PROBLEMARIO PARA EL ANÁLISIS DEL TEMA:

PRUEBAS DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR.

1.- COMPLETA EL SIGUIENTE CUADRO

ELECTROFORESIS PCR SOUTHERNBLOT NORTHERNBLOT RT-PCR RFLP
PROCESAMIENTO
DE LA MUESTRA

METODOLOGÍA

REVELADO DE
RESULTADOS
TIPO DE ENSAYO
(amplificación o
hibridación)

2.- De acuerdo a las partes de un gel de electroforesis, comente los tres siguientes geles de electroforesis y diga para cada carril, cuáles son las características de
la muestra en función de cantidad, calidad y peso molecular.

GEL 1

GEL 2. EL MARCADOR ES DE 100 PB, es decir, la diferencia entre cada banda es de 100 pb y la más pequeña es de 100 pb(el marcador está en el carril 5)
Gel 3. EL MARCADOR ES DE 100 PB, es decir, la diferencia entre cada banda es de 100 pb y la más pequeña es
de 100 pb(el marcador está en el carril 1)

3.- Diga cual de las siguientes secuencias es un palíndromo, suponga que todas van en dirección 5’-3’
a) GGGATC
b) AGATCT
c) CGCGCG
d) CGATCG
e) CATCAT

4.- Para la siguiente secuencia de doble cadena de ADN…

5’TAGCACTCAGATATAAACGTTCCCAGCAAGGCAATTTTACTTCTAACTGAAACTAGGGGCAAGGAGACGA3’
3’ATCGTGAGTCTATATTTGCAAGGGTCGTTCCGTTAAAATGAAGATTGACTTTGATCCCCGTTCCTCTGCT5’

Escriba las secuencias de 20pb que funcionarían como PRIMERS o INICIADORES de PCR para amplificar
solamente la región central de la secuencia correspondiente a 60 pb

5.- Se tiene un extracto de ADN genómico de humano y se quiere amplificar el gen de la hemoglobina
mediante PCR, el iniciador 1 hibrida desde el nucleótido 1234 al 1254, y el iniciador 2 hibrida en la región del
1563 al 1583. ¿cuál es el peso molecular del fragmento esperado?. Represente sus resultados en un gel de
electroforesis.

6.- El virus de la influenza tiene genoma de RNA, ¿cuál método de diagnóstico molecular emplearía para
determinar su presencia en una muestra clínica? _______________________________

7.- Los fragmentos de DNA generados con la endonucleasa de restricción, separados por electroforesis en gel y
transferidos a una membrana se ensayan con una sonda (fragmento de DNA radiactivo). Este procedimiento se llama:
A. Técnica de Northern
B. técnica de Southern
C. reacción en cadena de la polimerasa
D. recombinación de DNA
E. RFLP
 Herencia de los marcadores RFLP

Los seres humanos tenemos en total 23 pares de cromosomas. Cada par está formado por un cromosoma de la madre y
otro del padre. Los marcadores RFLP que se usan con más frecuencia para el análisis de perfiles de ADN se encuentran
en los crmosomas 1, 2, 4, 5, 10 y 17. Estos marcadores RFLP reciben un nombre según su posición en esos cromosomas.
Por ejemplo, el marcador situado en el cromosoma 2 se llama D2S44 (sección 44 del cromosoma 2). Estas posiciones en
los cromosomas se conocen como loci del ADN (del latín: locus en singular, loci en plural). El cariotipo de la figura
muestra los loci de ADN que se usan en el análisis de perfiles de ADN.

Recomendación: para solucionar el siguiente conjunto de problemas puedes visitar la página

http://biomodel.uah.es/epb/molecular_bio/problem_sets/Recombinant_DNA_Technology/recombinant_d
na.html

o seguir el vínculo de cada respuesta.

8.- La técnica de Southern implica:

A. la detección de fragmentos de RNA sobre una membrana usando anticuerpos específicos radiactivos.
B. la detección de fragmentos de DNA sobre una membrana usando una sonda de DNA radiactivo.
C. la detección de proteinas sobre una membrana usando una sonda de DNA radiactivo.
D. la detección de proteinas sobre una membrana usando anticuerpos específicos radiactivos.
E. la detección de fragmentos de DNA sobre una membrana usando anticuerpos específicos radiactivos.
9.- ¿Cuál de los siguientes cebadores para PCR, permitirá hacer copia complementaria del DNA monocatenario
de secuencia 5' ATGCCTAGGTC?

A. 5' ATGCC
B. 5' TACGG
C. 5' CTGGA
D. 5' GACCT
E. 5' GGCAT
10.- ¿Cuál de las siguientes herramientas de la tecnología del DNA recombinado está emparejada INCORRECTAMENTE
con su uso?

A. endonucleasa de restricción - producción de fragmentos de DNA para clonar genes.

B. DNA ligasa - enzima que corta al DNA, creando extremos cohesivos.
C. DNA polimerasa - copia secuencias de DNA en la reacción en cadena de la polimerasa.
D. transcriptasa inversa - producción de cDNA desde un mRNA.
E. electroforesis - análisis RFLP.

Recomendación: para solucionar el siguiente conjunto de problemas puedes visitar la página

http://biomodel.uah.es/epb/human_bio/problem_sets/dna_forensics_1/dna_forensics.html
o seguir el vínculo de cada respuesta, recomiendo ampliamente ver la guía o tutorial de cada problema

11.- El análisis de la "huella dactilar de ADN" se basa en la técnica de transferencia e hibridación de Southern.
En ésta:
A. El ARN celular no radiactivo, separado por electroforesis y transferido a un filtro o membrana, se ensaya mediante
hibridación con una sonda radiactiva, específica para un gen. Esta sonda puede ser ARN o ADN.
B. Los fragmentos de restricción del ADN, radiactivos, se separan por electroforesis y se transfieren a un filtro o
membrana, donde se ensaya su hibridación con una sonda (ARN o ADN) no radiactiva, específica para un gen.
C. El ARN celular, radiactivo, separado por electroforesis y transferido a un filtro o membrana, se ensaya mediante
hibridación con una sonda radiactiva, específica para un gen. Esta sonda puede ser ARN o ADN.
D. La investigación del ADN se hace al sur del ecuador.
E. Los fragmentos de restricción del ADN, no radiactivos, se separan por electroforesis y se transfieren a un filtro o
membrana, donde se ensaya su hibridación con una sonda (ARN o ADN) radiactiva, específica para un gen.

12.- Alelos con una sonda de locus único

¿Cuántos alelos distintos se pueden detectar por cada individuo heterocigótico, empleando una sonda de locus único,
en un análisis de huella dactilar de ADN? Ver guía del problema OBLIGATORIO
A. 1
B. 2
C. 4
D. 8
E. 2 por cada cromosoma
 Antes de resolver los siguientes problemas vaya al siguiente vínculo

http://biomodel.uah.es/epb/human_bio/activities/blackett/anatomy.html

Lea detenidamente la Actividad conl ADN de la Familia Blackett (Anatomía de una autorradiografía) desde la
parte 1 hasta la parte 6. OBLIGATORIO

13.- Determinación de la paternidad

La autorradiografía de la derecha muestra los resultados de un análisis de huella dactilar de ADN,

con una sonda de locus único, aplicado a un varón, una mujer y sus cuatro hijos/as. ¿Cuál de los
hijos/as es el que con menor probabilidad desciende de esta pareja?

A. Hijo 1
B. Hijo 2
C. Hijo 3
D. Hijo 4
E. NINGUNO de los hijos/as

14.- Perfil del padre

La figura muestra los resultados del análisis de huella dactilar de ADN, con una sonda de locus
único, para un varón y sus cuatro hijos/as. ¿Qué calle contiene el ADN del padre?

A. Calle 1
B. Calle 2
C. Calle 3
D. Calle 4
E. Calle 5
 15.- Investigación de una violación

Esta figura muestra la parte significativa de la autorradiografía de un análisis, con sonda de locus
único, de varias muestras de ADN procedentes de la investigación de una violación.
Las muestras de ADN se cargaron en las calles del gel de este modo:
1. Muestra de sangre de la víctima.
2. Muestra de sangre del acusado.
3. Marcadores de tamaño de ADN.
4. Fracción femenina de la muestra vaginal de la víctima.
5. Fracción masculina de la muestra vaginal de la víctima.
Si Ud. fuera el analista de ADN, debería sacar como conclusión:

A. El sospechoso es culpable.
B. El sospechoso podría ser culpable, pero deben usarse más sondas.
C. La muestra vaginal procede de una víctima errónea.
D. El sospechoso queda excluido como origen del ADN presente en la prueba del delito.
E. NINGUNA de éstas.

16.- Violación con dos sospechosos

La figura muestra la parte significativa de la autorradiografía resultante de analizar, con una

sonda de locus único, varias muestras de ADN en una investigación de violación.

Las muestras de ADN fueron las siguientes:

(1) muestra conocida de sangre de la víctima

(2) muestra conocida de sangre del sospechoso A

(3) muestra conocida de sangre del sospechoso B

(4) ADN marcadores de tamaño

(5) fracción femenina de la prueba de ataque sexual

(6) fracción masculina de la prueba de ataque sexual

Si fuera Ud. el analista de ADN, sacaría como conclusión:
A. Ambos sospechosos, A y B, quedan excluidos como origen de la prueba del delito.
B. El sospechoso A queda excluido como origen de la prueba del delito, pero no se puede descartar al sospechoso B.
C. El sospechoso B queda excluido como origen de la prueba del delito, pero no se puede descartar al sospechoso A.
D. No se puede descartar al sospechoso A ni al B como origen de la prueba.
E. No se puede descartar al sospechoso B como origen de la prueba del delito. Los resultados del sospechoso A no son
concluyentes.

17.- Otra violación con dos sospechosos

La figura muestra la parte significativa de la autorradiografía resultante de analizar, con una

sonda de locus único, varias muestras de ADN en una investigación de violación.

Las muestras de ADN fueron las siguientes:

(1) muestra conocida de sangre de la víctima

(2) muestra conocida de sangre del sospechoso A

(3) muestra conocida de sangre del sospechoso B

(4) ADN marcadores de tamaño

(5) fracción femenina de la muestra vaginal de la víctima

(6) fracción masculina de la muestra vaginal de la víctima

Si fuera Ud. el analista de ADN, sacaría como conclusión:

A. Ambos sospechosos, A y B, quedan excluidos como origen de la prueba del delito.

B. El sospechoso A queda excluido como origen de la prueba del delito, pero no se puede descartar al sospechoso B.
C. El sospechoso B queda excluido como origen de la prueba del delito, pero no se puede descartar al sospechoso A.
D. No se puede descartar al sospechoso A ni al B como origen de la prueba.
E. No se puede descartar al sospechoso B como origen de la prueba del delito. Los resultados del sospechoso A no son
concluyentes.
 18.- Reconstrucción del perfil de una madre ausente

En ocasiones, los científicos medicolegales deben reconstruir el perfil de ADN de una persona
desaparecida o ausente a partir del estudio de los perfiles de ADN de parientes cercanos. En
este caso, falta la madre de cuatro hijos/as, todos ellos con un mismo padre biológico. La
figura muestra los resultados del análisis de huella dactilar de ADN, con una sonda de locus
único, de los cuatro niños y del padre. Lamentablemente, el analista olvidó rotular cuál es la
calle donde puso el ADN del padre.
A pesar de ello, se puede deducir que los alelos de la madre ausente son:

A. B y C
B. A y B
C. A y C
D. B y D
E. A y D

19.- Determinación de la paternidad

La figura muestra los resultados del análisis de huella dactilar de ADN, con una sonda de locus
único, de un hombre, una mujer y sus cuatro hijos.
¿Cuál de los niños se puede descartar como hijo biológico de ese padre?

A. Hijo 1
B. Hijo 2
C. Hijo 3
D. Hijo 4
E. No se puede descartar NINGUNO de los hijos
20.-

Se tiene un tipo de flor, para la cual se está investigando el modo de herencia

del color de sus pétalos y solo hay dos fenotipos. Para ello se realiza Southern
blot y Northernblot con una sonda de locus único, es decir, ésta sonda solo
hibridará específicamente con la región de un solo gen (el gen que produce
color). Se extrae el ADN a partir de 5 diferentes flores de la misma especie, y
se sabe el fenotipo de las flores 1 y 2. flor 1= blanco, flor 2=rojo.
Las plantas 3, 4 y 5 no han floreado, pero deduzca lo siguiente a partir de los
análisis.
a) De qué color serán las flores de las plantas 3, 4 y 5?
b) ¿cuál es el alelo dominante?
c)¿cuáles son homocigotos?
d) ¿y heterocigotos?

21.-

22.- Para cada uno de los niños se realizó un RFLP con

sonda de locus único (carriles A, B, C, D, E, F), indica si
sus padres podrían ser:

a) #1
b) #2
c) Ambos #1 y #2
d) Ninguno
23.- Para el diagnóstico de Poliovirus se tiene el siguiente ensayo:

a) ¿Qué tipo de ensayo es?

b) Se realizó el ensayo con la muestra de tres pacientes para el diagnóstico de polio y se obtuvo el resultado en el gel de electroforesis mostrado, el marcador
se encuentra en el carril 1 y es de 100 pb, la banda de mayor tamaño corresponde a 500pb, diga cuál es el diagnóstico para cada paciente y¿por qué?:

M P1 P2 P3

24.- Para el diagnóstico del virus de la parotiditis se compararon varias secuencias del gen NP provenientes de 7 cepas vacunales de éste virus. Y se sintetizaron
primers (secuencia azul) para amplificar por PCR, la región central mostrada en negro. Las cepas SK-Beecham, Biken y UrabeAM-9 se han relacionado a casos de
meningitis, y las cepas Odate, Glouc1/uk96, Jeryl-lynn no. ¿Cómo podría distinguir las cepas que producen meningitis de las que no la producen? Proponga un
ensayo molecular y represente sus resultados en electroforesis

SK-Beecham CTTCAGAGTACAGCCACTACAGGATCCAATTCAAGCACAACTTTTCATGCCATTATATCC 60
Biken CTTCAGAGTACAGCCACTACAGGATCCAATTCAAGCACAACTTTTCATGCCATTATATCC 60
UrabeAM-9 CCTCAGAGTACAGCCACTACAGGACCCAACCCAAGCACAACTTTTCATGCCATTATATCC 60
Miyahara CTTCAGAGTACAGCCACTACAGGATCCAATTCAAGCACAACTTTTCATGCCATTATATCC 60
Odate CTTCAGAGCACAGCCGCTACAGGATCCAATTCAAGCACAACTTTTCATGCCATTATATCC 60
Glouc1/UK96 CTTTAGAGCACAGCCGTTACAGGATCCAATTCAAGCACAACTCTTCATGCCATTATATCC 60
JERYL-LYNN CTTTAGAGCACAGCCTTTACAAGATCCAATTCAAGCACAGCTTTTCATGCCATTATATCC 60
* * **** ****** **** ** **** ******** ** *****************
SK-Beecham TCAAGTCAGCAACATCCCAAATCATCAGAATCATCAGATCAATCGCGTCGGGGGGATGGA 120
Biken TCAAGTCAGCAACATCCCAAATCATCAGAATCATCAGATCAATCGCGTCGGGGGGATGGA 120
UrabeAM-9 TCAAGTCAGCAACATCCCAAATCATCAGAATCATCAGATCAATCGCGTCGGGGGGATGGA 120
Miyahara TCAAGTCAGCAACATCCCAAATCATCAGAATCATCAGATCAATCGCATCGGGGGGATGGA 120
Odate TCAAGTCAGCAATATCCCAAATCATCAGAATCATCAGGTCAATCGCATCGGGGGGATGGA 120
Glouc1/UK96 TCAAGTCAGCAACATCCCAAATCATCAGAATCATCAGATTAATCGCATCGGGGGGATGGA 120
JERYL-LYNN TCAAGTCAGCAACATCCCAAATAATCAGAATCATCAGATCAATCGCATCGGGGGGCTGGA 120
************ ********* ************** * ****** ******** ****
SK-Beecham ACACCAAGATTTATTACGATACAACGAGAATGGTGATCCTCAACAAGATG 170
Biken ACACCAAGATTTATTACGATACAACGAGAATGGTGATCCTCAACAAGATG 170
UrabeAM-9 ACACCAAGATTTATTACGATACAACGAGAATGGTGATCCTCAACAAGATG 170
Miyahara ACACCAAGATTTATTACGATACAACGAGAATGGTGATTCTCAACAAGATG 170
Odate ACACCAAGATTTATTACGATATAACGAGAACGGTGATTCTCAACAAGATG 170
Glouc1/UK96 ACACCAAGATTTATTACGATACAACGAAAATGGTGATTCTCAACAGGATG 170
JERYL-LYNN AAACCAAGATTTATTACGATACAACGAGAATGGTGATTCTCAACAAGATG 170
* ******************* ***** ** ****** ******* ****
Oligonucleótidos específicos para detectar el gen NP CGCG Sitio de corte para Bsh1236 I