UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE

FACULTAD DE INGENIERÍA

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA

INFORME N°1

“CINETICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO”

CURSO: Diseño de Reactores II

INTEGRANTES: Ariel Chali.

Valentina Duarte.

Luis Pooley.

Emmanuel Soto.

Víctor Urbano.

PROFESOR: Nicolás Palominos

AYUDANTE(s): Andrea Chávez

Denisse Benavides

FECHA EXPERIENCIA: 23 de Septiembre de 2019

FECHA DE ENTREGA: 14 de Octubre del 2019

 RESUMEN

El día lunes 23 de septiembre de 2019 en el Laboratorio de Bioprocesos, ubicado en el

Departamento de Ingeniería Textil de la Universidad de Santiago de Chile, se llevó a cabo la
experiencia: “Cinética de crecimiento microbiano”. Los objetivos de dicha experiencia fueron
determinar la cinética de crecimiento de Saccharomyces cerevisiae en condiciones discontinuas,
determinar el coeficiente de rendimiento observado de biomasa 𝑌 ` 𝑥⁄𝑠, luego asumiendo una
cinética de Monod, calcular los parámetros 𝐾𝑠 y 𝜇𝑚á𝑥 mediante métodos gráficos.

La experiencia se realizó en un reactor Batch, con aireación y agitación provista de un agitador

magnético calefactor. Se utilizaron inóculos adaptados jóvenes (a 37 y 20ºC) e inóculos adaptados
viejos (a 20 y 37ºC), además de inóculos sin adaptar (a 37 y 20ºC). A medida del transcurso del
tiempo se tomaron muestras desde el reactor microbiano, a las cuales se les analizó la densidad
óptica en un espectrofotómetro a 600 nm, esto en duplicado, para obtener la concentración de
biomasa generada, separando con anterioridad parte de la muestra para ser analizada mediante el
test de Glucostat para obtener la concentración de sustrato consumido.

A través de los datos obtenidos de la experiencia se logró mediante cálculos matemáticos obtener
valores para realizar la gráfica ln(X) v/s tiempo y destacar las fases de crecimiento bacteriano en
cultivo discontinuo. En donde se observó que cuatros de las distintas corridas experimentales
lograron salir de la fase de latencia, pudiéndose calcular la velocidad especifica de crecimiento en
la fase exponencial para estas, siendo las corridas del inoculo adaptado joven a 20 y 37°C, la del
inoculo adaptado viejo a 37°C y por ultimo contradictoriamente la del inoculo sin adaptar a 20°C,
teniendo en cuenta que a 37°C se favorece el crecimiento microbiano.

Los valores del coeficiente de rendimiento observado( 𝑌 ` 𝑥⁄𝑠) fueron 2,5467 y 0,9998 para el

inoculo adaptado joven a 37 y 20ºC respectivamente, indicando que a la temperatura optima (37°C)
hay una mayor formación de biomasa por cantidad de sustrato consumido. 1,7650 y 1,0207 para
el inoculo adaptado viejo a 37 y 20ºC respectivamente, siendo de igual manera que el inoculo
adaptado joven crece una mayor biomasa por cantidad de sustrato a la temperatura optima de
reacción. 0,6941 y 1,5325 para el inóculo sin adaptar a 37 y 20ºC respectivamente lo cual se
contradice con lo explicado anteriormente, debido a la falta de tiempo de experiencia y falta de
datos de absorbancia para medir la glucosa. Finalmente el inoculo adaptado joven presento
mejores rendimientos de biomasa producida por glucosa consumida.

Los parámetros cinéticos Ks y µmax no fueron obtenidos para esta experiencia debido a la poca
cantidad de corridas experimentales y/o a la falta de tiempo de experimentación.
 1. OBJETIVOS
1.1 Objetivo General:
 Determinar la cinética de crecimiento de Saccharomyces cerevisiae en condiciones
discontinuas.
1.2 Objetivos Específicos:
 Determinar el coeficiente de rendimiento observado de biomasa a partir de sustrato, YX/S.
 Determinar los valores de los parámetros Ks y μmax.
 Modelar el crecimiento a una cinética de tipo Monod.
 2. APARATOS, EQUIPOS Y MATERIALES

Tabla 2.1: Descripción de los aparatos usados en la experiencia.

Aparatos Descripción
Marca: Daihan LabTech Co., Ltd.
Modelo: LMS-1003
Rango Temperatura: [5-380] [ºC]
Agitador/Calefactor Magnético Rango Velocidad Agitacion: [60-1500] [rpm]
Voltaje: 220 [V], 50 [Hz]
Corriente: 3 [A]
Potencia: 500 [W]
Marca: Thermo Scientific
Modelo: Genesys 10S UV-Vis
Ancho de Banda Espectral: 1.8 [nm]
Espectrofotómetro Rango longitud de onda: [190-1100] [nm]
Velocidad de barrido de long. de onda: 4200 [nm/min]
Precisión: ±1.0 [nm]
Voltaje: 100/240 [V]
Marca: Daihan LabTech Co., Ltd.
Rango Temperatura: [5-70] [ºC]
Precisión: ±0.5 [ºC]
Incubadora
Voltaje: 220 [V], 50 [Hz]
Potencia: 200 [W]
Corriente: 1 [A]
 Tabla 2.2: Descripción de los accesorios usados en la experiencia.
Accesorio Descripción
Marca: BOECO Germany
Vaso de Precipitado Material: Vidrio de borosilicato
Capacidad: 2000 [ml]
Marca: Schott Duran
Frasco tapa rosca Material: Vidrio Borosilicato, Polipropileno (tapa)
Capacidad: 1000 [ml]
Marca: HP Pavilion
Computador
Modelo: Laptop 14-bk0xx

Tabla 2.3: Descripción de los accesorios usados en la experiencia (continuación).

Accesorio Descripción
Rango: [0-250] [ºC]
Termómetro Precisión: ±2 [ºC]
Material: Vidrio
Test Quimiostat Cantidad: 1
Marca: Motorola
Cronómetro Modelo: G6 play
Precisión: ±0.01 [s]
 3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

E1 E2
V1

R1

C1
T

Figura 3.1: Sistema experimental.

En primer lugar para para lograr llevar acabo la experiencia se procedió a realizar el montaje del
sistema experimental, el cual estuvo formado por un reactor de 1 L (R1) con calefacción y agitador
magnético para mantener tanto la temperatura como la homogeneidad de la mezcla constantes,
este “reactor” simulado por un frasco de vidrio, luego de adicionar 1000 ml de medio de cultivo y
dos ápices de levadura se procede a cerrar con una tapa plástica que posee dos orificios de
extracción, selladas con para film y nombradas E1 y E2 por la figura 3.1.

La extracción E1 estará sellada hasta llegado el momento de extraer una muestra, mientras que la
extracción (E2) está conectada por un tubo plástico de extracción que está unido a su vez a un
compresor (C1) el cual otorga la aeración necesaria al bio-reactor, este flujo de aire está controlado
por una válvula limitadora (V1) para lograr un flujo constante de oxígeno en la mezcla. Por otra
parte para medir la temperatura al interior del bioreactor se utiliza un termómetro (T), y así
coordinar el encendido y apagado del calefactor periódicamente según sea estimado.

Una vez montado el sistema experimental y teniendo en cuenta que el medio de cultivo se preparó
con anterioridad, conteniendo: 10 g/L de Peptona, 5 g/L de Extracto de levadura y una cantidad de
glucosa indeterminada; se procedió a la toma de datos de la siguiente forma:

1. Con una jeringa se extrajo una muestra inicial de 2 mL de medio de cultivo para medir la
densidad óptica haciendo un duplicado técnico de la muestra, midiendo esta a 600nm.
2. De los 2 mL de muestra extraída se apartan 100 μL para medir la concentración inicial de
la glucosa en el reactor, utilizando el kit Glucostat.
3. Luego se procede a encender el agitador magnético y la calefacción a 37°C.
 4. Una vez alcanzada la temperatura, medida constantemente con un termómetro de
mercurio, se añaden dos ápices de levadura “Saccharomyces cerevisiae” a la mezcla y se
cierra el bioreactor.
5. Se enciende el compresor de aire colocando la válvula limitadora previamente en alguna
sección del tubo plástico de extracción de forma semi-abierta, cuidando de no privar en
demasía de aire al sistema
6. Finalmente se procedió a repetir el paso uno y dos descritos con anterioridad cada 20
minutos para la medición de OD, haciendo un total de 8 datos, y cada una hora para la
glucosa, midiendo también para el último tiempo de experimentación, haciendo un total de
4 datos.

Se recomienda no elevar en demasía la aireación al interior bioreactor ya que el potente burbujeo

de aire podría provocar el rebalse de la suspensión momento de intentar extraer las muestras.

Metodología de uso para kit Glucostat.

1. A 0,01 mL de muestra (solución inactivada) agregar 1 mL del reactivo 1 (en oscuridad) y

agitar vigorosamente.
2. A 0,01 mL de estándar (reactivo 2) agregar 1 mL del reactivo 1.
3. Incubar a 37ºC por 10 minutos (para realizar la reacción).
4. Leer el valor de la absorbancia a 505 nm, contra un blanco de agua destilada y reactivo. El
valor de absorbancia del estándar se mide sólo una vez.

Cabe mencionar que se realizaron un total de seis corridas experimentales, en donde se modificó
tanto la calidad del inoculo utilizado (joven/viejo) como el uso de este y la temperatura de trabajo
de cada corrida experimental.

Tabla 3.1: Especificación de las condiciones de cada corrida experimental.

N° de corrida experimental Calidad del Inoculo Temperatura [°C]
1 Sin Inoculo 37
2 Sin Inoculo 20
3 Viejo 37
4 Viejo 18
5 Joven 37
6 Joven 20
 4. DATOS.

Tabla 4.1: Absorbancia del inoculo adaptado joven a 37ºC, a 600 nm.
Tiempo (min) Muestra 1 Muestra 2 Promedio Glucostat a 505 nm.
0 0,115 0,116 0,1155 -
20 0,146 0,153 0,1495 0,319
40 0,153 0,218 0,1855 0,3
60 0,184 0,188 0,186 0,238
75 0,234 0,293 0,2635 0,288
85 0,287 0,285 0,286 -
95 0,334 0,34 0,337 0,259
105 0,398 0,382 0,39 -
115 0,428 0,444 0,436 0,191
125 0,476 0,474 0,475 -
135 0,505 0,512 0,5085 0,171
145 0,53 0,527 0,5285 -
155 0,571 0,587 0,579 0,135
165 0,59 0,59 0,59 -
175 0,594 0,602 0,598 0,15
185 0,615 0,602 0,6085 0,085
195 0,61 0,6 0,605 0,117
205 0,611 0,608 0,6095 0,127
215 0,618 0,63 0,624 0,132
225 0,629 0,643 0,636 0,115
235 0,643 0,649 0,646 0,111
245 0,643 0,647 0,645 0,086
255 0,664 0,662 0,663 0,025
265 0,68 0,675 0,6775 0,096
275 0,686 0,687 0,6865 0,095
285 0,703 0,698 0,7005 0,08
295 0,698 0,701 0,6995 0,086
305 0,707 0,709 0,708 0,09
315 0,712 0,713 0,7125 0,072
Estándar Glucostat 0,363
 Tabla 4.2: Absorbancia del inoculo adaptado joven a 20ºC, a 600 nm.
Glucostat a
Tiempo (min) Muestra 1 Muestra 2 Promedio
505 nm.
0 0,262 0,255 0,2585 0,281
15 0,263 0,257 0,26 0,281
30 0,253 0,252 0,2525 0,288
50 0,247 0,248 0,2475 0,284
60 0,27 0,264 0,267 0,276
75 0,235 0,256 0,2455 0,249
90 0,242 0,258 0,25 0,242
105 0,247 0,255 0,251 0,231
120 0,263 0,2634 0,2632 0,232
150 0,266 0,259 0,2625 0,225
165 0,272 0,268 0,27 0,193
175 0,269 0,274 0,2715 0,113
190 0,277 0,277 0,277 0,142
205 0,293 0,28 0,2865 0,145
220 0,298 0,292 0,295 0,118
235 0,316 0,322 0,319 0,105
250 0,326 0,317 0,3215 0,092
265 0,351 0,342 0,3465 0,067
280 0,372 0,368 0,37 0,049
295 0,372 0,383 0,3775 0,048
310 0,414 0,424 0,419 0,042
325 0,437 0,439 0,438 0,039
340 0,0473 0,476 0,26165 -
355 0,486 0,484 0,485 -
Estándar Glucostat 0,368

Tabla 4.3: Absorbancia del inoculo adaptado viejo a 37ºC, a 600 nm.
 Tiempo (min) Muestra 1 Muestra 2 Promedio Glucostat a 505 nm.
0 0,413 0,415 0,414 0,425
15 0,44 0,436 0,438
30 0,445 0,446 0,4455 0,388
45 0,493 0,49 0,4915
60 0,533 0,533 0,533 0,328
75 0,628 0,62 0,624
90 0,729 0,705 0,717 0,188
105 0,801 0,801 0,801
120 0,874 0,882 0,878 0,154
135 0,928 0,945 0,9365 0,073
150 0,968 0,952 0,96
Estándar Glucostat 0,392

Tabla 4.4: Absorbancia del inoculo adaptado viejo a 18ºC, a 600 nm.
Tiempo (min) Muestra 1 Muestra 2 Promedio Glucostat a 505 nm.
0 0,444 0,444 0,444 0,145
20 0,46 0,459 0,4595 -
40 0,462 0,469 0,4655 0,23
60 0,486 0,484 0,485 -
80 0,485 0,485 0,485 0,222
100 0,488 0,482 0,485 -
120 0,52 0,518 0,519 0,17
140 0,518 0,524 0,521 -
Estándar Glucostat 0,274

Tabla 4.5: Absorbancia del inoculo sin adaptar con levadura directa a 37ºC, a 600 nm.
 Tiempo (min) Muestra 1 Muestra 2 Promedio Glucostat a 505 nm.
0 0,148 0,143 0,1455 0,473
20 0,235 0,237 0,236 -
40 0,225 0,227 0,226 -
60 0,234 0,232 0,233 0,382
80 0,182 0,187 0,1845 -
100 0,256 0,247 0,2515 -
120 0,296 0,295 0,2955 0,239
140 0,329 0,321 0,325 0,172
Estándar Glucostat 0,401

Tabla 4.6: Absorbancia del inoculo sin adaptar con levadura directa a 20ºC, a 600 nm.
Tiempo (min) Muestra 1 Muestra 2 Promedio Glucostat a 505 nm.
0 0,237 0,325 0,281 0,317
20 0,357 0,342 0,3495 -
40 0,422 0,428 0,425 0,292
60 0,405 0,399 0,402 -
80 0,42 0,398 0,409 0,243
100 0,456 0,45 0,453 -
120 0,512 0,51 0,511 0,144
140 0,541 0,545 0,543 0,118
Estándar Glucostat 0,401

5. RESULTADOS Y DISCUCIONES
 5.1 RESULTADOS:

Cinética Microbiana a 37°C

1.5000

1.0000

0.5000
IAJ 37°C
ln(X)

0.0000
IAV 37°C
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00
-0.5000 ISA 37°C

-1.0000

-1.5000
Tiempo(h)

Figura 5.1: Cinética Microbiana representada por tiempo v/s ln(biomasa) a 37°C para inóculo
adaptado joven(IAJ), inóculo adapto viejo(IAV) e inóculo sin adaptar(ISA).

Cinética Microbiana a 20°C

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1 IAJ 20°C
ln(X)

0 IAV 20°C
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 ISA 20°C
-0.1
-0.2
-0.3
-0.4
Tiempo(h)

Figura 5.1: Cinética Microbiana representada por tiempo v/s ln(biomasa) a 20°C para inóculo
adaptado joven(IAJ), inóculo adapto viejo(IAV) e inóculo sin adaptar(ISA).
Tabla 5.1: Concentraciones de biomasa, sustrato inicial y final. Velocidad especifica de crecimiento
y coeficiente de rendimiento observado.

Inoculo sin adaptar,

Inoculo adaptado, joven Inoculo adaptado, viejo
levadura directa

T = 37°C T = 20°C T = 20°C T = 37°C T=37°C T =20°C

X inicial [g/L] 0,4241 0,7405 1,2789 1,1919 0,4125 0,8058

X final [g/L] 2,0583 1,2615 1,4966 2,7085 0,9335 1,5663

S inicial [g/L] 0,8788 0,7636 0,5292 1,0842 1,1796 0,7905

S final [g/L] 0,1983 0,1060 0,6204 0,1862 0,4289 0,2943

μ [h-1] 0,7926 0,2068 Latencia 0,5460 Latencia 0,2855

Y'x/s 2,5467 0,9998 1,0207 1,7650 0,6941 1,5325

5.2 DISCUCIONES:

Con respecto a las cinéticas de crecimiento de la Saccharomyces cerevisiae que se pueden

observar en la Figura 5.1 pertenecientes a los Bioreactores sometidos a 37°C, solo algunos
salieron de la fase de latencia. Como podemos ver, la cinética que no salió de la fase de latencia
fue la que utilizo un inoculo sin adaptar (solo levadura), esto se debe por distintos motivos, los
cuales son: el microorganismo no estaba adaptado al medio de cultivo, por lo que utilizó el tiempo
de la experiencia en completar su adaptación y consumió el sustrato solo para mantención y no
para crecimiento. Por otra parte a falta de más datos experimentales, no se puede confirmar a
ciencia cierta si el microorganismo logro empezar la fase exponencial a pesar de tener dos datos
que poseen una tenue inclinación a fase exponencial.

En la Figura 5.2 se puede observar las cinéticas de crecimiento para cada tipo de inoculo utilizado
a 20°C, donde se aprecia que solo en la que se utilizó un inoculo adaptado viejo, no logró salir de
la fase de latencia; esto se puede atribuir a que al ser un inoculo viejo y estar guardado mucho
tiempo, la mayor parte de los microorganismos se encuentran en la fase de muerte o crecimiento
estacionario, por lo cual hay menor producción de biomasa, además de estar a una temperatura la
en la cual el crecimiento microbiano no es ideal.

Analizando las cinéticas de crecimiento para el inoculo sin adaptar se puede observar que a 37°C
no salió de la fase de latencia y a 20°C si salió de la fase de latencia, esto se debe a que a pesar
de que el primer bioreactor se encuentra a temperatura optima de operación, en el reactor operado
a 20°C se utilizó mayor cantidad de inoculo inicial teniendo además mayor circulación de oxígeno,
en comparación al reactor operado a 37°C, por lo cual generó una mayor actividad de producción
de biomasa facilitando que este salga de la fase de latencia, lo que da a entender que una de las
variables más preponderantes en la operación de un bioreactor es la cantidad inicial del inoculo

Para el bioreactor en el cual se utilizó inoculo adaptado viejo podemos observar que a 20°C no
sale de la fase de latencia y a 37°C si sale de la fase de latencia. Este resultado era de esperarse
ya que al ser un inóculo adaptado tiene mayor facilidad de salir de la fase de latencia a su
temperatura óptima de crecimiento.

Observando los resultados obtenidos para el coeficiente de rendimiento (Y´ x/s) podemos comparar
los resultados separándolos por dos tipos: el cambio de temperatura y por el tipo de inoculo
utilizado. Para el caso del cambio de temperatura se pueden observar datos esperados para los
inóculos adaptados jovenes e inóculos adaptados viejos, ya que para los dos casos a mayor
temperatura se obtuvo un mayor coeficiente de rendimiento a 37°C, esto se debe que a 37°C es la
temperatura ideal para la producción de biomasa por lo cual se obtiene mayor coeficiente de
rendimiento. En cambio para el inoculo joven sin adaptar (solo levadura) se obtuvieron datos
incoherentes ya que a 37°C debería haber dado un coeficiente de rendimiento mayor y se obtuvo
un coeficiente de rendimiento menor que a 20°C, esto se debe que a pesar de tener las mismas
concentraciones de medio de cultivo para esta corrida, no se agregó la misma cantidad de
levadura a ambos reactores, al reactor que operó a 20°C se le agrego mayor cantidad de
Saccharomyces cerevisiae por lo cual se obtiene mayor consumo de sustrato y mayor producción
de biomasa por ende se obtiene un coeficiente de rendimiento mayor.

Para el efecto del tipo de inoculo, se comparan los tipos de inóculos a las mismas temperaturas. A
37°C al comparar los resultados obtenidos para el inoculo adaptado joven (IAJ) y el inoculo
adaptado viejo (IAV) se obtiene que el IAJ tiene un mayor coeficiente de rendimiento que el IAV,
esto se debe que el IAV al tener más tiempo almacenado puede que tenga microorganismo
muertos o débiles en comparación al IAJ que tiene mayor probabilidad de tener en buen estado a
todos los microorganismos que lo componen, por lo cual el IAV produciría menos biomasa.

En el caso del inoculo sin adaptar (solo levadura) no podemos comparar el dato obtenido
numéricamente con los otros inóculos ya que la concentración de levadura adicionada
directamente al reactor no es igual a las concentraciones de inoculo adaptado joven e inoculo
adaptado viejo que se adicionaron en las otras corridas.

Finalmente no se tienen las condiciones apropiadas para la determinación de los parámetros

cinéticos Ks y 𝜇𝑚𝑎𝑥 a través de los modelos cinéticos linealizados de la ecuación de Monod:
Lineweaver-Burk y Langmuir, ya que con solo dos datos de velocidad específica de crecimiento a
una cierta temperatura (20 o 37 °C) no se obtienen datos significativos para estos parámetros, los
cuales al ser una linealizacion de una misma cinética se obtienen valores idénticos para cada
modelo. Además estos coeficientes al presentar una negatividad numérica de la constante de
saturación nos da una clara señal de la inexistencia de sentido físico, químico y biológico de los
resultados obtenidos. Esto pudo haber sido resultado de las pocas corridas experimentales y a la
falta de tiempo para terminar de verificar la salida de la fase de latencia de las dos corridas que no
lograron salir de esta fase.
 6. CONCLUSIONES

6.1 Objetivo general:

A partir de los resultados obtenidos se pudo observar que en la mayoría de las corridas
experimentales los distintos inóculos y a distintas temperaturas alcanzan el
comportamiento de crecimiento microbiano y salen de la fase de latencia, menos las
cinéticas del inoculo joven sin adaptar a 37°C y el inoculo adaptado viejo a 20°C.

6.2 Objetivos Específicos

6.2.1 Los valores obtenidos para los coeficientes de rendimiento son:
Para inoculo joven sin adaptar a 20°C y 37°C respectivamente son 1,5325 y
0,6941.Para inoculo adaptado joven a 20°C y 37°C respectivamente son
0,9998 y 2,5467. Para inoculo adaptado viejo a 20°C y 37°C respectivamente
son 1,0207 y 1,7650.
6.2.2 Los parámetros cinéticos Ks y 𝜇𝑚𝑎𝑥 obtenidos no tienen significancia, por ende
no se logró obtener resultados para estos parámetros.
6.2.3 No se pudo modelar el crecimiento microbiano según la cinética de Monod,
porque los parámetros cinéticos Ks y 𝜇𝑚𝑎𝑥 no se pudieron calcular
significativamente.
7. BIBLIOGRAFIA
 APENDICE A: DATOS BIBLIOGRÁFICOS

A.1 Datos de curva de calibración de concentración de biomasa.

Tabla A.1: Datos de concentración de biomasa y sus respectivas densidades ópticas.
𝒈
𝒙 · 𝟏𝟎𝟑 [ ] 𝑶. 𝑫[𝟔𝟎𝟎 𝒏𝒎]
𝒎𝑳
0 0
0,320 0,112
0,640 0,221
1,280 0,443
1,930 0,667
2,500 0,885
3,000 1,054
3,300 1,129
3,700 1,262
3,800 1,320
3,900 1,340

1.6

1.4

1.2
Absorbancia [OD]

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025 0.003 0.0035 0.004 0.0045
x [mg/L]

Figura A.1: Densidad óptica v/s Concentración de biomasa.

Tabla A.2: Regresión y coeficiente de correlación para densidad óptica vs concentración

de biomasa.
Regresión 𝑂. 𝐷 = 344,51 · 𝑥 + 0,0034
R² 0,99952
 APENDICE B: RESULTADOS INTERMEDIOS

Tabla B.1: Concentraciones de biomasa y sustrato en el tiempo para inóculo adaptado joven a 37
y 20°C.

Inóculo adaptado, Joven

37°C 20°C

Tiempo(h) X(g/L) S(g/L) Tiempo(h) X(g/L) S(g/L)

0,00 0,3254 - 0,00 0,7405 0,7636

0,33 0,4241 0,8788 0,25 0,7448 0,7636

0,67 0,5286 0,8264 0,50 0,7231 0,7826

1,00 0,5300 0,6556 0,83 0,7086 0,7717

1,25 0,7550 0,7934 1,00 0,7652 0,7500

1,42 0,8203 - 1,25 0,7028 0,6766

1,58 0,9684 0,7135 1,50 0,7158 0,6576

1,75 1,1222 - 1,75 0,7187 0,6277

1,92 1,2557 0,5262 2,00 0,7541 0,6304

2,08 1,3689 - 2,50 0,7521 0,6114

2,25 1,4662 0,4711 2,75 0,7739 0,5245

2,42 1,5242 - 2,92 0,7782 0,3071

2,58 1,6708 0,3719 3,17 0,7942 0,3859

2,75 1,7027 - 3,42 0,8218 0,3940

2,92 1,7260 0,4132 3,67 0,8464 0,3207

Tabla B.1: Concentraciones de biomasa y sustrato en el tiempo para inóculo adaptado joven a 37
y 20°C (cont.).

Inóculo adaptado, Joven

37°C 37°C

Tiempo(h) X(g/L) S(g/L) Tiempo(h) X(g/L) S(g/L)

3,08 1,7564 0,2342 3,92 0,9161 0,2853

3,25 1,7463 0,3223 4,17 0,9234 0,2500

3,42 1,7593 0,3499 4,42 0,9959 0,1821

3,58 1,8014 0,3636 4,67 1,0641 0,1332

3,75 1,8363 0,3168 4,92 1,0859 0,1304

3,92 1,8653 0,3058 5,17 1,2064 0,1141

4,08 1,8624 0,2369 5,42 1,2615 0,1060

4,25 1,9146 0,0689 5,67 0,7496 -

4,42 1,9567 0,2645 5,92 1,3980 -

4,58 1,9828 0,2617

4,75 2,0235 0,2204

4,92 2,0206 0,2369

5,08 2,0453 0,2479

5,25 2,0583 0,1983

Tabla B.2: Concentraciones de biomasa y sustrato en el tiempo para inóculo adaptado viejo a 37 y
20°C.
Inóculo adaptado, Viejo
37°C 20°C

Tiempo(h) X(g/L) S(g/L) Tiempo(h) X(g/L) S(g/L)

0,00 1,1919 1,0842 0,00 1,2789 0,5292

0,25 1,2615 - 0,33 1,3239 -

0,50 1,2833 0,9898 0,67 1,3413 0,8394

0,75 1,4168 - 1,00 1,3980 -

1,00 1,5373 0,8367 1,33 1,3980 0,8102

1,25 1,8014 - 1,67 1,3980 -

1,50 2,0714 0,4796 2,00 1,4966 0,6204

1,75 2,3152 - 2,33 1,5024 -

2,00 2,5387 0,3929

2,25 2,7085 0,1862

2,50 2,7767 -

Tabla B.3: Concentraciones de biomasa y sustrato en el tiempo para inóculo sin adaptar a 37 y
20°C.
Inóculo sin adaptar, levadura directa

37°C 20°C

Tiempo(h) X(g/L) S(g/L) Tiempo(h) X(g/L) S(g/L)

0,00 0,4125 1,1796 0,00 0,8058 0,7905

0,33 0,6752 - 0,25 1,0046 -

0,67 0,6462 - 0,50 1,2238 0,7282

1,00 0,6665 0,9526 0,75 1,1570 -

 Tabla B.3: Concentraciones de biomasa y sustrato en el tiempo para inóculo sin adaptar a 37 y
20°C (cont.)
Inóculo sin adaptar, levadura directa

37°C 37°C

Tiempo(h) X(g/L) S(g/L) Tiempo(h) X(g/L) S(g/L)

1,33 0,5257 - 1,00 1,1773 0,6060

1,67 0,7202 - 1,25 1,3051 -

2,00 0,8479 0,5960 1,50 1,4734 0,3591

2,33 0,9335 0,4289 1,75 1,5663 0,2943

Tabla B.4: Linealizaciones de la ecuación cinética de Monod para la obtención de los parámetros
Ks y 𝜇𝑚𝑎𝑥 .
Lineweaver-Burk y = -2,6439x + 4,2702
Langmuir y = 4,2702x - 2,6439
Eadie-Hofstee y = 0,6192x + 0,2342

Tabla B.5: Coeficiente de saturación Ks y velocidad especifica de crecimiento máxima µmax[h-1]

37°C
Lineweaver-Burk Langmuir
Ks -0,6192 Ks -0,6192
µmax 0,2342 µmax 0,2342
R² 1,0000 R² 1,0000
20°C
Lineweaver-Burk Langmuir
Ks -0,8713 Ks -0,8713
µmax -0,0292 µmax -0,0292
R² 1,0000 R² 1,0000
 APENDICE C: EJEMPLOS DE CÁLCULO
C.1 Determinación del coeficiente de rendimiento observado (𝒀′ 𝒙⁄𝒔):
C.1.1 Cálculo de la absorbancia promedio: Se calcula un promedio de los valores de absorbancia
de las muestras 1 y 2 para cada tiempo del experimento. A modo de ejemplo se utilizan los valores
del inóculo adaptado joven a 37ºC, encontrados en la tabla 4.1:
0,115 + 0,116
̅̅̅̅̅̅
𝐴𝐵𝑆 = = 0,1155
2
De forma análoga se repite el cálculo para todas las corridas de datos.
C.1.2 Obtención de la concentración de biomasa (X): Para obtener este valor se utilizaron los datos
de la tabla 4.1 y la regresión de la tabla A.2, además se realiza la conversión a (g/L),
obteniéndose:
0,1155 − 0,0034 𝑔 𝑚𝐿 𝑔
X= [ ] ∙ 1000 [ ] = 0,3254 [ ]
344,51 𝑚𝐿 𝐿 𝐿

Se realiza de igual forma para el resto de los datos de todas las corridas experimentales,
encontrándose tabulados en la tabla B.1, B.2, B.3.

C.1.3 Cálculo de la concentración de sustrato (S):

Utilizando los valores de absorbancia estándar y los valores de absorbancia de la glucosa a 505
(nm) registrados en la tabla 4.1, se procede a calcular junto a la relación del test de Glucostat de la
siguiente manera:
𝐴𝐵𝑆 0,319 𝑚𝑔
𝑆= ∙ 100 = ∙ 100 = 87,8788 [ ]
𝐴𝐵𝑆0 0,363 𝑑𝐿
𝑔
Se realiza un cambio de unidades para obtener la concentración en [ ]
𝐿

𝑚𝑔 1 𝑔 1 𝑑𝐿 𝑔
𝑆 = 87,87 [ ] ∙ [ ]∙ [ ] = 0,8788 [ ]
𝑑𝐿 1000 𝑚𝑔 0,1 𝐿 𝐿
De forma análoga se repite el procedimiento para cada absorbancia utilizando los valores estándar
correspondientes a cada experiencia, encontrándose tabulados en la tabla B.1, B.2, B.3.

C.1.4 Determinación del coeficiente de rendimiento observado (𝑌 ′ 𝑥⁄𝑠):

Con los datos de concentración de biomasa y sustrato al inicio y al final, ubicados en la tabla B.1
se calcula el coeficiente de rendimiento de la siguiente forma:
(0,3254 − 2,0583)
Y ′ x⁄s = = 2,5467
−(0,8788 − 0,1983)
Este coeficiente de rendimiento observado para cada corrida experimental se encuentra tabulado
en la tabla de resultados 5.1.
C.2 Determinación de los parámetros μmáx y Ks mediante distintos métodos:
C.2.1 Obtención de 𝜇:
Para la obtención de la velocidad de crecimiento específico microbiano se utilizan los datos de
masa microbiana y tiempo de la tabla B.1.
 ln(1,1222) − 𝑙𝑛(0,7550) 1
𝜇= = 0,7926 [ ]
1,75 − 1,25 ℎ
C.2.2 Método de Lineweaver-Burk:
1 1 𝐾𝑆 1
= + ·
𝜇 μmáx μmáx 𝑆
De la ecuación obtenida en la tabla B.4:
1
μmáx = = 0,2342
4,2702
𝐾𝑆 = 0,2342 ∙ (−2,6439) = −0,6192
C.2.3 Método de Langmuir:

𝑆 𝐾𝑆 1
= + ·𝑆
𝜇 μmáx μmáx

De la ecuación obtenida en la tabla B.4:

1
μmáx = = 0,2342
4,2702
𝐾𝑆 = 0,2342 ∙ (−2,6439) = −0,6192
Estos resultados se encuentran en la tabla B.5 del apéndice B de cálculos intermedios.