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Hidrolisis Enzimatica Del Almidon PDF
Hidrolisis Enzimatica Del Almidon PDF
Ingeniería de Alimentos
Laboratorio de Biotecnología
UNIVERSIDAD DE CALDAS
MANIZALES, CALDAS
ABRIL 2015
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA.
RESULTADOS
Tabla 1. Datos obtenidos para la curva de calibración por el método del DNS
0,2
0,15 ABS v.s ppm glucosa
0,1
0,05
0
0 500 1000
ppm glucosa
Ecuación de la recta
Y = mx + b
Y = 0,0004x + 0,0198
RESULTADOS OBTENIDOS PARA LA -AMILASA
y = 0,0004x + 0,0198
( )
( )
( )
( )
( )
( )
( )
AR reales=
mmol/L=
mmol/L
La glucosa teórica no se puede determinar por qué las variedades de almidón varían, se
utiliza equivalente de dextrosa.
EQUIVALENTE DEXTROZA
PORCENTAJE DE HIDROLISIS.
= 75%
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Actividad Enzimática =
ml enzima = 0,45 ml
U=
Este procedimiento se realiza para cada uno de los tiempos y así obtener un valor de U
promedio para calcular la actividad enzimática.
( )
U promedio =
Actividad Enzimática =
Tabla 3. Datos para la alfa amilasa
Glucosa vs Tiempo
70
y = -0,0314x2 + 2,6408x - 5,8194
60 R² = 0,8851
50
40 Concentración
Glucosa
g/L
30
20 Polinómica
10 (Concentración )
0
-10 0 20 40 60 80
Tiempo (min)
En t = 0
Vrxnα-amilasa = 2,6408
Figura 3. Concentración de azucares reductores reales vs tiempo
AR real vs tiempo
60 y = 0,7553x + 7,7634
AR reales vs tiempo
50 R² = 0,5825
40
azucar reductor real
gL
30
20
10 Lineal (azucar reductor
real)
0
0 20 40 60 80
Tiempo (min)
%ED vs Tiempo
80
70
60
50
% ED g/L
40
30 %ED
20
10
0
0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo (min)
Resultados Glucoamilasa
0 0,11
15 2,799
30 3,402
45 3,276
60 3,456
( )
( )
( )
( )
( )
AR reales=
Mmol/L=
mmol/L
La glucosa teórica no se puede determinar por qué las variedades de almidón varían, se
utiliza equivalente de dextrosa.
EQUIVALENTE DEXTROZA
PORCENTAJE DE HIDROLISIS.
= 75%
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Actividad Enzimática =
ml enzima = 0,45 ml
U=
Tabla 6. Datos para la Glucoamilasa
glucosa vs Tiempo
100
90 y = -0,0457x2 + 3,9379x + 8,2393
80 R² = 0,9289
70
60
Glucosa
g/L
50
40 glucosa
30 Polinómica (glucosa)
20
10
0
0 20 40 60 80
Tiempo (min)
Y’ = -0,0457x + 3,9379
En t=0
AR reales vs Tiempo
120
60
AR reales
40 Lineal (AR reales)
20
0
0 20 40 60 80
Tiempo (min)
%ED vs Tiempo
120
% Equivalente Dextrosa
100
80
60
40 %ED
20
0
0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo (min)
ANALISIS DE RESULTADOS
Para obtener los resultados esperados es necesario controlar factores críticos como
temperatura y tiempo para que se lleve a cabo la hidrólisis en condiciones óptimas.
Se halló las velocidades de las dos reacciones enzimáticas analizadas por el método de
velocidades iníciales para la alfa amilasa se obtuvo una velocidad de 2.6408 mmol/L*min,
para la gluco- amilasa la velocidad fue de 3.9379 mmol/L*min; siendo esta mayor que la
de la otra enzima analizada. La velocidad de reacción aumenta cuando la concentración
de la enzima es mayor y se reduce cuando la concentración enzimática es a una
temperatura menor a la óptima. Las reacciones catalizadas por enzimas se aceleran
cuando la temperatura es óptima, lo que se debe, en parte, al incremento de movimiento
de las moléculas que provoca colisiones más frecuentes del sustrato con la enzima.
CONCLUSIONES
Gelatinización:
Los gránulos de almidón son prácticamente insolubles en agua fría, pero a medida
que se incrementa la temperatura cuando estos se encuentran en una solución
acuosa, se retiene agua y el gránulo empieza a hincharse aumentando de
volumen. Cuando se alcanza una determinada temperatura, el gránulo alcanza su
volumen máximo, si se administra más calor, el gránulo hinchado incapacitado
para retener el líquido se rompe parcialmente, así la amilosa y la amilopectina se
dispersan en el seno de la disolución. La gelatinización transforma los gránulos de
almidón insolubles en una solución de las moléculas constituyentes en forma
individual. A medida que aumenta el volumen de los gránulos, aumenta la
viscosidad de la dispersión acuosa. Cuando los gránulos se rompen, la viscosidad
se reduce hasta un valor estable en el que se produce un gel cuyas características
físicas y químicas son diferentes en cada almidón. La temperatura de
gelatinización es aquella en la cual se alcanza el máximo de viscosidad y se
pierden la birrefringencia (índice de refracción de los gránulos) y el patrón de
difracción de rayos X. Esta temperatura es realmente un intervalo, porque así los
gránulos provengan de la misma fuente botánica, tienen diferente composición y
organización, lo que origina que unos sean más resistentes que otros.
Licuefacción:
La licuefacción o dextrinización: es el proceso mediante el cual a partir de un
almidón gelatinizado se obtiene una rápida disminución de la viscosidad en virtud
de una hidrólisis parcial. En esta etapa se producen polisacáridos de longitud
intermedia (maltodextrinas con 5 a 10 unidades de glucosa) y pequeñas cantidades
de polisacáridos de alto peso molecular, como también algunos de bajo peso
molecular (glucosa, maltosa entre otros).
Sacarificación:
a partir de las maltodextrinas de la etapa anterior se completa la hidrólisis total del
almidón a glucosa. En la digestibilidad de almidones como materia prima, muchos
factores como el tamaño de particular, relación de amilosa:amilopectina, extensión
de la asociación molecular entre los componentes del almidón, grado de
cristalinidad, longitud de la cadena de amilosa y presencia de complejos lípidos-
amilosa, juegan un papel importante en la degradación hidrolítica
5- Explique con sus propias palabras el sentido físico del equivalente de dextrosa
(ED) y su importancia práctica.
Los azúcares del tipo aldosa tienen acción reductora frente a ciertos grupos
metálicos, por loque pueden determinarse mediante una modificación del método
de Eynon y Lane, donde lasmoléculas de dextrosa y maltosa presentes en
lamuestra reducen el sulfato de cobre en un sistemade tartrato en medio alcalino
bajo condicionescontroladas, dando un precipitado rojo de óxidocuproso. El
resultado se expresa como dextrosa y se calcula como por ciento de materia seca.
6- Utilizando las diferentes definiciones que se reportan en la literatura sobre el
equivalente de dextrosa (ED), analice si se puede calcular este parámetro para
las dos reacciones estudiadas. En caso de que no sea posible, explique qué se
debe hacer para hallar el ED
( )
En donde los azucares reductores fueron hallados por el método de DNS, donde en la
curva de calibración y con la ecuación de la recta se halló las ppm de glucosa y por un
factor de conversión se llevaron a g/L siendo estos valores las concentraciones de
los azucares reductores y a partir de estos se hallaron los reales mediante la siguiente
ecuación:
Diseño experimental. Se usa un diseño factorial 2 de dos factores a dos niveles con
punto central para determinar el efecto de los factores y de sus interacciones en las
respuestas, o sea, las condiciones necesarias para extraer
y para hidrolizar el almidón.
Extracción del almidón. Todas las muestras que se usan se toman del mismo lote de
producción; se usa almidón de Harina de arroz y se mezcla con agua para solubilizar
la proteína. Se agitó a 100 rpm en vasos de 1L; una centrífuga manual separó dos
fases y el almidón obtenido se depositó en bandejas. El almidón aislado se lava con
agua hasta pH ligeramente neutro (solución inicial básica); se filtró y se seca (70°C,
3h). La proteína residual se analizó por el método de Kjeldahl.
La hidrólisis ácida por acción del HCl a 100ºC produce una hidrólisis totaldel almidón y
forma glucosa, maltosa, e isomaltosa. La hidrólisis enzimática por acción de la enzima alfa
amilasa produce unahidrólisis parcial produciendo maltosa, glucosa y dextrina límite que
es unacadena ramificada y para poder romperla se necesita de α-1-6 glucosidasa.
El procedimiento puede variar de acuerdo a la influencia que tienen factores como el pH,
la temperatura, la concentración de sustrato, el tipo de almidón, la dosificación de enzima
y la adición de cofactores, es decir: el pH en la actividad enzimática puede cargar los
restos de aminoácidos, cambiando la conformación de la enzima, pero hay un pH óptimo,
en el cual la actividad catalítica es la más efectiva; la temperatura acelera la velocidad de
reacción, pero hay que tener cuidado de no exceder la temperatura sobre 55oC, porque la
enzima al ser una proteína se puede desnaturalizar, creando daños en sus sitios
catalíticos; la concentración de sustrato mientras mayor sea, mayor es la velocidad que
alcanza la enzima, después de alcanzada esa velocidad máxima, un aumento en la
concentración de sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción; la dosificación
debe hacerse de acuerdo a los niveles de sustrato para que el rendimiento sea óptimo, y
los cofactores son necesarios para que la enzima actúe adecuadamente en los sitios
activos.
BIBLIOGRAFÍA
LÓPEZ, A., GARCÍA GARIBAY, M., QUINTERO, R., CANALES, M., 2002.
Biotecnología Alimentaria. Páginas 105 – 110. Disponible en
http://books.google.com.co/books?id=2ctdvBnTa18C&pg=PA577&dq=enzimas+en
+la+industria#v=onepage&q=enzimas%20en%20la%20industria&f=false