha del marcador o gen central.
 4) 2 Gametos tipo doble recombinantes: son las que resultan del
entrecruzamiento simultáneo en Zona I y Zona II.
¿Por qué el porcentaje de recombinación nunca es del 100%?

Ejemplo 2: Utilizando los datos siguientes calcule:

Genotipos Observados
ABC/abc 390
abc/abc 374
Abc/abc 27
aBC/abc 30
ABc/abc 81
abC/abc 85
AbC/abc 5
aBc/abc 8

Total 1000
a) la frecuencia de recombinación de los genes.
b) el orden en el mapa entre los tres genes.
c) ¿Cuáles son las distintas clases de la descendencia?

Primero se debe determinar cuál es el genotipo de los progenitores. Para

esto se tiene como dato que es un cruce de prueba, por lo tanto el genotipo
del progenitor probador es abc/abc.
Para determinar el genotipo del otro progenitor debemos considerar las
clases más numerosas de la descendencia llamadas de tipo progenitor y
que se corresponden con los gametos de tipo progenitor que siempre se
encuentran en mayor proporción.
Si se considera que al realizarse un doble entrecruzamiento, se
intercambian el alelo central las cromátidas no hermanas, al reconstruirlo
debemos obtener la combinación original, lo que confirma el alelo central y
por lo tanto el orden real de los alelos en el cromosoma.

Una vez determinado el orden se puede calcular la frecuencia de

recombinación entre los tres alelos, o sea, la proporción de los
recombinantes observados para cada par de genes respecto al número
total de individuos de la descendencia:

Cálculo de la frecuencia de recombinación entre a y b.

Este valor se obtiene de considerar el porcentaje de recombinantes en zona I

más los dobles recombinantes, ya que estos incluyen entrecruzamientos en esta
zona.

% recombinación entre a y b= % de recombinación en zona I + % D.R.

% recombinación entre a y b= 5,7 + 1,3

% recombinación entre a y b= 7%

Cálculo de la frecuencia de recombinación entre b y c.

Este valor se obtiene de considerar el porcentaje de recombinantes en zona II

más los dobles recombinantes, ya que estos incluyen entrecruzamientos en
esta zona.

% recombinación entre b y c= % de recombinación en zona II + % D.R.

% recombinación entre b y c= 16,7 + 1,3

% recombinación entre b y c= 18%

Cálculo de la frecuencia de recombinación entre a y c

5,7 + 16,7 + 2(1,3)= 25%
% recombinación entre a y c= 25 %

Nótese que para calcular la recombinación entre los genes extremos a la suma
de los porcentajes de recombinación en zona I y en zona II se agrega el doble
de la frecuencia de los doble recombinantes (2,6%). Al añadirlo al 22,4 por
ciento resulta un total de 25% para a-c, que es la suma exacta de las distancias
a-b (7) y b-c (18).

Las distancias génicas se obtienen a partir del porcentaje de recombinación,

siendo un uno por ciento de recombinación igual a un centiMorgan (cM) o una
unidad de mapa genético (u.m.)

COINCIDENCIA E
INTERFERENCIA

La baja frecuencia de los dobles entrecruzamientos indica la dificultad que se

presenta para separar en un entrecruzamiento el gen central de los genes que
se hallan a ambos lados del mismo. Esta dificultad aumenta ya que los dobles
entrecruzamientos se producen por lo general con una frecuencia incluso
menor a la esperada.
Si el entrecruzamiento de una pareja de loci no afectase al entrecruzamiento
de una pareja vecina, se espera que los dobles entrecruzamientos se
presenten con una frecuencia igual al producto de ambas frecuencias
(probabilidad combinada de dos sucesos independientes). Sin embargo, la
frecuencia observada siempre es menor que la esperada. Aparentemente
el entrecruzamiento en una región interfiere con el entrecruzamiento en una
región vecina.
Este fenómeno se designa como interferencia (I). La medida de la
interferencia se calcula a partir del coeficiente de coincidencia (c.c.) que es la
relación entre los dobles entrecruzamientos observados y los dobles
entrecruzamientos esperados.
Ejecución en programa R

#Determinación de Distribución genotipica segregacion independiente o ligada

cruce <- c(140, 38, 32, 150)
dist <- chisq.test(cruce, p = c(1/4, 1/4, 1/4, 1/4))
dist

#Ho: Hubo segregación normal, por lo tanto del cruce de prueba

#Hi: El cruce de prueba de un dihíbrido resultara en una proporción
#fenotípica diferente de ¼ para cada fenotipo resultante.

#de un heterocigoto se espera ½ de cada clase fenotípica.

#Chi cuadrado locus A
locus_a <- c(178, 182)
dist_a <- chisq.test(locus_a, p = c(1/2, 1/2))
dist_a

#de un heterocigoto se espera ½ de cada clase fenotípica.

#Chi cuadrado locus B
locus_b <- c(172, 188)
dist_b <- chisq.test(locus_a, p = c(1/2, 1/2))
dist_b

#Frecuencia de recombinación (FR)

FR<- (38+32)/(140+38+32+150)*100
FR

#Calculo recombinación entre a_b=%RI+%DR Donde: %RI=Recombinantes

en I zona,
#%DR=Dobles recombinantes
a_b<- (27+30)/1000*100+(5+8)/1000*100
a_b

#Calculo recombinación entre b_c=%RI+%DR Donde: %RII=Recombinantes

en II zona,
#%DR=Dobles recombinantes
b_c<- (81+85)/1000*100+(5+8)/1000*100
b_c

#Calculo recombinación entre a_c=%RI+%DR+2DR

a_c<- ((27+30)/1000*100) + ((81+85)/1000*100) + (2*(5+8)/1000*100)
a_c

#Calculo Coeficiente de coincidencia

DR <- (5+8)/1000*100

CC<- (5+8)/((0.07 * 0.179)*1000)

CC
#De los 100

crossing over teoricamente se han realizado 104%