Regulación de la expresión

génica en eucariotas
 La regulación génica es más compleja en
eucariotas
Procariotas Eucariotas

ADN desnudo cromatina

N° cromosomas 1 muchos

Asociación sí no
transcr.-traducc.

Interruptor sec. activadoras condensación cromatina

+ sec. activadoras
Regulación post-transcripcional de la
expresión génica en eucariotas
 Acoplamiento/separación de etapas

- Procariotas:
Procariotas
- la transcripción y la traducción
están acopladas.
-Eucariotas
- separación espacial de la
transcripción (nuclear) y la
traducción (citoplásmica)
 Genes

- Procariotas:
- colinealidad (continuidad) entre genes y proteínas
- n° de nucleótidos proporcional al n° de aa.
-Eucariotas
- discontinuidad en la mayoría de los genes
- mucho más ADN que el necesario para codificar ARNs
 ARNm eucariótico

• monocistrónico
• Presencia de exones e intrones en el pre-ARNm
Procesamiento postranscripcional

- 60% de los transcritos de genes humanos son

procesados de maneras diferentes
Procesamiento postranscripcional del
ARNm eucariótico

- Adición de un casquete o caperuza en 5´

- Poliadenilación en 3´
-Empalme o splicing de exones
-Edición de secuencia
 Adición del casquete 5´

Se adiciona un nucleótido modificado:

Guanosina
+ metilo Enlace 5´- 5´

= 7-metil-guanosina
 Adición del casquete 5´

- estabilidad del mensajero

- enzima sólo asociada a pol. II
- no existe casquete en ARNr ni ARNt
 Rol del casquete 5´ en el inicio de la
traducción

- unión de proteínas de reconocimiento del

casquete
- unión al ribosoma
- iniciación de la traducción
 Poliadenilación

• Reconocimiento de secuencia consenso: AAUAAA

• Corte a 10-30 pb hacia 5´de la sec. Consenso
• poli-A polimerasa + factores de poliadenilación: 50 a
250 residuos de Adenina
• no están codificados en la secuencia de ADN
 Poli-A

• Estabilidad del mensajero (vida media)

• unión al ribosoma

http://www.icampus.ucl.ac.be/SBIM2520/document/genemol/biomolespa/transcripcion/transcripcion.html
 Corte y empalme

- Posterior a la poliadenilación
- reconocimiento de secuencias intrónicas
- eliminación de intrones
Corte y empalme: alternativos
 Tipos de intrones

tipo I genes de ARNr autocorte y empalme

tipo II genes q cod. proteínas autocorte y empalme
en mt. y clorop.
Pre-ARNm genes q cod. proteínas corte por empalmosoma
nuclear en núcleo
ARNt genes de ARNt corte por enzimas
 Autocorte y Empalme

- Intrones tipo I y II, actúan como ribozimas

- Gasto de ATP Tipo I Tipo II

- Pliegue y formación de
estructuras secundarias
complejas; autocorte y
empalme
- ARNr procariotas, ARNm mt.
de hongos y ARNm de
bacteriófagos
 Empalme del Pre-ARNm nuclear

3 secuencias consenso intrónicas:

- Sitio 5´ : GU
-Sitio 3´ : AG
-Punto de ramificación : A entre 18-40 nt hacia 5´ del sitio
3´ y 3 pirimidinas
 Empalmosoma

snARN: U1, U2, U4, U5, y U6

+
300 proteínas
=
snRNPs : ribonucleoproteínas nucleares
pequeñas
 Acción del Empalmosoma

- Corte en 5´ y liberación del

exón 5´
- Unión G-5´ con A del punto
de ramificación (bucle)
- Corte en 3´
- Linearización y degradación
del intrón
 Intrones de ARNt o tipo IV

Enzimas independientes del

empalmosoma
 Empalme alternativo

Múltiples
ARNm de un
solo
transcrito
primario
 Ejemplo de empalme alternativo

gen de la Calcitonina

• Cerebro: poliadenilación después del 6to.exón.

Exones 1, 2, 3, 5, y 6 = Péptido Relacionado con el
Gen de la Calcitonina = CGRP
 Ejemplo de empalme alternativo

gen de la Calcitonina

• Glándula tiroides: exones 1, 2, 3 y 4 presentes =

hormona calcitonina
 Corte y empalme trans

• Unión de exones ubicados en diferentes ARNm

• Platelmintos,
• Nematodes, Drosophila,
vertebrados
 Edición de los ARN

• Genes nucleares y mitocondriales

• Luego de la transcripción, poliadenilación, corte y

empalme, la secuencia se altera

• Comprende conversiones, inserciones y deleciones

 Mecanismos de edición de ARN

• ARN guías:
parcialmente
complementarios, se
aparean con el ARN a
modificar. Lo modifican
y unen los extremos
cortados.
 Mecanismos de edición de ARN

• ARN guías: adición o

deleción de uracilos
 Mecanismos de edición de ARN

• Conversión enzimática de bases:

• Desaminación de Citosina

• Metilación de Uracilo =
Ribotimidina

• Cambio de unión ribosa-

Uracilo = Pseudouridina

• Desaminación de Adenina
Silenciamiento postranscripcional de
genes: microARNs = miRNAs

• moléculas cortas de ARN

• altamente conservados en organismos eucariotas
(levaduras, plantas, hongos y animales)
 ARN pequeños

Inhibición de la expresión génica por ARN cortos:

- micro ARN (miRNA)
- ARN interferentes pequeños (siRNA)

Descubiertos por A. Fire y C. Mello

Premio Nobel 2006 en Fisiología y
Medicina
 ARN pequeños

- ARN doble cadena

- moléculas de ARN cortas, aprox. 21 nt.
- pueden reprimir la transcripción (núcleo) o la
traducción (citoplasma)

Animales: interferencia
Plantas: silenciamiento postranscripcional
 ARN-polimerasas en eucariotas

ARN pol. I ARN pol. II ARN pol. III

ARNr ARNm ARNt

ARNr28S; 5,8S; 18S Genes codif.. de proteínas ARNt, ARNr5S, snARN,

miARN, snARN snoARN
miRNA
• transcripción de
miARNs Primarios
de doble cadena,
por la ARN-pol. =
Pri-miRNA
miRNA
• procesamiento del
poli-A por la
ribonucleasa
Drosha =
Pre-miARN
miRNA
• Trasporte al
citoplasma por una
exportina
miRNA
• clivaje por la
enzima Dicer
miRNA
• Selección de una
de las dos hebras
del miRNA maduro
y asociación al
complejo RISC
(complejo de
silenciamiento
inducido por ARN)
Silenciamiento de ARNm por miARN

• En asociación con
el complejo de
endonucleasa
RISC
• Clivaje del ARNm
 Estabilidad del ARNm eucariótico

• Vida media más larga que el ARNm procariótico

• Mayor estabilidad
• Aumenta la posibilidad de regulación de la traducción
 Regulación global del inicio de la
traducción en eucariotas

• En situaciones de estrés o escasez de nutrientes

• Reducción global de la traducción
• Por inhibición de eIF2. Fosforilación de eIF2, impide
unión a GTP.
• Ante la falta de eIF2-GTP, se impide la unión del
ARNt iniciador al sitio P.
 Degradación de ARNms erróneos

• Mecanismo de monitoreo de la integridad de los

ARNm en eucariotas
• Detección de codones stop prematuros generados
por mutación o error de empalme
• Remoción de la caperuza 5´ o de la cola poliA
• Degradación del ARNm desprotegido por
exonucleasas
 Degradación de ARNms erróneos

• Detección de ARNms sin codón stop

• El ribosoma continúa traduciendo hasta poliA
• Genera poli-lisina
• Reconocimiento por proteínas asociadas a eRF1 y 3
• liberación del ribosoma y degradación por
exonucleasas
Utilización de Drosophila
melanogaster para estudios
de expresión génica en
eucariotas
 Moscas GAL4-UAS

- origen mixto: levaduras-drosofilas

- permite expresar in vivo cualquier gen, proveniente
de cualquier especie, de manera dirigida y
específica
- en cualquier órgano o tejido de la mosca
- en cualquier etapa del ciclo vital
 Línea de moscas GAL4

Expresa GAL4 con un patrón específico de

tejido o de células

GAL4

Promotor
endógeno

Sin efecto fenotípico para la mosca

 Expresión de GAL4
- factor de transcripción eucariótico, de levaduras
- activa genes con la secuencia de reconocimiento
UAS (ausentes en la mosca)
- Puede asociarse a:
- un promotor débil: se mantiene inactivo a
menos que tenga un amplificador
cercano.
- un promotor específico de tejido: el
sistema se expresará en un tejido
particular
- promotor de un gen “house-keeping”: gen
que se expresa en todos los tejidos
 Línea de moscas UAS
Posee la secuencia UAS =upstream activation
system, que se mantiene “apagada” en ausencia de
GAL4

Gen efector

Sitio UAS de
unión para GAL4

Sin efecto fenotípico para la mosca

 Gen efector aguas abajo de UAS

Puede ser:
- Reporter: “marca” las células que expresan el
sistema. GFP (green fluorescent protein), lac-Z
(beta-galactosidasa), etc.
- Activador: ej. factor de transcripción
- Inhibidor: ej. toxina de tétanos para inactivar
neuronas
 Cruzamiento moscas GAL4 x UAS
La descendencia expresa GAL4.
GAL4 activa la expresión del gen precedido por UAS

el gen se
GAL4
expresa

Promotor Sitio UAS de

endógeno unión para GAL4
 Utilidad

Permite estudiar la regulación espacial en el

organismo y temporal a lo largo de la ontogenia de
distintos genes
 Ejemplo

Gen eyeless: cascada genética para la construcción

de un ojo

Promotor de Dpp (se

expresa en varios Sitio UAS de
GAL4 gen eyeless
tejidos) unión para GAL4

Ojos supernumerarios por

activación de eyeless en
distintas regiones del
cuerpo