Estudios de laboratorio para el

diagnóstico de las enfermedades

infecciosas bacterianas y virales

Dra. Elvira Garza González

 Métodos
• Observación directa
• Cultivo
• Serología
• Métodos moleculares
Observación directa

• Tinción de Gram
• Tinción de Ziehl-Neelsen
• Examen en fresco
Tinción de Gram

•De gran utilidad en

el diagnóstico
etiológico.
•Sensibilidad
variable según el
tipo de muestra y la
carga bacteriana
presente en ella.
 Sensibilidad de la tinción de Gram

• Requiere 104-105 organismos/mL de

fluido o tejido para detectar cualquier
bacteria
 Utilidad del Gram
• Ayuda a determinar rápidamente las
características morfológicas , por lo que es útil en
la indicación de los antibióticos.
• Evaluar la calidad de la muestra
• La presencia de polimorfonucleares (PMN) puede
indicar infección.
• Morfologías específicas: Ej Los hongos
levaduriformes se observan formando
pseudomicelios cuando hay invasión y no sólo
colonización.
 Ziehl-Neelsen

• Requiere 10.000 bacterias/ml.

• Es muy útil en tuberculosis pulmonar, donde
con tres baciloscopias de esputo se puede
establecer la presencia de micobacterias en un
70% a un 80% de los casos.
 Coloración Auramina-Rodamina
Son colorantes inespecíficos, fluorescentes
bajo luz ultravioleta que se unen a los ácidos
micólicos.

Ventajas:
• Puede ser observadas con menor aumento
de 200x y 400x
• Requiere menor tiempo
• Es más sensible
Condiciones generales de la muestra para el
examen microbiológico

• Suficiente cantidad.
• Representativa del proceso infeccioso.
• Emplear equipo estéril y medidas de asepsia.
• Transportar inmediatamente la muestra al laboratorio o
conservarla adecuadamente.
• Obtener las muestras antes del empleo de antibióticos.
• Rotular adecuadamente la muestra y acompañarla de la
información que se desea así como de los antecedentes
clínicos necesarios.
 Tipos de bacteriemia
Transitoria: lavado de dientes, manipulación
de tejido infectado, instrumentación de tejido
infectado, o cirugía de sitios no estériles.
Continua: Endocarditis bacteriana, otras
infecciones endovasculares, los organismos
son liberados al torrente sanguíneo de
manera constante. Fiebre tifoidea, brucelosis,
leptospitosis.
Intermitente. Abscesos no drenados.
 Volumen
Adultos
Hay menos de 30 UFC/ml en pacientes con
bacteriemias clínicamente significativas.

Adultos: 10 a 20 ml de sangre

La probabilidad se incrementa 3.l2% por

cada ml que se cultiva.
 Número de cultivos

Primer hemocultivo: detecta el 65% de las infecciones

El segundo detecta el 80%

El tercero detecta el 95%

 Asuntos a considerar
• Anticoagulación:
No se debe coagular! No usar EDTA,
heparina ni citrato… polietanol
sulfonato de sodio… es mejor inocular
directo en la botella… porque lo
tienen.
• Dilución: la recomendada por el
fabricante
• Medio de cultivo
Grupo A: gérmenes que nunca son contaminantes
Grupo A: microorganismos que nunca son contaminantes.

GRUPO A
S. pneumoniae
H. influenzae
N. meningitidis
Brucella spp.
M. tuberculosis
N. gonorroheae
HACEK
P. multocida
L. monocytogenes
Bacteroides, Prevotella, Porphyromonas, Fusobacterium
 Gérmenes que raramente son
contaminantes

GRUPO B:
S. aureus
S. pyogenes
S. agalactiae
Estreptococos grupo C y G
Enterobacterias
BNF (principalmente P. aeruginosa y A.
baumannii)
C. albicans
Gérmenes que en la mitad de las veces son
clínicamente significativos

GRUPO C
S. viridans
Clostridium spp (excepto C. septicum)
C. tropicalis y C. parapsilosis
Gérmenes que generalmente son
contaminantes

GRUPO D
• SCN (Staphilococcus coagulasa negativo)
• Difteroides
• Bacillus spp
• P. acnes
UCI: Hospital Universitario Dr. José Eleuterio
González
Sangre
Patógeno n (%)
A. baumannii 42 (13.6)
S. aureus 38 (12.3)
P. aeruginosa 32 (10.3)
K. pneumoniae 23 (7.4)
E. cloacae 15 (4.8)
E. faecalis 13 (4.2)
E. coli 9 (2.9)
E. faecium 8 (2.6)
Toma de la muestra
•Punción venosa (palpar vena)
•Limpieza del brazo: limpiar la superficie
de la piel en forma circular de adentro
hacia afuera con alcohol isopropílico
•Dejar secar
•Limpiar la superficie de la piel en forma
circular de adentro hacia afuera con
clorhexidina
•Dejar actuar por al menos dos minutos
•Limpiar la tapa de la botella con alcohol
•Hacer la punción
Toma de la muestra

• Adicionar el volumen de la
muestra indicado a la botella
• Marcar las botellas con el
NOMBRE COMPLETO ,
IDENTIFICACIÓN,
PROCEDENCIA Y NÚMERO
QUE CORREPONDE AL ORDEN
DE LA TOMA .

•
Hemocultivos automatizados
 Catéteres
Técnica de Maki: Cultivo semicuantitativo
de la punta de catéter

• Rodar tres o cuatro veces sobre la superficie

de una placa de agar sangre 3-4 cm del
extremo distal del segmento intravascular del
catéter.
Positivo o colonizado: ≥15 UFC / placa
• Especificidad: 76%.
• Siempre hemocultivo y punta de catéter
 Urocultivo
• Toma de Muestras en Mujeres:
– Proceda primero a lavarse las manos y luego siéntese en el inodoro, lo
más hacia atrás que pueda. Separe los labios genitales con una mano y
mantenga los pliegues separados y proceda a asearse toda la zona
genital con el jabón desinfectante. Enjuague con abundante agua
estéril y luego seque bien con gasa estéril o con un paño limpio.
– Proceda a recoger la orina, destapando previamente el frasco SÓLO
EN EL MOMENTO DE LA MICCIÓN y sin tocar con los dedos su interior,
coloque la tapa con el lado plano hacia abajo. No toque el interior del
recipiente o de la tapa. Empiece a orinar en el frasco y recoja en el
frasco sólo la muestra del chorro del medio es decir, NO DEBE
RECOGER NI LA PRIMERA, NI LA ÚLTIMA PARTE DEL CHORRO DE
ORINA.
– Tape muy bien el frasco y rotúlelo con su nombre. Tráigalo al
Laboratorio lo más pronto posible, en un recipiente con hielo, en
menos de una hora.
Flora residente del tracto urinario
• Mezcla de:
– Lactobacilos
– Estreptococos alfa hemolíticos
– Difteroides
– CoNS
– Gardnerella vaginalis
– Levaduras

Flora de la uretra
 Orinas contaminadas
 Problemática en la diferenciación entre contaminación de la
muestra y verdadera infección.

 El diagnóstico microbiológico va a depender de la calidad de la

muestra recibida.

 Posibilidad de errores diagnósticos y tratamientos

inadecuados del enfermo por:
 Una toma mal realizada.
 Muestra pobremente recogida.
 Inadecuado transporte, almacenaje y procesamiento de las
muestras.
 Criterios de Kass

1956
Son para Enterobacterias
Muestras obtenidas por punción
suprapúbica y chorro medio.
Mujeres con pieloniefritis
sintomática.
 Los criterios han cambiado
Bajos recuentos bacterianos podrían deberse también a
IVU por:
• Infección por cocos Gram positivos
• Mayor diuresis
• Antimicrobianos suministrados previamente
• IU adquiridas por vía hematógena.
 Concepto:
 Variaciones en la definición de orina contaminada.
 Clásicamente, estaban universalmente admitidos los
Criterios de Kass, (del año 1956):
 Recuentos iguales o superiores a 105 UFC/ml, en una orina obtenida por
micción espontánea, son indicativos de bacteriuria significativa en un 80% de
los casos.
 Porcentaje que se eleva al 95% cuando se repite en más de un cultivo o se
acompaña de síntomas de infección.
 Conteos inferiores a 10³ UFC/ml se consideran contaminación.
 Entre las dos cifras, dudosos o indicativos de otras circunstancias.
 Cuando la orina se obtiene por cateterismo, un solo conteo de 10⁴ UFC/ml ya
es indicativo de bacteriuria significativa, e inferior habla de una probable
infección.
 En el caso de que la orina se hubiese obtenida por punción vesical suprapúbica
o renal percutanea lumbar, cualquier recuento debe considerarse como
significativo de bacteriuria.
 Interpretación de los Resultados
= Criterios de KASS =

Tipo de orina Un patógeno 2 patógenos  3 patógenos

Chorro medio 10,000 UFC/ml 10,000 UFC/ml Múltiples patógenos
Negativo Negativo presentes.

Se sugiere toma adecuada de

nueva muestra y llevar
10,000 UFC/ml 10,000 UFC/ml inmediatamente al
→ ID y PS → ID y PS laboratorio.
Catéter, punción ID y PS ID y PS
suprapúbica

"Las cuentas de UFC menores a 100,000 pueden representar contaminación de la muestra

o respuesta parcial al tratamiento"
 El urocultivo da lugar a falsos positivos y
negativos:

Falsos positivos:
• combinación con la secreción vaginal
• orina no refrigerada y por lo tanto mal conservada

Falsos negativos:
• estar tomando tratamiento antibiótico o haber tomado
muy recientemente
• arrastrar los antisépticos a la orina en su obtención,
obstrucción urinaria completa
• orina con pH menos de 5 o mayor de 8,5
• gérmenes inusuales que requieren medios especiales de
cultivo.
 Coprocultivo
Múltiples agentes causales:
• Vibrio cholerae
• Campylobacter jejuni
• Salmonella
• Shigella
• Escherichia coli O7:H157
• Yersinia enterocolitica
• Clostridium difficile
 Coprocultivo

MEDIOS DE TRANSPORTE

Se emplean cuando la viabilidad de las bacterias es muy

escasa o la posibilidad de desecación de la muestra es
grande y la toma no puede realizarse en el mismo laboratorio,
se usarán medios de transporte.

De Stuart o Amies, Cary Blair

Microbiota colibacilar normal
Microbiota colibacilar disminuida +
Microbiota colibacilar disminuida ++
Microbiota colibacilar dismunida +++
Microbiota colibacilar ausente
Estados de potador
 Expectoración
Requiere evaluación de las muestras

Evaluación macroscópica de la calidad de las muestras

 EVALUACIÓN DE LA CALIDAD DELA
MUESTRA

Muestra aceptable para cultivo:

• Menos de 10 células epiteliales /campo 10X
• No existe criterio de rechazo por ausencia
de LPMN
CULTIVO CUANTITATIVO de LBAs, LBs,
Aspirados traqueales
Método de diluciones seriadas

Muestra

Sembrar 0.1 mL
1:10

Sembrar 0.1 mL
Dilución 1:10 1:1000

Dilución 1:100 Sembrar 0.1 mL

1:100,000
 Diagnóstico microbiológico:
cultivo cuantitativo

Muestra
Cultivo  Cuenta de bacterias
cuantitativo en una muestra de
Especimen obtenido vías respiratorias
≥ 103 UFC/ml inferiores mediante
con cepillo protegido
Lavado
el método
≥ 104 UFC/ml de dilución seriada
broncoalveolar
o mediante el asa
Aspirado traqueal ≥ 105 UFC/ml calibrada.

Critical Care Med 2004; 8: 422-430. 2000; 28: 2799-2804

LCR
LCR
 Aglutinación de partículas de látex
Exudado faríngeo
Con antígeno
-

Partícula de látex

Antígeno estreptocócico
Aglutinación de partículas de látex
 ESTUDIO DEL LCR
• El LCR es obtenido por Punción lumbar bajo
estrictas normas de asepsia.
 Agentes causales:
Haemophilus influenzae
Streptococcus pneumoniae
Neisseria meningitidis
Staphylococcus epidermidis
Escherichia coli
Streptococcus agalactiae
Listeria monocytogenes
Staphylococcus aureus
Mycobacterium tuberculosis
MUESTRA

Tubo con tapón de rosca

Transporte al laboratorio
inmediatamente
No refrigerar
Tiempo máximo de espera--- 6 h a 37
°C--- NADA
 Análisis hematológico y químico de LCR de niños y adultos

Condición Leucocitos / Tipo de célula Proteínas Glucosa

mm3 predominante

Normal 0-5 Ninguna 15-20 mg/dL 45-100 mg/dL

Viral 2-2,000 Mononucleares Ligeramente Normal

elevada

Infección 5-20,000 LPMN Elevadas Baja

purulenta

TB y hongos 5-2,000 Mononucleares Elevadas Normal o a

veces bajo
 Proceso de la muestra

•Centrifugar por lo menos 15 min a 1500 g

•Se remueve el sobrenadante y se dejan 0.5 ml

•Resuspender el sedimento
Streptococcus penumoniae
Haemophilus influenzae
Neisseria meningitidis
Listeria monocytogenes
Streptococcus agalactiae
 El estudio del LCR consta de:
• Aspecto:El LCR normal es cristalino, con un aspecto y una viscosidad
comparables a los del agua
• Color: El líquido normal es totalmente incoloro “agua de roca”
Examen
Macroscópico

• Química: glucosa, proteínas, cloruros

Examen • Recuento celular
Citoquímico

• Observación directa sin tinción o preparación al fresco

• Observación directa con tinción: Gram, Wright
Examen • Cultivo
Microbiológico
 CULTIVO DE LCR
Sensibilidad de alrededor del 80-90%.
 PCR para otras especies bacterianas
• Chlamydia trachomatis
• Bordetella pertussis
• Clostridium difficile
• PASS Pseudomonas, Acinetobacter,
Stenotrophomonas, Staphylococcus aureus.
• E. coli O157:H7
• Listeria monocytogenes
• Helicobacter pylori
 Cultivos para anaerobios
MUESTRAS QUE NO SE CULTIVAN
• Orina de chorro medio
• Esputo expectorado
• Heces (sólo para investigar Clostridium
difficile), ni hisopados rectales
• Hisopado faríngeo y nasofaríngeo
• Hisopado de encías
• Hisopado vaginal
• Superficie de úlceras
Cultivo para anaerobios