TALLER 7. Bacilos Gram-positivos : B. cereus, B. subtilis y B. anthracis.

El taller se debe llevar resuelto a clase, en cualquier momento el profesor podrá hacer
evaluaciones.

1. Llene y discuta en clase con su profesor la información acerca de cada uno de

estos microorganismos

Nombre del Hábitat Nombre y Dos Importancia Tratamiento

microorganismo natural y explique tres patologías a nivel de básico en
tipo de factores de que causen salud humanos y
muestra virulencia en humanos pública, medidas de
donde se (incluir el y/o industrial esterilización y
encuentra principal) animales y/o agrícola prevención o
control en
productos
industriales
Bacillus cereus

Bacillus subtilis

Bacillus
anthracis

2. Realice un esquema de la manera secuencial como usted iría identificando cada

uno de estos microorganismos y explique el fundamento de cada uno de los
medios o pruebas de laboratorio que utiliza para los mismos (máximo 7 pruebas
bioquímicas diferenciales en orden de importancia).

3. Las cepas virulentas de Bacillus anthracis portan genes que codifican tres
componentes proteicos tóxicos en un plásmido de gran tamaño, pX01. Cuales
son estas proteínas y como ocasionan el efecto patológico?

4. En la patogenia causada por Bacillus anthracis que papel juega la cápsula de

esta bacteria. Que papel juega el plásmido pX02 en la producción de la cápsula ?
Que genes posee este plasmido ? Cual es la composición fundamental de la
cápsula de Bacillus anthracis ?

La cápsula del Bacillus anthracis es un polisacárido del ácido D-glutámico de alto peso
molecular y muy antigénica, aunque los anticuerpos anticapsulares que si se usan para
diagnóstico, al contrario de los neumococos, no tienen efecto protector para el huésped.
La inoculación del cobayo con material proveniente de los exudados o de un cultivo
logrado a partir de un producto patológico, induce la septicemia en 48 horas y el
microorganismo que se recupera por punción cardiaca y/ o del bazo del animal
inoculado, tiene valor diagnóstico. El estudio post mortem de esos animales deberá
efectuarse con sumo cuidado para evitar la contaminación de los laboratoristas y del
medio ambiente, teniendo el cuidado de limpiar las superficies y desinfectarlas con
formaldehído. Los restos del animal deben ser incinerados. Cuando la bacteria se
inocula en agar-nutriente con bicarbonato al 0.7% añadido y, se le cultiva toda la noche
a 37°C en atmósfera de bióxido de carbono al 5-20%, el germen puede sintetizar su
cápsula in vitro y las colonias obtenidas son de aspecto mucoide. En las muestras de la
sangre de un paciente septicémico teñido con la técnica de Mc Fadyean se pueden
demostrar los bacilos encapsulados. El germen se ha observado también en el examen
microscópico directo del líquido pleural y ascítico y en el líquido cefalorraquídeo de los
casos con meningitis. Con la técnica de inmunohistofluorescencia se puede demostrar la
presencia del bacilo en las muestras patológicas (frotis directo) o en los tejidos y
biopsias del paciente

5. Que papel juegan en la gastroenteritis las dos enterotoxinas producidas por

Bacillus cereus ?

Bacillus cereus

Hábitat natural y tipo de muestra donde se encuentra

Uno de los aspectos más resaltantes de la Bacillus cereus es su ubicuidad. Esto significa
que se puede encontrar en gran variedad de ambientes. Todo esto gracias a su capacidad
para sobrevivir en diversas condiciones ambientales de pH y temperatura.

A través de diversos estudios ha sido posible aislar cepas de esta bacteria tanto en suelos
polares como en lugares tropicales, lo que ratifica su capacidad de colonizar diversidad
de ambientes.

Pueden encontrase en suelos, plantas, aguas minerales, sedimentos e incluso polvo.

Nombre y explique tres factores de virulencia (incluir el principal)

Bacillus cereus tiene la capacidad de producir diferentes toxinas que afectan la salud
humana cuando se consumen alimentos contaminados por el microorganismo en dosis
de 105 a 108 UFC por gramo de alimento. Las toxinas generadas dependen de las cepas
de B. cereus, la toxina emética, se caracteriza por causar vómito, y las enterotoxinas
como la hemolítica, la no hemolítica y la citotoxina K, inducen permeabilidad vascular
por la formación de poros en el intestino delgado y por consiguiente, diarrea.

La toxina emética se expresa al inicio de la fase estacionaria de B. cereus; consiste de

un polipéptido cíclico y actúa como un ionóforo de potasio que afecta los gradientes de
concentración de iones transmembrana necesarios para el buen funcionamiento celular;
se caracteriza por ser altamente hidrofóbica y termoestable, solo se inactiva a 121ºC por
90 minutos y es activa en un rango de pH entre 2 y 11. La toxina emética es resistente a
la digestión de las enzimas proteolíticas del tracto intestinal y a los ácidos presentes en
el estómago humano; tras ser ingerida en el alimento, se une al receptor 5–HT3 en el
estómago provocando el vómito. Esta toxina puede causar insuficiencia hepática debido
a que interfiere en la fosforilación oxidativa llevada a cabo por las mitocondrias de los
hepatocitos. Se ha sugerido que existe una baja probabilidad de que la toxina emética se
produzca en alimentos refrigerados, debido a que las cepas productoras crecen a
temperaturas superiores a 15 °C, por tanto, se asume que los alimentos refrigerados
estarían libres de la toxina mientras se conserve la cadena de frío.

Enterotoxinas. Las enterotoxinas son producidas después de la colonización del

intestino delgado por B. cereus; allí forman poros en las membranas de las células
epiteliales, generando un desbalance osmótico que induce la diarrea en el humano. Los
genes que codifican para las diferentes enterotoxinas se encuentran en el cromosoma
bacteriano y su expresión es regulada por una proteína pleotrópica (PlcR) de 34 kDa, la
cual está presente en los miembros del grupo Bacillus cereus. Entre las enterotoxinas
más relevantes producidas por B. cereus se encuentran la toxina hemolítica, la toxina no
hemolítica y la citotoxina K; las cuales se describen a continuación. Toxina hemolítica o
hemolisina BL –HBL La hemolisina BL (hbl), es considerada el factor de virulencia más
importante de B. cereus porque tiene efecto hemolítico, citotóxico, dermonecrótico y
puede inducir permeabilidad vascular. Está constituida por las subunidades proteicas L1
y L2 que son componentes citolíticos y la subunidad B, que favorece la unión a la célula
huésped. Estas subunidades están codificadas por los genes hblD, hblC y hblA,
respectivamente y juntos forman el operón hbl; todos los genes deben estar presentes y
expresarse para que esta enterotoxina tenga actividad biológica. En algunas cepas se ha
detectado un gen adicional en el operón hbl, el gen hblB, que sintetiza la proteína B’, la
cual no tiene una función conocida, pero debido a la alta homología con la proteína B,
se cree puede ser un sustituto de esta; sin embargo, trabajos más recientes indican que el
gen hblB no ha sido transcrito a un nivel detectable, dato que sugiere que podría ser un
pseudogen.

Toxina no hemolítica – NHE

La enterotoxina no hemolítica (NHE), al igual que la enterotoxina HBL, está formada

por tres subunidades; la subunidad NheA actúa como componente citolítico y las
subunidades NheB y NheC favorecen la unión a las células epiteliales del intestino
delgado. La enterotoxina NHE es codificada por los genes nheA, nheB y nheC, los
cuales conforman el operón nhe (Figura 3), ubicado en el cromosoma de B. cereus [30].
Recientemente se encontró que la cepa B.

Citotoxina K - CytK La citotoxina K (CytK)

forma poros en la membrana de las células epiteliales y tiene actividad necrotizante y

citotóxica. CytK es resistente al dodecilsulfato sódico (SDS), pero sensible a las
temperaturas de ebullición; se estima que alrededor del 30 al 40% de las cepas de B.
cereus contienen los genes para sintetizarla. Se han encontrado dos variantes de esta
enterotoxina en diferentes cepas bacterianas, la CytK–1 codificada por el gen cytK–1 y
la CytK–2, codificada por el gen cytK–2, ambos genotipos presentes en el cromosoma
bacteriano. Estas variantes se diferencian por su efecto biológico en cultivos celulares,
la variante CytK–1 presenta un efecto más tóxico que la variante CytK–2, por lo que la
primera constituiría un mayor riesgo para la salud humana.

Enterotoxina FM - EntFM La enterotoxina FM (EntFM)

Es un polipéptido de 45 kDa codificado por el gen entFM, localizado en el cromosoma
bacteriano. Aunque la EntFM no ha sido implicada directamente en intoxicaciones
alimentarias, el gen entFM ha estado presente en la mayoría de cepas que ocasionan los
brotes diarreicos; se ha reportado que, en experimentos con ratones y conejos, esta
enterotoxina genera permeabilidad vascular, hecho que sugiere un riesgo potencial de
desencadenar diarrea en personas cuyo intestino delgado sea colonizado por una cepa de
B. cereus enterotóxica.

Dos patologías que causen en humanos y/o animales

Bacillus cereus es una bacteria patógena que puede producir numerosas patologías en el
ser humano: infecciones en el tracto gastrointestinal y fuera de éste, así como también,
en casos extremos, infecciones sistémicas.

Esta bacteria produce dos tipos de toxinas: la cereulida y la diarreogénica. Cada tipo de
toxina tiene efectos específicos.

Las infecciones a nivel gastrointestinal que genera esta bacteria son:

Síndrome emético: es causado por la toxina cereulida y se produce por la ingestión de

alimentos contaminados con ésta. Su período de incubación es de 1 a 5 horas.

Síndrome diarreico: se origina por la ingestión de esporas que posteriormente se

desarrollan en el intestino delgado. El período de incubación es de 1 a 24 horas.

Importancia a nivel de salud pública, industrial y/o agrícola

Importancia a nivel alimentaria

Importancia a nivel clínico. Pacientes inmunosuprimidos

Tratamiento básico en humanos y medidas de esterilización y prevención o control

en productos industriales

Las infecciones
gastrointestinales se
tratan de forma
asintomática; las
infecciones oculares u
otras enfermedades
invasivas precisan la
retirada de los cuerpos
extraños y el
tratamiento con
vancomicina,
clindamicina,
ciprofloxacino o
gentamicina
Las infecciones gastrointestinales se tratan de forma asintomática; las infecciones
oculares u otras enfermedades invasivas precisan la retirada de los cuerpos extraños y el
tratamiento con vancomicina, clindamicina, ciprofloxacino o gentamicina. La
enfermedad gastrointestinal se previene mediante la preparación adecuada de la comida
(adecuada refrigeración, almacenamiento)

http://www.scielo.org.co/pdf/rfnsp/v34n2/v34n2a12.pdf

Bacillus subtilis

Hábitat natural y tipo de muestra donde se encuentra

Bacillus subtilis es una especie bacteriana notablemente diversa, capaz de crecer en

diversos entornos, incluidos los tractos gastrointestinales de los animales. Las especies
de Bacillus son ubicuas en la naturaleza, encontrándose en mayor proporción en los
suelos como microorganismos saprófitos, resultando de gran utilidad usar muestras de
suelo como fuente de inóculo.

Nombre y explique tres factores de virulencia (incluir el principal)

B. subtilis no es considerado patógeno humano; sin embargo puede contaminar los
alimentos, pero raramente causa intoxicación alimenticia. Sus esporas pueden sobrevivir
la calefacción extrema que a menudo es usada para cocinar el alimento, y es responsable
de causar la fibrosidad en el pan estropeado.

La Bacillus subtilis es una especie bacteriana que puede ser encontrada en diversos
ambientes. Ha sido aislada de ambientes terrestres y acuáticos. Sin embargo, cuando se
encuentra en un medio con condiciones hostiles tiene un mecanismo para sobrevivir.
Ese mecanismo es la producción de esporas, las cuales son altamente resistentes a las
cambiantes condiciones de medio externo. Una vez el medio ambiente vuelve a ser
favorable, las esporas germinan y comienzan a reproducirse las bacterias nuevamente.

Importancia a nivel de salud pública, industrial y/o agrícola

Actividad antifúngica. Entre los microorganismos patógenos que afectan a los diversos
cultivos están los hongos. Ellos se encuentran entre los causantes principales del daño y
deterioro de ciertas plantas.

Elaboración de detergentes. La Bacillus subtilis produce un tipo de enzimas,

conocidas como proteasas, las cuales han sido utilizadas desde hace muchos años como
aditivos en los detergentes. Entre las proteasas que produce esta bacteria, la más
utilizada a nivel industrial en la fabricación de detergentes es la subtilisina.

En el área farmacológica
La Bacillus subtilis produce ciertas sustancias que tienen un efecto antibiótico. Esto
quiere decir que son capaces de eliminar otras cepas bacterianas que si son patógenas.

En la gastronomía
Hay una cepa de Bacillus subtilis que actúa sobre la semilla de la soja, llevando a cabo
el proceso de fermentación. El resultado de este proceso es un alimento de origen
japonés conocido con el nombre de Natto.

Dos patologías que causen en humanos y/o animales

En los pocos casos de intoxicación alimentaria por Bacillus subtilis, los síntomas
descritos son similares a la intoxicación generada por la bacteria Bacillus cereus. Entre
los más destacados se pueden contar:

Diarrea
Nauseas
Febrícula
Malestar general.

Tratamiento básico en humanos y medidas de esterilización y prevención o control

en productos industriales
No es patógeno

https://www.lifeder.com/bacillus-subtilis/#Patologias_relacionadas

Bacillus anthracis

Hábitat natural y tipo de muestra donde se encuentra

se encuentra en el suelo y en la lana y otros productos de origen animal. Se encuentra en

todos los continentes, tanto en los camellos africanos, como en las vacas argentinas.
Este bacilo necesita medios de cultivo ricos, tanto en nucleótidos como en glucosa.

Nombre y explique tres factores de virulencia (incluir el principal)

Los factores de virulencia principales del B. anthracis son codificados por dos
plásmidios pX01 y pX02, el primero de ellos induce la síntesis de la exotoxina
bacteriana y tiene un tamaño de 184.5 pares de kilobases (pkb). El complejo gene-
toxina tiene tres componentes: el antígeno protector (AP), el factor letal (FL), y el factor
causante del edema (FE), los tres se combinan para formar dos toxinas binarias. El FE
es la enzima adenilato-ciclasa dependiente de la calmodulina y el AP es aquella porción
que facilita la entrada de la toxina en la célula huésped, de tal modo que los niveles del
adenosinmonofosfato cíclico (AMPc) acumulados dentro de la célula humana alteran la
homeostasis celular y se cree sean los responsables de la hinchazón masiva, tan
característica del ántrax cutáneo.

Por otro lado, el FE inhibe in vitro la función de los leucocitos polimorfonucleares

neutrófitos, y en los pacientes la función del neutrófilo se ha encontrado también
alterada. El FL es una zinc-metaloproteasa que puede inactivar a la proteinkinasa
activada por mitógeno, que como es sabido actúa como un “dominio de ligadura”, esta
toxina induce en el macrófago la liberación del factor de necrosis tumoral alfa (FNT-
alfa) y de la inteleucina I-beta, estos productos son parcialmente responsables de la
muerte en el ántrax toxémico masivo.

El plásmide más pequeño de los dos, llamado pX02 tiene longitud de 95.3 pkb y
codifica tres genes de la cápsula de poliglutamato cap A, cap B y cap C36,37. Las
exotoxinas inhiben y retardan la respuesta inmunológica, pero la cápsula protege a la
bacteria contra la fagocitosis. La expresión de los factores de virulencia bacteriana está
regulada por la temperatura del huésped >37°C, y la concentración del bióxido de
carbono >5% y la presencia de ciertos nutrientes y componentes del suero17,38,39. La
regulación de la expresión fenotípica de los genes de la cápsula y de la exotoxina, está
mediada por un activador de la transcripción AtxA que puede ser afectado cuando se
modifican las condiciones del ambiente40. El gene capsular tiene también su propio
regulador de transcriptasa AcpA41 y, la acción sinérgica de los dos plasmidios se
requiere para que la cepa sea plenamente virulenta. Cuando por algún motivo se pierde
alguno de los dos plasmidios, se produce una mutante del bacilo del ántrax de virulencia
atenuada o avirulenta. La cepa que desarrolló Luis Pasteur en sus experimentos de
vacunación animal en Francia lleva el pX02, tiene cápsula pero no se expresa la
exotoxina, en el laboratorio se conoce también la cepa-Sterne atenuada que sólo lleva el
pX01, puede sintetizar la exotoxina, pero no forma cápsula
https://www.medigraphic.com/pdfs/iner/in-2001/in014g.pdf

Dos patologías que causen en humanos y/o animales

 Piel (cutáneo) — Esta es la forma más común del ántrax. Para que se produzca
la infección, tiene que haber una herida en la piel. Los primeros síntomas
incluyen picazón donde la piel ha sido expuesta. Luego aparece una gran
ampolla o úlcera. La úlcera adquiere un cascarón negro que la cubre. Si no se
administra tratamiento, la infección puede diseminarse a los ganglios linfáticos y
al torrente sanguíneo.

 Inhalación — El ántrax de inhalación es muy raro en los Estados Unidos. Los

primeros síntomas incluyen fiebre, fatiga, malestar y tos o dolor torácico. En el
plazo de 2 a 5 días aparecen fiebre alta, pulso acelerado y dificultad respiratoria.
El ántrax por inhalación es con frecuencia letal.

 Gastrointestinal — Esta forma ocurre sólo después de haber comido carne

infectada, mal cocinada. Los primeros síntomas incluyen fiebre, dolor
abdominal, diarrea acuosa y vómito con sangre.

Importancia a nivel de salud pública, industrial y/o agrícola

Es un agente usado para el bioterrorismo

Si se realizara un ataque bioterrorista, Bacillus anthracis, la bacteria que causa el ántrax,

sería uno de los agentes biológicos que se utilizaría con más probabilidad. Los agentes
biológicos son gérmenes que pueden infectar o matar a las personas, los ganados o los
cultivos. El ántrax es uno de los agentes que se utilizaría con más probabilidad debido a
lo siguiente:

Las esporas de ántrax se encuentran fácilmente en la naturaleza, se pueden generar en

un laboratorio y pueden perdurar en el ambiente.
Las esporas microscópicas pueden colocarse en polvos, aerosoles, alimentos y en el
agua.

Tratamiento básico en humanos y medidas de esterilización y prevención o control

en productos industriales

En los pacientes contaminados asintomáticos o expuestos a las esporas, se recomienda

aplicar doxiciclina o ciprofloxacina por seis semanas o más. La vacuna del ántrax
absorbida (VAA), y precipitada con hidróxido de aluminio contiene el antígeno
protector (AP) obtenido del Bacillus anthracis cepa Sterne, y con dos inoculaciones se
logró una protección experimental satisfactoria en los monos. En los humanos se
administra por vía subcutánea, en dosis 0.5mL, repetida a las 2 y 4 semanas y a los 6, 12
y 18 meses con refuerzo anual. Quienes reciben tratamiento profiláctico con antibióticos
deben ser protegidos además con la vacuna. Actualmente, se hace investigación para
preparar otra vacuna más segura, potente y efectiva, usando antígenos purificados y
cepas mutantes auxotróficas. En Rusia, se ha empleado desde hace muchos años una
vacuna viva atenuada en animales y en los humanos.

https://www.medigraphic.com/pdfs/iner/in-2001/in014g.pdf
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/grampositivosaerobios.pdf

2. Realice un esquema de la manera secuencial como usted iría identificando cada

uno de estos microorganismos y explique el fundamento de cada uno de los
medios o pruebas de laboratorio que utiliza para los mismos (máximo 7 pruebas
bioquímicas diferenciales en orden de importancia).
B2 Y B3 Bacillus subtilis.
B4 Bacillus cereus

https://revistas.unicolmayor.edu.co/index.php/nova/article/download/151/303?inline=1