Practicas de Hematologia

APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA 2020
QFB, FCQ, UANL

Cuantificación de Hemoglobina en sangre.
Lecturas previas que se considerarán para el examen diario

Manual de Hematología:
 Métodos de extracción de sangre (pp. 21 a 27)
 Biometría hemática (pp. 28 a 31)
 Cuantificación de hemoglobina (hemoglobinometría) (pp. 32 a 34)
Material necesario para la práctica

 Una pipeta serológica de 5 ml
 3 tubos de 13 x 100 mm
 Una pipeta Sahli para dilución de hemoglobina
 Una boquilla para pipeta Sahli (de preferencia comprar para su uso personal o
de lo contrario al pedirla en el almacén lavarla bien y desinfectarla y usarla por
todo el semestre)
 Gradilla para los tubos de 13 x 100 mm
 Espectrofotómetro
 Celda para espectrofotómetro
Boquillas
Pipeta Sahli
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Estructura del grupo hem
 Hb reducida= Fe2+
 Metahemoglobina = Hb oxidada con Fe3+ (MetaHb)
 Cianometahemoglobina= el CN se acompleja con la metahemoglobina
Dilución de la muestra:
Para fines prácticos se calcula la dilución dividiendo 5/0.02 lo cual da 250.
Nota:
Para la determinación deberán contar con guantes desechables, lentes de seguridad,
papel absorbente y por supuesto su bata de laboratorio así como la indumentaria
adecuada para el trabajo en el laboratorio.
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Hematocrito

 Hematocrito (volumen de glóbulos rojos sedimentados) (pp. 35 y 36)

 Torundas con alcohol
 Lancetas estériles
 Tubos capilares heparinizados para microhematocrito
 Plastilina para sellar el tubo capilar
 Centrífuga para micro-hematocrito
 Regla milimétrica (hasta 10 cm de longitud)
 Medidor de micro-hematocrito
Procedimiento:
1.- Desinfectar la yema del dedo con alcohol, secándola

posteriormente al aire o con un algodón. Utilizar
siempre guantes y lancetas estériles. Los tubos de
micro-
hematocrito deben de ser preferiblemente
heparinizados.
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2.- Punzar la yema del dedo con la lanceta y

presionar el mismo para que salga sangre.
3.- Llenar el capilar del micro-hematocrito

apoyando uno de los extremos sobre la gota de
sangre del dedo.
4.- Taponar el extremo más próximo a la sangre
(por el que se hizo el
llenado) con
plastilina.
5.- Centrifugar el capilar durante 5 minutos a

10,000 rpm en una centrífuga específica para
micro-hematocrito.
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6.- Con la regla milimétrica medir la longitud

que ocupa en el capilar la columna formada por
glóbulos rojos sedimentados y referirla en tanto
por ciento a la longitud total que ocupa la sangre
que llena el capilar.
Se puede hacer la medida del hematocrito de forma directa, utilizando una

plantilla especialmente diseñada para ello. Basta con desplazar el tubo
hacia la derecha, manteniendo la interfase plastilina-elementos formes en
la línea horizontal inferior, que marca el cero, hasta que el límite superior
del plasma alcanza el valor de 100%.
En esas condiciones, la interfase plasma-elementos formes nos estaría
marcando el valor de hematocrito. En la parte inferior se muestra una
simulación de dicho proceso:
También se puede utilizar un lector para microhematocrito.

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Valor de referencia:
El rango de valores normales, es el siguiente:
Mujeres: 35-47% ó 0.35-0.47 L/L
Hombres: 40-52% ó 0.40 a 0.52 L/L
Nota:
papel adsorbente y su bata de laboratorio así como la indumentaria adecuada según lo
marca el Reglamento de trabajo en los laboratorios de FCQ.
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Recuento de Eritrocitos e Índices Eritrocitarios
Lecturas previas para el Examen Diario

 Métodos de extracción de sangre (pp. 21 a 27)
 Biometría hemática (pp. 28 a 31)
 Recuento globular (eritrocitos) (pp. 37-39)
 Valores corpusculares de los hematíes, índices eritrocitarios (pp. 40-41)
Material necesario para la práctica:

 Pipetas Thoma para dilución de eritrocitos
 Boquilla para pipeta Thoma
 Cámara de Neubauer (Hematímetro)
 Cubrehematímetro
 Microscopio
101 0.5
Pipeta THOMA para dilución de
sangre, glóbulos rojos (eritrocitos)
Tolerancia: ± 3%
Surco o hendidura 3 Plataformas

transversal
Fosas
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0.1 mm de espesor
entre el cubreobjetos
y la plataforma
cuadriculada
Cámara de Neubauer (vista frontal) Cámara de Neubauer (vista lateral)
Se ha marcado con la ayuda de un diamante una

cuadrícula como la que se ve en la imagen.
Es un cuadrado de 3 x 3 mm (9 mm), con una separación

entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm.
La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1

mm respecto a la superficie, de forma que cuando se
cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie
marcada 0.1 milímetro.
Observe que en la cuadrícula de la cámara de

Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y
leucocitos son diferentes.
Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas

de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan
en las áreas coloreadas de azul.
Tener en cuenta que la cuadrícula central tiene 25

cuadrados y cada uno mide 0.2 x 0.2 mm. Cada uno de
estos está dividido en 16 cuadrados más pequeños.
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Procedimiento para el Recuento de Eritrocitos:
Se mezcla la sangre hasta que esté

homogénea.
Se aspira con la pipeta de dilución
perfectamente limpia y seca hasta la marca de
0.5. Hay que evitar la entrada de burbujas de
aire, pudiendo ayudarnos de un papel de filtro
para conseguir el enrasado.
La punta y el exterior de la pipeta se limpian
antes del siguiente paso.
A continuación se toma con la pipeta líquido de

Hayem isotónico o NaCl 0.85% o 0.9%, hasta la
marca de 101; así, la sangre queda diluida
1/200 (redondeando 100 ÷ 0.5).
Agitamos la pipeta mecánica o manualmente

para que los eritrocitos se mezclen
homogéneamente con el líquido de dilución. A
través de la goma de conexión con la pipeta,
soplamos para desechar las primeras 4-5 gotas
por corresponder al líquido que estaba en el
capilar.
Se adapta un cubreobjetos (cubre-hematímetro)

sobre una cámara cuenta glóbulos limpia y seca
y se coloca una gota en uno de los lados del
cubre; esta gota penetra por capilaridad y
rellena el retículo de la misma.
Evitar el sobrellenado que levanta el cubre-
hematímetro lo cual causa un error positivo por
aumentar el volumen medido.
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Una vez preparada la cámara se coloca sobre la

platina del microscopio dejándose unos minutos
en reposo para que sedimenten los glóbulos.
Disponemos el condensador bajo y luz débil;

enfocamos primero con el objetivo débil seco
(10X) y luego se cambia al fuerte seco (40X)
para proceder al recuento, que se lleva a cabo
en los cuadrados pequeños del retículo
marcado en color rojo.
Finalizado el recuento se procede a la limpieza
de la pipeta con agua destilada y se deja secar
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La imagen de abajo simula el campo que está viendo al microscopio con un objetivo de 45x. Solo es
visible el centro de la cuadrícula. Cuenta los glóbulos rojos en los cinco cuadrados mencionados
anteriormente y determina el recuento de eritrocitos como se ha descrito anteriormente.
Muy importante: Cuando un eritrocito se sitúa en mitad de las líneas superior y/o de la izquierda,
entonces es contabilizado. Pero no se contabiliza cuando se sitúa en mitad de las líneas inferior y/o de la
derecha.
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En los cuadros encerrados en un círculo azul se cuentan leucocitos y los eritrocitos se cuentan en los
cuadros encerrados en un círculo rojo.
Se debe llevar una secuencia de conteo para no confundirse y olvidar contar algunos o contar dos veces.
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En resumen:
o La cámara de Neubauer está dividida en 9 cuadrados de 1 mm de lado.
o Los cuadros de las cuatro esquinas (marcados con L o azul claro) sirven para contar leucocitos.
o El cuadro central, a su vez está dividido en 25 cuadros más pequeños de 0.2 mm de lado cada uno,
en los cuales se cuentan los eritrocitos en cinco de ellos (los de las cuatro esquinas y el del centro
marcados en rojo).
o El espacio que queda entre la base de la cámara y el cubreobjetos es de 0.1 mm, por lo tanto el
volumen de líquido en el cual se cuentan los eritrocitos se determina considerando la superficie de
los 5 cuadrados en los cuales se cuentan las células y la profundidad de la cámara que es de 0.1
mm.
o Por lo tanto el volumen total contado es:
o Superficie de cada cuadrado: 0.2 mm x 0.2 mm por cuadrado = 0.04 mm2
o Superficie total en 5 cuadrados: 0.04 mm 2 x 5 = 0.2 mm2
o Volumen total contado = 0.2 mm2 x 0.1 mm = 0.02 mm3
La dilución de la muestra fue de 1:200, el cálculo de eritrocitos se realiza de la siguiente manera:

En 0.02 mm3 de muestra diluida (1:200) hay Y número de eritrocitos (contados en los 5 cuadros)
En 1 mm3 de muestra sin diluir hay X número de eritrocitos.
No. de Eritrocitos por mm 3 de sangre (X) = Y x 200 (dilución)

0.02 mm3
Índices Eritrocitarios
VGM ó VCM= Volumen Globular Medio ó Volumen corpuscular medio

MCV en inglés =Mean cell volume.
Representa el volumen individual de los eritrocitos expresado en femtolitros.
Recuento automatizado de glóbulos rojos y VGM

Los contadores de células más comunes se basan en el principio de la “impedancia
eléctrica”, conocido como principio de Coulter en honor al ingeniero Wallece Coulter
quien lo describió en 1956 y que ha permitido realizar el recuento de eritrocitos,
leucocitos y plaquetas con gran precisión y eficiencia.
El principio de impedancia eléctrica mide el número y el tamaño de partículas
(células), de acuerdo con los cambios que se producen en la resistencia eléctrica al
pasar éstas por un pequeño orificio. Las células sanguíneas, que no son
conductoras de electricidad, se diluyen en una solución amortiguada de electrolitos
como la solución salina (conductora), que pasa por un orificio (por lo general de 100
µm de diámetro) en un tubo de apertura entre dos electrodos (positivo “ánodo” y
negativo “cátodo”) colocados a ambos lados del orificio.
La interrupción de la corriente por las células altera la carga eléctrica y se produce
una pulsación. La amplitud de cada pulsación es proporcional al volumen de la
célula y el recuento total de eritrocitos se determina a partir del número total de
señales obtenido en un determinado volumen de sangre. El VGM se obtiene por el
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promedio de las amplitudes de cada pulsación, las cuales representan el volumen de

cada eritrocito.
Los contadores de partículas para determinar el número de eritrocitos cuentan por
triplicado un promedio de 70.000 células con un coeficiente de variación menor de
1.0%, en contraposición con el recuento manual que oscila entre 11 y 22%.
Este método de contar eritrocitos es muy preciso y por lo tanto el cálculo de VGM
por este método también lo es.
VGM obtenido de una Biometría Hemática por el método manual.

En este caso se relacionan el Recuento de Eritrocitos y el Hematocrito para obtener el
volumen individual promedio de los eritrocitos.
El método manual de recuento de eritrocitos tiene muchos puntos críticos por lo tanto es
muy impreciso, lo cual no da resultados muy confiables de VGM.
o El Hematocrito representa el volumen total de todos los eritrocitos en 100 ml de sangre
(%) o en un litro de sangre (L/L)
o La cuenta total de eritrocitos me indica cuantos eritrocitos hay en cada mm 3 (L)o bien
en cada litro de sangre, según las unidades en que se exprese.
Ejemplo:
Hematocrito = 45 %, 0.45 L/L
45 % significa que en 100 mL hay 45 mL de eritrocitos o lo que es lo mismo en 1 L de
sangre hay 0.45 L de eritrocitos.
Eritrocitos = 5.0 x 106 /mm3, 5.0 x 1012 /L
Para calcular El VGM se relaciona el número de eritrocitos por litro, con el volumen total de
eritrocitos en el mismo litro de sangre.
5.0 x 1012 eritrocitos ocupan un volumen de 0.45 L (Hto)

¿Qué volumen ocupa un eritrocito?
VGM = Hto L/L = 0.45 L/L

Eritrocitos /L 5.0 x 1012/L
Si despejamos las unidades nos van a quedar litros y el resultado de este ejemplo sería
0.09 x 10-12 L.
Para que las unidades queden en números enteros se multiplica por 1000, lo que nos
da 90 x 10-15 L.
10-15 L es igual a 1fL =femtolitro
Si usamos el hematocrito en % debemos multiplicar por 10

VGM = Hto L/L = 45 % =9 x 10 = 90 fL
Valores de referencia = 80-100 fL

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Tomar en cuenta que la forma correcta es la primera pues maneja las unidades
correctas. La segunda fórmula es solo para ajustarse a las unidades.
HCM ó MCH = Hemoglobina celular media ó mean cell hemoglobin

Es el promedio de la concentración de hemoglobina que posee cada eritrocito.
Esta es calculada a partir de la hemoglobina en sangre y del recuento de eritrocitos,
tanto por el método manual como por el automatizado.
La confiabilidad de este dato (HCM) depende del método por el cual se contaron los
eritrocitos. Por lo tanto el automatizado es muy confiable pero el manual no lo es tanto.
La relación aquí es la siguiente:

o La hemoglobina representa los g de ésta que tenemos en 1 L de sangre
o La cuenta total de eritrocitos me indica cuantos eritrocitos hay en cada mm 3 (L) o
bien en cada litro de sangre, según las unidades en que se exprese.
Ejemplo:
Hemoglobina 15 g/dL, 150 g/L
Eritrocitos = 5.0 x 106 /mm3, 5.0 x 1012 /L
5.0 x 1012 eritrocitos contienen 150 g de Hemoglobina

¿Cuánta hemoglobina contiene un eritrocito?
HCM = Hb g/L = 150 g/L = 30 x 10-12 g ó 30 pg

Las unidades nos quedan g

Valores de referencia = 27 – 34 pg
CHCM ó MCHC = Concentración de Hemoglobina celular media ó mean cell

hemoglobin
Es el promedio de la concentración de hemoglobina que hay en un decilitro de
eritrocitos.
Esta es calculada a partir de la hemoglobina en sangre y del hematocrito, tanto por el
método manual como por el automatizado.
La confiabilidad de este dato (CHCM) depende del método por el cual se obtuvo el
Hematocrito. Por lo tanto el manual es muy confiable pero el automatizado no lo es ya
que el hematocrito se calcula a partir de la suma del volumen de cada eritrocito.
Calibrar el hematocrito en un método automatizado es un punto crítico del método.
La relación aquí es la siguiente:

o La hemoglobina representa los g de ésta que tenemos en 1 L de sangre
o El Hematocrito representa el volumen total de todos los eritrocitos en 100 ml
(decilitro) de sangre (%) o en un litro de sangre (L/L)
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Ejemplo:
Hemoglobina 15 g/dL, 150 g/L
Hematocrito = 45%, 0.45 L/L
45 % significa que en 100 mL hay 45 mL de eritrocitos o lo que es lo mismo en 1 L de
sangre hay 0.45 L de eritrocitos.
En 0.45 L de eritrocitos hay 15 g de hemoglobina

¿Cuánta hemoglobina contiene un decilitro de eritrocito?
CHCM = Hb g/dL = 15 g/dL = 33.3 g/dL

Hto L/L 0.45 L/L
Las unidades nos quedan g/dL

g .
dL . = g L = g/dL
dL L
L
Valores de referencia = 31 – 36 g/dL
Estos índices sirven para clasificar los eritrocitos con respecto a su volumen y cantidad
de hemoglobina, lo cual da un indicio de la causa de los defectos en los eritrocitos y en
su caso de anemia.
VGM > 100 fL es macrocitosis

VGM < 80 fL es microcitosis
CHCM > 36 es hipercromia
CHCM < 31 es hipocromia
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Recuento de Reticulocitos

 Métodos de extracción de sangre. Pp 21 a 27
 Biometría hemática. Pp 28 a 31
 Hematocrito (volumen de glóbulos rojos sedimentados) pp 35 y 36
 Recuento de reticulocitos pp 46 y 47

MATERIAL NECESARIO PARA LA PRÁCTICA:
1. Recuento de Reticulocitos
 Micropipeta de 1000 µL y puntas.
 1 tubo de 10 x 75 mm
 Portaobjetos limpios y secos
 Cubreobjetos
 Microscopio
Aceite de inmersión para microscopía
2. Para la determinación del micro –hematocrito.
 Tubos capilares sin heparina
 Centrífuga para micro-hematocrito
 Medidor de micro-hematocrito
Descripción:
Características de los reticulocitos:

 Representan la fase anterior a los eritrocitos maduros
 Carecen de núcleo
 Su tamaño es mayor al de los eritrocitos.
 Contienen restos de ARN (ribosomas)
 Se observan en las anemias hemolíticas, en la enfermedad hemolítica del recién
nacido y, en general, cuando hay una producción aumentada de eritrocitos.
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Tradicionalmente el conteo de reticulocitos se realiza a partir de la tinción de la sangre
periférica con colorantes supravitales (azul de cresilo brillante o el azul de metileno)
de sangre anticoagulada con EDTA ya que el RNA precipita observándose como
estructuras gránulo-filamentosas en el interior de estos hematíes jóvenes con ayuda del
microscopio óptico
Por otro lado, en una tinción Romanowsky (ej. Wright), el citoplasma se tiñe de rosa
con tonalidades azuladas (basofilia difusa o policromasia) debido a que contienen
residuos de aparato de golgi, mitocondrias y restos de ARN.
El número de reticulocitos en sangre periférica es un reflejo del grado de actividad

eritropoyética de la médula ósea, por lo que la identificación y cuantificación de
reticulocitos es un método para valorar la actividad eritropoyética medular.
Procedimiento:
1. Colocar en un tubo de ensayo 250 µL de la muestra de sangre y 250 µL del
colorante azul de cresilo brillante.
2. Mezclar bien y llene uno de los tubos capilares con la mezcla.
3. Dejar reposar 10-15 minutos a temperatura ambiente.
4. Hacer una extensión de la mezcla sobre un portaobjetos.
Realización de las extensiones de sangre periférica:

Uno de los métodos más empleados para la realización del frotis sanguíneo es el
método de los dos portaobjetos. Consiste en la extensión de una gota de sangre
sobre un portaobjetos mediante otro portaobjetos. La técnica es la siguiente:
1. Depositar una pequeña gota de sangre (en este caso la mezcla de sangre y
colorante) en el extremo de un portaobjetos.
2. Con el borde de otro portaobjetos a 45 grados, tocar la gota, esperar a que la

sangre se distribuya por capilaridad y después deslizar suavemente un
portaobjetos sobre el otro en sentido longitudinal hasta que la gota quede bien
extendida sobre la superficie del primar portaobjetos.
3. Dejar secar al aire
4. Observar al microscopio óptico.

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 Primero evaluar el frotis con objetivo de 40 X para seleccionar la porción

del frotis para contar.
 Contar de 1000 a 2000 eritrocitos (10-15 campos), incluyendo los
reticulocitos con objetivo de inmersión.
 Especificar cuantos reticulocitos obtuvo dentro de las 1000 células
contadas
 Obtener el % de Reticulocitos.
Recuento corregido:
El valor relativo de reticulocitos viene siempre referido a una cifra normal de hematíes,
por lo que, cuando existe anemia, dicho valor relativo debe ser corregido de acuerdo
con la intensidad de la anemia. Por esta razón, debemos medir el hematocrito.
Hematocrito del paciente x cuenta de reticulocitos (%)

0.45 L/L
Índice de producción de Reticulocitos (IPR):

Cuando la anemia es intensa, se acompaña de un estímulo eritropoyético compensador
que facilita la salida de reticulocitos acortando su periodo de maduración intramedular y
prolongando el periodo de maduración en sangre periférica.
Hto(%) T1/2 MO T1/2 SP

<15 1 3
16-25 2 2
26-35 2.5 1.5
>36 3 1
Hematocrito Cuenta de 1 .
del paciente x reticulocitos(%) x tiempo de maduración de
0.45 L/L cambio de reticulocitos
en base al Hto
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Práctica No. 6
Recuento de Leucocitos

 Métodos de extracción de sangre. Pp 21 a 27
 Biometría hemática. Pp 28 a 31
 Recuento de Leucocitos 48 y 49

 Pipetas Thoma para dilución de leucocitos
 Boquilla para pipeta Thoma
 2 Tubos de 13 x 100 mm
 1 vaso de precipitado de 50 mL
 Cámara de Neubauer (Hematímetro)
 Microscopio
0.5 11 Pipeta THOMA para dilución de sangre,
glóbulos blancos (leucocitos)
0.5:11
Tolerancia: ± 3%
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0.1 mm de espesor
entre el cubreobjetos
y la plataforma
cuadriculada
Cámara de Neubauer (vista frontal) Cámara de Neubauer (vista lateral)
Se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula como

la que se ve en la imagen.
Es un cuadrado de 3 x 3 mm (9 mm), con una separación entre dos

líneas consecutivas de 0.25 mm.
El área sombreada y marcada con L corresponde a 1 milímetro

cuadrado
El volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es

de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 microlitro.
Si contamos los leucocitos en cuatro de estos cuadros, el volumen

total contado será de 0.4 mm 3 o 0.4 microlitros
Observe que en la cuadrícula de la cámara de

Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y
leucocitos son diferentes.
Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas

de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan
en las áreas coloreadas de azul.
El factor de dilución para la cuenta de leucocitos es de

1:20. Convierte el número de glóbulos blancos
contados en los 4 cuadrados a Nº glóbulos blancos/µl.
(1 µl = 1 mm3 )
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Procedimiento para el recuento de Leucocitos:
Se mezcla la sangre hasta que esté

homogénea. Se aspira con la pipeta de dilución
perfectamente limpia y seca hasta la señal 0.5.
Hay que evitar la entrada de burbujas de aire,
pudiendo ayudarnos de un papel de filtro para
conseguir el enrasado.
A continuación se toma con la pipeta líquido de

Türk, hasta la señal 11; así, la sangre queda
diluida al 1:20
Tomamos la pipeta entre los dedos índice y

pulgar y agitamos o bien colocamos la pipeta en
un agitador para pipetas Thoma para que los
leucocitos se mezclen homogéneamente con el
líquido de dilución. A través de la goma de
conexión con la pipeta, soplamos para desechar
las primeras gotas por corresponder al líquido
que estaba en el capilar.
Se adapta un cubreobjetos (cubre-hematímetro)

sobre una cámara cuenta glóbulos limpia y seca
y se coloca una gota en uno de los lados del
cubre; esta gota penetra por capilaridad y
rellena el retículo de la misma. Evitar el
sobrellenado que levanta el cubre-hematímetro
lo cual causa un error positivo por aumentar el
volumen medido.
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Una vez preparada la cámara se coloca sobre la

platina del microscopio dejándose unos minutos
en reposo para que sedimenten los glóbulos.
Disponemos el condensador bajo y luz débil;
enfocamos con el objetivo débil seco (10X) y
luego procedemos al recuento, que se lleva a
cabo en los cuadrados grandes de las esquinas
del retículo marcado en color azul claro.
Finalizado el recuento se procede a la limpieza
de la pipeta con agua destilada y se deja secar
En los cuadros encerrados en un

círculo azul se cuentan leucocitos
y se debe llevar una secuencia de
conteo para no confundirse y
olvidar contar algunos o contar
dos veces.
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En resumen:
 La cámara de Neubauer está dividida en 9 cuadrados de 1 mm de lado.
 Los cuadros de las cuatro esquinas (marcados con L o azul claro) sirven para contar
leucocitos.
 El espacio que queda entre la base de la cámara y el cubreobjetos es de 0.1 mm,

por lo tanto el volumen de líquido en el cual se cuentan los leucocitos se determina
considerando la superficie de los 4 cuadrados en los cuales se cuentan las células y
la profundidad de la cámara que es de 0.1 mm.
 Por lo tanto el volumen total contado es:

o Superficie de cada cuadrado: 1 mm x 1 mm por cuadrado = 1 mm 2
o Superficie total en 4 cuadrados: 1 mm2 x 4 = 4 mm2
o Volumen total contado = 4 mm2 x 0.1 mm = 0.4 mm3
La dilución de la muestra fue de 1:20, el cálculo de leucocitos se realiza de la siguiente

manera:
No. de Leucocitos por mm3 de sangre (X) = Y x 20 (dilución)

0.4 mm3
= Y x 50
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Recuento de Diferencial Glóbulos Blancos

 Métodos de extracción de sangre (pp 21 a 27)
 Biometría hemática (pp 28 a 31)
 Anormalidades de los eritrocitos (pp 44 y 45)
 Recuento diferencial y apreciación de las anormalidades de leucocitos (pp. 50-
56)

 Portaobjetos
 Microscopio
Realización de las extensiones de sangre periférica:

La extensión sanguínea es de gran importancia en algunas enfermedades
hematológicas, ya que su diagnóstico puede realizarse o sospecharse sólo con
observar la morfología de las células de la sangre.
Uno de los métodos más empleados para la realización del frotis sanguíneo es el
método de los dos portaobjetos. Consiste en la extensión de una gota de sangre
sobre un portaobjetos mediante otro portaobjetos. La técnica es la siguiente:
1.- Depositar una pequeña gota de sangre en el extremo de un portaobjetos.
2.- Con el borde de otro portaobjetos a 45 grados, tocar la gota, esperar a que la
sangre se distribuya por capilaridad y después deslizar suavemente un portaobjetos
sobre el otro en sentido longitudinal hasta que la gota quede bien extendida sobre la
superficie del primar portaobjetos.
3.- Dejar secar el frotis.
Cuando la extensión se realiza por este procedimiento, el frotis presenta tres zonas
diferenciadas, en las que la morfología eritrocitaria puede variar y la distribución de
leucocitos puede ser diferente.
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La zona en que inicialmente se depositó la gota (“cabeza”) es excesivamente gruesa y

no puede ser valorada adecuadamente. A continuación se extiende el “cuerpo” de la
extensión, que corresponde a la región intermedia del frotis y en ella existe un reparto
equilibrado de las células; es la zona ideal para la observación microscópica. Por
último, al final de la extensión, se encuentran las “barbas” o la “cola”, es una zona
fina dónde las células adoptan una disposición de cordones.
Tinción de las extensiones de sangre periférica:

El frotis, una vez seco, se fija y se tiñe mediante colorantes adecuados. Generalmente,
en los laboratorios hematológicos se emplean colorantes basados en la tinción de
Romanowsky, basado en una combinación de eosina y azul de metileno.
Con la tinción de los elementos formes de la sangre se pueden distinguir los siguientes
aspectos morfológicos de las células:
 La forma, dimensión y contorno de los hematíes (de color rosa pálido),

leucocitos (células nucleadas) y plaquetas (pequeños corpúsculos).
 El núcleo: de color púrpura
 El citoplasma: de color azulado o gris en los linfocitos y monocitos.

Granulaciones: mezcla de colores pardos (neutrófilos), anaranjadas (eosinófilos)
y azul oscuro (basófilos).
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TINCIÓN CON HEMOCROM:

(TÉCNICA A REALIZAR EN EL LABORATORIO)
1. Preparar el frotis de sangre periférica (FSP) y dejar secar al aire.

2. Fijar el FSP sumergiéndolo en metanol absoluto por 10 segundos y dejar secar al
aire.
3. Sumergir el FSP fijado en el colorante eosina amarillenta por 10 a 15 segundos.
4. Enjuague el FSP con Buffer de fosfatos pH 7.2 (no sumergir el frotis, solo
enjuagar).
5. Sumergir el FSP en el colorante azul de metileno por 10 a 15 segundos.
6. Enjuague el FSP con Buffer de fosfatos pH 7.2 (no sumergir el frotis, solo
enjuagar)
7. Dejar secar al aire y observar al microscopio.
a. Primero recorra el FSP con objetivo de 10X para observar la distribución de
las células
b. Cambie al objetivo de 40X para que seleccione la sección en la cual se
llevará a cabo el conteo
c. Una vez ubicada la mejor región del FSP para el conteo, colocar una gota de
aceite de inmersión y cambiar a objetivo de 100X
Cuente a lo largo del FSP si no completa 100 regresar en dirección contraria hacia
arriba o hacia abajo del sitio inicial
Conteo en almena
QFB, FCQ, UANL
Imágenes microscópicas de frotis de sangre periférica a diferentes aumentos:
10X
40X
QFB, FCQ, UANL
40X
Zona poco adecuada para la valoración de las células sanguíneas de sangre periférica
(cerca de la cabeza del FSP)
Sangre periférica
Linfocito (100X)
Neutrófilo segmentado
QFB, FCQ, UANL
Sangre periférica
Eosinófilo (100X)
Granulocito basófilo (100X) Monocito (100X)

QFB, FCQ, UANL
Recuento de Plaquetas

 Hemostasia (pp. 67)
 Métodos de laboratorio para el estudio de la hemostasia (pp.70-71)
 Recuento de Plaquetas (pp. 75 a 77)

 Pipeta Thoma para la dilución de leucocitos
 Cajas de Petri
 Cámara de Neubauer
 Agitador mecánico para micropipetas
 Microscopio
 Papel Filtro
Método Directo Método Indirecto

QFB, FCQ, UANL
Velocidad de Sedimentación Globular (VSG)
Lecturas previas para el Examen Diario

 Determinación de la velocidad de sedimentación globular o eritrocítica por el
método de wintrobe. (pp. 42 y 43)
Material necesario para la práctica:

1. Obtención de sangre venosa.
 Torundas de algodón alcoholadas
 Torniquete de goma
 Agujas estériles desechables
 Tubos con EDTA para obtener la muestra
 Equipo para extracción de sangre al vacío
2. Para la determinación de la VSG.
 1 Tubos de Wintrobe
 1 Pipetas Pasteur (para llenar el tubo de Wintrobe)
 Gradilla para tubos de Wintrobe
QFB, FCQ, UANL
Descripción:
Es la sedimentación de los eritrocitos en un tiempo determinado (1-2 horas), que se
relaciona directamente con la tendencia de los glóbulos rojos hacia la formación de
acúmulos o pilas de monedas debido a la concentración plasmática de fibrinógeno,
globulinas y otras proteínas.
El estudio se solicita para:
 Detectar procesos inflamatorios o infecciosos. Como discriminador o reactante de
presencia de enfermedad.
 Como control de la evolución de ciertas enfermedades crónicas ó infecciosas.
 Para detectar procesos crónicos inflamatorios ocultos o tumores.
La técnica es poco específica por lo que se debe asociar a otros estudios para poder
orientar un diagnóstico.
.
Valor de Referencia:
En la sangre normal la velocidad de eritrosedimentación es prácticamente nula,
inclusive si el colesterol u otros lípidos están muy elevados puede disminuir la
capacidad de formar acúmulos y disminuir más la VSG.
Recién Nacidos 0 a 2 mm/h

Niños hasta 10 mm/h
Hombres adultos hasta 10 mm/h
Mujeres adultas hasta 20 mm/h
Mujeres gestantes 40-45 mm/h
Resultados anormales:
La VSG se eleva si las proteínas del grupo de las globulinas están elevadas con
respecto a la albúmina. También cuando el fibrinógeno este elevado.
 Artritis reumatoide
 Anemia intensa
 Enfermedades renales
 Enfermedades autoinmunes (Lupus eritematoso)
 Enfermedades tiroideas
 Embarazo (en los primeros meses puede aparecer elevada sin más repercusiones)
 Fiebre reumática
 Infecciones agudas
 Macroglobulinemia
 Mieloma múltiple
 Polimialgia reumática
 Sífilis
 Tuberculosis
 Vasculitis
QFB, FCQ, UANL
La VSG deberá relacionarse con el Hematocrito y de ser necesario se deberá corregir
el valor usando la gráfica de Wintrobe.
Nota:
Para realizar este análisis no se precisa estar en ayunas.
papel adsorbente y su bata de laboratorio así como la indumentaria adecuada según lo
marca el Reglamento de trabajo en los laboratorios de FCQ.
QFB, FCQ, UANL
Pruebas de Coagulación: Tiempo de Sangrado

 Métodos de laboratorio para el estudio de la hemostasia (pp 70 y 71).
 Pruebas para la Fase Vascular y Plaquetaria. A. Tiempo de Sangrado (pp 73 y
74)

 Cronometro
 Papel filtro
 Lancetas
Descripción
El tiempo de sangrado mide la fase primaria de la hemostasia: la interacción de las
plaquetas con la pared del vaso sanguíneo y la formación del tapón hemostático. El
tiempo de sangrado constituye la mejor prueba para detectar alteraciones de la función
plaquetaria y es uno de los principales estudios en los trastornos de la coagulación.
Se hace una pequeña herida en el lóbulo auricular o en el antebrazo y se anota el
tiempo de sangrado y la velocidad con la que se forma el coágulo plaquetario. La
duración del sangrado de un capilar depende de la calidad y cantidad de plaquetas y de
la vasoconstricción.
El tiempo de sangrado es una prueba muy útil para detectar anormalidades vasculares
y más o menos útil para detectar anormalidades plaquetarias.
Método de duke
Principio:
Este ensayo se lleva a cabo para diagnosticar ciertos padecimientos hemorrágicos y
antes de realizar operaciones quirúrgicas.
Técnica:
1. Con una lanceta se hace una pequeña incisión en el lóbulo de la oreja. La
sangre fluye por esta incisión y se mide el tiempo que transcurre hasta que se
detiene el sangrado. Puede utilizar un cronómetro o un reloj con segundero.
2. Comunique el tiempo de sangrado redondeándolo al medio minuto más cercano.
3. Si el tiempo de sangrado se prolonga examine una extensión de sangre teñida
según el método de Romanowski para observar si las plaquetas son escasas.
Método de Ivy
Principio:
Mediante esta prueba se estudia la adhesión de las plaquetas al endotelio vascular y su
capacidad para formar el trombo plaquetario que detiene la hemorragia a nivel de un
vaso de pequeño calibre. Consiste, por tanto, en realizar una pequeña herida y medir el
tiempo que tarde en dejar de sangrar.
QFB, FCQ, UANL
Técnica:
1. Exponer el antebrazo del paciente y escoger una zona libre de vénulas,
hematomas, heridas y otros. Si el paciente tiene marcada cantidad de vellos,
afeite la zona.
2. Limpie con alcohol la zona escogida.
3. Coloque el tensiómetro en el brazo del paciente y regúlelo a 40 mm Hg
4. Se extrae la lanceta de su reservorio estéril y se quita el seguro. No deben pasar
más de 30 a 60 segundos entre la inflada del tensiómetro y la producción de la
incisión.
5. Se presiona el disparador al mismo tiempo que el cronómetro y un segundo
después retire el dispositivo.
6. Cada 30 segundos secar con el papel de filtro, no tocar los bordes de la incisión
para no interferir con el tapón plaquetario.
7. Se anota el tiempo que tarda en cesar la hemorragia, lo que corresponde al
tiempo de sangría.
VALORES NORMALES
Técnica: Valor según Valor según Valor según Valor según

McKenzie Manual Morrison Almaguer
Duke 1-5 min Hasta 6 minutos < 3 minutos 1-7 minutos
Ivy 1-9 min 2-3 minutos 2-8 minutos (Generalmente es
inferior a 6 minutos)
INTERFERENCIAS
 Los valores del tiempo de sangrado varían cuando el sitio de la punción no es
uniforme en profundidad y amplitud.
 Si se toca el sitio de la prueba, se rompen partículas de fibrina y se prolonga el
tiempo de sangrado.
 El consumo excesivo de alcohol aumenta el tiempo de sangrado.
 La ingestión de 10 g de aspirina hasta cinco días antes de la prueba.
 La ingestión de otros fármacos que prolongan el tiempo de sangrado: dextrán,
estrptocinasa-estreptodornasa, mitramicina, alcohol pantotenilo.
 El frío o el calor extremo
NOTA: PARA LAS PRACTICAS DE TP Y TTP DEBERAN CONSULTAR LOS

INSERTOS EN EL ALMACEN.

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APUNTES PARA LAS PRACTICAS DE HEMATOLOGIA 2020

QFB, FCQ, UANL

Lecturas previas que se considerarán para el examen diario

Material necesario para la práctica

Estructura del grupo hem

Lecturas previas que se considerarán para el examen diario

Material necesario para la práctica

1.- Desinfectar la yema del dedo con alcohol, secándola

2.- Punzar la yema del dedo con la lanceta y

3.- Llenar el capilar del micro-hematocrito

5.- Centrifugar el capilar durante 5 minutos a

6.- Con la regla milimétrica medir la longitud

Se puede hacer la medida del hematocrito de forma directa, utilizando una

También se puede utilizar un lector para microhematocrito.

Mujeres: 35-47% ó 0.35-0.47 L/L

Hombres: 40-52% ó 0.40 a 0.52 L/L

Recuento de Eritrocitos e Índices Eritrocitarios

Lecturas previas para el Examen Diario

Material necesario para la práctica:

Surco o hendidura 3 Plataformas

Cámara de Neubauer (vista frontal) Cámara de Neubauer (vista lateral)

Se ha marcado con la ayuda de un diamante una

Es un cuadrado de 3 x 3 mm (9 mm), con una separación

La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1

Observe que en la cuadrícula de la cámara de

Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas

Tener en cuenta que la cuadrícula central tiene 25

Procedimiento para el Recuento de Eritrocitos:

Se mezcla la sangre hasta que esté

A continuación se toma con la pipeta líquido de

Agitamos la pipeta mecánica o manualmente

Se adapta un cubreobjetos (cubre-hematímetro)

Una vez preparada la cámara se coloca sobre la

Disponemos el condensador bajo y luz débil;

La dilución de la muestra fue de 1:200, el cálculo de eritrocitos se realiza de la siguiente manera:

No. de Eritrocitos por mm 3 de sangre (X) = Y x 200 (dilución)

VGM ó VCM= Volumen Globular Medio ó Volumen corpuscular medio

Recuento automatizado de glóbulos rojos y VGM

promedio de las amplitudes de cada pulsación, las cuales representan el volumen de

VGM obtenido de una Biometría Hemática por el método manual.

5.0 x 1012 eritrocitos ocupan un volumen de 0.45 L (Hto)

VGM = Hto L/L = 0.45 L/L

Si usamos el hematocrito en % debemos multiplicar por 10

Valores de referencia = 80-100 fL

HCM ó MCH = Hemoglobina celular media ó mean cell hemoglobin

La relación aquí es la siguiente:

5.0 x 1012 eritrocitos contienen 150 g de Hemoglobina

HCM = Hb g/L = 150 g/L = 30 x 10-12 g ó 30 pg

Las unidades nos quedan g

CHCM ó MCHC = Concentración de Hemoglobina celular media ó mean cell

La relación aquí es la siguiente:

En 0.45 L de eritrocitos hay 15 g de hemoglobina

CHCM = Hb g/dL = 15 g/dL = 33.3 g/dL

Las unidades nos quedan g/dL

Valores de referencia = 31 – 36 g/dL

VGM > 100 fL es macrocitosis

Lecturas previas que se considerarán para el examen diario

Material necesario para la práctica

Características de los reticulocitos:

El número de reticulocitos en sangre periférica es un reflejo del grado de actividad

Realización de las extensiones de sangre periférica:

2. Con el borde de otro portaobjetos a 45 grados, tocar la gota, esperar a que la

3. Dejar secar al aire