Traducción de la información genética

Traducción

Proceso altamente conservado en todos los organismos

Costo energético muy alto (en bacterias de crecimiento

rápido se invierte 80% de la energía)

Altamente complejo, intervienen más de 100 proteínas y

ARNs
 Antecedentes históricos

1908: A Garrod: relación

genotipo-proteínas

1941: G. Beadle y E.
Tatum: relación directa
entre genes y enzimas en
rutas bioquímicas de
Neurospora crassa.
 Antecedentes históricos
Crecim. en medio mínimo

RX

cultivo en medio completo

cultivo en medio mínimo

Mutantes auxótrofos con

una deficiencia nutricional

La aparición de la cepa
mutante se debe a un
cambio en un gen
 Antecedentes históricos

1940-1950: Micrografía electrónica de un ribosoma

1950s: los ribosomas son el asiento de la síntesis proteica

Polirribosoma - micrografía
 Antecedentes históricos

1957: Zamecnik P., Hoagland M.

Antes de incorporarse a la proteína, los aminoácidos se unen
a unas “moléculas adaptadoras”
Esas moléculas son los ARN de transferencia
 Experimentos de Nirenberg y Leder

1964: Nirenberg y Leder: descifrado del código genético.

Experimentación con extractos de E. coli libre de ADN

Hipótesis del triplete:

1 nucleótido: 4 posibilidades
2 nucleótidos: 4x4=16 posibilidades
3 nucleótidos: 4x4x4=64 posibilidades
 Experimentos de Nirenberg y Leder

Extractos de E. coli libre de ADN

+ ARN sintético poli-U
+ ARNt cargados con uno de los aa marcado
+ ribosomas unidos a un filtro

+ +
Experimentos de Nirenberg y Leder

+ +
C
C
C
Experimentos de Nirenberg y Leder
 Código genético

- 61 codones correspondientes a un aminoácido; uno

de los codones es señal de iniciación: AUG (en
bacterias puede ser también GUG o UUG)

- 3 codones stop o señales de terminación: UAA,

UAG, UGA
Código genético
 Marco abierto de lectura

ORF= open reading frame:

Sucesión de codones contiguos que especifican una
proteína. Comienza y termina en sitios internos
dentro del ARN mensajero (distintos de los extremos
del ARNm)
 Marco abierto de lectura

Cada ARNm contiene al menos un ORF

Eucariotas: 1 ORF
Procariotas: 1, 2 o más ORF = ARNm policistrónico
 Acoplamiento traduccional

En ARNs mensajeros policistrónicos, puede haber

solapamiento de los codones de terminación e
iniciación:
AUG
AUGA
UGA

La traducción del 2do. ORF requiere la previa

traducción del 1ro.
Componentes que intervienen en la
traducción del ARNm
Componentes que intervienen en la
traducción del ARNm
 Componentes que intervienen en la
traducción del ARNm

Aminoacil ARNt sintetasas:

familia de enzimas donde cada una reconoce un aa específico

y los ARNt isoaceptores correspondientes a ese aa.
catalizan la unión covalente del grupo carboxilo del aa al
extremo 3´ del ARNt
 Ribosomas

- Son los coordinadores de la síntesis proteica

- Ubican los elementos de la síntesis en la
posición correcta
-Catalizan algunas reacciones químicas de la
traducción
 Ribosomas

Aprox. 20.000/ célula >> n°/ célula

 Genes de ARNr

Especie Copias de genes ARNr

Escherichia coli 1
Levaduras 100-200
Rana sp. 450
Homo sapiens 280
 Genes de ARNr

Procariotas: Eucariotas:
Dispersos Dispuestos en tándem
1 tipo de gen para los 3 2 tipos de genes: 1 para 5,8S,
ARNr 18S y 28S; otro para 5S
Procesamiento postranscripcional de ARNr en procariotas y
eucariotas: metilación y escisión.
-- En eucariotas, con
participación de los snoARN
 ARNt

Moléculas adaptadoras entre el

ARNm y el polipéptido en síntesis.
Tamaño pequeño: 74-95 nucleót.
Contienen nucleót. modificados

Bacterias: 30-45 ARNt

Eucariotas: hasta 50 ARNt
 Procesamiento de losARN de
transferencia

1- Escherichia coli: Trimming: transcripción de un ARNt

precursor grande, y corte en varios ARNt.
2- bases raras: por modificación de bases nitrogenadas
clásicas
3- eliminación de intrones por corte y empalme:
algunos eucariotas, arqueobacterias.
 Procesamiento de losARN de
transferencia

4- adición de CCA en extremo 3´ Secuencia 5´-

CCA-3´ universalmente conservada
Si no está, es sintetizada por una enzima dadora
de CCA que no requiere molde.
 ARNt
Brazo D: contiene siempre una
dihidrouridina

Brazo anticodón: contiene el

triplete que empareja con el mRNA

Lazo V: contiene 3 a 5 nt. (Clase 1)

o 13 a 21nt.(Clase 2)

Brazo Timina - Pseudouridina -

Citosina

Brazo aceptor: unión del aa. por

aminoacil sintetasas
 ARNt
Otras bases raras:
Hipoxantina
Timina
Metilguanina

Las células que carecen de bases

modificadas en sus ARNt, tienen
una tasa de crecimiento reducida.
 Aminoacil-ARNt-sintetasas

Alta fidelidad, son 20, unen el aminoácido específico a los

ARNt con gasto de ATP (esterificación)

-COOH

Groove: surco
 Aminoacil-ARNt-sintetasas

Importancia de la alta fidelidad:

El ribosoma no puede discriminar entre un ARNt cargado
correctamente y un ARNt cargado erróneamente

-COOH

Groove: surco
ARN de transferencia
 Unión ARNm-ARNt
interacción codón-anticodón

La 3ra. base del codón no está totalmente alineada

con la 1ra. del anticodón. Se aparea con menos
restricciones = titubeo G-U

Codón de Isoleucina

Codón de Metionina
La traducción del ARNm puede
dividirse en 3 pasos

- Iniciación

- Elongación

- Terminación
 Iniciación de la traducción

Ensamblado del ribosoma con el ARNm, en posición

aguas arriba del codón de iniciación, por
reconocimiento de un sitio de unión del ribosoma en el
ARNm: en procariotas secuencia Shine-Dalgarno, y
otras
 Iniciación de la traducción

Bacterias:
Subunidad menor + un Factor de iniciación se unen a la
secuencia ARNm por apareamiento de bases con la
subunidad menor
 Iniciación de la traducción

Bacterias:
Otro factor de iniciación
(IF2) coloca el ARNt
iniciador (aminoacilado
con N-formilmetionina)
en posición (con gasto
de GTP)
 Iniciación de la traducción

Eucariotas:
Unión de la subunidad menor al
ARNm por su extremo 5´
mediada por la caperuza y la
cola poli-A. Formación de un
complejo de iniciación.
Escaneo hasta hallar el codón
de iniciación.
No requiere fMet
 Iniciación de la traducción

Termina con la unión de la subunidad mayor con

gasto de GTP, y determina la liberación de los
factores de iniciación
 Factores de Iniciación
(IF: initiation factors)

Bacterias
IF-1: unión de las subunidades mayor y menor, probable
entrada correcta de los ARNt al sitio A
IF-2: dirige ARNtMet a la posición correcta en el complejo
de iniciación
IF-3: previene asociación prematura del ribosoma
 Factores de Iniciación
(IF: initiation factors)
Eucariotas
eIF-1, eIF1A, eIF-3: complejo de preiniciación
eIF-2: unión de ARNtMet al complejo de preiniciación
eIF-2B: regenera el complejo eIF-2-GTP
eIF-4A, eIF-4E, eIF-4F, eIF-4G: complejo de unión cap
eIF-4B y eIF-4H: escaneo del ARNm
eIF-5: liberación de los otros factores de iniciación
eIF-6: previene unión de subunidades en el citoplasma
 Regulación de la iniciación
de la traducción

Dos puntos de control:

-global: afecta cantidad proteica total. Ej. en eucariotas,
todos los mRNA con mecanismo cap, impidiendo la unión
eIF-2 con GTP
-específico: afecta uno o un grupo de proteínas
relacionadas. Ej. en bacterias, operones con genes que
codifican proteínas ribosómicas
 Etapa de elongación

Con la unión de la
subunidad mayor del
ribosoma se generan
sitios de unión para los
ARNt:
P = peptidílico
A = aminoacílico
 Etapa de elongación

Un factor de elongación
coloca el ARNt en el sitio
A, con gasto de GTP
 Etapa de elongación

Formación del enlace

peptídico entre ambos
aminoácidos, con gasto
de GTP.
Responsable: peptidil
transferasa (ribozima)
 Etapa de elongación

Translocación:
El ribosoma se desplaza 3 nucleótidos hacia 3´
El dipéptido se posiciona
en el sitio P y se libera
el ARNt de fMet
Gasto de GTP
 Factores de elongación
(EF: elongation factors)

Bacterias:
EF-1A: posición correcta del tRNA siguiente
EF-1B: regenera EF-1A
EF-2: desplazamiento del ribosoma por el ARNm
Eucariotas:
eEF-1: complejo formado por 1A, 1B, 1D y 1G; posición
correcta del tRNA siguiente
eRF-2: media la traslocación (desplazamiento)
 Factores de elongación
(EF: elongation factors)

Toxina diftérica:
Inhibe el factor de elongación 2.
El ribosoma no puede desplazarse
hacia el siguiente codón.
Se detiene la síntesis proteica.
 Terminación de la traducción

Un factor de
liberación reconoce
un codón de
terminación, e
ingresa al sitio A
 Terminación de la traducción

No se incorpora
ningún aminoácido.
Se libera el
polipéptido
 Terminación de la traducción

Se disocian las
subunidades del
ribosoma y
vuelven al pool
citoplasmático
 Factores de liberación
(RF: release factors)

Bacterias:
RF-1: reconoce 5´-UAA-3´ y 5´-UAG-3´
RF-2: reconoce 5´-UAA-3´ y 5´-UGA-3´
RF-3: estimula disociación RF-1 y RF-2 del ribosoma
Eucariotas:
eRF-1: reconoce los 3 codones de terminación
eRF-3: posible disociación eRF-1, posible disociación del
ribosoma
 Factor de reciclado del ribosoma
(RRF: ribosome release factors)

disociación de las subunidades del ribosoma, hasta la

próxima ronda de traducción

Bacterias:
RRF: requiere gasto de energía (GTP)
Eucariotas:
No se ha identificado un RRF; posible función de
eRF-3