Practica de Urocultivo

Muestra, Colección y Transporte

Muestra:

 Orina obtenida en forma aséptica a mitad de chorro,

previa limpieza en un frasco estéril proporcionado por el
laboratorio.
 Orina de un niño obtenida en una bolsita colectora,
previa limpieza con agua y jabón del área perineal.
 Las muestras no deben permanecer más de dos horas a
temperatura ambiente
 Todas las muestras serán conservadas a partir de su
entrega al laboratorio a temperatura de refrigeración.
Bolsita colectoras de orina
para uso pediatrico

Frascos esteriles para la

recoleccion de orina para adultos
 Muestra, Colección y Transporte
Consideraciones previas:

 Supresión de Diuréticos
 Antibioticoterapia
 No ingesta de líquidos abundantes
 Necesita retener orina por 2-4 horas antes de la prueba.

Criterios de rechazo de muestra:

 Muestra de orina visiblemente contaminadas con Heces.

 Muestras de orina conservadas durante más de dos
horas a temperatura ambiente.
 Reactivos, medios, materiales y
equipos
Equipos:
 Estufa
 Microscopio
 Centrífuga

Materiales
 Asa de cultivo calibrada 1 ul.
 Placas con Agar Mac ConKey
 Placas con Agar Sangre
 Placas con Agar Mueller Hinton
 Tubos con medio manitol salado(si el aislamiento así lo requiere)
 Tubos con medios diferenciales:TSI,LIA,CITRATO DE SIMONS,SIM
(si el aislamiento así lo requiere)
 Discos de sensibilidad.
 Tubos 13x100 ml.
Materiales
 Procedimiento
 Se anotará el aspecto macroscópico y color de la orina
si este fuera patológico.
 Utilizando el asa de cultivo calibrada se introducirá en
forma perpendicular en el recipiente de orina y se
sembrará en un cuadrante de la placa de Agar Sangre.
 El procedimiento se repetirá para sembrar un cuadrante
con Agar Mac Conkey.
 Se realizará la determinación de presencia de
sustancias antibacterianas residuales.
 Las placas serán incubadas a 37°C por 18 horas.
 Procedimiento

 Se centrifugará 5 ml. de orina en un tubo de 13x100

mm durante cinco minutos a 3000 r.p.m.
 El sedimento de orina se observará a 400 x
 Después de incubar se realizará el recuento de colonias
 Se realizara la identificación de los cultivos
 Se realizará el antibiograma si corresponde.
 Las muestras con más de 5 leucocitos por campo de
400 x y con un recuento de colonias menor de 10,000
U.F.C./ml serán resembradas en agar sangre e
incubadas en CO2 por 24 horas.
 Cálculos e Interpretación

 Se realizará un recuento de colonias, cada colonia se contabilizará como

equivalente a 1000 U.F.C./ml. Para el recuento de colonias.

 Recuento menores de 10,000 U.F.C./ml. Se considerán como

contaminación y los cultivos son reportados como negativos.

 Recuentos entre 10,000 y 100,000 U.F.C./ml. Son considerados como

sospechosos, se realizará la identificación y el antibiograma.

 Recuentos mayores de 100,000 U.F.C/ml. Son considerados como

positivos y se realizará la identificación y el antibiograma.

 La presencia de una muestra de una mujer con gran cantidad de células

epiteliales, un recuento menor a 100,000 U.F.C./ml. y menos de 5
leucocitos por campo en el sedimento está asociado a contaminación por
flora vaginal y se reportará como cultivo negativo y presencia de flora
vaginal
 Cálculos e Interpretación
 La presencia de más tres colonias diferentes esta asociado a
contaminación, excepto en pacientes con presencia de sonda vesical,
en los cuales es frecuente encontrar asociaciones de bacterias y
hongos.

Falsos positivos:
 > de 100,000 colonias sin infección
Contaminación con flora (higiene inadecuada), uretra, vagina,
heces(lactantes).
Fimosis, jabón contaminado, recipiente no estéril, orinas no
refrigeradas.
Falsos Negativos:
 < de 100,000 colonias existiendo infección urinaria
Orina con densidad menor de 1010, ph extremos, focos renales que
no drenan a tubulis, bacterias que no crecen en los medios de cultivo,
antibioticoterapia.
 Archivo
Se anotará en un cuaderno de trabajo de
urocultivos:
 Datos del paciente: nombre, fecha,edad, código de
ingreso,
 Médico que indica la prueba
 Aspecto macroscópico y sedimento urinario.
 Resultado del cultivo, recuento de colonias e
identificación.
 Antibiograma
 Presencia de sustancias antibacterianas residuales
 Observaciones
 Presencia de sustancias
antibacterianas
Para determinar la presencia de sustancias antibacterianas
residuales en orinas se utiliza los siguientes equipos y
materiales:

Equipos y materiales:
 Discos de papelfiltro Whatman N°3 estériles de 6 mm de
diámetro.
 Placa de Agar Mueller Hinton 100x15 mm.
 Tubo con solución salina x 1 ml.
 Cepa de Bacillus subtilis ATCC 6633.
 Presencia de sustancias
antibacterianas
Procedimiento:

 Hacer una suspensión de Bacillus subtilis en un tubo de solución salina ,caldo

Mueller Hinton o Caldo Tripticasa de soya, que sea similar al tubo 0,5 de la escala de
Mc Farland.

 Sembrar la placa de agar Mueller Hinton con la suspensión de bacterias de manera

similar a un antibiograma.

 Tomar con la pinza un disco de papel de filtro y sumergirlo en la orina.

 Colocarlo en la placa sembrada según la plantilla.

 La placa será incubada a 37°C por 24 horas.

 Se observará la presencia de un halo de inhibición alrededor del disco con la orina.

 Presencia de sustancias
antibacterianas
Interpretación:
 Cualquier diámetro de halo se considerará como prueba
positiva.

 La ausencia de halo se considerará como prueba

negativa.

 El resultado se informa como sustancias antibacterias

residuales: Positivo o Negativo.