UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONA PERUANA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS DEPARTAMENTO ACADMICO DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

CURSO DE BACTERIOLOGA

Edith Ruiz Snchez lvaro Tresierra Ayala 2011

INTRODUCCIN Aunque las primeras bacterias fueron observadas por Anthony van Leeuwenhoek en 1683, empleando un microscopio de lente simple diseado por l mismo, a las que las denomin animculos, el trmino bacteria (bastn pequeo), fue introducido en 1828, por Ehrenberg. Entre la amplia diversidad de microorganismos presentes en los diferentes ecosistemas del planeta, las bacterias o moneras constituyen uno de los grupos ms interesantes, dada su gran versatilidad metablica as como porque algunas constituyen la causa de enfermedades no solo para humanos sino tambin para animales y plantas. Aunque muchos estudiosos de la vida se muestran escpticos, las bacterias son los organismos ms abundantes del planeta, son ubicuas, crecen hasta en los hbitats ms extremos como en los manantiales de aguas calientes y cidas, en desechos radioactivos, en las profundidades tanto del mar como de la corteza terrestre; algunas pueden incluso sobrevivir en las condiciones extremas del espacio exterior. Se estima que se pueden encontrar en torno a 40 millones de clulas bacterianas en un gramo de tierra y un milln de clulas bacterianas en un mililitro de agua dulce. Estos organismos procariotas son imprescindibles para el reciclaje de los elementos, pues muchos pasos importantes de los ciclos biogeoqumicos dependen de stas. Como ejemplo cabe citar, la fijacin del nitrgeno atmosfrico. Por otro lado, se ha estimado que una gran parte (se supone cerca del 90 a 95%) de las especies de bacterias existentes, todava no ha sido descrita. Adems, en las especies bacterianas conocidas y que mayormente crecen en los medios de cultivo de laboratorio, existen algunas cepas denominadas bacterias viables pero no cultivables, las cuales pese a estar presentes en una muestra, no son susceptibles de desarrollar en los medios de cultivo, por lo que su estudio actualmente constituye un reto para los bacterilogos. En el cuerpo humano existen aproximadamente diez veces tantas clulas bacterianas como clulas humanas, con una gran cantidad de bacterias en la piel y en el tracto digestivo. Aunque el efecto protector del sistema inmune hace que la gran mayora de estas bacterias sea inofensiva o beneficiosa, algunas bacterias patgenas pueden causar enfermedades infecciosas, incluyendo clera, sfilis, lepra, tifus, difteria, escarlatina, etc. Las enfermedades bacterianas mortales ms comunes son las infecciones respiratorias, con una mortalidad slo para la tuberculosis de cerca de dos millones de personas al ao. Afortunadamente, en todo el mundo se utilizan antibiticos para tratar las infecciones bacterianas, sustancias que mayormente son producidas por bacterias y son efectivas mayormente contra otras bacterias, ya que inhiben la formacin de la pared celular o detienen otros procesos de su ciclo de vida. Tambin se usan extensamente en la agricultura y la ganadera en ausencia de enfermedad, lo que ocasiona que se est generalizando la resistencia de las bacterias a los antibiticos; de modo que dentro de poco, el hombre tendr que
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verse obligado a buscar otras alternativas para contrarrestar las enfermedades de etiologa bacteriana, causadas por agentes multidrogo-resistentes y quizs recurra al empleo de sustancias de origen vegetal. Pero no todo es adverso, puesto que en la industria, algunas bacterias son importantes en procesos tales como el tratamiento de aguas residuales, en la produccin de queso, yogur, mantequilla, vinagre, etc., y en la fabricacin de medicamentos y de otros productos qumicos Por todo lo expuesto, aunque parezca paradjico, existen bacterias perjudiciales (patgenas), menos mal que son pocas y otras tantas son benficas, pero el ponerse a pensar que algunos de estos organismos tienen como hbitat diferentes partes de nuestro cuerpo, tal es el caso de la flora bacteriana intestinal, permitindonos asimilar al mximo los nutrientes que ingerimos, el ponerse a pensar que con el empleo de la tecnologa del ADN recombinante, la humanidad dispone de bacterias capaces de sintetizar insulina humana u otras hormonas necesarias para el ser humano, cada vez que escuchsemos el trmino bacteria no solamente pensemos en perjuicio, pero la idiosincrasia de nuestra sociedad, es muy difcil de cambiar. A fin de facilitar el proceso formativo de nuestros estudiantes, se ha considerado conveniente elaborar esta obra, la cual abarca el estudio de algunas de las bacterias presentes en el mbito amaznico. Aqu se contemplan no solamente aspectos genotpicos de estos seres microscpicos, sino tambin aspectos fenotpicos como lo son: la morfologa, ecologa, bioqumica, patogenia, fisiologa, entre otros. En vista que no todas las bacterias incluidas en este documento, son consideradas como patgenas, en algunas de ellas se describen sus potencialidades benficas utilizadas a nivel industrial, virtudes que hoy en da son aprovechadas por la humanidad a fin de solucionar algunas de sus necesidades.

Los autores

NDICE:
INTRODUCCIN ..................................................................................................... 2 NDICE .................................................................................................................... 4 Contenido del Curso de Bacteriologa ................................................................. 6 I UNIDAD ................................................................................................................ 6 1.1. Caractersticas de las Bacterias .................................................................... 6 1.2. Clasificacin de las Bacterias ........................................................................ 6 1.3. Nomenclatura Bacteriana .............................................................................. 8 1.4. Identificacin de las Bacterias ....................................................................... 9 1.5. Medios de cultivo......................................................................................... 11 1.6. Clasificacin de los medios de cultivo ......................................................... 12 1.7. Mecanismos de Patogenicidad Bacteriana .................................................. 14 1.8. Invasin a las Clulas del Tejido del Hospedero ......................................... 17 1.9. Las Toxinas Bacterianas ............................................................................. 19 SECCIN 1: Las Espiroquetas ........................................................................ 21 Especie: Treponema pallidum......................................................................... 21 Especie: Leptospira interrogans...................................................................... 26 SECCIN 4: Bacilos y Cocos Gram Negativos .............................................. 28 Especie: Pseudomonas aeruginosa ............................................................... 28 Microorganismos Fijadores de Nitrgeno: Gnero: Rhizobium ....................... 31 II UNIDAD ............................................................................................................. 36 Especie: Neisseria gonorrhoeae ..................................................................... 36 Especie: Brucella melitensis ........................................................................... 38 Especie: Brucella abortus ............................................................................... 38 Especie: Brucella suis ..................................................................................... 38 SECCIN 5: Bacilos Gram Negativos Facultativos ....................................... 42 Familia: Enterobacteriaceae ........................................................................... 42 Especie: Escherichia coli ................................................................................ 45 Especie: Klebsiella pneumoniae ..................................................................... 48 Especie: Proteus vulgaris ............................................................................... 50 Especie: Proteus mirabilis ............................................................................... 50 Especie: Proteus myxofaciens ........................................................................ 50 Especie: Salmonella typhi ............................................................................... 52 Especie: Shigella dysenteriae ......................................................................... 56
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III UNIDAD............................................................................................................. 62 Especie: Vibrio cholerae ................................................................................. 62 Especie: Haemophilus influenzae ................................................................... 65 SECCIN 9: Rickettsias ................................................................................... 68 SECCIN 16: Las Mycobacterias .................................................................... 72 Especie: Mycobacterium tuberculosis ............................................................. 72 SECCIN 17: Cocos Gram Positivos .............................................................. 77 Especie: Staphylococcus aureus .................................................................... 77 Especie: Streptococcus pyogenes .................................................................. 79 IV UNIDAD ............................................................................................................ 83 SECCIN 18: Bacilos y Cocos Gram Positivos Esporogenos ..................... 83 Especie: Bacillus anthracis ............................................................................. 83 Especie: Bacillus subtilis ................................................................................. 83 Especie: Clostridiun tetani .............................................................................. 87 Especie: Clostridiun botulinun ......................................................................... 90 SECCIN 19: Bacilos Gram Positivos Regularmente Asporogenos ........... 92 Especie: Listeria monocytogenes ................................................................... 92 SECCIN 20: Los Bacilos Gram Positivos Irregularmente Asporogenos .. 95 Especie: Corynebacterium diphtheriae ........................................................... 95 SECCIN 29: Streptomyces y Generos Relacionados .................................. 98 Especie: Streptomyces griseus ....................................................................... 98 SECCIN 30: Los Mycoplasmas ................................................................... 103 Especie: Mycoplasma pneumoniae .............................................................. 103 REFERENCIAS SELECCIONADAS ................................................................... 108

CONTENIDO DEL CURSO DE BACTERIOLOGA I UNIDAD:

1.1. Caractersticas de las Bacterias Las bacterias o procariotas, son microorganismos que se caracterizan por: Ser unicelulares. Reproducirse mayormente por fisin binaria. Contener informacin gentica, sistema de energa y sistema de biosntesis necesarios para el crecimiento y la reproduccin, hay excepciones: Rickettsias y Chlamydias que no tienen sistema de biosntesis, por lo que son consideradas como parsitos obligados. Poseer ribosomas 70S, velocidad de sedimentacin en funcin a su peso molecular. Mayormente poseer un cromosoma circular desnudo, compuesto de doble cadena de ADN, que se multiplica amitticamente. Algunas poseen fimbrias, funcin de adherencia. La composicin qumica de su envoltura celular les confiere caractersticas tintoriales nicas que permiten dividirlas en 3 grupos: Gram +, Gram y las denominadas bacterias cido-alcohol resistentes. 1.2. Clasificacin de las Bacterias La clasificacin, nomenclatura e identificacin son tres reas separadas, pero interrelacionadas de la taxonoma: La clasificacin se puede definir como el ordenamiento de los microorganismos en grupos taxonmicos (taxa), en base a sus semejanzas o interrelaciones. La nomenclatura en dar nombre a un microorganismo, en base a reglas interrelacionadas de acuerdo a sus caractersticas. La identificacin, se refiere al uso prctico de su sistema de clasificacin. Criterios para la clasificacin de bacterias: El agrupamiento de cualquier organismo se hace atendiendo sus caractersticas comunes respecto a otros, esto implica que el grupo de organismos ha evolucionado a partir de un ancestro comn, por lo que este individuo que conforma este grupo, retiene alguna de las caractersticas de su antepasado, establecindose una jerarqua filogentica.
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La informacin que se utiliza para clasificar y determinar las relaciones evolutivas en los microorganismos superiores, proviene de fsiles, pero para algunos, en el caso de las bacterias no existen fsiles, por lo que no se disponen de estas evidencias para establecer o determinar las relaciones. Entonces en las bacterias no se puede establecer una jerarqua filogentica; sin embargo, al inicio de la clasificacin, se pretendi establecer una jerarqua de reino, divisin, clase, orden, familia, gnero y especie. Como las bacterias son seres microscpicos no podan ser observados a simple vista, por lo que se tuvo que esperar la creacin del microscopio. Se logr a finales del siglo XVII, por Anthony van Leeuwenhoek, tallador de lentes, quien empleando un microscopio con solo un lente, descubre el mundo microbiano. La clasificacin de los seres microscpicos se inicia en 1866, Haeckel crea el reino Protista, incluyendo a microorganismos unicelulares indiferenciados que no forman tejidos especializados, ni sistemas orgnicos, que son caractersticas de plantas y animales superiores incluyendo a bacterias, hongos, algas y protozoarios. Recin a mediados de los cincuenta del pasado siglo, se logr inventar el microscopio electrnico, se lleg a la determinacin que las bacterias sintetizan estructuras qumicas nicas, que el ncleo carece de envoltura y que adems carecen de muchas organelas intracelulares. En la dcada del 60 del siglo XX, se establece que las bacterias difieren a nivel de organizacin intracelular con las clulas de vida libre ms elevadas. Es as como en 1966, tres investigadores: Murray, Stanier y Van Niel, crearon para las bacterias un nuevo reino Procaryotae, que significa ncleo primitivo, (1) cianobacterias: bacterias azul verde y (2) bacterias; y tambin el reino Eucaryotae. El libro que contiene la clasificacin de todas las bacterias es el Manual de de Bergey. 1923: 1 Edicin, se clasificaba por sus caractersticas fenotpicas, con jerarquas de reino, divisin, clase, orden, familia, gnero y especie. 1957: 7 Edicin, clasificacin por sus caractersticas bioqumicas, se determin la composicin qumica de la pared celular. 1974: 8 Edicin, entr a tallar la taxonoma gentica, se produjo una revolucin en la clasificacin con jerarquizacin, existiendo muchas especies que no tenan familia, agrupndolas como especies de afiliacin incierta. A las especies conocidas se agruparon en 19 grupos
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1984: Se empieza a editar 4 volmenes del manual: Vol. I. Describe las bacterias Gram de importancia mdica e industrial. Vol. II. Describe las bacterias Gram + de importancia mdica e industrial. Vol. III. Describe a las cyanobacterias, arqueobacterias o bacterias primitivas y a las Gram que no estaban consideradas en el Vol. I. Vol. IV. Describe a los actynomycetes. En estos 4 volmenes no se habla de grupos, si no de secciones, clasificando a las bacterias en 36 secciones. 1994: 9 Edicin, sntesis de los anteriores vols., en este manual se consideran 4 rangos o divisiones, en funcin a su pared celular: Gracilicutes Firmicutes Tenericutes Mendosicutes Gram (-) Gram (+) Sin pared Bacterias primitivas

2001: 10 Edicin, siguen establecidos las 4 divisiones y la mayora de las secciones carecen de la clasificacin en familias. 1.3. Nomenclatura Bacteriana Existen millones de organismos vivos, no se puede usar nombre vulgares, porque acarreara confusin Antiguamente se empleaba el empirismo para nombrar a los animales (creaba confusin), por tal motivo en el siglo XVII, Linneo, estableci las bases para un sistema universal de denominacin: Binario, el cual consta de dos nombres: 1 Genrico, 2 Especfico. Caractersticas que se toman en cuenta para dar nombre a una especie: a) Caractersticas Genitvas. Se basa en el nombre del que la descubri. Ejem. Pasteurella de Pasteur Yersinia de Yersin Escherichia de Escherich Bordetella de Bordet y Gengou

b) Caractersticas Fisiolgicas. Sustancias que produce la bacteria. Ejem. P. fluorescens Lactobacillus acidophylus Acetobacter aceti Enterobacter aerogenes Pigmento verde fluorescente Produce cido lctico a partir de la glucosa cido actico Gas a nivel de entern

c) Caractersticas Ecolgicas. Segn el lugar en donde se halla. Ejem. Y. enterocoltica E. faecalis C. botulinum S. epidermidis Infeccin en el colon. Se encuentra en los restos fecales. En el alimento, botul. (salchicha). En la epidermis.

d) Caractersticas Morfolgicas. Segn su forma Ejem. V. comma Bacillus Streptococcus Forma de coma Forma de bacilo Cocos en cadena

e) Caractersticas Patognicas. Segn la enfermedad que produce Ejem. C. tetani Shigella dysenteriae B. anthracis S. pneumoniae f) Caractersticas philos=amor Ttano Disentera ntrax Neumona Haemophilus: haemo=sangre,

Nutricionales.

1.4. Identificacin de las Bacterias Para qu se identifica una bacteria? Generalmente para conocer el agente causal de una enfermedad. Para saber que bacteria es responsable de una cambio determinado en el sustrato. La preocupacin de los mdicos y miclogos cuando hay una persona, animal o planta enferma, es el aislamiento e identificacin rpida del agente causal de la enfermedad para poder iniciar a su vez un tratamiento rpido y adecuado. Para identificar una bacteria, primero hay que aislarla y para esto debemos realizar una buena toma de muestra. La forma de la toma de muestra va a depender del origen de la muestra clnica, si es de la piel, heces, orina, sangre, abscesos, secreciones, etc.
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Por ejemplo: La sangre, LCR, abscesos cerrados, a partir de estas muestras se puede obtener cultivos puros, con estas muestras no es necesario utilizar algn medio de cultivo selectivo. Las muestras de esputo, piel, heces y ofidismo del cuerpo, generalmente contienen mezclas de microorganismos, donde el microorganismo patgeno se encuentra en mayor nmero y puede ser pasado por alto si son eliminados por productos metablicos (cidos), producidos por los microorganismos no patgenos que generalmente se encuentra en mayor nmero. En este tipo de muestras es recomendable utilizar medios de cultivo selectivos, en los que se da ventaja de crecimiento de patgenos; generalmente estos medios tienen un pH apropiado para la bacteria patgena o puede contener inhibidores que impidan el crecimiento de la flora de acompaamiento que se encuentra en la muestra, tambin el medio tenga nutrientes apropiados para el crecimiento del patgenos. Una vez que se logra el cultivo puro (cepa), se procede a identificarlo tomando en cuenta las siguientes caractersticas. 1. Caractersticas Fenotpicas: a) Caractersticas Microscpicas. Morfolgcas. Tintoriales. Tamao. Presencia de estructuras; flagelos, endospora, cpsula, etc.

b) Caractersticas Macroscpicas. Cultivos lquidos. Cultivos en medios slidos: diferenciales. c) Caractersticas Bioqumicas Accin sobre carbohidratos. Accin sobre protenas. Accin sobre lpidos. Produccin de toxinas (colergeno, tetanoespasmina, etc.) y enzimas (hialuronidasa, hemolisina).

Medios

comunes,

selectivos,

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d) Caractersticas Nutricionales. Algunos no son exigentes, otros si necesitan de medio enriquecidos. e) Caractersticas Fisiolgicas. Su necesidad de pH, T, O2, y potencial de xido-reduccin. f) Caractersticas Ecolgicas. Si hacen simbiosis o si hacen sinergias, si son parsitas. g) Caractersticas Patgenas. Si es patgena para un determinado hospedero y cules son sus determinantes de patogenicidad, por ejemplo el caso del S. aureus, produce coagulosa. 2. Caractersticas Genotpicas. Se determinan por el estudio de ADN, los genes son secuencias de ADN y se estima que el nmero total de genes que posee una bacteria es de 1000 a 4000. La informacin gentica del ADN, puede variar o bien por mutacin de los genes o por transferencias de nuevos genes. 1.5. Medios de Cultivo En bacteriologa se refiere a sustratos que contienen todo lo necesario para el crecimiento de las bacterias. Algunas bacterias pueden crecer satisfactoriamente en medios comunes, otras requieren de medios enriquecidos, es decir son exigentes nutricionalmente. Condiciones que deben reunir el medio de cultivo 1. Deben cubrir todas las necesidades nutricionales de la bacteria en estudio. Es decir, debe tener una fuente nitrogenada (peptonas, aminocidos, etc.), una fuente de energa (carbohidratos), sales minerales y vitaminas. 2. Debe contener suficiente humedad y oxigeno 3. pH correctamente ajustado. 4. Debe ser estril.

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1.6. Clasificacin de los medios de cultivo A. Por su naturaleza u origen: 1. Definidos o Sintticos. Cuando su composicin qumica es definida. 2. Indefinidos o No Sintticos. Cuando su composicin qumica no est definida. Como aquellos que contienen extracto de carne, extracto de levadura, etc. Pueden ser elaborados en laboratorios o tambin artesanalmente. B. Por su estado fsico: 1. Liquido. Cuando tiene una consistencia fluida. Sirve para determinar las caractersticas macroscpicas del crecimiento. Por ejemplo: Crecimiento en forma de velo o pelcula en la superficie, crecimiento en forma de turbidez, crecimiento en forma de sedimento, etc. 2. Slido. Es cuando en su composicin se encuentra una sustancia solidificante como el agar-agar, que es un polisacrido complejo no utilizable, que es extrado de algas marinas, cuyas propiedades lo hacen valioso para el trabajo en medios microbiolgicos, por ejemplo: No es fcilmente degradado Se funde a temperatura de ebullicin del agua Se mantiene liquido hasta los 40C 3. Semislido. Cuando contiene pequeas cantidades de sustancias solidificantes y sirve para determinar la movilidad (agar movilidad) y algunas pruebas bioqumicas (medio de OX/FER, segn Hugh y Leifson, este medio tiene 0.25g de agar-agar/100 ml de medio de cultivo). C. Por su utilidad: 1. Medios Comunes. Sirven para el cultivo de bacterias poco exigentes. Por ejemplo; agar plate count, que contiene peptona, glucosa, NaCl. 2. Medios Enriquecidos. Sirve para cultivar nutricionalmente exigentes. En su composicin altamente nutritivas, ejemplo: Agar sangre; agar Lowenstein-Jensen; agar carne-hgado: con base
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microorganismos lleva sustancias chocolate; agar carne e hgado,

glucosa, almidn, hierro (proporciona una oferta rica en nutrientes) y agar-agar. 3. Medios Diferenciales. Son los que contienen algunas sustancias que van a permitir diferenciar un gnero de otro e incluso diferenciar especies. Ejemplo: Agar manitol-sal comn-rojo de fenol, para diferenciar S. aureus de S. epidermidis. Agar SS (SalmonellaShigella), contiene lactosa y rojo neutro (lactosa - = colonias transparentes, lactosa + = colonia roja) + tiosulfato de sodio y citrato de hierro (diferencia las bacterias que reducen el tiosulfato a sulfuro + citrato de hierro= sulfuro de hierro). 4. Medios selectivos. Contienen algunas sustancias inhibidoras que impiden el crecimiento de algunos grupos de bacterias. Ejemplo: Caldo prpura de del Enterococcus microorganismos Pseudomonas se agua. bromocresol azida, que selecciona el crecimiento faecalis en muestras que pueden contener otros como S. aureus, S. agalactiae, E. coli y usa para recuento de Enterococcus faecalis en

Caldo brila, que contiene verde brillante y sales biliares que inhiben el crecimiento de bacterias Gram (+) o Gram (-), que normalmente no se encuentran en el entern por lo que no estn acostumbradas a la presencia de la bilis. 5. Medios de Enriquecimiento. Medios lquidos que actan dificultando el crecimiento de algunas bacterias y de esta manera favorecen el crecimiento de otras. Ejemplo: Caldo de enriquecimiento para Enterobacterias o caldo Mossel; sirve para enriquecimiento selectivo de todas las enterobactericeas, particularmente para la investigacin simultnea de Salmonella y coliformes a partir de alimentos. La glucosa favorece el crecimiento de enterobacterias L(+) y L(-), la bilis y el verde brillante inhiben la flora indeseable, el hidrgeno fosfato disdico y el dihidrgeno potsico impiden la muerte de los grmenes enriquecidos debido a los cidos producidos a partir de la glucosa. Caldo de enriquecimiento selectivo segn Leifson, el selenito inhibe el crecimiento de bacterias intestinales coliformes y de los Enterococcus principalmente en las primeras 6 a 12 horas de incubacin, mientras que no inhibe a Salmonella y Proteus. Entre su contenido tenemos:

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peptona, lactosa, selenito sdico, hidrgeno fosfato dipotsico y dihidrgeno fosfato monopotsico. 6. Medios de Transporte. Sirven para transportar una muestra clnica, conservando la sobrevivencia de los microorganismos contenidos en la muestra. Ejemplo: Medio de Stuart modificado por Ringertz conserva microorganismos patgenos como: Neisseria (hasta 3 das), Trichomonas (hasta 1 da), Haemophilus y Streptococcus (de 3 a 5 das), Salmonella y Shigella (de 8 a 12 semanas). Mantiene la composicin de la flora inicial, carece de fuente de nitrgeno y azcares (lo que impide la multiplicacin de los microorganismos). En su composicin contiene: glicerol fosfato sdico, tiosulfato sdico, cloruro de calcio, azul de metileno, agar-agar. 7. Medios de Identificacin. Sirven para determinar los diferentes productos metablicos microbianos a partir de un sustrato determinado que se utiliza en el proceso de identificacin bacteriana. Ejemplo: agar citrato de Simons, agar TSI, caldo glucosado con fosfato dipotsico (VP y RM).

1.7. Mecanismos de Patogenicidad Bacteriana Existen miles de especies bacterianas, pero solo un aproximado de 300, han adquirido caractersticas genticas que les dan la capacidad de producir enfermedad en el hombre, animales y plantas. Robert Koch, en 1884, propuso una serie de postulados que sirvieron de base para vincular especies bacterianas especficas con una enfermedad particular: 1. El microorganismo debe encontrarse en todos los casos de la enfermedad en cuestin y su distribucin en el cuerpo debe concordar con las lesiones observadas. 2. El microorganismo debe ser aislado en cultivo puro in vitro, durante varias generaciones. 3. Debe ser capaz de producir la enfermedad tpica en animales susceptibles cuando se les inocula un cultivo puro. 4. Debe ser aislado a partir de las lesiones producidas en el animal experimental. Estos postulados han permanecido como el sostn o soporte principal de la Microbiologa, pero a finales del siglo XIX se ha demostrado que muchos de los microorganismos patgenos no satisfacen los criterios de los
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postulados. (Ejemplo: El Treponema pallidium (sifilis) y el Mycobacterium leprae (lepra) no crecen in vitro; sin embargo, existen modelos animales de la infeccin con estos agentes. En otro ejemplo, la Neisseria gonorrhoeae (gonorrea), no existe un modelo animal de la infeccin, pero la bacteria puede cultivarse con facilidad in vitro; se ha producido infeccin experimental en el ser humano, la cual substituye al modelo animal. Las bacterias patgenas incluyen las siguientes caractersticas: Capacidad de transmisibilidad. Adherencia a las clulas del hospedero.. Invasin de clulas y tejidos del hospedero. Toxigenicidad. Capacidad para invadir el sistema inmunitario del hospedero.

Transmisin de la Infeccin Las bacterias residen normalmente en determinados ambientes, por ejemplo en animales y humanos donde se adaptan y aseguran su supervivencia e incrementan su posibilidad de transmitirse. Cuando una bacteria que vive normalmente en las personas produce una infeccin asintomtica o leve, aumenta la posibilidad de transmitirse de una persona a otra. Algunas bacterias que habitan sobre todo en animales pueden infectar a los humanos de manera accidental; por ejemplo: Salmonella, Campylobacter y Brucella infectan animales y se transmiten al ser humano a travs de los alimentos. Otras bacterias como la Y. pestis que es un microorganismo no adaptado a los humanos, muestra un ciclo biolgico bien establecido en los roedores y las pulgas de los mismos y, la transmisin por la pulga a los humanos es inesperada produciendo una enfermedad grave (la peste). Otro microorganismo como B. anthracis, que vive en el ambiente, a veces infecta animales y se transmite al ser humano a travs de los pelos desprendidos de los animales. Otra formas de transmisin es por las secreciones que se producen en las enfermedades (diarreas, tos, secrecin genital); estos productos con frecuencia promueven la transmisin del agente causal. Ejemplo: V. cholerae, M. tuberculosis, E. coli.

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Transmisin de persona a persona a travs de las manos. Ejemplo: S. aureus, muchos patgenos oportunistas que causan infecciones nosocomiales. La puerta de entrada ms frecuente de las bacterias patgenas son: Mucosas de las vas respiratorias, la va digestiva, genital y urinaria, tambin la piel en caso de lesiones como heridas y quemaduras. Una vez que la bacteria entra al cuerpo del hospedero, como segundo paso, debe adherirse a las clulas de la superficie de un tejido; si no se adhiere ser arrastrada por el moco y otros lquidos que baan las superficies del tejido. La adherencia: Es solo un paso del proceso infeccioso y va seguido del desarrollo de las microcolonias. Las bacterias se adhieren a las clulas de la superficie de un tejido por accin de unas estructuras llamadas adhesinas, que se unen a receptores especficos conformados generalmente por azcares especficos en la superficie tisular y evitan ser eliminados. Muchas de estas protenas de adhesin estn en las fimbrias o pelos (pili). Streptococcus pyogenes (A) utiliza el acido lipoteicoico y la protena M para adherirse a las clulas del epitelio, estos compuestos se encuentran envolviendo las fimbrias. El acido lipoteicoico y ms especficamente la porcin lipdica (ligando) promueve la adherencia de Streptococcus a las clulas epiteliales de la boca a travs de la fibronectina, que acta como molcula receptora de las clulas hospederas. La protena M acta como molcula antifagoctica. Otro ejemplo de la adherencia son los pelos de la N. gonorrhoeae. La colonizacin: Se logra a travs de una parte estructural de las bacterias patgenas conformada por una biopelcula que es una membrana viscosa compuesta por polisacridos que mantienen unidas a las bacterias entre si y tambin a la superficie de la clula del hospedero. La cpsula: De estructura polipeptdica o polisacrida. Ejemplo: S. pnemoniae, Haemophilus influenzae, N. meningitis, y otros que tambin forman cpsula, hace que no puedan ser fagocitadas fcilmente y las protegen de las repuestas inmunes.

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1.8. Invasin a las Clulas del Tejido del Hospedero Una vez que la bacteria coloniza las superficies de las mucosas, las bacterias producen una o ms protenas bacterianas que se conocen con el nombre de invasinas y que estn implicadas en la penetracin celular. Estas invasiones o antgenos de invasin, interactan con un receptor de la clula epitelial; por ejemplo: las invasinas de Yersenia interactan con unas protenas de adhesin de las clulas epiteliales llamadas integrinas; en el caso de la Salmonella el receptor puede ser el factor de crecimiento epidrmico y en el caso del S. pneumoniae, el receptor es el factor de agregacin plaquetaria. Por lo tanto, las bacterias aprovechan para sus fines, las estructuras funcionales de las clulas. La interaccin de las invasinas con su receptor, provoca la transmisin de una seal a travs de la membrana citoplasmtica, ocasionando la polimerizacin de la actina y miosina que forman el citoesqueleto y que finalmente son responsables de la invaginacin de la membrana citoplasmtica para englobar a una bacteria y formar una vacuola fagocitaria. Una vez en su interior, las bacterias pueden seguir distintas estrategias: Multiplicarse intravacuolarmente Salir al citoplasma y multiplicarse en l. Salir al exterior de la clula por exocitosis, es decir, atravesar la mucosa.

Penetracin a travs de la piel: Esto se produce por toxinas o enzimas que degradan la matriz extracelular que cementa los tejidos o lisan las clulas. Por ejemplo: la matriz de los tejidos es rica en colgeno y acido hialurnico y algunas bacterias como C. perfringens, causante de la gangrena, produce enzimas colagenasas y hialuronidasas; la elastina que da elasticidad al tejido pulmonar puede ser degradada por la elastasa de P. aeruginosa, etc. Otra de las caractersticas de las bacterias patgenas, es su capacidad de producir enzimas, que son sustancias extracelulares, no txicas que permiten destruir los tejidos y logran el acceso a fuentes nutritivas e invadir el sistema inmunitario. A. Enzimas Destructoras de Tejidos 1. Lecitinasa: Que destruye la lecitina, que es una mezcla de fosfolpidos que se encuentra en los tejidos de animales, principalmente en el tejido del sistema nervioso.
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2. Colagenasa: Que degrada el colgeno, que es una protena que se encuentra en el tejido fibroso conjuntivo, debajo de la piel, cartlago y diferentes rganos. Esta permite a la bacteria diseminarse en estos tejidos. 3. Hialuronidasa: Que hidroliza el cido hialurnico, que es una sustancia fundamental del tejido conjuntivo, esta enzima tambin favorece la diseminacin en los tejidos. Ejemplo: Staphylococcus, Streptococcus y anaerobios. 4. Coagulasa: Coagula el plasma debido a la conversin del fibringeno en fibrina. Contribuye a la formacin de paredes de fibrina alrededor de las lesiones formadas por Staphylococcus y esto le ayuda a persistir en la infeccin localizada; tambin se forma la pared de cogulo alrededor de los Staphylococcus, lo que les ayuda a protegerse contra la fagocitosis. 5. Estreptocinasa: (Fibrinolisina) Activa una enzima proteoltica del plasma, disolviendo el plasma coagulado y favoreciendo la diseminacin de los Streptococcus a travs de los tejidos. 6. Citolisinas: Son sustancias que disuelven eritrocitos (hemolisinas) o que destruyen las clulas tisulares o leucocitos (leucocidinas), por ejemplo: Streptococcus del grupo A producen estreptolisina que hemolisa los eritrocitos. Tambin las producen cepas de Staphylococcus y de otras bacterias. B. Proteasa Ig A Producida por un gen codificador de enzimas que divide las uniones especficas (prolina-treonina o prolina-serina), que se encuentran en la regin de la bisagra de la cadena pesada de la Ig A, inactivndola como anticuerpo. La producen Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, H. influenzae, S. pneumoniae y otras. Otra actividad de las bacterias patgenas es la produccin de toxinas que se diseminan mediante la sangre u otros fluidos corporales (LCR).

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1.9. Las Toxinas Bacterianas Existen muchas toxinas elaboradas por diferentes cepas bacterianas. Son sustancias que tienen efecto toxico en el hospedero. Son sustancias que interfieren en los mecanismos de defensa del hospedero. Se diseminan mediante la sangre u otros fluidos corporales (LCR) Se dividen en 2 grupos: A. Exotoxinas, que se liberan fcilmente de la clula bacteriana. B. Endotoxinas, que estn ntimamente conectadas a las clulas bacterianas y son liberadas por lisis de la bacteria. A. Toxinas Extracelulares (Exotoxinas) Son de naturaleza proteica y tienen actividad enzimtica, se dividen en 2 grupos: a) Toxinas proteicas con 2 componentes De 2 componentes, en la cual uno de ellos est asociado con la adsorcin a la superficie de una clula susceptible (especfica) y sirve de fuente o canal para que el otro componente sea transferido a la membrana celular (se sugiere que es un mecanismo de formacin de un tnel con canales hidrfilos). Ejemplo: En la toxina producida por el agente del clera, el componente B se une a los ganglisidos de la superficie celular para que la porcin o componente A atraviese la membrana celular, efecto que produce una profusa diarrea con prdida de electrolitos, la cual es potencial y letal. Tambin es una cualidad de algunas cepas de E. coli. b) Citolisinas bacterianas Citolisinas, que lesionan las membranas de los eritrocitos, produciendo hemlisis. Tambin lesionan las clulas blancas (leucocitos). Ejemplo: Clostridium. Staphylococcus, Streptococcus. B. Endotoxinas Que estn ntimamente ligadas a las clulas bacterianas (bacterias Gram -).
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 Se requiere de gran manipulacin qumica para extraerlas de la pared celular bacteriana. Estn compuestas de protenas polisacridas y lpidos. La accin toxica se adjudica a la porcin lipdica. Son menos estables al calor que las exotoxinas y no forman toxoide. Son menos txicas y menos especificas.

Todos estos mecanismos ocasionan sntomas, cuya gravedad depende de: 1. De la importancia del rgano afectado 2. De la extensin del dao causado por la infeccin. Por ejemplo: las infecciones del SNC son siempre graves. 3. De la cepa bacteriana y el tamao del inculo. Estos dos son factores fundamentales para determinar si se va a producir la infeccin, sin embargo el tamao del inculo puede variar desde relativamente pequeo (por ejemplo: menos de 200 clulas de Shigella Shigelosis o disentera bacilar), hasta inculos grandes (por ejemplo: 108 clulas de V. cholerae o Campylobacter). Los factores del hospedero tambin pueden desempear un papel determinante, por ejemplo si la dosis infectante (DI) de Salmonella es de 106 para que produzca enfermedad en una persona sana, esta dosis disminuye cuando el pH del jugo gstrico del individuo es neutro. Otros factores que tambin incrementan la susceptibilidad del individuo son: Los efectos congnitos. Las situaciones de Inmunodeficiencia y las alteraciones producidas por otras enfermedades. Patgenos oportunistas.

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SECCIN 1: LAS ESPIROQUETAS

Gnero: Treponema Especie: Treponema pallidum (agente causal de la sfilis) Caractersticas Morfolgicas: Tiene forma de espiras delgadas. Tiene movilidad activa, girando constantemente alrededor de su filamento axial, incluso despus de haberse fijado a la clula del husped. Las espiras son tan delgadas que no pueden ser observadas al microscopio con facilidad a menos que al frotis se le aplique nitrato de plata y se observe en campo oscuro, o se tia con suero antitreponmico marcado con fluorescena y se examine al microscopio en busca de espiroquetas fluorescentes tpicas. Cultivo: Solo se hacen cultivos tisulares utilizando clulas epiteliales de conejo e incubndolas en una atmsfera de oxgeno reducida; en estas condiciones mantiene su virulencia y su tiempo de generacin es de 30 horas. Estructura Antignica: Estimulan la produccin de una sustancia extracelular similar a un anticuerpo que se le denomina Reagina y que es determinado en el diagnstico serolgico. Tambin producen anticuerpos Ig G e Ig M, igualmente vlidos para el diagnstico serolgico. A pesar que se da una enrgica respuesta inmunolgica por parte del hospedero frente a la infeccin, sin embargo la infeccin no es controlada ni erradicada. Durante la infeccin inicial, hacia el momento que aparece el chancro, pueden detectarse anticuerpos humorales Ig G e Ig M, que persisten largo tiempo en el paciente no tratado. Si el paciente es tratado en forma adecuada, los anticuerpos Ig M declinan durante los 2 aos siguientes, pero los anticuerpos Ig G habitualmente persisten durante toda la vida del paciente. La inmunidad natural se ha visto incrementada, no se sabe si se debe a un cambio de la virulencia del microorganismo o por que las poblaciones han desarrollado una resistencia relativa a la infeccin. Patogenia: En Sfilis Adquirida, la infeccin natural se adquiere por contacto sexual y las lesiones primarias o chancro duro se encuentran generalmente sobre la piel o las mucosas de los genitales. Sin embargo en 10 a 20 % de los casos la lesin
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primaria es intrarrectal, perianal u oral. Esta bacteria puede atravesar las mucosas intactas o penetrar a travs de una herida en la epidermis. Las espiroquetas se multiplican localmente en el sitio de entrada y algunas se propagan a los ganglios linfticos cercanos y despus alcanzan la circulacin sangunea. De 2 a 10 semanas despus de la infeccin, aparece en el sitio infectado una ppula, la cual se rompe para formar una lcera de base dura y limpia denominada chancro duro. Esta lesin siempre cicatriza espontneamente. Luego de 2 a 10 semanas ms tarde aparecen las lesiones secundarias que consiste en exantema maculopapular eritematoso en cualquier parte del cuerpo, incluso manos y pies, tambin aparecen los condilomas que son ppulas plidas y hmedas en la regin anogenital, axilas y boca. Las lesiones secundarias tambin ceden espontneamente. Tanto las lesiones primarias y secundarias son ricas en espiroquetas y muy infectantes y esto puede prolongarse de 3 a 5 aos despus de la infeccin, pero a partir de ese momento la persona ya no es infectante. La infeccin sifiltica puede permanecer sub-clnica y el paciente puede pasar por las 2 etapas sin sntomas hasta desarrollar las lesiones terciarias. En casi 30% de los casos, la infeccin avanza espontneamente hasta la curacin completa. En otro 30% la infeccin no tratada permanece latente. En el resto, la enfermedad progresa hasta la etapa terciaria, caracterizada por el desarrollo de lesiones granulomatosas llamadas gomas en piel, huesos e hgado, cambios degenerativos en el sistema nervioso central o lesiones cardiovasculares. En esta etapa las treponemas son poco frecuentes, sin embargo pueden encontrarse en los, ojos o el sistema nervioso central. Sfilis Congnita. Una mujer sifiltica embarazada, puede transmitir el T. pallidum al feto a travs de la placenta, la infeccin se inicia entre la 10 a 15 semanas de gestacin. Algunos fetos infectados mueren y el resultado es un aborto; otros nacen muertos a trmino. Otros nacen vivos, pero desarrollan signos de sfilis congnita en la infancia: queratitis intersticial, dientes de Hutchinson, nariz de silla de montar y varias anormalidades del sistema nervioso central. La destruccin asea tarda y la sfilis cardiovascular, son frecuentes en nios que no son tratados y que sobreviven a la presentacin inicial de la enfermedad. Los resultados positivos de las pruebas serolgicas en los hijos de la madres infectadas, pueden representar la transferencia pasiva de anticuerpos o una respuesta inmunolgica especfica a la infeccin. Estas dos posibilidades se distinguen midiendo el titulo de anticuerpos en los sueros del nio durante 6 meses. El ttulo de anticuerpos en nios no infectados disminuye hasta valores no detectables a los 3 meses de nacer. En los nios con sfilis congnita permanecen elevados.
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Sfilis: Penetran a travs de mucosas y piel y se localizan en la piel, mucosas de rganos genitales u otros lugares. Del 10 al 20% es intrarrectal, perineal o bucal. Se multiplica localmente en los ganglios linfticos regionales. En 2 a 10 semanas aparece una ppula en el sitio de entrada con caractersticas de una ulcera limpia y dura (chancro duro). La inflamacin se caracteriza por el predominio de linfocitos y clulas plasmticas que se cura espontneamente. En 2 a 10 semanas despus se desarrollan lesiones secundarias con exantemas mucocutneas generalizadas en todas las partes del cuerpo y ppulas hmedas y plidas (condilomas) en la regin ano-genital, en las axilas y en la boca; adems presentan un sndrome pseudogripal con dolor de garganta, cefaleas, fiebre, mialgia y anorexia. Las dos etapas de las lesiones son ricas en espiroquetas muy infecciosas. Despus de 3 a 10 aos, el 40% de los pacientes evoluciona hacia el periodo terciario que se caracteriza por lesiones granulomatosas (gomas) en la piel, huesos e hgado, produciendo cambios degenerativos en el SNC o lesiones cardiovasculares (pobres en espiroquetas). Diagnstico de Laboratorio: Muestras. Lquidos de las lesiones superficiales en la sfilis temprana para demostrar la presencia de las espiroquetas. Suero sanguneo, para pruebas serolgicas. Observacin microscpica en campo oscuro de la extensin hecha con el lquido de las lesiones a la cual se le trata con nitrato de plata o inmunofluoresceina. Pruebas serolgicas para Sfilis (PSS): A. Antgenos no Treponmicos: Se usa como antgeno, la cardiolipina, que un lpido purificado, extrado del corazn de mamferos. Con este antgeno se detecta la presencia de reaginas que se encuentra en el suero del paciente, despus de 2 a 3 semanas de la infeccin no tratada y en lquido cefalorraqudeo despus de 4 a 8 semanas de la infeccin. a) Floculacin (VDRL= Venereal Disease Research Laboratory)

Cardiolipina <==========> Reagina (formando flculos) La prueba positiva se vuelve negativa en 6 a 18 meses, luego de un tratamiento eficaz de la sfilis.

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b) Fijacin de Complemento (FC = Wasserman - Kolmer)

Suero con Reagina <======/======> Cardiolipina (+ GR de carnero) Complemento

Si el paciente es sifiltico, la reagina presente en el suero del paciente se une con la cardiolipina que se usa como antgeno y por ende hay fijacin de complemento (no se produce lisis de glbulos rojos). Si el paciente no es sifiltico, el complemento queda libre, por lo que se produce la lisis de glbulos rojos de carnero. En ambas pruebas se puede obtener un resultado cuantitativo (estimacin de la cantidad de reagina presente en el suero), cuando se utiliza diluciones progresivas, expresando el ttulo como la ms alta dilucin que an da resultado positivo; esto es valioso para establecer un diagnstico y para valorar el efecto del tratamiento. Estas pruebas pueden dar resultados falsos positivos, debido a dificultades tcnicas de la prueba, o a presencia de reagina en una gama de trastornos (sarampin, paludismo, lepra, trastornos reumticos, etc.). Los falsos negativos se dan en sfilis terciaria, o sea un VDRL negativo no descarta dicha actividad patolgica. B. Antgenos Treponmicos: a) Pruebas con Anticuerpos Treponmicos Fluorescentes (FTA) Se hace una extensin de microorganismos liofilizados de la cepa Nichols que va actuar como antgeno y que se fija a la lmina porta objetos, luego se aplica el suero en estudio (si tiene anticuerpos estos se fijan al antgeno), se lava nuevamente y se aplica -globulina anti-humana marcada con fluorescena. T pallidum muerto + suero del paciente + -globulina antihumana marcada con fluorescena. Se observa al microscopio en busca de treponemas fluorescentes. Este mtodo es excelente para el diagnstico en sfilis temprana y tambin para sfilis congnita, determinando la presencia de Ig M.

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b) Prueba del TPI Demuestra la inmovilizacin del T. pallidum por anticuerpos especficos del suero del paciente, despus de la segunda semana de infeccin. Se utiliza suero del paciente con complemento + T. pallidum vivo y mvil extrado de chancros testiculares de conejo, luego se hace una observacin microscpica en campo oscuro. Esta prueba se basa en la capacidad del anticuerpo y el complemento de inmovilizar una suspensin de Treponemas vivas y mviles, pero tambin da positivo en treponematosis no venreas como: Pinta, Bejel y Frambesia.

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Gnero: Leptospira Especie: Leptospira interrogans Leptospira interrogans es la causa de la leptospirosis. Se divide en serogrupos que causan enfermedad en diferentes animales y reas geogrficas. Cada serogrupo se divide a su vez en serotipos. Las leptospiras infectan varios animales, incluyendo la rata y otros roedores, ganado domstico y animales de compaa. En los Estados Unidos, los perros son el reservorio ms importante. Los animales eliminan leptospiras en la orina, que contamina los cuerpos de agua. Nadar en aguas contaminadas o consumir bebidas o comida contaminadas son los principales mecanismos de infeccin en los seres humanos. Las personas que trabajan en alcantarillas presentan un riesgo elevado. La infeccin en seres humanos se produce cuando las leptospiras son ingeridas o pasan a travs de las membranas mucosas o la piel. Caractersticas Morfolgicas: Son espiroquetas delgadas y flexibles, enrolladas estrechamente Presentan un activo movimiento de rotacin por la presencia de dos filamentos axiales, insertados una en cada extremo de la clula. Este microorganismo solo se observa cuando se aplica al extendido nitrato de plata y observado al microscopio en campo oscuro. Cultivo: Es aerobio. Su temperatura ptima de crecimiento est entre 28 a 30 C. Su pH ptimo es de 7.2 a 7.4. El medio de cultivo selectivo para su crecimiento en el laboratorio es el medio de Fletcher, es semislido rico en protenas, donde crece al cabo de 6 a 10 das, formando colonias redondas de 1 a 3 mm. de dimetro. El tiempo de generacin en este medio es de 12 a 16 horas. Tambin crece en la membrana corioalantoidea de huevos embrionados y en animales inoculados, en este ltimo tiene un tiempo de generacin de 4 a 8 horas.

Determinantes de Patogenicidad: Endotoxina.- Que produce toxemia (toxicidad en sangre) Hemolisina.- Probablemente de naturaleza proteica, termolbil y soluble; causante de las hemorragias. Antgeno leptospirsico.- Que sensibiliza a las clulas del tipo W de la conjuntiva produciendo irritacin.
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Adems las cepas virulentas son menos sensibles al efecto leptospirocida del suero inmune y el complemento. Los macrfagos no son bactericidas para las leptospiras virulentas a menos que estn en presencia de Ig. Patologa: La infeccin se produce por ingestin de agua y alimentos contaminados con leptospiras, luego pasa por un perodo de incubacin de 1 a 2 semanas. La enfermedad es bifsica: 1 fase.- Se inicia con fiebre y la presencia de leptospiras en la sangre, luego se establecen en rganos parenquimatosos (hgado y rin) por lo que son eliminados tambin por la orina, produciendo necrosis y hemorragia en estos rganos originando disfuncin de los mismos, produciendo ictericia, hemorragia y retencin de nitrgeno con acumulacin de rea y creatinina en los riones. 2 fase.- Coincide con el aumento de Ig M. Generalmente se presenta con meningitis asptica, con cefalea intensa, rigidez de cuello y pleocitosis (aumento de leucocitos en LCR). Tambin puede volver a presentarse nefritis y hepatitis. Diagnstico de Laboratorio: Muestras: a) Sangre.- Para la observacin directa en campo oscuro o frotis grueso teido con Giemsa. b) Orina.- Para examen en campo oscuro de la orina centrifugada. c) Suero.- Para realizar aglutinaciones: macroscpica empleando como antgeno leptospiras formolinizado y microscpicamente empleando como antgeno leptospiras vivas. d) Cultivo.- En medio de Fletcher, a partir de la sangre total o de la orina. e) Inoculacin en animales.- Se inocula la sangre o la orina intraperitonealmente a cobayos; al cabo de 10 das el animal muere y se obtiene leptospiras de la cavidad intraperitoneal o de las lesiones hemorrgicas de los tejidos.

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SECCIN 4: BACILOS Y COCOS GRAM NEGATIVOS

Gnero: Pseudomonas Especie: Pseudomonas aeruginosa Est entre los tres bacilos Gram negativos ms frecuentemente aislados a partir de la sangre. Tiene una amplia distribucin en la naturaleza, preferentemente en ambientes hmedos. Constituye un saprfito cuando coloniza individuos sanos. Es un patgeno en personas inmunodeficientes, representando la causa ms comn de las neumonas hospitalarias. Caractersticas Morfolgicas: Es un bacilo Gram negativo. Presenta movilidad por flagelo polar nico. Presenta capa de polisacrido extracelular semejante a la cpsula. Posee cilios que promueve la adherencia a la superficie celular del husped.

Cultivo: Para su crecimiento es extremadamente adaptable a ms de 80 compuestos orgnicos diferentes; crece en medios para enterobactericeas y por tolerar condiciones alcalinas tambin crece en medios para Vibrio. Es aerobio. Produce -hemlisis en agar sangre. Temperatura ptima de crecimiento es de 35 a 42 C, esta propiedad la diferencia de las dems especies del gnero. Temperatura ptima a 37C. En los medios de cultivo slidos, forma colonias hmedas, redondas y lisas con cierto olor a uvas y de un color verde azulado. Produce pigmentos de color verde fluorescente (fluorescena) y azul (piocianina). A veces puede formar muchos tipos de colonias en un solo cultivo, como si se tratara de un cultivo mixto: cada tipo puede tener actividad bioqumica y enzimtica diferente, as como diversos patrones de sensibilidad qustica, formando colonias mucoides por excesiva produccin del exopolisacrido. El agar cetrimide es el medio de cultivo selectivo para esta bacteria, siendo el compuesto inhibidor el bromuro de N-cetil N,N,N- trimetil amonio, que inhibe a los microorganismos que no son idnticos a P. aeruginosa.

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Estructura Antgena: Antgeno somtico que determina hasta 17 serotipos diferentes Tipificacin con fases y con piocianina (bacteriocina), que es ms compleja. Antgeno K en la capa mucosa. Determinantes de Patogenicidad: Pelos o fimbrias.- Que sirven para la fijacin a la clula epitelial del hospedero. Cpsula o capa mucosa.- Sirve para la adherencia lo que permite la formacin de microcolonias en el lugar de la infeccin. Tambin impide la fagocitosis. Ambos (pelos y cpsula) constituyen factores de colonizacin, pero no se adhieren a clulas normales ni en proceso de regeneracin, sino nicamente a clulas lesionadas. La pared del cuerpo que est constituida por LPS, es causante de muchas propiedades endotxicas. Produce 2 hemolisinas y una de ellas contribuyen a la invasividad del microorganismo por destruccin del tejido pulmonar. Produce 2 proteasas que son las responsables de las lesiones hemorrgicas cutneas. La Exoenzima A, que produce necrosis tisular mortal: bloquea la sntesis de protena de la clula produciendo necrosis y el rgano ms afectado es el hgado. Enterotoxina.- Que puede producir infeccin de transmisin alimentaria. Patogenia: P. aeruginosa slo es patgena cuando se introduce en regiones desprovistas de defensas normales, por ejemplo, mucosas y piel lesionadas por dao tisular directo (quemaduras); empleo de catteres intravenoso o urinario; o cuando hay neutropenia como en la terapia contra el cncer. Las bacterias se unen a las mucosas o a la piel y las colonizan; invaden localmente y producen enfermedad sistmica. P. aeruginosa produce infeccin en heridas y quemaduras, formando pus color azul verdoso; cuando se produce por puncin lumbar causa meningitis, e infeccin del aparato urinario cuando la va de entrada son catteres, instrumentos o soluciones irritantes. Las afecciones del aparato respiratorio, en especial por aparatos respiradores contaminados, producen neumona necrosante. Esta bacteria se observa con frecuencia en la otitis externa leve de los nadadores. En pacientes con diabticos puede causar otitis externa invasora (maligna). La infeccin del ojo, que puede conducir a una destruccin rpida de ese rgano, ocurre con mayor frecuencia despus de procedimientos o lesiones quirrgicas. En lactantes y personas debilitadas puede invadir el torrente sanguneo y causar septicemia mortal.
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Diagnstico de Laboratorio: 1. Muestra. Puede ser pus de las lesiones cutneas, orina, sangre (en caso de septicemia, osteomielitis, endocarditis, meningitis y neumona), lquido cefalorraqudeo (en caso de fibrosis qustica y neumona), esputo y otros materiales, segn lo indique el tipo de infeccin. La toma de muestra en caso de neumona es importante que sea esputo y no saliva. Una muestra es fiable si tiene ms de 25 leucocitos y menos de 10 clulas epiteliales por campo de 100X. Si el paciente no puede toser es necesario hacer lo siguiente: Inducir el esputo, hacer una aspiracin trans-traqueal, un lavado branquial o una biopsia de pulmn. Sistema respiratorio ==> fibrosis qustica, quemaduras ==> piel. 2. Observacin microscpica. Haciendo un extendido y coloreando con la tcnica de Gram, donde se observa sus caractersticas morfolgicas y su afinidad al Gram negativo. 3. Aislamiento. Siembra en agar nutritivo y en agar cetrimide para ver caractersticas de las colonias y produccin de pigmentos. 4. Cultivo. En agar sangre y en los medios diferenciales que se emplean para bacilos entricos, creciendo como colonia transparente, no fermentadora de la lactosa. 5. Identificacin: Prueba de la oxidasa Prueba de OX/FER con glucosa (la metaboliza oxidativamente), lo cual nos permite diferenciarlas de las Plesiomonas, Aeromonas y Vibrio que tienen metabolismo fermentativo. Prueba de OX/FER con maltosa; se utiliza para diferenciar especies: P. aeruginosa, P. alcaligenes, P. putida, P. fluorescens, estas especies se diferencian por la temperatura de crecimiento a 42C, por ejemplo: P. aeruginosa crece y P. alcaligenes no crece. Pruebas GRAM Oxidasa Ox/Fer Gluc. Pseudom. -+ Ox P. aeruginosa -+ Enterobac. --Fer Vibrio -+ Fer P. fluorescens d -Aerom. -+ Fer Plesiom. -+ Fer P. alcaligenes --

Ox/Fer Malt Crec. 42C

P. putida d -30

Microorganismos Fijadores de Nitrgeno: Familia: Rhizobiaceae. Gnero: Rhizobium Entre las especies fijadoras de nitrgeno se encuentran las cianobacterias (Anabaena y Nostoc), arqueobacterias (Methanococcus), bacterias grampositivas (Frankia y Clostridium), enterobacteras (Klebsiella) y otras proteobacterias (Rhizobium, Azospirillum y Acetobacter, entre otras). Algunas familias de plantas emparentadas entre s, gozan de la capacidad para asociarse en simbiosis con bacterias fijadoras de nitrgeno. Las plantas en cuestin alojan a las bacterias en estructuras especiales llamadas ndulos que se forman en sus races. En los ndulos, las bacterias fijan el nitrgeno. Individuos de los gneros Rhizobium, Bradyrhizobium y Azorhizobium, penetran en las races y a veces en los tallos de las leguminosas, mientras que Frankia (Gram positiva) y otros actinomicetos son las responsables de la fijacin de nitrgeno en Casuarina y otras especies. Caractersticas: Son bacilos ciliados, aerobios que pueden presentarse bajo 3 formas: pequeos bastoncitos, pequeas clulas globosas o micrococos o como bastoncitos mayores sin flagelos muchas veces con grnulos prominentes de -hidroxibutirato. Son hetertrofos, comprenden formas gran negativas, mviles en estado juvenil pasando a la forma de bacteroide durante la simbiosis en los ndulos o en medios artificiales que contienen alcaloides. Viven como saprfitos en el suelo hasta hallarse en la proximidad de una raz viva de leguminosa, a la que penetra a travs de los pelos radiculares. Se desarrollan en forma optima entre 25 - 30C y a un pH de 6.7. Descripcin General de la Simbiosis de Rhizobium con las Leguminosas: Los Rhizobium son bacterias Gram negativas y aerobias que se conocen con el nombre de bacterias fijadoras de nitrgeno. Los dems organismos de la naturaleza no pueden asimilar el N2 de la atmsfera. Estas bacterias pertenecen a la familia: Rhizobiaceae. Entre ellos se encuentran los gneros Rhizobium, Bradyrhizobium y Azorhizobium. Estos microorganismos del suelo, forman una asociacin simbitica con distintas especies de plantas tetraploides y durante la simbiosis son capaces de llevar a cabo la fijacin de nitrgeno molecular. En la simbiosis, las bacterias se encuentran en las races de las plantas dentro de estructuras llamadas ndulos rizoidales. Ni las plantas ni estas bacterias aisladamente fijan el nitrgeno molecular (N2) para convertirlo en amonio. La simbiosis es inhibida si existe un exceso de nitrato o amonio en el suelo. Dentro de los ndulos, las bacterias se convierten en bacteroides que son clulas de forma irregular y ms grandes que los Rhizobium que se encuentran
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en el suelo, estas llevan a cabo la fijacin de nitrgeno porque son capaces de formar la enzima nitrogenasa que es responsable de la conversin del nitrgeno molecular en amonio, adems de la hidrolasa del ATP. Debido a esta simbiosis, la planta recibe nitrgeno que puede utilizar para s misma, mientras que las bacterias utilizan molculas (carbohidratos, producto de la fotosntesis) que les proporciona la planta. Se ha confirmado que la informacin gentica que determina la especificidad de los Rhizobium para cada especie de leguminosa es de origen extracromosmico, es decir del plsmido y que adems existen muchos genes de Rhizobium caractersticos de la simbiosis como por ejemplo los genes nod, nol, nif y fix. Los ndulos aparecen rojos por causa de una protena llamada leghemoglobina. Despus de la fase de fijacin de nitrgeno, el color del ndulo llega a ser verde debido a la conversin de leghemoglobina en biliverdina. La leghemoglobina protege a la nitrogenasa de los altos niveles de oxgeno y evitan la inactivacin de esta enzima. Cada tipo de Rhizobium tiene un espectro especfico de plantas con las que es capaz de formar ndulos. Por ejemplo, Bradyrhizobium japonicum forma una simbiosis con Glycine max, Rhizobium leguminosarum bv.viciae con Pisum sativum o Vicia faba, Rhizobium (Sinorhizobium) meliloti con Medicago sativa y Azorhizobium caulinodans con Sesbania rostrata. Azorhizobium caulinodans es capaz de fijar nitrgeno tambin fuera de su planta hospedadora. Por eso, en presencia de estas bacterias simbiticas las leguminosas pueden crecer en suelos que no tienen suficiente nitrato o amonio para un desarrollo normal de la planta. Por esta razn los Rhizobium pueden ser utilizados como inoculantes para mejorar el crecimiento de leguminosas en lugar de abonos. Reconocimiento entre planta y Rhizobium: Las races de plantas forman exudados que inducen la expresin de genes rhizobiales que son caractersticos para el comienzo de la simbiosis. Uno de esos factores son flavonoides que producen una interaccin con la protena codificada por el gen nodD. La protena NodD y las substancias flavonoides forman parte del reconocimiento hospedador-especfico debido a que no todos los flavonoides pueden interactuar con una NodD de una especie bacteriana dada. Despus, las protenas codificadas por los genes nod catalizan la formacin de los metabolitos nod. Esos son oligmeros de N-acetil glucosamina con algunas alteraciones qumicas. Invasin: La invasin de las plantas se lleva a cabo por los pelos radiculares. Las bacterias inducen una curvacin de esos pelos mediante el contacto con la planta y la produccin de metabolitos nod. Las bacterias invaden las plantas mediante el desarrollo de canales de infeccin, por lo que se forman tneles transcelulares. Durante la penetracin, y la simbiosis, las bacterias no quedan alojadas directamente dentro del citoplasma de las clulas de la planta
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hospedadora, sino que permanecen alojadas en vesculas rodeadas por una membrana derivada de la membrana citoplasmtica de la clula de la planta. Nitrogenasa: La nitrogenasa es la enzima responsable de la reduccin de nitrgeno atmosfrico a amonio en la simbiosis entre Rhizobium y leguminosa. Se compone de las protenas NifH, NifD y NifK. La nitrogenasa contiene dos protenas NifD y dos protenas NifK. Esas cuatro protenas forman la dintrogenasa. Adems, la nitrogenasa contiene dos protenas NifH que sirven como reductasa de la dintrogenasa. Para la reduccin del nitrgeno, se transportan electrones de reductasa de la nitrogenasa a la dintrogenasa y finalmente al nitrgeno. El amonio formado durante la fijacin, del nitrgeno es proporcionado a la planta en forma de aminocidos. Hidrogenasa: Esta protena no es sintetizada por todas las especies de la familia Rhizobiaceae y cataliza la reaccin de oxgeno con el hidrgeno formado durante la fijacin del nitrgeno. De esta forma reduce la concentracin del hidrgeno y del oxgeno dentro del ndulo. Existen especies de Rhizobium que tienen la posibilidad de utilizar la energa que resulta de esa reaccin para formar ATP. Leghemoglobina: Leghemoglobina es una protena que contiene una porcin hemo. La subunidad hemina es formada por las bacteroides, mientras que la globina es formada por la planta. Leghemoglobina es responsable del color rojo de los ndulos activos. Sirve para limitar la concentracin de oxgeno dentro del ndulo. De esta forma los bacteroides reciben suficiente oxgeno para sobrevivir y se evita que la nitrogenasa pueda ser inactivada por el oxgeno. Genes nod: Se diferencian en genes comunes de nodulacin, nodA, nodB y nodC, y en genes nod que son del hospedador-especfico. Existe una regulacin de los genes de la fijacin de nitrgeno a base al gen nodD. El producto de este gen interacta con los flavonoides caractersticos producidos por la planta hospedadora y por eso es responsable de la especificad de las simbiosis. Debido a la interaccin con los flavonoides de la planta, la protena NodD activa la transcripcin de genes, que por su parte tienen una caja de nodulacin. Esta se encuentra en la regin donde est el promotor de los genes regulados por nodD. La expresin de estos genes es especfica para la simbiosis. En el grafico 1, se pueden apreciar los siguientes eventos:

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Figura 1. Dinmica de formacin de un ndulo en la raz en una leguminosa causado por Rhizobium.
1. Rhizobium libre. 2. Rhizobium atrado por el pelo radical. 3. Inicio de la infeccin por Rhizobium en el pelo radical. 4. Cayado del pastor (pelos radicales, infectados por Rhizobium) 5 y 6. El cordn de infeccin de Rhizobium invade la matriz de clulas corticales de la leguminosa en la raz. 7. Rhizobium se reproduce en clulas haplodes de la raz y pierde su pared celular. 8. Sobreproduce auxna. 9. Resultado se da la hipertrofia radical y aparece el ndulo. 10. Rhizobium sin pared (bacterode) en las clulas corticales fija nitrgeno. 11. El ndulo con leghemoglobina fija N2.

Recordar: Se determin que el Rhizobium es una bacteria que forma ndulos con las leguminosas y fijan nitrgeno atmosfrico. Los ndulos son estructuras que se forman en las races de las leguminosas, alojan a las bacterias en su interior. En estas estructuras las bacterias se trasforman en bacteroides, que son los encargados de fijar el nitrgeno atmosfrico. El bacteroide es mayor que la bacteria, posee una forma irregular y se muestra ms sensible a cambios de presin osmtica. Adems, los bacteroides llevan a cabo la fijacin de nitrgeno porque son capaces de formar la enzima nitrogenasa que es responsable de la conversin del nitrgeno molecular en amonio. No todas las especies de leguminosas forman simbiosis con Rhizobium. Las ms conocidas son las que tienen valor comercial y alimentario para el ser humano o para el ganado, como el frjol, la soja, el chcharo, la lenteja, el haba y la alfalfa. La fijacin biolgica del nitrgeno es una biotecnologa agrcola respetuosa con el medio ambiente y representa una alternativa a la fertilizacin nitrogenada, evitando la contaminacin de suelos y aguas por nitratos.
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Aislamiento de Rhizobium: 1. Raz leguminosa 2. Seleccionar los ndulos Rojos (pigmento rojo = presencia de leghemoglobina) 3. Lavar en agua de cao 4. Lavar en agua destilada estril (2 veces) 5. Desinfectar en alcohol de 95 por 30 minutos 6. Lavar 7. Sumergirlo en HgCl2 al 1/1000 x 3 a 4 min o leja al 10% 8. Lavar con agua destilada x 5 veces (escurrir bien) 9. Triturar los ndulos con 2 gotas de agua destilada estril. Se puede realizar coloracin Simple para observacin microscpica 10. Sembrar en Medio de YMA con Rojo de Congo. Incubar a temperatura ambiente x 4-5 das. 11. Colonias rosadas y mucosas transparentes. (Bacilos con cpsula) Composicin de Medio YMA: (Agar Manitol - Rojo de Congo y extracto de levadura) Extracto de levadura 0.4g K2HP04 0.5g Mg2S04, 7 H20 0.2g NaCl 0.1g Manitol. 10g Rojo de Congo 0.05g Agar-Agar 17g Agua destilada 1 litro pH 6.8-7 Medios de Cultivo: Rhizobium crecen bien en medios que contengan extracto de levadura manitol, extracto de plantas, pero no se multiplican bien en medios que contienen peptona (que es utilizado por muchas bacterias como fuente de nitrgeno). En el medio mencionado, la levadura es la fuente de nitrgeno, el manitol es fuente de carbono que puede ser sustituido por glucosa o sacarosa. Siembra: Colocar 1ml. de la dilucin 10-1 y 10-2, depositarlas en las placas petri con agar-agar fundido y mezclar por rotacin un sentido de las agujas del reloj y en sentido contrario. Incubacin: A 25C por 5 das para rizobios de crecimiento rpido y durante 10 das para los de crecimiento lento. Crecimiento: Colonias incoloras o blancas con moderada a mucha formacin de goma en agar levadura, y en agar levadura-Manitol-rojo de congo; generalmente presentan un aspecto incoloro o levemente rosado. La nodulacin es la prueba confirmativa al 100%.
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II UNIDAD:
Gnero: Neisseria Especie: Neisseria gonorrhoeae Caractersticas Morfolgicas: Tiene forma de cocos Gram negativos, no mviles. Individualmente tiene forma de rin, pero generalmente se emparejan por los lados cncavos.

Cultivo: En agar chocolate ya que requiere de hemina y otras protenas animales Se incuba en una atmsfera con oxigeno reducido, con 2 a 8% de CO 2, que adems le da el beneficio del aumento de humedad. Las colonias se desarrollan como mucoides, convexas, elevadas y pueden ser transparentes u opacas, de 1 a 5 mm. de dimetro, no pigmentadas y no hemolticas. Thayer Martn es un medio selectivo que permite el aislamiento de neiserias, de muestras contaminadas con otros microorganismos debido a que contiene: vancomicina que inhibe a las bacterias Gram positivas, colistina que inhibe a las Gram negativas y nistatina que inhibe el desarrollo de levaduras. Determinantes de Patogenicidad: Los Pelos.- Las neiserias que presentan pelos son virulentos y forman en los cultivos colonias pequeas y densas, las que no presentan pelos son avirulentas y forman colonias grandes y granulosas. Los pelos confieren a la pared celular de esta bacteria una mayor capacidad de adherirse a la clula del husped y entre s. Las neiserias virulentas pueden ser fagocitadas por los leucocitos polimorfos nucleares, pero la fagocitosis no resulta exitosa, por lo tanto no ocurre la lisis del microorganismo dentro del fagocito; el polimorfo nuclear puede ser fagocitado por el gonococo, llevndole intracelularmente vivo. Esto es una caracterstica que se observa en el frotis de una secrecin de un paciente con gonorrea. Ig A proteasa.- Es una enzima que rompe la Ig A, que es el anticuerpo que constituye la defensa primordial en las superficies mucosas; presumiblemente esta enzima le permite al gonococo adherirse a las superficies mucosas, incluso en presencia de una respuesta de anticuerpos secretores.

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Los LPS de la pared celular, a la cual se le asume los efectos endotxicos de esta infeccin. Diagnstico de Laboratorio: 1) Muestra : Secrecin uretral. Secrecin endocervical. Secrecin conjuntival. Lquido sinovial purulento. Sangre infeccin diseminada.

2) Examen microscpico. Tincin Gram, en que lleva a diagnsticos equivocados debido a la presencia en la muestra de microorganismo saprofitas morfolgicamente similares. 3) Cultivos. las muestras derivadas de sitios normalmente estriles deben ser inoculados en medios no selectivos como agar chocolate. Para muestras contaminadas se utiliza medios selectivos de Thayer Martn (agar chocolate + vancomicina que inhibe a las Gram (+), colistina que inhibe a las Gram (-) y nistatina que inhibe levaduras), a este medio se recomienda agregar almidn, colesterol o albmina para neutralizar el efecto inhibidor de las Ac. grasos. Se inocula 2 8 % de CO2 (favorece la humedad necesaria por el cultivo liberados a partir de los eritrocitos). A las 48 horas desarrollan colonias mucoides, convexas elevadas, pequeas, tpicas, un asilamiento primario (bacterias con pili). Se presentan variantes opacas y transparentes. Se identifican a partir de cultivos :

Diplococos Gram (-) Oxidasa (+) Catalasa (+) Fermenta la glucosa. No fermenta la maltosa, lactosa, sacarosa.

4) Serologa. el suero y liquido genital contienen anticuerpos Ig G y Ig A contra los pili, la protena de la membrana externa y el LPS del gonococo. Se identifica la presencia utilizando la prueba de ELISA y el radio inmunoensayo.
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Gnero: Brucella Especie: Brucella melitensis Especie: Brucella abortus Especie: Brucella suis Son pequeos parsitos obligados de animales y humanos que producen la Brucelosis (fiebre ondulante, fiebre de malta). En general:

B. melitensis, infecta a cabras. B. abortus, ganado bovino. B. suis, infecta a cerdos. B. canis, perros.

Todos ellos infectan al hombre. Otras especies se encuentran solo en animales de acuerdo a estudios de similitud del ADN demuestran que solo existe una especie en el gnero: B. melitensis con mltiples biovariedades. Esta bacteria penetra en el cuerpo humano mediante la ingestin de derivados lcteos contaminados, o a travs de la piel mediante contacto directo con animales infectados, como por ejemplo en mataderos. Caractersticas Morfolgicas: En cultivos jvenes varan desde cocos hasta bacilos con predominio de las formas coco bacilares cortas. Son Gram (-) tindose en forma irregular, requiriendo 3 minutos con safranina. Son inmviles y no esporulados. Cpsula pequea en variantes lisas o mucoides. Cultivo: Aerobios estrictos. Solo B. abortus requiere entre 5 10 % de CO2. Como estn adaptadas al hbitat intracelular, requieren de medios complejos para el aislamiento primario, que contengan vitaminas, sales, aminocidos y glucosa, tales como: agar suero dextrosa o agar tripticasa y soya donde crecen lentamente, al cabo de 2 5 das desarrollan colonias pequeas, convexas, lisas y hmedas. Utilizan los carbohidratos pero no producen cidos ni gas en cantidades suficientes para ser utilizados en su clasificacin; para esto se utiliza su capacidad de producir H2S y el crecimiento en presencia de colorantes como
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tinica y la fucsina bsica. Las 4 especies que infectan al hombre son: Catalasa +, oxidasa + y reduce NO3 NO2. Las Brucellas son moderadamente sensibles al calor y a la acidez, la pasteurizacin las matan.

Variantes: Se presentan variantes lisas, mucoides y rugosas por el aspecto de la colonia, lo cual est en relacin con la virulencia. Los microorganismos virulentos tpicos forman colonias lisas y transparentes; bajo cultivo tienden a experimentar mutacin hacia la forma rugosa que es avirulento. El suero de los animales sensibles contiene una globulina y una lipoprotena que suprime el crecimiento de los tipos avirulentos pero favorece el crecimiento de los tipos virulentos. Estructura Antignica: Es probable que se encuentren 2 antgenos de LPS, que son el A y el M, en diferentes proporciones en las 4 especies y adems un antgeno L superficial que se parece al antgeno Vi de la Salmonella en total se ha llegado a determinar antgenos A, M y G en diferentes proporciones en cada especie Determinantes de Patogenicidad: 1. Su capacidad de sobre vida y multiplicacin intracelular, lo que le permite llegar a los ganglios y otros tejidos, aunque se desconoce el mecanismo por el cual lo logra. Los microorganismos lisos son fagocitados ms lentamente que los microorganismos rugosos y adems no son destruidos en la clula hospedera, pudiendo incluso multiplicarse dentro de ella. Las bacterias estn protegidas en el fagosoma y ni los microorganismos. lisos, ni los rugosos pueden estimular la produccin de enzimas necesarias para la ingesta. Los primeros experimentos atribuan la sobrevida en fagocitos a la pared celular de las brucelas. 2. Las cepas rugosas de Brucella (no virulentas) poseen antgenos accesibles a los anticuerpos, mientras que esto no ocurre con las cepas lisas. Las cepas rugosas parecen unirse con Ig G y otras protenas sricas en forma no especfica mientras que las cepas lisas no lo hacen. Estas observaciones son compatibles con la hiptesis que a medida que los microorganismos se toman rugosos quedan expuestas las protenas de
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la membrana externa; y estos cambios en la superficie se relacionan con la prdida de la virulencia. 3. la composicin de LPS de la pared celular vara entre un microorganismo liso y rugoso. Los microorganismos presentan fracciones de LPS solubles en fenol y agua. los microorganismos rugosos presentan fraccin de LPS nicamente solubles en agua. 4. B. abortus presenta predileccin por los tejidos fetales de los bovinos debido a que es rico en eritritol, alcohol, que las cepas virulentas utilizan como una fuente de carbohidratos para incrementar su crecimiento, esto no lo hacen las cepas avirulentas. Hay una significativa correlacin del rgano tropismo de las vacunas con la presencia del eritritol. La infeccin se produce por consumo de leche fresca y productos lcteos preparados con leche sin pasteurizar, o por contacto con el animal infectado, ya sea en granjas o mataderos. Una vez ingresado la bacteria al hospedador, tiene un periodo de incubacin de 1 a 6 semanas. Los microorganismos avanzan hacia los conductos linfticos, ganglios linfticos regionales, hasta el conducto torcico y la corriente sangunea, la cual las distribuye a los rganos parenquimatosos (hgado y bazo). Los anticuerpos Ig M aumentan durante la primera semana de la enfermedad aguda y alcanzan su mximo a los 3 meses y puede persistir durante la enfermedad crnica. Los anticuerpos Ig G aumentan casi 3 semanas despus de iniciada la enfermedad aguda, alcanzan su mxima produccin de 6 a 8 semanas y permanece as durante la enfermedad crnica. La produccin de la Ig A es paralela a la de la Ig G. Diagnstico de Laboratorio: 1. Muestra: Sangre, LCR (un caso de complicaciones nerviosas), medula sea, hgado, ganglios linfticos, suero para el diagnostico serolgico. 2. Cultivo: Agar suero dextrosa, agar papa infusin de carne, agar tripticasa de soya, agar Brucella con suero o agar 5% de sangre de oveja. Siembra por duplicado para incubar uno en presencia de oxigeno libre y el otro para incubar 5 10 % de CO2 (B. abortus). Se puede usar medios distribuidos en botellas de Castaeda con medio bifsico, para poder incubar hasta 21 0 35 das, realizando resembrar c/ 3 5 das).

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3. Puebas de Identificacin: Produccin de H2S y crecimiento en presencia de tionina y fuscina bsica. Especies Crecimiento en 1: 100. 000 de fuscina bsica. + + Crecimiento en tionina 1 : 25,000 + +

Requerimiento de CO2 + -

Produccin de H2S + + -

B. melitensis B. abortus B. suis B. canis

4. Prueba Serolgica: Utilizando como antgeno cepas de colonias lisas de Brucella, estandarizacin, muestras por el calor y fenolizadas. Los ttulos de aglutinacin de 1:160 indican infeccin activa. Prueba de Coombs, usando globulina antihumana. Produce reaccin cruzada con la tularemia, clera y Yersinia. 5. Prueba Cutnea Inoculacin intradrmica de una protena de extracto de Brucella. Prueba (+) a las 21 horas a parece un edema e induracin. Se recomienda hacer la prueba despus de la prueba de aglutinacin ya que puede estimular el nivel de aglutinacin.

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SECCIN 5: BACILOS GRAM NEGATIVOS FACULTATIVOS

Familia: Enterobacteriaceae Caractersticas Generales: Las enterobactericeas se componen de un gran nmero de especies de bacilos Gram negativos que habitan en el intestino grueso del hombre y muchos animales. Tambin se encuentran en el suelo, agua y materia en descomposicin. Es el grupo ms comn de bacilos Gram negativos cultivados en el laboratorio. Incluye microorganismos que forman parte de la flora normal y microorganismos patgenos como la Salmonella y Shigella. La E. coli forma parte de la flora normal aunque incidentalmente causa enfermedad; algunos son saprofitos en su hbitat normal; pero cuando invaden otros tejidos se convierten en patgenos. Clasificacin: La taxonoma de las enterobactericeas es compleja y ha cambiado con rapidez desde el desarrollo de las tcnicas de determinacin del secuenciamiento del cido nucleco y las tcnicas de hibridacin. En la actualidad estn definidos ms de 25 gneros y muchas especies; sin embargo las enterobactericeas clnicamente significativas comprenden no ms de 25 especies, otras aparecen con poca frecuencia. Morfologa: Cuando crecen sobre medios de cultivo, son bacilos cortos, Gram negativos; pero en muestras clnicas la morfologa es muy variable, algunos son mviles por la presencia de flagelos pertricos, algunas especies presentan cpsula. Las cpsulas son grandes y regulares como en la Klebsiella., menos en el Enterobacter y poco comn en otras especies. Pueden poseer fimbrias. Poseen pared celular compleja compuesta de murena, lipoprotena, fosfolpidos, protenas y LPS dispuestos en capas. Fisiologa: Facultativos Fermentan la glucosa Catalasa +
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Oxidasa negativos Reducen los NO3- a NO2Algunas producen gas a partir de la glucosa Adems de la glucosa, fermentan muchos otros CH, lo que permite la diferenciacin de los grupos: lactosa + y lactosa negativa.

Cultivo: En medios slidos--> colonias hmedas, lisas, grises rugosas, con bordes bien definidos. En medios liquido--> turbidez -hemolticas y no hemolticas Gran variedad de medios selectivos y diferenciales: Mac Conkey, desoxicolato, EMB y otros que permiten distinguir las colonias fermentadoras de la lactosa (pigmentadas) de las no fermentadoras de la lactosa (no pigmentadas). Resistencia: Relativamente sensibles al calor y a bajas concentraciones de germicidas y desinfectantes comunes--> cloro en agua las mata. Toleran sales biliares y tinturas bacteriostticas en grado variable. Relativamente sensible a la desecacin. Estructura Antignica: 1. Presenta antgeno O conformado por LPS que est compuesto de 3 regiones iguales -->el antgeno O est contenido en la regin I. 2. Antgenos K--> polisacrido capsular. 3. Antgenos H--> protena flagelar. Determinantes de Patogenicidad: Endotoxina: Conformada por la porcin de LPS de la pared celular--> efectos: fiebre, shock fatal, alteraciones leucocitarias, --> cito toxicidad, alteraciones en la respuesta del husped y diversos cambios metablicos. Su papel no est claro en infecciones urinarias o de las heridas; sin embargo cuando los microorganismos llegan a la sangre; producen un shock endotxico en el 30% de estos pacientes, con una tasa de mortalidad del 40%-90%. Enterotoxina: Ejercen efecto toxico en el intestino delgado, causando un pasaje de liquido en el ileon. Otros factores: La cpsula, el antgeno Vi impide la destruccin intracelular del microorganismo, algunos producen hemolisinas u otras enzimas.
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Diagnstico de Laboratorio: 1. Muestras--> esputo, tejidos, pus, lquidos corporales, escobillado rectal y heces. 2. Transporte--> medio de Stuart. 3. Relativo realizar--> coloracin Gram. 4. Cultivo--> en caso de muestras no fecales cualquier aislamiento entrico podra ser patgeno; en este caso se debe emplear un medio de baja selectividad, es decir que permita crecer a la mayora de las bacterias entricas, pero que inhiba bacilos Gram+ o Gram- no entricos. En caso de muestras fecales, lo que se busca es aislar patgenos intestinales, Salmonella, Shigella, Yersinia; por lo que se hace un tratamiento previo a la muestra, adems se acostumbra usar un medio de cultivo de alta selectividad. 5. Pruebas de identificacin--> se selecciona de acuerdo al criterio del laboratorio, basndose en las tablas de identificacin de Ewing y el Manual de Bergeys pero 1 se debe diferenciar de otros microorganismos no entricos como Pseudomonas, Vibrio, Aeromonas y Plesiomonas y para esto es vlido la prueba de la oxidasa.

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Gnero: Escherichia Especie: Escherichia coli Se encuentra ubicado en la tribu Escherichieae que comprende 2 gneros: Escherichia y Shigella (patgeno). El gnero Escherichia comprende 2 especies: E. coli y E. hermanii. Escherichia coli. Es ms predominante en el intestino grueso del hombre. Patgeno oportunista asociado con enfermedad gastro intestinal humana (particular) en nios y en viajeros. Esta infeccin se adquiere por la ingesta de aguas contaminadas con heces humanas. Algunas cepas son enterohemorrgicas y causan diarrea sanguinolenta, generalmente por la ingesta de carnes mal cocidas. Es la causa ms comn de las infecciones del aparato urinario y de sepsis por bacilos Gram negativos. Una de las causas ms importantes de la meningitis neonatal. Caractersticas Morfolgicas: Bacilo Gram negativo, mvil y no pigmentado. Caractersticas Biolgicas y de Cultivo: Crece en muchos medios comunes. Algunas son hemolticas en agar sangre, principalmente en las cepas aisladas de la orina. Fermentan la lactosa, con excepcin de la cepa E. coli enteroinvasiva. No pigmentadas, mviles, descarboxilan la lisina. Utilizan el acetato como nica fuente de carbono. Es indol positiva y no utiliza el citrato. Estructura Antignica: Antgenos O que permiten distinguir hasta 150 serotipos diferentes. Antgenos K que permiten clasificar 90 tipos serolgicos. Antgenos H que permiten clasificar hasta 50 tipos serolgicos. Se puede realizar ms de 1000 combinaciones de tipos antgenos. Existen serotipos especficos asociados a ciertas enfermedades.

Determinantes de Patogenicidad: Antgenos superficiales. Presenta 2 tipos de fimbrias, una sensible a la manosa y otra resistente a la manosa. Ambos son importantes para la colonizacin de tejidos. Se han demostrado la presencia de estas fimbrias
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en microorganismos aislados de vas urinarias y se cree que es necesario para la unin de los microorganismos a las clulas uroepitelial. Antgeno capsular. Parece que interfiere con la fagocitosis de los microorganismos por los leucocitos. Enterotoxinas. 2 tipos: termoestable (TE) y termolbil (TL) --> la produccin de las mismas se asocia con 2 plsmidos. La TL es semejante a la toxina del clera que estimula la adenil ciclasa en las clulas epiteliales de la mucosa del intestino. Otros factores de patogenicidad son la hemolisina y su capacidad de penetracin. Clasificacin del E. coli de Acuerdo a su Mecanismo de Patogenicidad Infeccin del Tracto Intestinal: 1. Enterotoxignica. Que produce la enfermedad por medio de 2 enterotoxinas: termolbil y termoestable. Produce diarrea voluminosa, sin sangre y de corta duracin (1 a 3 das). A menudo est asociada con los viajes (diarreas del viajero), en pases en vas de desarrollo. 2. Enteroinvasiva. Tiene carcter invasivo por la presencia de fimbrias, es lactosa negativa, no presenta movilidad. Produce diarrea con moco y sangre, semejante al de la Shigella. Se acompaa de clulas inflamatorias (leucocitos) en las heces. 3. Enterohemorrgica o verotoxigenica. Produce diarrea con sangre por accin de una toxina llamada toxina shiga o Verotoxina, que es una citosina especializada, que lisa las lneas de clulas Vero, que son clulas que se cultivan en laboratorio. La infeccin con este serotipo est asociada con la ingesta de hamburguesas poco cocidas en restaurantes de comida rpida. Algunos pacientes que presentan infeccin con la cepa O157:H7, sufren una complicacin mortal denominada sndrome hemoltico urmico que aparece cuando la verotoxina en el torrente circulatorio. 4. Enteropatgena clsica. Que produce la diarrea infantil por accin de una citotoxina. 5. Enteroagregativa. Estudios recientes han definido algunas caractersticas de estas cepas, como es el fenmeno de la autoagregacin, que est determinado por un plsmido de 55 a 65 mdaltons, que codifica para una
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fimbria de adherencia, un lipopolisacrido uniforme y una nueva enterotoxina termoestable (TE) denominada toxina enteroagregativa estable (TEAE).133 Se han detectado algunas cepas que elaboran una segunda toxina termolbil antignicamente relacionada con la hemolisina de Escherichia coli, la cual puede causar necrosis de las microvellosidades, acortamiento de las vellosidades intestinales e infiltracin mononuclear de la submucosa. 6. De adherencia difusa. Se adhiere a la totalidad de la superficie de las clulas epiteliales y habitualmente causa enfermedad en nios inmunolgicamente no desarrollados o malnutridos. No se ha demostrado que pueda causar diarrea en nios mayores de un ao de edad, ni en adultos y ancianos. Infeccin Sistmica: Los componentes estructurales que desarrollan un papel ms importante en la patogenia de la enfermedad sistmica son la capsula y la endotoxina. Por ejemplo, las cepas de E. coli que causan meningitis neonatal normalmente poseen un tipo capsular especfico denominado antgeno Kl. La endotoxina de E. coli es el lipopolisacrido de la pared celular, que causa algunas manifestaciones caractersticas de la sepsis por bacterias gramnegativas, como fiebre, hipotensin y coagulacin intravascular diseminada. Infecciones del Aparato Urinario: Algunos serotipos O de E. coli causan preferentemente infecciones del aparato urinario, que se caracterizan por presentar pili con protenas adhesinas que se unen a receptores especficos en el epitelio del aparato urinario. Diagnstico de Laboratorio: Las muestras aspticas se pueden sembrar en agar sangre y en un medio diferencial como el agar EBM o el agar Mac Conkey. En agar EBM, E. coli tiene un aspecto verde tornasolado. Una colonia caracterstica se asla en agar comn y se realizan las pruebas de identificacin bioqumica TSI: Produccin de indol a partir del triptfano. Utilizacin del acetato Movilidad positiva El E. coli O157:H7 no fermenta en sorbitol, lo que la diferencia de otras cepas de E. coli.
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Gnero: Klebsiella Especie: Klebsiella pneumoniae TRIBU KLEBSIELLAE K. pneumoniae el ms comnmente aislado. K. oxytoca similar en su infeccin a K. pneumoniae. K. ozaenae produce atrofia progresiva y ftida de las mucosas. K. rhinoscleromati rinosclerona que es un granuloma destructor de la nariz y faringe.

Estos dos ltimos estn asociados a infecciones crnicas de las mucosas nasales y faringe. Klebsiella pneumoniae: Se encuentra de manera normal en el tracto intestinal del hombre y algunos animales, pero est en menos numero que el E. coli lo que puede dificultar su crecimiento en los medios de cultivo cuando se incuba por solo 24 horas, pero si se incuba 48 horas se puede observar el crecimiento. Produce neumona que es la responsable de aproximadamente el 2 % de las neumonas bacterianas y puede causar condensacin hemorrgica necrosante extensa del pulmn. En las infecciones de las vas urinarias puede derivar en una bacteria generalmente en pacientes debilitados. Caractersticas Morfolgicas: Similar a las de la familia. Inmviles. Presenta glicoclix que est formada por polmeros de polisacridos que forma una maraa de fibras que se extiende fuera de la clula semejando una cpsula. Caractersticas Bioqumicas y de Cultivo: La presencia de cpsula hace que las colonias de Klebsiella, aparezcan grandes, hmedas, y mucosas. Utilizan el citrato como nica fuente de carbono, para su aislamiento se est utilizando con bastante xito el agar Mac Conkey, inositol y carbenicilina, sugerido por Bagley y Seidler, cuya selectividad se basa en la resistencia del microorganismo a la carbenicilina.

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Estructura Antignica: Presenta antgeno O, compuesto LPS y antgeno K que es un polisacrido que ha demostrado ser ms til para la tipificacin serolgica debido a que es un antgeno estable al calor, al contrario del antgeno O. Se han descrito hasta 82 antgenos K diferentes ene el ultimo manual de Bergey. La mayora de los antgenos K contiene solo un constituyente monosacrido que puede ser generalmente el cido glucurnico y de 2 a 4 de los siguientes azcares: galactosa, D- glucosa, manosa, fucosa, y L- ramnosa. Ningn tipo serolgico nico de K. pneumoniae es ms virulento que otro, ni se le asocia ms frecuentemente con diferentes infecciones; sin embargo la tipificacin serolgca proporciona un marcador nico para investigar diferentes epidemias causadas por este microorganismo. Determinacin de Patogenicidad: Cpsula. Que le previenes contra la fagocitosis y le ayuda a establecerse en las vas areas. Endotoxina. LPS de la pared celular. Enterotoxina. Similar a las toxinas TE y TL de E. coli y su produccin esta mediada por plsmido. Diagnstico de Laboratorio: Produce neumona primaria en hombres de edad media y ancianos con problemas mdicos como alcoholismo, enfermedades broncopulmonar crnica y diabetes mellitus. Es patgeno oportunista y causa neumona, infeccin de las vas urinarias y de heridas, bacterianas y meningitis. Se puede aislar de muestras: orina, secrecin de las heridas, resistentemente se ha incrementado las infecciones en hospitales con cepas resistentes a gran diferentes de antibiticos. Coloracin Gram. Cultivo: agar Mac Conkey colonia mucoides, grandes y rosadas. Pruebas bioqumicas para diferenciarlas de las dems especies de Klebsiella.

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Gnero: Proteus Especie: Proteus vulgaris Especie: Proteus mirabilis Especie: Proteus myxofaciens Proteus vulgaris. Es la especie ms importante dentro del gnero. Se encuentra en el intestino humano y en una gran variedad de animales, en el suelo y agua de polucin. Se convierte en patgeno causando trastornos en las vas urinarias, tambin son invasores secundarios en infecciones en diversos sitios del cuerpo. Caractersticas Morfolgicas: Bacilo recto, Gram negativo, presente movilidad por flagelos peritrcos Caractersticas de Cultivo: Crecen en una gran variedad de medios de cultivo comunes y selectivos para enterobactericeas. En agar gelatina desarrolla el fenmeno de swarming, que consiste en un crecimiento con ciclos peridicos de migracin y concentracin alrededor de un punto de inoculacin.- En el periodo de migracin las clulas se alargan alcanzando de 20 - 30 m. y presentan mayor nmero de flagelos.En la fase de consolidacin las clulas se dedican a multiplicarse y no migran. Se desconoce el mecanismo por el cual se lleva a cabo el swarming, pero se cree que los factores crticos para la iniciacin es el desarrollo9 de clulas alargadas, el aumento de flagelos y la produccin de ciertas sustancias extracelulares. Puede crecer tambin formando una fina pelcula. Estas formas de crecimiento del Proteus, hace difcil que se pueda aislar otras especies existentes en la muestra. En los laboratorios entricos, los medios han sido elaborados para inhibir el swarming, adicionando sales biliares o detergente, reduciendo la concentracin de NaCl o aumentando la concentracin de agar-agar al 4% al 7%, , adicionando nitroglicerol entre 0.1 - 0.3%, que no inhibe la flagelacin o movilidad y es de baja toxicidad para Proteus y otras bacterias. Para su identificacin se aplican las siguientes pruebas: Desaminacin oxidativa de una gran variedad de aminocidos como la fenilalanina y el triptfano. Produccin de cidos a partir de monosacridos y disacridos. No produce cidos a partir del inositol ni alcoholes de cadena recta como tetra, penta hexahidroalcoholes. Hidroliza la urea. Produce H2S en TSI y en agua pepenada
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Estructura Antignica: Presentan antgenos O y H y algunas cepas de P. vulgaris y P. mirabilis presentan antgenos K. La serotipificacin se hace mediante el sistema de Kauffman y Perch, que considera 49 antgenos somticos O, de los cuales 17 estn presentes en P. vulgaris., 27 en Proteus mirabilis y 5 en ambas especies.- Adems 3 antgenos O (A, B, C) y adems antgenos somticos designados con nmeros que van del 101 al 104 y del 200 al 205. El nmero de antgenos flagelares segn Kauffman y Perch es de 19. Las cepas de Proteus vulgaris designadas como OX-K, OX-2 y OX-19, pueden producir reaccin cruzada con los anticuerpos de Rickettsia, por lo que se usa para el diagnstico de la enfermedad producida por Rickettsia. Determinantes de Patogenicidad: Capacidad de invasividad. Produccin de endotoxina. Produccin de ureasa, que en las infecciones de las vas urinarias, degradan la urea en amoniaco elevando el pH de la orina, ocasionando la precipitacin de las sales de calcio y magnesio originando la formacin de clculos. La ureasa tambin es importante en la severidad de la enfermedad. Cuando no hay actividad de ureasa, el nmero de microorganismos en los riones y la extensin de la enfermedad renal son menores que cuando la enzima est presente. Las evidencias indican que la alcalinizacin de la orina por ureasa, incrementa la lesin del epitelio renal Diagnstico de Laboratorio: Patgeno del tracto urinario y de all produce bacteriemia. Muestra.- Orina y sangre. Coloracin Gram a partir de la muestra. Siembra en agar desoxicolato, que contiene desoxicolato de sodio, lactosa, rojo neutro y da lugar a la formacin de colonias incoloras. Otro medio que se puede emplear es el agar SS, que contiene lactosa, rojo neutro, verde brillante, bilis de buey, tiosulfato de sodio y citrato de hierro; las colonias en este medio son incoloras con centro negro. La identificacin de las colonias se hace mediante las siguientes pruebas: Ureasa, para diferenciarla de Salmonella. Desaminacin oxidativa de aminocidos, para diferenciarla de Providencia y Morganella.

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Gnero: Salmonella Especie: Salmonella typhi Especie patgena cuando se ingiere por va oral causando enteritis, infeccin sistmica y fiebre entrica.

Caractersticas Morfolgicas: Similar a todas las enterobactericeas, son mviles por flagelos peritricos con excepcin de S. pullorum. Caractersticas de Cultivo: No fermentan la lactosa. Forman cido y a veces gas a partir de la glucosa. Suelen producir sulfuro de hidrgeno a partir del tiosulfato, sin embargo S. typhi no produce gas a partir de la glucosa y produce escasa cantidad de sulfuro de hidrgeno. Estructura Antignica: Presentan antgenos O y H, que son tiles para la serotificacin. Los antgenos H, presentan 2 fases: En la primera fase son compartidos por pocos microorganismos y cuando el antgeno H se encuentra en la fase 2, se comparte con muchos microorganismos. Algunas salmonellas poseen antgeno K, conocido como antgeno Vi, que son vinculados con la invasividad. Variacin. Los microorganismos pueden perder el antgeno H y perder la movilidad. Cuando pierden el antgeno O, las colonias lisas se transforman en colonias rugosas. El antgeno Vi tambin puede perderse en parte o en su totalidad. Estas prdidas u obtencin se producen en el proceso de transduccin Clasificacin: La clasificacin es compleja debido a que los microorganismos constituyen una continuidad ms que especies definidas. Hasta 1982, Swing y col., haban propuesto slo 3 especies de Salmonella: S. cholerae suis (con 1 serotipo), S. typhi (tambin con 1 serotipo) y S. enteritidis con ms de 1500 serotipos. A partir de 1983, se han clasificado a las salmoneras en base a estudios de hibridacin del DNA y considera que el gnero Salmonella presenta 7 sub
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grupos, cada subgrupo con sus propias caractersticas e historia fenotpica; sta clasificacin an no se emplea. La nomenclatura simplificada considera los nombres de los serotipos como nombres de especies, por ejemplo: el nombre del gnero Salmonella y el serotipo typhimurium. En laboratorios clnicos se identifican mediante pruebas bioqumicas y serolgicas 4 especies de salmoneras que causan fiebres entricas: typhi, paratyphi A, paratyphi B y cholerae suis. Resistencia a Agentes Fsicos y Qumicos: Toleran concentraciones elevadas de bilis. Son resistentes al verde brillante, tetrationato de sodio y desoxicolato de sodio; stos compuestos son de utilidad para la formulacin de los medios selectivos. Determinantes de Patogenicidad: 1. Antgenos de superficie (O) Cumple la funcin de adherencia y permite la sobrevivencia intracelular; en el caso de la S. typhi es el antgeno Vi, las salmonellas que presentan ste antgeno son ms virulentas. 2. Invasividad. Al igual que la Shigella, es invasora, atraviesa el revestimiento epitelial del intestino delgado y pasa directamente al tejido sub epitelial; se desconoce el mecanismo, pero el proceso parece ser similar a la fagocitosis. Las salmonellas atraviesan las clulas epiteliales. Ocasionalmente, ocurre penetracin epitelial a nivel de la unin intercelular. Luego de la penetracin, los microorganismos se multiplican y pueden pasar hacia otros sitios del cuerpo. La destruccin epitelial se observa en los estadios tardos de la enfermedad, pero se desconoce los mecanismos por los cuales ocurre esta destruccin. 3. Endotoxina. Es responsable de la fiebre observada en las afecciones por salmonellas; actan directa o indirectamente a travs de la liberacin de pirgenos. 4. Enterotxina. Tiene las mismas propiedades que la enterotxina TL y Te del E. coli. Su actividad est relacionada con la pared celular o la membrana externa de la clula bacteriana. Manifestaciones Clnicas: Gastroenteritis. Ocurre 18 horas despus de haber ingerido alimento contaminado. Se caracteriza por presentar diarrea, fiebre, dolor abdominal. La causa ms comn es la S. enteritidis serotipo typhimurium. Septicemia. Se caracteriza por fiebre, escalofros, anorexia y anemia. Puede desarrollarse lesiones focales en cualquier tejido, produciendo osteomielitis,
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neumona, abscesos pulmonares, meningitis y endocarditis. En este tipo de enfermedad con frecuencia se asla S. cholerae suis. Fiebre tifoidea y otras fiebres entricas. La fiebre tifoidea es la ms severa y el agente causal es la S. typhi. Las fiebres entricas son producidas por los serotipos paratyphi A y paratyphi B; en estas, los sntomas son ms leves y la tasa de mortalidad es menor. Tifoidea: 1 semana. Fiebre, malestar, letargo, dolores generalizados. El microorganismo penetra la pared intestinal e infecta los linfticos regionales y son transportados a travs del torrente circulatorio. 2 Semana. Se multiplican en los tejidos intracelularmente y reingresan al torrente circulatorio produciendo bacteriemia; tambin se da la infeccin del sistema biliar, la fiebre es sostenida de 39 C, el abdomen se presenta sensible y tambin pueden presentarse otros sntomas. 3 Semana. Los pacientes se mantienen exhaustos, con fiebre, pero comienzan a mejorar si no se presentan complicaciones: perforacin, severa hemorragia, tromboflebitis, colecistitis, formacin de abscesos, neumona. Diagnstico de Laboratorio: Muestra. Heces.- Aunque las salmonellas no son tan sensibles al cido de las heces como las shguelas, es aconsejable amortiguar las heces si no se va a sembrar inmediatamente en los medios de cultivo. En la primera semana se obtiene el 25% de aislamiento y en la cuarta semana el 85% de aislamiento. Sangre. Se utiliza para el hemocultivo durante las 2 primeras semanas de la enfermedad. Luego de la negativizacin de los hemocultivos (cuarta semana), los cultivos de mdula sea pueden ser positivos; la orina puede ser positiva en el 25% de los pacientes con fiebre tifoidea. Cultivo: Cuando la muestra es heces, se hace un tratamiento previo de enriquecimiento en caldo selenito o tetrationato. El aislamiento se realiza en un medio de cultivo selectivo y diferencial, como EMB, Mac Conkey, desoxicolato de sodio, agar SS, o agar entrico de Hektoen. La identificacin se realiza mediante reacciones bioqumicas y pruebas serolgicas de aglutinacin rpida en frotis.
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Pruebas serolgicas: Prueba de aglutinacin por dilucin en tubo (Prueba de Widal). Las aglutininas aumentan durante la segunda y tercera semana de la infeccin por salmonera. Se requiere al menos dos muestras de suero obtenidas a intervalos de 7 a 10 das para demostrar un aumento en el ttulo de anticuerpos. Los resultados se interpretan de la siguiente manera: 1. Los ttulos altos o en aumento de O (igual o mayor de 1: 160) sugiere que hay infeccin activa. 2. Los ttulos grandes de H (igual o mayor a 1: 160) sugiere inmunizacin pasada. 3. El ttulo alto de anticuerpos al antgeno Vi, se presentan en algunos portadores.

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Gnero: Shigella Especie: Shigella dysenteriae Shigella Descripcin General: El gnero Shigella, perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, est formado por bacilos gramnegativos, no esporulados e inmviles, facultativos. Las especies de este gnero tienen un patrn antignico complejo y su clasificacin se basa en sus antgenos O somticos, muchos de los cuales son comunes a otros bacilos entricos, como E. coli. Hay cuatro especies: S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii y S. sonnei. Las distintas especies de Shigella constituyen la principal causa de disentera bacteriana, diarrea caracterizada por eliminacin frecuente de heces conteniendo pus, sangre y/o mucus. El ser humano es el nico reservorio conocido de este agente. La mayora de los casos ocurren en nios, en general transmitidos por contacto directo. Los brotes a gran escala, vinculados a alimentos, son ms raros. A pesar de ello, constituye un importante problema de salud pblica mundial, debido fundamentalmente a su elevada transmisibilidad, la emergencia de cepas resistentes a antimicrobianos y la falta de vacunas efectivas. Caractersticas Microbiolgicas Taxonoma: Shigella es un bacilo gram negativo perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, que se encuentra estrechamente relacionada con el gnero Escherichia, por sus propiedades bioqumicas, serolgicas y por similitudes genticas. Se caracteriza por ser inmvil, no produce lisina descarboxilasa y raramente produce gas a partir de hidratos de carbono. Su identificacin se basa en caractersticas bioqumicas y antignicas. En base a ello, se describen cuatro especies, todas ellas pueden causar disentera, aunque con diferente gravedad. ESPECIE Serogrupo Indol Manitol Ornitina decarboxilasa Tartrato de Jordan S. dysenteriae A S.flexneri B + S.boydii C + S.sonnei D + + +

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Clasificacin: Hay varias especies diferentes de bacterias Shigella, clasificados en cuatro subgrupos:

Serogrupo A: S. dysenteriae (12 serotipos), es un tipo que se encuentra en los pases del mundo en desarrollo donde ocasiona epidemias mortferas. Serogrupo B: S. flexneri (6 serotipos), causante de cerca de una tercera parte de los casos de shigelosis en los Estados Unidos. Serogrupo C: S. boydii (23 serotipos). Serogrupo D: S. sonnei (1 serotipo), conocida tambin como Shigella del grupo D, que ocasiona ms de dos terceras partes de todos los casos de shigelosis en los Estados Unidos.

Los grupos AC son fisiolgicamente similares, S. sonnei (grupo D) puede ser distinguida del resto en base de pruebas de metabolismo bioqumico. De estas especies la representativa del gnero es S. dysenteriae. Fisiologa y Metabolismo: En los medios de cultivo diferenciales, empleados habitualmente para cultivo de bacilos gram negativos entricos, aparecen como colonia no fermentan la lactosa en medios de cultivo diferenciales (agar Mac Conkey, agar Salmonella Shigella, etc.), con excepcin de algunas cepas de S. sonnei, que lo hacen en forma lenta. No producen H2S y la produccin de gas a partir de la glucosa slo se observa en algunas cepas de S. flexneri, lo que las diferencia de Salmonella. A diferencia de E. coli, no producen lisina descarboxilasa, utilizan acetato como fuente de carbono. Son ms lbiles a condiciones desfavorables que Salmonella, su viabilidad se ve comprometida frente a cidos, sales biliares, desecacin y muchos desinfectantes. An as pueden sobrevivir a temperatura ambiente durante meses. Estructura Antignica: Todas las especies presentan antgeno O, termoestable y pueden o no poseer antgeno K, termolbil. Este ltimo no interviene en la serotipificacin, pero puede interferir en la determinacin antgeno O; lo cual se evita mediante la ebullicin de la cepa. Los cuatro serogrupos se corresponden con las especies, tal como se observa en el cuadro anterior. A su vez, cada serogrupo puede subdividirse en tipos, en base a variantes del antgeno O, estos serotipos se designan mediante nmeros arbigos. Pueden diferenciarse adems serovares, en algunas especies. El conocimiento detallado de la estructura antignica resulta de utilidad para estudios epidemiolgicos y en la formulacin de vacunas.
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Atributos de Virulencia: La disentera bacilar resulta de la adherencia, e invasin de clulas epiteliales de la mucosa del leon terminal y colon, con inflamacin y ulceracin de la misma. Modelos Experimentales: Dado que se trata de un patgeno exclusivamente humano, no existen buenos modelos experimentales animales, con la excepcin de primates. La queratoconjuntivitis lograda al inocular Shigella en la conjuntiva de cobayos (test de Sereny) ha sido usada para demostrar la adherencia y capacidad invasiva de las cepas. El modelo de asa ligada de conejo se ha empleado para estudiar acumulacin de lquido en la luz del segmento. La mayora de nuestro conocimiento en la patogenia de la infeccin por Shigella se ha logrado mediante el empleo de cultivos celulares, en especial la lnea celular HeLa. Invasividad: La invasin es la penetracin activa de la bacteria en la clula hospedera. Las lesiones inflamatorias en la mucosa colnica afectada por Shigella se hallan fundamentalmente a nivel de las placas de Peyer, lo que sugiere que la bacteria podra ingresar inicialmente por las clulas M, naturalmente fagocticas, encargadas de captar antgenos de la luz intestinal y presentarla al tejido linfoide de la placa de Peyer subyacente. Pero tambin se observa el ingreso a travs de clulas no fagocticas. En cultivos celulares, la bacteria inicialmente se adhiere a la clula, provoca la reorganizacin de la actina del citoesqueleto celular en las inmediaciones y la formacin de pseudpodos. La clula husped, normalmente no fagoctica engloba e ingiere a la bacteria adherida, la cual a su vez escapa del fagosoma y se multiplica en el citoplasma de la clula HeLa. Continan producindose reordenamientos de actina en la vecindad de la bacteria que le permiten moverse a travs de la clula y luego pasar otra contigua. Una vez en libre en el citoplasma, la bacteria exhibe dos tipos de movimiento, por un lado, la polimerizacin de actina en un extremo de la bacteria crea una estructura tipo cola de cometa, que propulsa a la bacteria a travs del citoplasma, por otro lado, tambin se ha observado movimiento unidireccional de la bacteria lo largo de filamentos de actina. Muchos genes involucrados en la invasin han sido identificados (ipa: invasion plasmid antigens) y se localizan en plsmidos de peso molecular 120 - 140 MD. Algunas protenas codificadas por esos plsmidos, intervienen por ejemplo en la ruptura de la pared del fagosoma, o bien son exportados a la superficie de la bacteria. Las integrinas, protenas de superficie celular podran ser los receptores de las protenas Ipa. Las protenas Ipa slo parecen actuar luego de que las bacterias han ingresado a travs de las clulas M. Muerte celular: El crecimiento bacteriano intracelular causa cesacin de la sntesis proteica. Inicialmente se atribuy la muerte celular a la toxina de Shiga, pero luego se demostr que mutantes que no la poseen, tambin son capaces
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de determinan la muerte celular. Ms recientemente se ha sealado a la induccin de apoptosis o muerte celular programada como responsable de la muerte celular. Toxinas: La llamada toxina de Shiga, es potente neurotoxina, que determina convulsiones. Clsicamente se crea era producida exclusivamente por S. dysenteriae tipo 1. Tambin se han encontrado toxinas similares en otras especies de Shigella y en ciertas cepas de E. coli (Shiga like toxin). Es una toxina de tipo A-B, que se libera al medio durante la lisis bacteriana. Esta toxina se une a las clulas de mamferos, es internalizada por endocitosis y finalmente detiene la sntesis proteica a nivel ribosomal. Tiene mltiples actividades txicas: induce la acumulacin de liquido en el modelo de asa ileal ligada de conejo, (aunque no se relaciona ni desde el punto de vista antignico ni por su mecanismo de accin con toxina colrica o toxina termolbil de ETEC), acta como neurotoxina, e induce la apoptosis, aunque como se dijo, esta ocurre an con mutantes no productoras de toxina. Su papel ms relevante es en el Sndrome hemoltico urmico, donde el efecto principal es el dao a nivel de vasos sanguneos. Al menos dos toxinas ms, con actividad de endotoxina han sido descritas y que pueden hallarse en especies distintas de S. dysenteriae. Se denominan ShET1 y ShET2 y seran responsables de la acumulacin de lquidos en el asa intestinal y de la diarrea acuosa que puede observarse en la fase inicial de la shigelosis. Lipopolisacrido: Su efecto principal es contribuir al dao celular, y no parece intervenir ni la invasin, replicacin intracelular ni en la diseminacin entre clulas. Cepas rugosas de Shigella, que no poseen antgeno O conservan su capacidad de invadir y replicarse en cultivos celulares, pero son incapaces de causar inflamacin en el test de Sereny. Efectos Sobre la Salud Humana: Shigella sp. puede ocasionar enfermedades intestinales graves, incluida la disentera bacilar. Cada ao se producen ms de dos millones de infecciones que ocasionan unas 600 000 muertes, sobre todo en pases en desarrollo. La mayora de las infecciones por Shigella se producen en nios menores de diez aos. El periodo de incubacin de la shigelosis suele ser de 24 a 72 h. La ingestin de tan solo 10 a 100 microorganismos puede producir una infeccin, una dosis infectiva sustancialmente ms baja que la de la mayora de las dems bacterias entricas. Al comienzo de la enfermedad aparecen clicos, fiebre y diarrea acuosa. Todas las especies pueden producir enfermedades graves, pero la enfermedad producida por S. sonnei es, por lo general, relativamente leve y de resolucin espontnea. En el caso de S. dysenteriae, las manifestaciones clnicas pueden desembocar en la formacin de lceras con diarrea hemorrgica y una concentracin alta de neutrfilos en las heces. Estas manifestaciones estn relacionadas con la produccin de la toxina shiga por el microorganismo patgeno. Las especies del gnero Shigella estn, al parecer, mejor adaptadas a la infeccin del ser humano que la mayora de las dems bacterias entricas patgenas.
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Fuentes y Prevalencia: Segn parece, los nicos hospedadores naturales de las shigelas son las personas y otros primates superiores. Las bacterias permanecen contenidas en las clulas epiteliales de sus hospedadores. Las epidemias de shigelosis se producen en ncleos con alta densidad de poblacin y en lugares con higiene deficiente. Muchos casos de shigelosis estn asociados con guarderas, crceles y hospitales psiquitricos. Los militares que trabajan sobre el terreno y las personas que viajan a zonas con saneamiento deficiente tambin son propensos a infectarse. Vas de Exposicin: Shigella sp. son agentes patgenos entricos que se transmiten predominantemente por va fecal-oral, mediante el contacto entre personas o por el agua y los alimentos contaminados. Se ha comprobado tambin que las moscas son un vector de transmisin del microorganismo presente en residuos fecales contaminados. Relevancia de su Presencia en el Agua de Consumo: Se ha documentado cierto nmero de grandes brotes de shigelosis transmitidos por el agua. Estos microorganismos no son particularmente estables en medios acuticos, por lo que su presencia en el agua de consumo indica contaminacin reciente con heces humanas. Es probable que los datos disponibles hayan subestimado su prevalencia en los sistemas de abastecimiento de agua, porque las tcnicas de deteccin que se han utilizado en general tienen una sensibilidad y fiabilidad relativamente bajas. El control de Shigella spp. en los sistemas de abastecimiento de agua de consumo tiene una especial importancia para la salud pblica, por la gravedad de la enfermedad que ocasiona. Las especies del gnero Shigella son relativamente sensibles a la desinfeccin. En un PSA pueden aplicarse como medidas de control para gestionar el riesgo potencial la proteccin de las fuentes de agua bruta de los residuos humanos, un tratamiento adecuado y la proteccin del agua durante su distribucin. El anlisis de Escherichia coli (o bien de coliformes termotolerantes) es un ndice por lo general fiable de la presencia o ausencia de Shigella spp. en las aguas de consumo. Diagnstico de Laboratorio: Para certificar el diagnstico etiolgico se requiere la demostracin de su presencia en materias fecales, ya sea por tcnicas de cultivo clsicas o bien por la demostracin de su material gentico mediante biologa molecular. Una muestra de materias fecales del paciente debe ser obtenida, en lo posible al inicio de la enfermedad y previo al suministro de antimicrobianos. Una dificultad habitual es la conservacin de la muestra hasta su procesamiento, ya que retardos en el mismo pueden afectar la viabilidad de germen, Se dispone
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para ello de medios de transporte (p. ej. Cary Blair y otros) para conservar la muestra a temperatura ambiente y de esa manera aumentar las posibilidades de aislamiento. El examen microscpico con tincin de azul de metileno o Gram permite detectar la presencia de leucocitos polimorfonucleares que sugieren infeccin por Shigella aunque no es exclusivo de este germen. En la shigelosis usualmente se observan abundantes polimorfonucleares. Para el cultivo se utilizan diversos medios de cultivo incluyen medios selectivos y diferenciales (agar Salmonella-Shigella, agar Mac Conkey, agar Hektoen). Las colonias lactosa negativas son estudiadas mediante pruebas bioqumicas y aglutinadas con antisueros para completar su caracterizacin. Se han utilizado diversas tcnicas de biologa molecular: sondas de ADN para detectar genes de virulencia, localizados plsmido de 120 MD, sin amplificacin y PCR. Esta ltima tcnica puede detectar cantidades muy pequeas de bacterias, sus desventajas radican en su complejidad y costos. Sensibilidad a Antimicrobianos Tratamiento: La resistencia antimicrobiana fue descrita inicialmente en Shigella, en Japn en 1955; actualmente cepas resistentes a uno o varios antibiticos han sido aisladas prcticamente en todo el mundo. Este problema es especialmente dramtico en pases subdesarrollados o en vas de desarrollo, donde las tasas de resistencia son mayores y el acceso a antimicrobianos de segunda y tercera lnea es ms dificultoso. La resistencia suele deberse a la adquisicin de plsmidos a partir de cepas la misma especie o gnero pero tambin de bacterias de gneros diferentes. Estos plsmidos de resistencia pueden albergar genes que codifican ms de un mecanismo de resistencia y pueden a su vez ser transferidos a otras bacterias.

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III UNIDAD:
Familia: Vibrionaceae Gnero: Vibrio Especie: Vibrio cholerae Caractersticas Morfolgicas: Bastones cortos Gram (-), inicialmente tiene forma de coma, es mvil por un flagelo polar. Fisiologa: Facultativa. T de crecimiento de 18 37 C Metabolismo respiratorio. Pueden crecer en medio simple si se le proporciona hidrato de carbono utilizable, nitrgeno inorgnico, S, P, minerales y amortiguadores adecuados. pH ptimo 7, tolera 9.5. Sensibles a pH cido menor a 6, auto-esteriliza. En agar extracto de carne recin aislada son translucidos, verde iridiscente con luz oblicua. Cultivos viejos opacos y rugosos. Medio para aislamiento primario TTGA (agar gelatina, taurocolato, telurito). TCBS (tiosulfato, citrato, sales biliares, sacarosa, donde el tiosulfato y citrato inhiben enterobacteriaceas, mientras que la bilis y colato inhiben enterococos). Para diferenciarlos de los dems miembros de la familia: se emplea la hidrlisis de arginina.

Son negativos: V. cholerae, V. parahaemolyticus, V. alginolyticus y V. vulnificus; para diferenciarlos de estos vibrios mencionados se realiza el crecimiento en 0% de NaCl; solo V. cholerae crece, las otras 3 especies no crecen. Estructura Antignica: 1. Antgeno somtico O. Es de mayor importancia, se clasifican en 6 serogrupos. El serogrupo O - 1, contiene los biotipos cholerae y el Tor que son los agentes causales del clera clsico. El O 1 se subdivide de acuerdo a sus factores antignicos A, B, C, en 3 sertipos : Ogawa, Inaba e Hikojima.

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Diferenciacin bioqumica de los biotipos clera y el Tor: Cholerae --+ + El Tor + + ---

VP a 22 C Aglutinacin de eritrocitos de pollo. Sensibilidad a 50 UI de polimixina B. Sensibilidad a fagos del clera grupo IV.

La diferenciacin bioqumica de V. cholerae O 1 en los biotipos cholerae y el Tor es epidiologicamente til y puede llevarse acabo por medio de las pruebas VP, aglutinacin de eritrocitos de pollo, sensibilidad a 50 UI de polimixina B y sensibilidad a fagos de clera grupo IV. 2. Antgenos flagelares H.- que son compartidos por todas las cepas de V. cholerae. Determinacin de Patogenicidad: 1. Enterotoxina extracelular.- responsable de los sntomas clnicos. El colergeno es compleja, est constituido predominantemente de protena (98 %), 1 % de lpido y 1 % de hidrato de carbono. Presenta 2 sub. Unidades: A es la responsable de la actividad biolgica constituida por 2 pptidos desiguales: A1 con actividad toxica. B es la que sirve de unin de la toxina con la membrana celular. El pptido A1 provoca un aumento de la actividad de la enzima adenilciclasa incrementando el nivel de AMPc intracelular, el cual lleva a la rpida secrecin de electrolitos hacia la luz del intestino delgado. El resultado es la secrecin de un liquido isotnico con una concentracin de bicarbonato que es el doble de lo normal y una concentracin de potasio, 4 5 veces mayor que la concentracin plasmtica. La prdida de liquido puede ser de hasta 1 l/ h. 2. Adherencia. Las clulas virulentas penetran en el moco intestinal y se adhieren a los microvellosidades de las clulas epiteliales del intestino, esto relacionado con la movilidad ya que las cepas inmviles que producen toxinas son incapaces de producir enfermedad.

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Diagnstico de Laboratorio: 1. Muestra: Heces Diarreicas. 2. Siembra: Enriquecimiento: esto solo en caso de buscar portadores convalecientes.
Caldo peptonado alcalino incluir 0.5 1 g de muestra 37 C / 6 8 horas. T ambiente

1 asada se siembra en agar TCBS incubacin a 37 C (se puede aprovechar en buscar otros patgenos entricos como E. coli enteropatognica y V. parahaemolyticus)

Colonias amarillas Siembra en Agar TSA incubacin a 37 C / 18 24 horas La identificacin se realiza mediante las siguientes pruebas:

GRAM

Oxidasa

String Test o Prueba de Cordn

TSI

LIA

INDOL

Serologa

Bacilos GRAM +

(+)

(utilizando 1 gota de desoxicolato de Na al 0.5%)

A/A

K/K

(+)

(con suero polivalente)

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Familia: Pasteurellaceae Gnero: Haemophilus Especie: Haemophilus influenzae Se encuentra en la mucosa de las vas respiratorias del hombre y otros vertebrados. En nios se asocia como causa de la meningitis bacteriana aguda y algunas otras enfermedades peditricas. En adultos se asocia primeramente con enfermedad pulmonar crnica, tambin ocasiona enfermedades invasivas como meningitis, diartrosis, celulitis, neumona, y epiglotitis aguda, sin embargo los H. influenzae, no capsulado generalmente se asocian con enfermedades respiratorias crnicas principalmente e n adultos, pero tambin causan infeccin sistmicas en pacientes inmunodeprimidos. Morfologa: En LCR, lquido articular o cultivos primarios de estos materiales en medios enriquecidos, los microorganismos son predominantemente cocobacilares y uniformes, puede observarse capsula retrctil dbil, demostrables por reacciones de impregnacin con antisueros especficos de tipo. Los microorganismos no capsulados que provienen de esputo o material aspirado del odo, generalmente son ms alargadas y pueden presentar una tincin bicolor con coloracin gran y como adems pueden aparecer como gran variables, pueden ser confundidos con Streptococcus pneumoniae. Los microorganismos de colonias rugosas son muy pleomrficos apareciendo como largos hilos y filamentos. Se debe realizar una cuidadosa coloracin Gram, decolorando rigurosamente con alcohol acetona, contrastando si fuera posible con carbol fucsina. Cultivo: Generalmente se usa agar chocolate, debido a que este microorganismo requiere de factores X y V para su desarrollo. El factor X, hemina que es termoestable. Las especies independientes de hemina, como el H. parainfluenzae, sintetizan la hemina por la va de la tetrapirroles. Las especies dependientes de hemina parecen carecer de todas las enzimas en la sntesis de tetrapirroles, que son grupos prostticos en los citocromos que contienen hierro o en enzimas como grupo hemo, como catalasa y peroxidasas. El factor V, es termolbil, es un dinucletido de nicotinamida y adenina que acta como una coenzima para deshidrogenasas unidas a piridinas.
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 El agar chocolate se prepara calentando el agar sangre a 80C y en este proceso se libera la hemina a partir de la lisis de los glbulos rojos. El crecimiento se da a 37C/ 36 a 48horas, alcanzando 1mm de . En agar sangre se puede sembrar en forma cruzada con S. aureus, que libera los factores X y B, creciendo las colonias como satlites. En medio de Levinthal y Filder (BHI + iso vitalex), es un medio enriquecido y transparente y sirve para diferenciar las colonias capsuladas de las no capsuladas. El crecimiento es evidente en 18 a 24horas. Las colonias de especies de H. influenzae capsuladas del tipo b, son mucoides, brillantes, iridiscentes, grandes, de 3-4mm de . Despus de las 24 horas se presentan una umbilicacin central, debido a la prdida del polmero capsular y se vuelven rugosas, su mantenimiento en el laboratorio es muy difcil, debido a su tendencia de autlisis, se logra con frecuentes transferencias en agar chocolate o mejor, en medio de liofilizacin. Estructura Antgena: 1. Antgenos capsulares. Polisacridos, presenta 6 tipos de antgenos: a, b, f, se tipifican mediante la prueba de hinchazn de la capsula impregnando el cultivo o en las muestras clnicas con antisueros especficos, esta es una prueba similar a la Prueba de Quellung, para el neumococo. Casi todas las cepas asociadas al serotipo b, es el nico que contiene pentosas, ribosa y ribitol fosfato, en lugar de hexosas o hexosaminas que contienen los otros serotipos. 2. Antgenos somticos. La envoltura celular de H. influenzae consiste en una membrana externa y una interna que contienen antgenos proteicos y LPS. Determinantes de Patogenicidad: 1. Cpsula. Fosforriboril ribitol fostato de H. influenzae tipo b. tiene proclividad a producir infecciones, se cree que es debido a su estructura de polisacrido capsular, el cual en ausencia de anticuerpos especficos imparte al microorganismo. una resistencia efectiva al complemento. 2. Componentes de la membrana externa. Aunque la cpsula es el determinante crtico de la virulencia, es probable que sea multifactorial y que intervengan las protenas y los LPS, de la membrana externa. Diferentes molculas de superficie pueden ser asociadas a la virulencia como son: La adherencia, la invasividad y resistencia a la fagocitosis. 3. Ig. A proteasas. Endopeptidasas.
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Infecciones clnicas: Meningitis, neumona, bactericemia sin foco, celulitis, epiglotitis, pericarditis y proantrosis.

Diagnostico de Laboratorio: 1. Examen Directo. Las muestras adecuadas son: LCR, artrocentesis, toracocentesis, material aspirado del odo medio y muestras de esputo. 2. Cultivo. La muestra debe cultivarse de inmediato, debido a que el microorganismo tiende a morir rpidamente, es recomendable sembrar en agar chocolate y Levinithol, incubarse en aerobiosis y en atmsfera de 10% de CO2. Adems debe hacerse hemocultivo en pacientes con meningitis u otra enfermedad invasiva. 3. Deteccin de antgenos polisacridos. Impregnando la muestra clnica con antisueros especficos, es de gran ayuda, diagnstico rpido, tambin se puede hacer aglutinaciones y contra inmunoelectroforesis, efectivo en el 90% de casos de meningitis por H. influenzae tipo b.

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SECCIN 9: RICKETTSIAS
Se caracterizan por ser parsitos intracelulares obligados cuyos reservorios son los artrpodos (piojos, pulgas y caros). Las rickettsias son microorganismos pleomrficos, de forma de bastn a cocoides y se presentan aislados en pares, ms cortas en filamentos. La ultraestructura y la composicin qumica se asemejan a las de las bacterias Gram negativas, teidas son fciles de visualizar con el microscopio de luz, con Giemsa, muestra color azul, con la de Macchiavello presenta color rojo en contraste con el color azul del citoplasma de la clula hospedadora Pared celular de tres capas, una membrana plasmtica trilaminar y material nuclear. En el citoplasma granular se encuentran partculas de tipo ribosomal y organelos citoplasmticos Poseen ARN v ADN Caractersticas de los Cultivos: Debido a los riesgos de infeccin del personal de laboratorio, los procedimientos de cultivos deben emprenderse en establecimientos especialmente equipados. Excepto R. quintana, todas las Rickettsias requieren clulas vivas para su crecimiento. Pueden propagarse en el saco vitelino de que llega a contener hasta 10 9 por ml. en huevos embrionados, cultivos de tejidos, animales de laboratorio (cobayos, ratones, ratones de las praderas) y en ciertos artrpodos. La temperatura ptima para su crecimiento es de 32 a 35C, si los embriones se mantienen a 40C, la multiplicacin de las Rickettsias es lenta. El glutamato es la principal fuente de carbono y energa de Rickettsias Resistencia: Son inestables extracelularmente en condiciones ambientales ordinarias, y se requiere una cuidadosa tcnica para el aislamiento del microorganismo a partir de lquidos y tejidos corporales. Las rickettsias permanecen viables durante largos periodos cuando se almacenan a 20C o se liofilizan de medios apropiados. Estructura Antgena: Las diferencias en la composicin antignica de las rickettsias han hecho posible su clasificacin en gneros, grupos y especies. No hay un antgeno comn.
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Se han detectado dos clases principales de antgenos: Antgenos especficos de grupo, solubles en ter, que representan material capsular desprendido. Antgenos de tipo especfico, que se asocian con la pared celular. Diagnstico Serolgico: En casos fulminantes con un resultado letal, pueden o no aparecer anticuerpos. La deteccin de anticuerpos del tipo IgM e IgG, obtenidos a travs de la muestra del paciente puede ayudar a dilucidar si la infeccin es reciente o remota. Los anticuerpos fijadores de complemento son tiles para identificar diferentes gneros de rickettsias. Incluyen microaglutinacin, hemaglutinacin indirecta; y tcnicas con anticuerpos fluorescentes. La tcnica indirecta de anticuerpos fluorescentes puede ser la ms utilizada, debido a la disponibilidad de los reactivos y a la facilidad con la cual se puede realizar. En ella se emplea Rickettsias parcialmente purificadas, provenientes de un saco vitelino infectado, esto se confronta con diluciones de suero del paciente, con esta prueba se detecta IgG e IgM Reaccin de Weil-Felix (Para diagnsticos serolgicos): Se basa en reacciones cruzadas entre los antgenos de las rickettsias y el antgeno o polisacrido de Proteus. As, los anticuerpos para rickettsias pueden aglutinar a ciertas cepas no mviles de Proteus (OX-19, OX-2, OX-K) Las aglutininas para Proteus 0X2 y/o 0X19 habitualmente aparecen 5 a 8 das despus de la infeccin con R. rickettsii. Una elevacin en cuatro veces la produccin de anticuerpos son signos de presentar una infeccin reciente. Algunas enfermedades por rickettsias (como rickettsiosis pustulosa y fiebre Q) no se asocian con aumento de anticuerpos de Weil-Felix, y las infecciones de las vas urinarias por Proteus, pueden dar resultados falso- positivos Las pruebas de fijacin de complemento, de tipo especfico pueden no hacerse positivas hasta 2 a 3 semanas despus del comienzo. Determinantes de Patogenicidad: Slo las rickettsias viables son capaces de penetraren la clula husped. La infeccin por ricketsias de una clula individual del husped es un proceso en dos pasos: la absorcin a receptores que contienen colesterol, precede la penetracin en la clula. Ambos pasos dependen de la energa producida por las rickettsias infectantes. Una vez dentro de la clula del hospedero, causan poco dao detectable a la clula parasitaria, hasta que la clula se rompe Las rickettsias del grupo tifus son capaces de hemolizar eritrocitos de diversas especies animales. Esta actividad hemoltica se correlaciona con la infectividad de las rickettsias y
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con sus actividades metablicas. Diferentes microorganismos aislados de la misma especie de ricketsias varan en la virulencia. Patogenia: La infeccin produce una lesin endotelial diseminada, que da como resultado una oclusin de los pequeos vasos, microtrombos, microhemorragias, cambios secundarios en los lquidos y electrlitos, y en los casos severos, necrosis, shock y muerte. Sin embargo todava se desconoce el mecanismo preciso por el cual la infeccin por rickettsias produce la lesin endotelial. Manifestaciones Clnicas: El periodo de incubacin vara de 3 a 12 das. La enfermedad comienza en forma brusca con cefaleas, fiebre y malestar. Puede haber escalofros y las mialgias difusas son comunes La erupcin aparece 2 a 4 das despus del comienzo y en muchos casos, aparece primero en tobillos y muecas y luego se hace generalizada. En algunos casos se presentan molestias gastrointestinales, artralgias, conjuntivitis, rigidez de cuello y edema periorbital. Los factores que incrementan la posibilidad de muerte son edad avanzada, mayor tiempo entre el comienzo y la institucin de tratamiento efectivo y, quizs, la virulencia del agente infectante Tifus Epidmico (tifus transmitido por piojos): Es una enfermedad transmitida por piojos causada por la R. prowazekii. Puede infectar el piojo del cuerpo humano y el piojo de la cabeza, siendo el primero el vector ms significativo. El piojo del cuerpo se alimenta slo en humanos, y los tres estadios de su ciclo de vida (huevo, ninfa y adulto) ocurren en el mismo hospedero. Los piojos se infectan luego de ingerir sangre de un humano con rickettsias. Vanos das despus, la rickettsias ingeridas se han multiplicado lo suficiente en el piojo y aparecen ricketsias infecciosas en las heces del artrpodo. Si el piojo encuentra un humano susceptible en este momento, puede haber transmisin de R. prowazeckii. Es ms probable que la infeccin sea adquirida por personas en clima fros. Los piojos buscan lugares de una temperatura de 20C, y pueden abandonar al husped si tiene una T corporal de 40C o ms. Manifestaciones Clnicas: El periodo de incubacin vara de 10 a 14 das. Los sntomas son cefaleas, malestar, fiebre, mialgias generalizadas, escalofros o sensacin de fro. A menudo se presentan otros sntomas: molestias gastrointestinales, debilidad y tos. No tratada la enfermedad puede durar hasta 3 semanas.
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La mortalidad ha variado del 10 al 40% en diferentes brotes. Se ha demostrado que la mortalidad aumenta con la edad. Los sobrevivientes de tifus epidmico son inmunes durante aos luego de su infeccin primaria, aunque pueden ocurrir recadas leves (enfermedad de Brill-Zinsser) aos ms tarde. Enfermedad de Brill-Zinsser: Los individuos que han presentado tifus epidmico previamente pueden desarrollar una infeccin recrudescente muchos aos ms tarde. La enfermedad lleva los nombres de Nathan Brill, quien reconoci y describi por primera vez los aspectos clnicos de la enfermedad y de Hans Zinsser, quien sugiri por primera vez en 1934 que la enfermedad poda ser una recada de una infeccin previa por tifus epidmico. Desde entonces se han publicado evidencias epidemiolgicas, clnicas y experimentales que confirman la hiptesis de Zinsser.

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SECCIN 16: LAS MYCOBACTERIAS

Gnero: Mycobacterium Especie: Mycobacterium tuberculosis Agente Causal de la Tuberculosis: Es una enfermedad antigua, reconocible en esqueleto de la edad de piedra y en huesos de algunas momias egipcias. Aunque la naturaleza infecciona de la tuberculosis fue establecida por Villemin aproximadamente en 1865; la naturaleza proteiforme de sus manifestaciones clnicas demor la comprensin de la enfermedad hasta el descubrimiento del informe causal en 1883 por Koch: Encontr que el bacilo estaba constantemente asociado con la enfermedad clnica; lo aisl en cultivo puro, reprodujo la enfermedad en cobayos y conejos, y recuper el bacilo en cultivos puros de animales experimentalmente infectados. Estos rgidos requerimientos, denominados los postulados de Koch, han proporcionado criterios considerados esenciales para la aceptacin total de un microorganismo en particular como causa de una enfermedad infecciosa especifica. Caractersticas Morfolgicas: El Mycobacterium tuberculosis es un bastn delgado, recto o ligeramente curvo, con extremos redondeados, el microorganismo varia en ancho de 0.20.5m y en longitud de 1-4m. Ocasionalmente se observan ramificaciones verdaderas en cultivos viejos y en frotis de ganglios linfticos caseosos. Los bacilos son cidos resistentes, no formadores de esporas y no capsulados. La coloracin Acido resistente de Ziehl Neelsen es til para la tincin de organismos de cultivos o de secreciones de pacientes. Con esta tincin los bacilos aparecen como bastones teidos de rojo brillante contra un fondo azul. Son frecuentemente incolora, aerbica estricta. Su crecimiento est subordinado a la presencia de oxigeno y al valor del pH circundante. Es muy resistente al fro, la congelacin y la desecacin y por el contrario muy sensible al calor, la luz solar y la luz ultravioleta. Su multiplicacin es muy lenta (se divide cada 16 a 20 horas) y ante circunstancias adversas puede entrar en estado latente, pudiendo retrasar su multiplicacin desde algunos das hasta varios aos. El reservorio natural del M. tuberculosis es el hombre, tanto el sano infectado como el enfermo. Morfologa e Identificacin: Bacilos delgados, con extremos redondeados. Son bacilos aerobios no esporuladores o inmviles.
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Tienen requerimientos nutricionales exigentes y crecimiento laboratorio. La pared celular es rica en lpidos, por lo que su hidrfoba, esta es la razn por la que las mito bacterias son muchos desinfectantes y a tinciones de laboratorio comunes, Gram y Giemsa.

lento en el superficie es resistentes a como las de

Aproximadamente el 25% del peso seco de la bacteria est constituido por los lpidos libres de las capas exteriores de la clula. Estos lpidos contienen ceras, micsidos especficos de especie y el factor de cordn (6,6-dimicolaio de trehalosa). El factor de cordn se asocia al alineamiento en paralelo de las filas de bacilos. Cuando se observa el frotis a partir de colonias desarrolladas en medios artificiales se aprecian formas cocoides o formas ramificadas, especialmente cuando el cultivo es viejo, estas formas tambin se pueden observar en muestras tomadas de ganglios linfticos caseosos. En extendidos a partir de tejidos o esputo, generalmente los organismos se tien irregularmente tomando apariencia de rosario, por la presencia de grnulos metacromticos debido presumiblemente a su contenido de polifosfatos y vacuolas. Los bacilos tuberculosos son difciles de teir y con la tcnica de Gram, se colorea de manera irregular y pobre, debido a la falta de penetracin del colorante a travs de la pared celular, por lo que es necesario aplicar una tcnica de coloracin en la que se somete al calor con el colorante carbol fucsina y que luego de enfriarlo se decolore la muestra con el alcohol- cido. El bacilo tuberculoso se comporta como cido alcohol resistente debido a su contenido lipdico de su pared celular que impide que el colorante carbol fucsina se pierda en el proceso de decoloracin. Esta tcnica recibe el nombre de Ziehl Neelsen, y el M. tuberculosis aparece de un color rojo brillante contra un fondo de color azul. Cultivo: La T ptima de crecimiento es de 37C, su pH ptimo es de 7, con un rango de 6-7, es aerobio. El medio de cultivo ms usado y ms adecuado es el de Lowenstein Jensen. Tambin se est utilizando el medio Ogawa. Al medio lquido se recomienda agregar un detergente no inico polisorbato (Tween 80), con el fin de obstaculizar la agregacin de las clulas y permitir su crecimiento disperso, lo que permite analizar turbidimtricamente. La bacteria requiere por lo menos de 15 das para presentar un desarrollo visible macroscpicamente sobre el medio de cultivo y necesita hasta 8 semanas de incubacin debindose incubar un promedio de 30 das. Sus
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colonias son de color blanco cremoso, son esfricas, secas, rugosas, opacas, polimorfas y de dimensiones variables. Caractersticas de Crecimiento: Las micobacterias son aerobios obligados y derivan su energa de la oxidacin de muchos compuestos simples de carbono. El incremento de la tensin del C02 aumenta el crecimiento. Es muy resistente al fro, la congelacin y la desecacin y por el contraro muy sensible al calor, la luz solar y la luz ultravioleta. Su multiplicacin es muy lenta (se divide cada 16 a 20 horas) y ante circunstancias adversas puede entrar en estado latente, pudiendo retrasar su multiplicacin desde algunos das hasta varios aos. Reaccin a los Agentes Fsicos: Las micobacterias tienden a ser ms resistentes a los agentes qumicos en comparacin con otras bacterias, debido a la naturaleza hidrfoba de la superficie celular y a su crecimiento en grumos. Estructura Antignica: Lpidos: Las micobacterias son abundantes en lpidos. Estos incluyen cidos miclicos (cidos guisos de cadena larga C78-C90), ceras y fosftidos. En cierto grado los lpidos son los causantes de la resistencia al cido. Protenas: Cada tipo de micobacterias contiene varias protenas que inducen la reaccin de la tuberculina. Polisacridos: Las micobacterias contienen varios polisacridos. Su funcin en la patogenia de la enfermedad es incierta. Pueden inducir hipersensibilidad de tipo inmediato y a veces sirven como antgeno en las reacciones con el suero de personas infectadas. Determinantes de Patogenicidad: Factor de cordn: hace que el microorganismo se desarrolle en forma de agregados laterales semejantes a cordones. El crecimiento en cordones puede correlacionarse con la presencia de un glucolpido: Trehalosa 6-6 dimicolato, ubicado perifricamente en el microorganismo. Se sospecha que este factor inhibe la fusin de los lisosomas de los macrfagos con los fagosomas, fenmeno que se considera clave para la supervivencia de M. tuberculosis dentro de los macrfagos. Sulftidos: son dentados aninicos de sulfato de trehalosa que contienen cidos grasos de cadena larga, ubicados en la superficie ms externa de las micobacterias y que a pesar de ser compuestos no txicos, potencian sinrgicamente la toxicidad del factor cordn.

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El complejo superxido dismutasa (SOD)/ catalasa, que neutraliza el poder oxdame de los iones superxido (O2) y del perxido de hidrgeno (H202), presente en los lisosomas de los fagocitos. Patologa: Dos lesiones principales: 1. Tipo exudativo: esta lesin es una reaccin inflamatoria aguda con lquido de edema, leucocitos polimorfonucleares y despus monocitos que rodean a los bacilos tuberculosos. Este tipo de lesin se observa particularmente en el tejido pulmonar, donde se asemeja a la neumona bacteriana. 2. Tipo productivo: cuando la lesin est totalmente desarrollada consiste en un granuloma crnico que consta de tres zonas: I) una regin central de clulas gigantes y multinucleadas que contiene bacilos tuberculosos; 2) una zona media de clulas epitelioides plidas, con frecuencia dispuestas radialmente, y 3) una zona perifrica de fibroblastos, linfocitos y monocitos. Posteriormente se desarrolla tejido fibroso en la periferia, y la regin central sufre necrosis caseosa. A esta lesin se le denomina tubrculo Deteccin y Diagnstico de Laboratorio: Prueba de Tuberculina: Est basada en la respuesta de hipersensibilidad retardada por clulas frente a antgenos especficos del bacilo. Pruebas diagnsticas de laboratorio: El diagnstico definitivo de tuberculosis slo puede establecerse cuando se cultiva M. tuberculosis. Sin embargo, existen otras pruebas diagnsticas, que ayudan a plantear el diagnstico de esta enfermedad. Pruebas microbiolgicas. Las caractersticas tintoriales de M. tuberculosis permiten su rpida visualizacin (baciloscopia) en muestras clnicas mediante el uso de diferentes tcnicas de tincin. La baciloscopia es la herramienta fundamental para el diagnstico de la TBC y para el seguimiento del tratamiento de los pacientes con tuberculosis. Muestras: Las muestras consisten en esputo fresco, lavado gstrico, orina, liquido pleural, liquido cefalorraqudeo, lquido articular, material de biopsia, sangre u otro material sospechoso. Frotis: EI esputo, los exudados u otro material se examina en busca de bacilos acidorresistentes mediante la tincin de Ziehl-Neelsen. La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, que se basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (por ejemplo, el cido miclico) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos.

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Por esto se denominan bacilos cido-alcohol resistente o BAAR. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Cultivo, identificacin y pruebas de susceptibilidad: Las muestras procesadas recolectadas de sitios no estriles y las muestras centrifugadas de sitios estriles se pueden cultivar directamente sobre medios selectivos y no selectivos. El caldo de cultivo selectivo es con frecuencia el mtodo ms sensible y proporciona resultados con mayor rapidez. Un medio agar selectivo (p. ej. Lowenstein-Jensen o Middlebrook 7H10/7H11 en biplaca con antibitico) se debe inocular paralelamente con los medios de caldo de cultivo. La incubacin se efecta de 35 a 37C en 5 a 10% de CO2 durante ocho semanas. Si los cultivos resultan negativos en presencia de una tincin acidorresistente positiva, o se sospecha de micobacterias atpicas con crecimiento lento, entonces se debe incubar un conjunto de medios inoculados a temperaturas menores (por ejemplo: 24 a 33 C) e incubar ambos grupos durante 12 semanas.

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SECCIN 17: COCOS GRAM POSITIVOS

Gnero: Staphylococcus Especie: Staphylococcus aureus La intoxicacin de origen alimentario que se presenta con mayor frecuencia, es la producida por la ingestin de toxina formada cuando crecen en los alimentos ciertas cepas de S. aureus. A esta toxina se le denomina enterotoxina y produce en el individuo sntomas caracterizados por nauseas, vmitos, diarreas, malestar y debilidad general. Estos sntomas comienzan a manifestarse de 1 6 horas despus de haber consumido el alimento y aunque en algunos casos la recuperacin puede durar varios das. Se han determinado hasta 6 tipos de enterotoxina producidas por S. aureus que son serolgicamente distintas, designadas como A, B, C1, C2, D, E y que tienen diferente grado de toxicidad; la mayora de las intoxicaciones son producidas por el tipo A. Y se requiere de un microgramo de esta toxina para producir los sntomas de intoxicacin en el hombre y para que exista esta cantidad de enterotoxinas en el alimento es necesario que s e haya proliferado ms de 1000,000 de clulas por gramo de alimento. La inactivacin por calor es influenciada por el pH y la composicin del medio Ej. El tiempo necesario para inactivar el 90 % de la Enterotoxina B es una solucin. Amortiguada a 110 C es de 18, mientras que en caldo de buey es de 60, debido a que las protenas ejercen un efecto protector sobre las toxinas. Condiciones de Produccin de la Toxina Estafiloccica: El margen del pH para la produccin de la toxina es de 5 9 aproximadamente. Se produce la toxina enana velocidad importante cuando el alimento se encuentra conservado a una temperatura entre 15.6 46.1 C. Adems es ms probable su produccin cuando no hay microorganismos competidores. Tambin su produccin se halla influenciada por el tipo de alimento, se produce grandes cantidades en carnes y en alimentos con un pH de baja acidez (menor de 4.6) y una actividad acuosa de 0.86 o ms. En general cuanto mejor medio de cultivo sea el alimento ms amplio ser el margen de temperatura, pH y aw. Una importante caracterstica de la enterotoxina es su marcada termo resistencia.

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 No se destruye a temperatura de pasteurizacin, ni coccin, ni es inactivada a 117 C. la toxina parcialmente inactivada puede reactivarse en alimentos mantenidos a 25 C/ 24 horas. El cocinado normal del alimento no destruye la toxina formada antes del calentamiento; estos alimentos podran dar lugar a intoxicaciones, aunque no se hubiera llegado a demostrar la presencia de estafilococos. Alimentos Responsables: Productos de pasteleras, jamn, carne, alimentos mal refrigerados, leche y productos lcteos, salsas enlatadas, cremas, empanadas y aderezos de ensalada. En alimentos cuya naturaleza no permita la proliferacin de los St. el problema se presenta si estos alimentos son utilizados como ingredientes en otros alimentos donde los St. si pueden multiplicarse: Ejemplo la gelatina que son utilizados en adornos de pastelera o rellenos de tortas, igualmente ocurre en el queso. Por otro lado en alimentos fluidos como la leche cruda que se mantiene sin refrigeracin (se multiplica y elabora su toxina) al pasteurizarla se inactiva a la mayora o a todos los Stpahylococcus pero no a la toxina que es termorresistente.

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Gnero: Streptococcus Especie: Streptococcus pyogenes Los Streptococcus estn conformados por un grupo heterogneo de bacterias y no hay un sistema apropiado para clasificarlos, hasta ahora se ha utilizado algunas combinaciones caractersticas para ello, como son: Caracterstica morfolgica de la colonia. Patrones de hemlisis sobre agar sangre. (, , ninguna hemlisis). Composicin antignica de las sustancias de pared celular. Reacciones bioqumicas y resistencia a factores fsicos y qumicos). Caractersticas Morfolgicas de Streptococcus pyogenes: Cocos Gram (+) que se disponen en cadena, debido a que se dividen en un solo plano; esta cadena presenta un aspecto diploccico y su longitud depende de factores ambientales, por ejemplo en medio liquido las colonias las cadenas son ms largas. En cultivos viejos pueden perder su gran positividad. Produce una cpsula que est compuesto de cido hialurnico que impiden la fagocitosis. La pared celular est compuesta de protenas, carbohidratos y presenta peptidoglucano. Vellosidades conformado por protena M, recubierto de cido lipoproteico y sirve para adherirse. Cultivo e Identificacin de Laboratorio: Crece en medios slidos formando colonias discoides de 1 2 mm de dimetro. Las cepas capsuladas del grupo A forman colonias mucoides. El crecimiento tiende a ser pobre tanto en medios slidos como lquidos a menos que se enriquezcan con sangre o lquidos de tejidos, adems el crecimiento y la hemlisis se incrementa cuando se incuba con 10 % de CO 2. Son facultativos. T optima, 37 C, 7.4 7.6. Puede formar 2 tipos de colonias : Amaraadas, formada por clulas que elaboran mucha protena M, son virulentas y poco sensible a la fagocitosis por leucocitos humanos. Lustrosas, formadas por clulas con poca protena M, son avirulentas.
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 Produce hemlisis en agar sangre. Los cultivos pueden identificarse mediante pruebas de deteccin de antgenos especficos del grupo A. Presenta susceptibilidad a la bacitracina que sirve para la identificacin de los Streptococcus del grupo A con 95% de seguridad. Tiene metabolismo fermentativo siendo el principal producto de este el cido lctico. Son catalasa y oxidasa negativas. Los requerimientos nutricionales son complejos, debido a su capacidad del microorganismo para sintetizar muchos de sus aminocidos, purinas, pirimidinas y vitaminas. Son destruidos a 60 en 30 min.

Estructura Antignica: Un antgeno especifico de grupo de la pared celular, que est compuesto por un polmero ramificado de L ramnosa y N acetil glucosamina, que produce reaccin de precipitacin en tubos capilares. Protenas.- Los Streptococcus del grupo A, producen 3 antgenos proteicos de superficie: M, T y R; que son tiles para la tipificacin serolgica. Ms del 90 % de las cepas estreptoccicas pueden ser clasificadas empleando los antgenos M y T. La protena M, es el principal factor de virulencia de los estreptococos del grupo A, y con este antgeno se han determinado ms de 60 serotipos. Los microorganismos que producen protena M, son resistentes a la fagocitosis en ausencia de anticuerpos especficos. Los antgenos T, no se asocian con el vello de superficie ni con la virulencia, son tipificados mediante pruebas de aglutinacin en portaobjeto. Antgeno capsular.- compuesto de cido hialurnico y que resulta ser menos importante como factor de virulencia que la protena. Determinacin de Patogenicidad: 1. cido lipoteicoco responsable de la adherencia a las clulas epiteliales. 2. Protena M, resistencia a la fagocitosis y a la destruccin entra celular por los tejidos locales y contiguos. Tambin de tejidos alejados, a travs del torrente sanguneo. 3. Hemlisis: estreptolisina O y estreptolisina S.
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 Estreptolisina O, responsable de la hemlisis; es inactivada por oxigeno, pero se revierte con agentes reductores como la cistena o beta mercaptoetanol; tambin es irreversible, inactivada por colesterol. Estreptolisina S, tambin produce hemlisis, ejerce accin ltica sobre glbulos rojos, blancos y forma de L y protoplastos bacterianos. 4. Toxina eritrognica, responsable del enrojecimiento de la piel en la escarlatina. Causa bloqueo del retculo endotelial, necrosis miocrdica y heptica y shock en conejos. 5. Enzimas, su papel en la patogenia no est claro, estreptoquinasa, hialuronidasa, proteinasa, etc. Manifestaciones Clnicas: Faringitis. Escarlatina. Infecciones Cutneas: Imptigo. Celulitis. Erisipela. Infecciones de heridas y gangrena.

Otras Infecciones: Sepsis puerperal. Secuelas de Infecciones Estreptoccica Aguda: 1. Fiebre reumtica aguda (FRA).- Es una reaccin inflamatoria no supurativa que esta epidemiolgica y serolgicamente relacionada con una infeccin previa con Streptococcus del grupo A. Se manifiesta con artritis, carditis, eritema marginado o noduloso subcutneo. Se diagnostica detectando un aumento del ttulo de anticuerpos para por lo menos uno de los diversos antgenos estreptoccicos (estreptolisina O, DNasa o estreptoquinasa). 2. Glomrulo nefritis post estreptoccica aguda (GNA).-S e asocia como una complicacin de faringitis o de una infeccin cutnea y se caracteriza por edema de comienzo agudo, oliguria, hipertensin, insuficiencia cardiaca congestiva o convulsiones.

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Diagnstico de Laboratorio: El diagnstico definitivo de una faringitis estreptoccica solo puede hacerse por cultivo directo. Los hisopados pueden inocularse en caldo de cultivo y examinarse por anticuerpos fluorescentes o en agra sangre, con agrupamiento posterior por sensibilidad a la bacitracina en discos o tcnicas serolgicas. De lesiones impetiginosas. El liquido vesicular o pustular inoculado en agra sangre puede proporcionar un crecimiento puro de estreptococos. A medida que las lesiones envejecen, pueden aislarse en forma concominante estreptococos y estafilococos. Los microorganismos de celulitis y erisipela se cultivan mejor por aspiracin con aguja de lquidos histicos. Especialmente del borde que avanza en la erisipela o por inyeccin salina estril seguida de respiracin. Tambin pueden aislarse estreptococos de la sangre de pacientes con infecciones ms profundas.

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IV UNIDAD: SECCIN 18: BACILOS Y COCOS ESPOROGENOS GRAM POSITIVOS

Gnero: Bacillus Especie: Bacillus anthracis Especie: Bacillus subtilis Ubicuos, la mayor parte no son patgenos, pero algunas especies causan enfermedad importante en el humano. Bacillus anthracis: El ntrax es una enfermedad importante en animales y el hombre, B anthracis puede ser el agente principal de la guerra biolgica, retraso de refutacin final de la teora de la generacin espontnea. En estudio de B. anthracis, Koch demostr por primera vez un conjunto de postulados que deben ser satisfechos antes de que un microorganismo pueda ser acreditado como agente etiolgico, tambin introdujo el uso de microorganismos vivos atenuados como una forma de inmunizacin. Caractersticas Morfolgicas: Bastn recto, Gram +, sus extremos aparecen cuadrados y sus ngulos a menudo son tan agudos, que los bacilos en cadenas estn en contacto en esos puntos. Cuando se examina frotis de sangre o tejidos de un animal infectado, los microorganismos generalmente se encuentran solos o en pares, pero cuando el frotis procede de un cultivo, se presentan formando largas cadenas. No es mvil. En animales infectados, forma cpsula, pero in vitro no lo forma a menos que sean cultivados en un medio con bicarbonato y en presencia de 5% de CO2. Presenta esporas en cultivos, en el suelo y en los tejidos y exudados de animales muertos, pero no en la sangre ni tejido de animales vivos. Cultivo: Aerbico, aunque puede crecer de manera escasa en ausencia de oxgeno, pH. ptimo de 7 a 7.4. T optima de crecimiento 37Ccon un rango entre 12 a 45C.
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 Crece en medios comunes de laboratorio, pero las caractersticas morfolgicas de las colonias se observan mejor en agar con 5% de sangre libre de antibiticos (no hemoltico). Caracterstica de la colonia en medio simples: Blanco + grisceo, de 2-3mm de dimetro, elevadas, opacas, con borde irregular, estas colonias al microscopio aparecen como masas enmaraadas de largos tirabuzones, son de consistencia membranosa y poco emulsionables. Identificacin de Laboratorio: Con la reaccin de sarta de perlas, que separa B. anthracis virulento y avirulento de B. cereus, y otros aerobios formadores de esporas. La reaccin de Sarta de perlas se realiza inoculando la cepa en la superficie de un medio slido al que se agrega entre 0.05 a 0.5 unidades de penicilina g/ml. Se incuba durante 3 a 6horas y aparecen clulas grandes y esfricas formando cadenas en la superficie del medio como un collar de perlas. Otra prueba para diferenciar B anthracis, de B cereus, se basa en la susceptibilidad de B. anthracis, a un bacterifago variante, fago gamma, las clulas de B. anthrasis se lisan. La diferencia entre B. anthracis y B. subtilis: Fermentacin del manitol (B. anthracis no fermenta, B. subtilis fermenta). B. anthracis virulentos son los nicos microorganismos que producen colonias rugosas en ausencia de CO2 y colonias mucoides cuando crecen en un medio con bicarbonato de sodio en la atmsfera con 5% de CO 2. Prueba Biolgica: Inoculando a un ratn una suspensin de un cultivo en agar de B. anthracis. El ratn muere habitualmente de 2 a 5 das, despus de la inoculacin con sntomas de ntrax y los microorganismos se pueden recuperar de la sangre del corazn. Resistencia: Extremadamente resistentes a agentes fsicos y qumicos, una T de 120C/ 15min es adecuada para activar las esporas. La forma vegetativa es diferente a la de otras bacterias, no formadas de esporas y es destruida a 54C/30min. En tierra seca y pastos resisten durante aos. Los productos animales contaminados con esporas del ntrax, solo puede esterilizarse en autoclave.

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Estructura Antignica: 1 Polipptido capsular compuesto de cido D-glutmico 1 Antgeno somtico, que es un polisacrido componente de la pared celular compuesto de N-acetilglucosamina y D-galactosa. La toxina de ntrax que es una protena compleja compuesta de: Un antgeno protector (AP), un factor letal (FL), un factor de edema (FE). Otra forma es el ntrax pulmonar, y se conoce tambin como la enfermedad de los cardadores de lana, y se adquiere por la inhalacin de la espora, su sntomas son tpicamente cono una infeccin respiratoria, es pocos das se hace muy severa y en esta forma el paciente muere generalmente en 24 horas. Otra forma es el ntrax intestinal, con manifestaciones de nauseas, vmitos y diarreas asociadas con una profunda postracin y eventualmente con shock y muerte. De cualquiera de las formas puede haber invasin del torrente circulatorio y localizacin en las meninges produciendo meningitis fatal. Diagnstico de Laboratorio: Muestra: Liquida de la pstula maligna, esputo o sangre. Tincin Gram. Fuertemente presuntivos, pero ms insuficientes para un diagnstico definitivo, para empezar un tratamiento inmediato por la gravedad del cuadro. Anticuerpos precipitantes o hemaglutinantes en el suero de las personas o animales infectados o vacunados. Cultivo. Diferenciacin con los antracoides, grmenes saprfitos muy similares pertenecientes al mismo gnero. Hemocultivo, posible existencia de una septicemia fuerte. Para llegar a gnero: Movilidad (-), formacin de esporas (+), catalasa (+), crecimiento en aerobiosis (+). Determinantes de Patogenicidad: Cpsula: Que interfiere en la fagocitosis y parece ser un importante factor en la patogenia del microorganismo, especialmente en los estudio primarios, forma anticuerpos pero no patgenos contra la enfermedad. Toxina del ntrax. A quien se atribuye los signos y sntomas de la enfermedad, ste se acumula en el organismo hasta llegar a un nivel mximo en el momento de la muerte del animal que se produce por insuficiencia respiratoria y anoxia por accin de la toxina sobre el SNC.

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Infeccin Clnica: En animales la enfermedad, ocurre en los bovinos en los cuales el microorganismo ingresa a travs de microscpicos cortes en la mucosa de la boca o estmago, el animal permanece asintomtico hasta unos das o unas horas antes de su muerte, la tasa de mortalidad el del 80% y los campos contaminados con esporas continan siendo fuente de infeccin durante unos 20 30 aos. En humanos, la forma ms comn es el ntrax industrial, en la que la espora penetra a travs de la piel y se manifiesta en 2 a 5 das luego de la infeccin con la aparicin de pstula que en pocos das se convierte en una vescula llena de un lquido oscuro, negro azulado, que se denomina pstula maligna. La lesin generalmente se encuentra en las manos, antebrazos o cabeza.

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Gnero: Clostridiun Especie: Clostridiun tetani Clostridiun tetani: Agente causal del ttano, raro en pases desarrollados; en pases en vas de desarrollo el ttano es neonatal y tiene una buena representatividad en la mortalidad total. La tasa de mortalidad tanto en los neonatos como en los dems es bastante alta, especialmente en nios y ancianos. Caractersticas Morfolgicas: Es un bacilo bastante largo y delgado cuando se le compara con otros Cl. Gram + en cultivos jvenes Habitualmente gran en cultivos viejos y en frotis de heridas. Produce una espora terminal y deformante (palillo de tambor), la espora no se colorea con gran, apareciendo como una estructura redondeada e incolora, en incubacin prolongada las clulas se lisan dejando la espora con restos de la clula vegetativa adheridos. Movilidad muy activa por flagelos peritricos. Caractersticas de Cultivo: Anaerobio. T ptima de crecimiento 37C pH ptimo de crecimiento 7.4 Requiere medios que contengan cierto nmero de aminocidos y vitaminas que son cubiertos con agar sangre. Desarrolla Swarming Tambin crece en caldo de carne cocida, con escaso crecimiento en 48horas. En medio tioglicolato, sustancias reductoras, cistena y tioglicolato de sodio, se siembre por picadura hasta el fondo. Caldo de Tarozzi.

Identificacin de Laboratorio: 1. Se debe transportar en recipientes con dixido de carbono 2. Cultivarse en medios reducidos

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3. Incubar en condiciones anaerbicas. A veces el aislamiento es difcil por la presencia de otros microorganismos en la muestra clnica. Para facilitar el aislamiento se procede de la siguiente manera: Siembra de la muestra en caldo, incubar por 24 a 37C. Calentar el cultivo a 80C/20, para destruir las formas vegetativas y no a las productoras de esporas, de esta manera se recupera C. tetani 4. Sembrar en medio slido en la mitad de la placa por 24horas a 37C, y se observa un fino crecimiento que avanza a la parte del medio no sembrado. 5. La prueba final del aislamiento de C. tetani, consiste en ver si es capaz de elaborar la toxina. Prueba en vivo, incubando a los ratones una cepa del cultivo, previamente a uno de ellos se administra antitoxina tetnica. El ratn no protegido muere con los sntomas del ttano. Resistencia: La espora no es destruida por ebullicin durante 20 minutos, se destruye en autoclave a 120C/15 minutos. Estructura Antignica: Antgeno de espora Antgeno somtico Antgeno flagelar Antgeno de toxina nico en todas las cepas

10 diferentes tipos de antignicos nico en todas las cepas y su neutralizacin con una antitoxina.

Determinacin de Patogenicidad: Parece que es necesario la asociacin con otras bacterias en la infeccin local que ayudan a disminuir el potencial de xido /reduccin en el sitio de la lesin. C. tetani, no es invasivo (no invade otros tejidos), produce un infeccin localizada Toxina tetnica Toxina Tetnica: Tetanospasmina, neurotoxna extremadamente txica, liberada por autlisis celular. La forma molecular intracelular consiste en una cadena polipeptdica, con un peso molecular de 150,000, durante su liberacin se acompaa de una
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muesca, formando 2 cadenas polipeptdicas: una de peso molecular de 100,000 y otra de peso molecular de 50,000, responsable de la actividad txica La toxina liberada por las clulas vegetativas puede alcanzar el SNC, mediante transporte axonal retrgrado o por la corriente sangunea. En el SNC, la toxina se fija a los ganglisidos en la mdula espinal y en el tallo celular e inhibe la liberacin desustancias transmisoras inhibitorias provocando hipereflexia y espasmos musculares a veces generalizados. Trismus: Contraccin del msculo masetero (maxilar inferior), risa sardnica. Contraccin de los msculos de la espalda: Posicin opisttonos. Flexin de brazos y piernas. Cualquier estmulo produce un espasmo, el dolor es intenso, el paciente permanece plenamente consciente hasta el momento de su muerte, que generalmente se da por falla respiratoria. La tasa de mortalidad es alta. Diagnstico: Se basa en el cuadro clnico, las heridas que se ven en la placa, son heridas punzantes simples, sin embargo puede ser por fracturas compuestas, levantamiento de la piel en drogadictos, la otitis externa, extracciones dentarias, cordn umbilical. Prevencin: 1. Inmunizacin activa, con toxoide, la toxina inactivada en cuanto a su actividad txica, pero no es su capacidad inmungena (en el 1 ao de vida DPT o triple). 2. Atencin apropiada de las heridas contaminadas. 3. Empleo profilctico de la antitoxina, preparada en animales o humanos, sta bloquea la toxina que an no se ha fijado en el SNC. 4. Administracin de penicilina.

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Gnero: Clostridium Especie: Clostridiun botulinun Agente etiolgico del botulismo que es una intoxicacin alimentara con un sndrome neurolgico grave. Caractersticas Morfolgicas: Bacilo recto o ligeramente curvo Gram positivo Presenta flagelos peritricos Produce esporas termorresistentes, ovales, sub terminales, cuya formacin se estimula sembrando en medios alcalinos con glucosa e incubndolo entre 20 a 25 C. No se produce esporas a temperaturas mayores. Cultivo: Anaerobio. Sus requerimientos nutricionales del microorganismo son complejos y una de las condiciones es que se cultive nicamente en medios que contienen sustancias reductoras de oxigeno e incubarlas en condiciones anaerbicas. Produce -hemlisis en agar sangre con excepcin del tipo serolgico G. Resistencia: La espora es termorresistente, resistiendo por horas a 100 C, hasta 10 minutos a 120 C. Tambin resisten a las irradiaciones. Su resistencia disminuye en presencia de pH cido y en presencia de NaCl. El tipo A es el ms letal que todos los dems tipos serolgicos y tambin es ms termorresistente que los tipos B y C. El tipo E es el ms sensible. Estructura Antignica: Presenta antgeno somtico y antgeno de espora que son nicos en todas las cepas. La toxina que es una exotoxina, que se libera cuando la bacteria muere y se lisa. De acuerdo a la toxina se distinguen siete tipos serolgicos que se designan como A, B, C (C1 y C2), D, E, F y G. Los tipos A, B y E (y en ocasiones F) son la causa principal de la enfermedad en el hombre. Los tipos A y B se vinculan con varios tipos de alimentos y el tipo E predominan en productos de pesca. El tipo produce cuello blando en aves; el tipo D botulismo en mamferos

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Determinantes de Patogenicidad: La toxina son protenas neurotxicas; formada por una cadena pesada y una ligera unidas por un puente disulfuro. La cadena pesada sirve para enlazar de manera especfica y con avidez a la placa terminal nerviosa motora para facilitar la penetracin de la cadena ligera que es la txica. La cadena ligera bloquea la liberacin de la acetilcolina en las sinapsis y en las uniones neuromusculares; como consecuencia se produce parlisis flcida. La dosis mortal para humanos est aproximadamente entre 1 a 2 g.. La temperatura ptima para la produccin de la toxina est entre 30 a 38 C. El pH se considera que debe ser mayor de 4.6. La toxina es inactivada calentando el alimento que la contiene a 100 C durante un minuto o a 75 a 85 C durante 5 a 10 minutos. Tambin por exposicin directa a la luz del sol durante cinco das. Su produccin est asociada a bacterifagos del C. botulinum, por lo que las clulas tratadas contra el bacterifago estn libres de la capacidad de producir toxinas. El proceso del tratamiento del alimento en las industrias es a 121 C por 30 minutos. Patogenia: Los sntomas aparecen de 18 a 24 horas despus de ingerir el alimento txico, estos comprenden: transtornos visuales (incoordinacin de los msculos oculares, visin doble), incapacidad para deglutir y dificultad para hablar; los signos de parlisis bulbar son progresivos y la muerte ocurre por parlisis respiratorio o cardaco. No hay fiebre. El paciente permanece totalmente consiente hasta poco antes de su muerte; la tasa de mortalidad es alta. Diagnstico de Laboratorio: Con frecuencia se puede detectar la toxina en el suero del paciente o en el alimento mediante la prueba biolgica: Se inocula a dos ratn intraperitonealmente una suspensin del suero del paciente o una suspensin del alimento, previamente a una de ellos se le administra una inyeccin con antitoxina botulnica polivalente (A, B y E); el ratn no protegido con la antitoxina desarrolla los sntomas de botulismo y muere.

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SECCIN 19: BACILOS GRAM POSITIVOS REGULARMENTE ASPOROGENOS

Gnero: Listeria Especie: Listeria monocytogenes

Caractersticas Morfolgicas: Es causa importante de una amplia gama de enfermedades en el hombre. Es un bacilo corto Gram positivo. No formador de esporas. Tienen tendencia a aparecer en cadenas cortos de 3 a 5 microorganismos, tambin puede presentar una tpica disposicin difteroide, es decir en empalizada, propiedad que puede confundir con las corinebacterias. En cultivos incubados de 3 a 6 horas a 37C predominan las formas bacilares, pero luego la forma prevalerte es la de bacilos cortos. En colonias rugosas de 3 a 5 das de cultivo se observan estructuras largas filamentosas. De 20 a 25C presenta una activa movilidad por accin de 4 flagelos peritricos, pero a 37C solo se forma un flagelo polar, esta caracterstica es til para su diferenciacin de Erysipelothrix y corinebacterias. Caractersticas de Cultivo: La temperatura ptima de crecimiento es de 37C pero pueden crecer en un amplio rango de temperatura, hasta a 2.5C. Esta capacidad de crecer a bajas temperaturas es utilizada para su aislamiento a partir de muestras que contienen una flora mixta , es decir la muestra de tejido se mantiene a 4C durante algunos das antes de ser inoculado en el medio bacteriolgico. Es anaerbico facultativo. Es un microorganismo delicado y crece bien en agar tripticasa donde las colonias son translucidas y fcilmente reconocibles por su caracterstico color verde azulado cuando se observa con luz oblicua. Tambin crece en agar sangre de carnero donde desarrolla colonias semejantes a Streptococcus de 0.5 a 1.5 mm. de dimetro y con produccin de hemlisis. Es Catalasa positiva.

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Estructura Antignica: Presenta antgenos O y H, sobre cuyas bases la bacteria se ha separado en cuatro grupos serolgicos, cada uno de ellos con uno o ms serotipos. Los serotipos Ia Ib y IVb, causan por lo menos el 90% de todas las infecciones por Listeria en todo el mundo. Determinantes de Patogenicidad: Su virulencia es multifactica y aparentemente se debe a componentes antifagocticos presentes en la superficie celular del microorganismo y tambin a productos insolubles que son excretados durante el crecimiento bacteriano como la hemolisina que es oxgeno lbil, termolbil y cuando se inyecta por va endovenosa es letal para el ratn. La hemolisina de la Listeria puede actuar durante la infeccin rompiendo las membranas, especialmente aquellas de las vacuolas fagocticas y de los lisosomas Adems, presenta el antgeno lipoltico cuyo papel en la infeccin no est claro. Los componentes de superficie que parecen intervenir en la fagocitosis impidiendo que esta se lleve a cabo en forma exitosa de tal manera que la bacteria queda parasitando los mononucleares. Las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas de los componentes de la pared celular purificada de la Listeria patgena, son notablemente similares a las endotoxinas y se cree que induce la produccin de anticuerpos que pueden reaccionar bajo condiciones apropiadas con los propios eritrocitos del hospedero, causando una lisis in vivo mediada por complemento. Los anticuerpos responsables son de la clase Ig M. Manifestaciones Clnicas: Produce una amplia variedad de sndromes clnicos, que va desde una leve enfermedad similar a la gripe, hasta la listeriosis neonatal fulminante asociada con tasas de mortalidad del 54 al 90%. En el adulto, las infecciones mayores son meningitis (55%), bacteriemia primaria (25%), endocarditis (7%) e infeccin no meningtica del SNC (6%). Ms de la mitad de estos pacientes presentan trastornos subyacentes como cncer, alcoholismo, cirrosis, diabetes o estn recibiendo drogas inmunosupresoras. Patogenia: L. monocytogenes ingresa a la sangre a travs del aparato gastrointestinal despus de la ingestin de alimentos como queso y vegetales. La protena de la superficie de la pared celular de la bacteria denominada internalina, interacta con un receptor de las clulas epiteliales promoviendo la fagocitosis
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al interior de las clulas epiteliales; luego la bacteria encerrada en el fagolisosoma es activada por el pH bajo para producir listerilisina O, la cual provoca lisis de la membrana del fagolisosoma y permite al la listeria escapar hacia el citoplasma de otra clula epitelial. Diagnstico de Laboratorio: Cultivo: Se basa en el aislamiento de la bacteria de las muestras clnicas apropiadas, dependiendo del sndrome. Los materiales usuales incluyen sangre, lquido cefalorraqudeo, lquido amnitico y secreciones genitales. La combinacin de la tcnica de enriquecimiento de la muestra en fro y el uso de la luz oblicua para el examen de las colonias es bsica. Debe hacerse tincin de Gram a partir de las muestras y examinarse en busca de los tpicos bacilos Gram positivos pleomrficos. La identificacin de un cultivo se basa en la demostracin de la -hemlisis, produccin de catalasa y la movilidad entre 20 a 25 C. Las pruebas serolgicas no son recomendadas por que presentan reaccin cruzada con otros microorganismos Gram positivos incluyendo estafilococos Inoculacin en Animales: La inoculacin de L. monocytogenes en el saco conjuntival de un conejo joven produce en 24 a 36 horas, queratoconjuntivitis purulenta (Prueba de Antn). La inoculacin en la vena marginal de la oreja del conejo provoca una notable monocitosis. La inoculacin intraperitoneal en ratones da como resultado foco de necrosis en el hgado y la muerte de los animales.

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SECCIN

20:

LOS BACILOS GRAM POSITIVOS IRREGULARMENTE ASPOROGENOS

Gnero: Corynebacterium Especie: Corynebacterium diphtheriae Caractersticas Morfolgicas: Es un bacilo Gram positivo que no forma esporas. En frotis teido aparecen en empalizadas o como clulas individuales, formando ngulos agudos unas con otras en formaciones en V o L. Estas formaciones son causadas por el movimiento en saltos que se producen cuando dos clulas se dividen. Presenta en un extremo una dilatacin que le da la forma de palo de raqueta. A lo largo del cuerpo tambin presentan grnulos metacromticos que son cmulos de polifosfatos polimerizados que le da el aspecto de rosario. Cultivo: Es facultativo, pero crece mejor en condiciones aerbicas. Se utilizan medios complejos para el aislamiento primario, para la caracterizacin de la colonia y para la produccin comercial de la toxina. Muchas cepas crecen como una pelcula crea en la superficie de medios lquidos. El medio de Lffler es til para el aislamiento primario del microorganismo, donde crece al cabo de 24 a 48 horas con una incubacin a 37 C formando diminutas colonias brillantes de coloracin blanco-griscea. Se puede incorporar tambin a este medio, sales de telurito, con la finalidad de disminuir el nmero de contaminantes y las colonias del microorganismo adoptan un color negro o gris caracterstico. En el medio con telurito se puede diferenciar tres tipos principales de colonias: Gravis, que son colonias grandes, planas, de color gris a negro, con una superficie roma. Mitis, colonias de tamao intermedio que son ms pequeas, ms negras, brillantes y ms convexas. Intermedius, son muy pequeas y lisas o rugosas.

Resistencia: Resistente a la accin de la luz, desecacin y congelamiento que muchos de los bacilos no formadores de esporas. Son destruidos por ebullicin durante un
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minuto, o por exposicin durante 58 C durante 10 minutos, son destruidos fcilmente por la mayora de los desinfectantes de uso rutinario. Estructura Antignica: La toxina, que es nica en todas las cepas. Antgeno K, que son protenas termolbiles y que se encuentran localizadas en las capas superficiales de la pared y es el responsable de la invasividad y virulencia. Antgeno O, comn en todas las corinebacterias parsitas del hombre y los animales. Es un polisacrido que contiene arabinogalactanos, es termoestable. Determinantes de Patogenicidad: Invasividad. Est dada por la cpsula. Adems tambin existe un factor que coadyuva a la virulencia que es un glucolpido txico que contiene cido corinemiclico y cido corinemicolnico. Tambin tiene factores adicionales que desempean papel importante en la invasividad, como son: neurominidasa y el N-acetilneurominato liasa, que son fuente fcilmente accesible de energa para las bacterias que habitan las membranas mucosas. Exotoxina. Es el principal determinante bioqumico de la patogenia de la infeccin y responsable esencial de todos los efectos patolgicos. Esta toxina es producida slo por cepas infectadas con un bacterifago moderado que transporta el gen estructural para la produccin de la toxina. Es secretada como una nica cadena polipeptdica no txica que adquiere toxicidad cuando sufre un clivaje en dos fragmentos funcionalmente distintos, A y B por un puente disulfuro. Ambos fragmentos son esenciales para la citotoxicidad. El fragmento B se une a los receptores especficos en la membrana celular del husped y media la entrada del fragmento A , la cual inhibe catalticamente la sntesis de protenas causando necrosis y los efectos neurotxicos. Patogenia: C. diphtheriae es el nico patgeno humano del grupo; se presenta en la naturaleza en vas respiratorias, heridas o sobre la piel de personas infectadas o de portadores normales. Se propaga por gotas microscpicas de las secreciones respiratorias o por contacto con individuos susceptibles; despus los bacilos crecen sobre las mucosas o en escoriaciones de la piel y los bacilos toxignicos comienzan a elaborar su toxina. Esta toxina se absorbe en las mucosas y provoca la destruccin del epitelio y la respuesta inflamatoria superficial. El epitelio necrosado queda embebido en un exudado de fibrina,
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eritrocitos y leucocitos de modo que se forma una pseudomembrana de color grisceo, comnmente sobre las amgdalas, faringe o laringe. La bacteria contina produciendo activamente la toxina en la membrana. Dicha toxina se absorbe y produce dao txico a distancia, como: degeneracin parenquimatosa, infiltracin grasa y necrosis en miocardio, hgado, riones y suprarrenales; con frecuencia produce dao nervioso causando parlisis del paladar blando, msculos oculares o de extremidades. La difteria en heridas o sobre la piel se observa principalmente en los trpicos; puede formarse membranas sobre una herida infectada que no cicatriza. La pequea cantidad de toxina que se absorbe durante la infeccin cutnea promueve la formacin de anticuerpos antitoxina. Diagnstico de Laboratorio: Sirve para confirmar la impresin clnica y nunca debe retrasarse el tratamiento especfico en espera del informe del laboratorio. Muestra. Frotis de lesiones nasales, farngeas o de otras regiones bajo sospechas, antes de administrar antimicrobianos. Frotis. Con azul de metileno alcalino o tincin de Gram, muestran bacilos en forma de rosario, agrupadas en formas de V o L. Cultivo. En los medios indicados con anterioridad para observar las caractersticas de crecimiento. Todo cultivo parecido al de la difteria debe someterse a una prueba de virulencia antes de hacer el diagnstico bacteriolgico de difteria. Se pueden hacer de la siguiente manera: 1. Prueba in vivo: Un cultivo en agar inclinado de Lffler se emulsiona en agua y se inyecta 4 ml. por va subcutnea a dos cobayos a uno de los cuales se administra 2 horas antes 1000 a 2000 unidades de antitoxina por va intraperitoneal. El animal no protegido debe morir en 2 o 3 das, en tanto que el animal protegido sobrevive. 2. Prueba in vitro: Se satura una tira de papel de filtro con antitoxina y se coloca sobre una placa de agar que contenga 20 % de suero de caballo. Los cultivos que deben someterse a la prueba de toxicidad, se extienden en bandas a travs de la placa en ngulo recto con el papel filtro. Despus de 48 horas de incubacin, la antitoxina que se difunde a partir de la tira de papel precipita la toxina que se difunde a partir de los cultivos toxignicos y se producen lneas irradiadas desde la interseccin de la tira con las bacterias en crecimiento.

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SECCIN 29: STREPTOMYCES Y GENEROS RELACIONADOS

Gnero: Streptomyces Especie: Streptomyces griseus Streptomyces (Waksman y Henrici, 1947): Es uno de los gneros ms caractersticos y conocidos de la divisin Actinobacteria, la cual agrupa a bacterias filamentosas. Los actinomicetos, histricamente, se han venido agrupando segn criterios morfolgicos, tales como la capacidad de formar filamentos ramificados y esporas, los cuales ha llevado durante largo tiempo a ser confundidos con hongos. Por ser considerado saprfitos, el papel como patgenos de los Streptomyces est relacionado con el hecho de ser agentes etiolgicos de actinomicetomas; sin embargo an no est bien definido su papel como agentes productores de infecciones sistmicas. Los Actinomicetos estn ampliamente distribuidos en la mayora de tipos de suelo y en la vegetacin descompuesta en todas las zonas climticas, y por sus propiedades bioqumicas y metablicas, as como por su participacin en la descomposicin de tejidos animales y vegetales en el humus, son miembros importantes del sistema de descomposicin del suelo. La mayora produce esporas (tambin denominadas conidios) en los extremos de las hifas areas. Streptomyces se caracteriza por poseer una morfologa particular en donde se diferencian dos formas de crecimiento, una primaria o asimilatoria y una secundaria o reproductiva. El gnero es de gran importancia biotecnolgica debido a que como metabolitos secundarios produce antibiticos que son de amplio uso en medicina humana y veterinaria, as como compuestos represores de tumores, enzimas y vitaminas. A pesar de la importancia de Streptomyces como uno de los elementos caractersticos de las poblaciones microbianas edficas, se conoce poco acerca de su comportamiento en este ambiente, siendo reconocida la necesidad actual del estudio de la distribucin del gnero en diferentes regiones climticas y ecolgicas. Se encuentran reportadas numerosas formas de deteccin e identificacin de aislamientos de Streptomyces; la ms reconocida y empleada es la tcnica de cultivo de enriquecimiento, en donde mediante la formulacin de un medio de cultivo con los nutrientes apropiados y la utilizacin de condiciones de crecimiento adecuadas, es posible obtener aislamientos primarios de microorganismos particulares. Una metodologa alternativa, independiente del aislamiento, se basa en la amplificacin de los genes ribosomales y su anlisis por secuenciacin, patrones de restriccin o electroforesis en geles con gradientes desnaturalizantes, para definir la diversidad gentica de las comunidades bacterianas en el ambiente. La identificacin de estas bacterias sigue siendo difcil, y an hoy en da su diagnstico y clasificacin principalmente se basa en el estudio de las
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caractersticas morfolgicas (macro y microscpicas), en las quimiotaxonmicas y en las bioqumicas Gram positivas, aerobias, catalasa positiva, quimiorganotrofas, no se colorean con la tcnica de Ziehl-Neelsen ni de Kinyoun (decoloracin por acido sulfrico al 2%), producen filamentos (o micelios) largos (por lo general de 0.5 a 1.0 m de dimetro y una longitud indefinida), muy ramificados y que no se fragmentan, filamentos areos pueden ser rudimentarios o extensos y pueden estar embellecidos por espirales, enroscamientos o ramificaciones mltiples, los filamentos areos de muchas especies producen esporas (comnmente llamadas conidias), con frecuencia en cadenas, estas pueden ser rectas o flexuosas, enruladas o espiraladas. A menudo carecen de paredes transversales en la fase vegetativa. La superficie de la espora puede ser lisa, rugosa o espinosa. Forma pigmentos asociados con las esporas (azules, verdes, grises, rojos, violetas, blandos o amarrillos). Presenta diversas enzimas como las proteinasas y las hidrolasas. G + C = 69 78 mol %. Pared celular con cido diaminopimlico (L-DAP), glicina, ausencia de polisacridos o cidos miclicos (L-DAP especfico de Stretomyces, Nocardioides e Intrasporangium). La menaquinona predominante es la de tipo MK-9. A diferencia de Norcardia, Streptomyces no reduce nitratos o nitritos. Hidrolizan con rapidez la casena e hidrolizan ms lentamente la xantina y la tirosina. Las tierras alcalinas y neutras son las ms favorables para el desarrollo de Streptomyces que los suelos cidos. Las colonias presentan aspectos ceroso, de aspecto polvoroso, de color blanco grisceo, comn en la mayora de los Streptomyces, variando del color crema al negro, como sucede con S. somaliensis; sin embargo, estos aspectos no son especficos, y dependen de las condiciones de cultivo. Son pegajosas y se adhieren al agar debido a que los filamentos profundos penetran en el medio y ancla la colonia. Crecen en medios simples o complejos (medios Saboraud, Ben-nett, Lowenstein-Jensen) formando filamentos ramificados (hifas) areas, que poseen cadenas de conidias que no se fragmentan. Son los nicos que forman micelios areos en los cultivos. Los cultivos muestran su crecimiento entre dos a diez das, cultivados a temperaturas de 37 C o, an mejor, a 30 C. En cultivos estacionarios en caldo los microorganismos se desarrollan en la superficie como una alfombra hasta que se sumergen debido a su propio peso. En cultivos lquidos aireados y agitados se desarrollan en microcolonias esfricas y no producen filamentos areos Son los actinomicetos ms abundantes de la naturaleza. Se encuentran de forma natural unos pocos centmetros por debajo de la superficie del suelo, en el agua y en los restos orgnicos. Dan el olor caracterstico a los suelos (olor a tierra mojada) por la geosmina. Unas pocas especies producen infecciones en el ser humano (S.somaliensis, S.griseus, S.paraguayensis). Afectan a cultivos como la papa ( S.scabies, S.acidiscabies, S.turgidiscabies) Capaces de degradar sustancias complejas lignocelulosa, quitina o peptidoglicano contribuyendo notablemente a la mineralizacin de estos compuestos en el suelo y compostaje.
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Tienen gran importancia en los campos de la industria y farmacutico como los principales productores de antibiticos p. ej.: S.aureofaciens (tetraciclina), S.erythraeus (eritromicia), S.fradiae (neomicina), S.griseus (estreptomicina), S.racemosus (terramicina), S.venezuelae (cloranfenicol), etc. Streptomyces producen ms de 6000 productos qumicos distintos entre agentes antibacterianos, antifngicos, agentes antitumorales, antihelmnticos e inmunosupresores. Antibiticos antifngicos Nistatina (S. noursei) Anfotericina B (S. nodosus) Pimaricina (S. natalensis) Antibiticos antibacterianos Eritromicina (S. erythreus) Espiramicina (S. ambofaciens) Neomicina (S. fradiae) Estreptomicina (S. griseus) Tetraciclina (S. rimosus) Vancomicina (S. orientalis) Rifamicina (S. mediterranei) Cloranfenicol (S. venezuelae) Daptomicina (S. roseosporus) Inmunosupresores Tacrolimus (S. tsukubaensis) Sirolimus (S. hygroscopicus) Diferenciacin de las Especies: Entre 1949 y 1957 ms de mil especies han sido descritas en el gnero Streptomyces, llegando a aumentar el nmero hasta 3.100 a partir de 1970, basndose los criterios en los aspectos morfolgicos y la pigmentacin de los cultivos. Actualmente pueden estar inventariadas 300 especies. La identificacin de la especie requiere numerosas pruebas fenotpicas; no es necesario hacerlo para el diagnstico en el laboratorio de rutina. Biologa Molecular: Para la identificacin del gnero entre los actinomicetos ha sido establecido un mtodo de PCR-RFLP, por el equipo de Steingrbe, utilizando los eslabones complementarios de la Heat Shock Protein (hsp 65). Para la identificacin de la especie se utiliza la amplificacin por PCR de los ARN 16s.

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Epidemiologa: Estas bacterias estn ampliamente distribuidas en el medio ambiente. S. somaliensis, prefiere los suelos ridos arenosos, y su localizacin ha sido principalmente reportada en frica, Arabia, Mxico y Amrica del Sur (Brasil y Venezuela). S. paraguayensis y otros Streptomyces sp. han sido aislados de suelos, de vegetales en descomposicin y de plantas. A excepcin principalmente de S. somaliensis, el cual ha sido identificado como uno de los agentes etiolgicos del actinomicetoma (en Arabia Saudita, Nigeria, Nger, Sudn, Somalia, frica del Sur, Venezuela y Estados Unidos), estas bacterias han sido clsicamente consideradas como saprfitas, y la evaluacin de su rol en patologa humana es an no bien conocida. A los Streptomyces les corresponde un 15,4% de las cepas de actinomicetos aerobios aislados de las muestras clnicas recibidas en el Centro para Control de las Enfermedades y Prevencin de Atlanta, EUA, entre los aos de 1985 y 1988, siendo S. griseus la especie aislada con mayor frecuencia despus de Nocardia asteroides y Actinomadura madurae. Las muestras positivas correspondieron en orden de frecuencia a las de expectoraciones, de heridas, de sangre y de cerebro. En un estudio de Mishra, este tercer lugar ha sido confirmado, despus de Nocardia asteroides y N. brasiliensis. En el Instituto Pasteur de Pars, en el Centro Nacional de Referencia de Micosis Humanas de Antifngicos y Actinomicetos, la proporcin de los Streptomyces en 1998 fue de 27% de los aislamientos clnicos recibidos. Aspectos Clnicos: A pesar del importante nmero de especies pertenecientes al gnero Streptomyces, solamente tres especies se relacionan como patgenos en humanos; estas son: S. somaliensis, S. griseus y S. paraguayensis. El papel como patgeno oportunista de los Streptomyces tiende a definirse frente al creciente nmero de infecciones sistmicas reportadas en la literatura, tales como: peritonitis), pericarditis crnica, septicemia, paniculitis, absceso cerebral, linfadenitis cervical, neumopata nodular en sujetos seropositivos a VIH, endocarditis, sobreinfeccin pleural y neumona. Sin embargo, otras especies como S. albus, S. coelicolor y S. violaceoruber han sido aisladas de caries dentarias, de expectoraciones, de muestras de amgdalas, de sangre y cutneas, sin que el rol principal como patgenos sea reconocido.

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Tratamiento: Para el tratamiento de las infecciones por los actinomicetos aerobios, son principalmente utilizados los siguientes antibiticos o quimioteraputicos: estreptomicina, en asociacin con dapsona, o el trimetroprim-sulfametoxazol. Segn McNeil, los antibiticos ms activos in vitro seran la amikacina (100% de cepas sensibles), la minociclina (90%), la eritromicina (86%), la doxiciclina, el imipenem (81%) y la ceftriaxona (80%). El 29 % de las cepas de S. griseus se mostraron resistentes in vitro al trimetroprim-sulfametoxazol.

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SECCIN 30: LOS MYCOPLASMAS

Gnero: Mycoplasma Especie: Mycoplasma pneumoniae Mycoplasma: Pertenece a la clase Mollicutes, que incluye bacterias que tienen genomas pequeos, carecen de una pared celular y tienen un bajo contenido de GC (18-40%). La familia Mycoplasmataceae contiene dos gneros que infectan a humanos: Mycoplasma y Ureaplasma, a los que usualmente se les menciona simplemente como mycoplasmas. Aunque hay muchas especies de mycoplasmas, slo cuatro se reconocen como patgenos de humanos: Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium y Ureaplasma urealyticum. Existen muchas otras espcies que han sido aisladas a partir de humanos, pero su papel en la enfermedad no est bien establecido. En la Tabla 1 se presentan las enfermedades causadas por M. pneumoniae, M. hominis, M. genitalium y U. urealyticum. Tabla 1. Enfermedades causadas por mycoplasmas. ORGANISMO M. pneumoniae ENFERMEDAD Enfermedad respiratoria del tracto superior, traqueo bronquitis, pulmona atpica Pelonefritis, enfermedad inflamatoria plvica, fiebre del post parto (puerperal Uretritis no gonoccica Uretritis no gonoccica

M. hominis M. genitalium U. urealyticum Morfologa y Fisiologa:

Los mycoplasmas son las bacterias ms pequeas de vida libre. Su tamao va de 0.2 0.8 micrmetros, por lo cual pueden atravesar algunos filtros utilizados para la eliminacin de bacterias. Adems poseen el genoma con el tamao ms pequeo y como un resultado, han sufrido la prdida de algunas rutas metablicas, por lo que se requiere de un medio complejo para su aislamiento. El mycoplasma es un anaerobio facultativo, excepto M. pneumoniae, el cual es un aerobio estricto. Una caracterstica tpica que distingue al mycoplasma de otras bacterias, es la falta de la pared celular. As, ellos pueden asumir mltiples formas incluyendo formas redondas, en forma de pera e incluso la forma filamentosa.

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El mycoplasma crece lentamente por fisin binaria y produce colonias en forma de huevo frito en las placas de agar; las colonias de M. pneumoniae tienen una apariencia granular. Debido al lento crecimiento de mycoplasma, las colonias pueden tomar hasta tres semanas para desarrollarse y ser generalmente muy pequeas. Las colonias de Ureaplasma son extremadamente pequeas, por lo cual al Ureaplasma se les llama tambin tiny strains o cepas-T (T-strains). El mycoplasma requiere de esteroles para su crecimiento y sntesis de membrana. La tres especies pueden ser diferenciadas por su habilidad de metabolizar la glucosa (M. pneumoniae), la arginina (M. hominis) o la urea (U. urealyticum). La cuarta especie M. genitalium es muy difcil de cultivar. Patognesis: A. Factores de adherencia - Los mycoplasmas son patgenos extracelulares que se adhieren a superficies epiteliales celulares. As, las protenas de adherencia son uno de los factores de mayor virulencia. La protena de adherencia en M. pneumoniae se ha identificado como una protena de 168 kD llamada P1. La adhesina P1 se localiza en la punta de las clulas bacterianas y se une con los residuos de cido silico localizados en las clulas epiteliales del hospedero. La naturaleza de la adhesinas en las otras especies no ha sido establecida. La colonizacin del tracto respiratorio por M. pneumoniae da como resultado el cese del movimiento ciliar. Los mecanismos normales de despeje del tracto respiratorio no funcionan, lo cual resulta en una contaminacin del mismo y el desarrollo de una tos seca. B. Productos metablicos txicos - La ntima asociacin del mycoplasma con las clulas husped proporciona un ambiente en el cual los productos metablicos txicos se acumulan, daando a los tejidos del husped (Figura 1). Ambos, el perxido de hidrgeno y el anin superxido, son productos del metabolismo de mycoplasma que han sido implicados en la patognesis de los tejidos infectados, ya que en los tejidos infectados se han encontrado lpidos oxidados del husped. Adems, se ha demostrado que el mycoplasma inhibe la actividad de la catalasa de la clula husped, con lo que se aumentan las concentraciones del perxido. C. Inmunopatognesis Los mycoplasmas pueden activar a los macrfagos y estimular la produccin de citocinas y la activacin de linfocitos (M. pneumoniae es un super-antgeno). As, se ha sugerido que los factores del husped pueden contribuir a la patognesis, la evidencia experimental en animales sostiene esta sugerencia. La ablacin de la funcin del timo antes de la infeccin con M. pneumoniae previene el desarrollo de neumona y en animales en los cuales se restaura la funcin del timo, la neumona se
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desarrolla en una tasa exacerbada. Datos epidemiolgicos en humanos sugieren que es necesario que se presenten repetidas infecciones antes de que se observe la enfermedad, de nuevo, sugiriendo que los factores del husped tienen un papel relacionado con la patognesis; la mayora de los nios se infecta entre los 2-5 aos de edad, pero la enfermedad es ms comn en nios de 5-15 aos de edad. Mycoplasma pneumoniae: A. Epidemiologa La neumona causada por M. pneumoniae ocurre a nivel mundial y no se ha observado ningn incremento por actividad estacional. Sin embargo, las epidemias ocurren cada 4 a 8 aos. La enfermedad se disemina por contacto cercano va gotitas de aerosol y por tanto se facilita el contagio en poblaciones confinadas o hacinadas (por ejemplo, entre las familias, en las escuelas, barracas del ejrcito). La enfermedad es propia de nios (5 - 15 aos de edad). B. Sndrome clnico - El sndrome clnico ms comn seguido de la infeccin con M. pneumoniae es la traqueo bronquitis, la cual se observa en un 7080% de las infecciones. Aproximadamente una tercera parte de las personas infectadas podra desarrollar neumona, la cual es generalmente leve pero de duracin larga. La neumona causada por este agente se ha denominado: neumona atpica primaria y neumona ambulatoria. El perodo de incubacin despus de la infeccin, es de aproximadamente dos a tres semanas en el que se observan gradualmente fiebre, dolor de cabeza y malestar. Estos sntomas pueden estar acompaados de una tos persistente no productiva. Los sntomas respiratorios aparecen posteriormente y persisten por algunas semanas. De forma interesante, en la neumona por M. pneumoniae el examen de rayos X podra mostrar los signos de neumona inclusive antes de que aparezcan los sntomas respiratorios. Los organismos pueden cultivarse a partir del esputo antes de que los sntomas ocurran y durante el curso de la enfermedad. La resolucin de la enfermedad es lenta pero raramente fatal. Esta enfermedad se debe diferenciar de otras neumonas atpicas C. Inmunidad La activacin de la va alterna del complemento y las clulas fagocticas, tienen un papel en la resistencia a la infeccin. A medida que la infeccin avanza, los anticuerpos tienen un papel importante en el control de la infeccin, particularmente la IgA. Sin embargo se ha asociado el desarrollo de un tipo de hipersensibilidad retardada, con la severidad de la enfermedad, lo que sugiere que la patognesis es al menos, en parte, una inmunopatognesis.
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D. Diagnstico de laboratorio - En etapas tempranas de la infeccin, el diagnstico podra realizarse en la clnica. Sin embargo, cuando la infeccin progresa, se puede disponer de diversas pruebas de laboratorio. 1. Microscopa - No es particularmente til, debido a la ausencia de la pared celular, pero podra ser de utilidad al descartar la participacin de otros posibles patgenos. 2. Cultivo - Esputo (generalmente escaso) o bien lquidos de lavado farngeo deben ser enviados al laboratorio en un medio de transporte especial. Obtener una identificacin positiva puede tomar de 2 -3 semanas. El cultivo es esencial para un diagnstico definitivo 3. Serologa. Prueba de fijacin de complemento La prueba de fijacin del complemento es una buena opcin, presenta alta sensibilidad y especificidad. Sin embargo, los ttulos no alcanzan su mximo hasta las 4 - 6 semanas despus de la infeccin. Un incremento de 4 veces el ttulo es indicativo de una infeccin reciente. Ya que los niveles de anticuerpos pueden persistir hasta 1 ao, un ttulo alto sostenido no necesariamente indica que la infeccin est actualmente presente. Aglutininas en fro - Aproximadamente del 34% a 68% de pacientes con infeccin de M. pneumoniae desarrollan aglutininas en fro. Las aglutininas en fro son anticuerpos que aglutinan con eritrocitos humanos a 4C pero no a 37C. El antgeno ante el cual son dirigidos los anticuerpos es el antgeno I. Estos anticuerpos se producen antes que los anticuerpos de la fijacin del complemento y despus declinan ms rpidamente. Las aglutininas en fro no son especficas para infecciones por M. pneumoniae, estas tambin podran aparecer en otras infecciones y otras enfermedades (por ejemplo mononucleosis infecciosa, infecciones por influenza, enfermedad de aglutininas en fro, leucemia). Sin embargo, si un paciente presenta signos clnicos de infecciones por M. pneumoniae, se puede realizar un diagnstico presuntivo. ELISA Existe un nuevo ELISA para IgM que se ha sido utilizado para el diagnstico de la infeccin aguda. Es sensible y especfico. Sin embargo, an no est disponible comercialmente. Tratamiento y Prevencin - Ya que mycoplasma carece de pared celular, las penicilinas y cefalosporinas no son eficaces. Los antibiticos de eleccin son las tetraciclinas (solamente en adultos) y la eritromicina. La prevencin es un problema debido que la enfermedad es de larga duracin y es complicado el aislar a los pacientes por largo tiempo, con la intencin de evitar el contagio por contacto cercano. No hay vacunas disponibles actualmente

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Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum: A. Sndromes clnicos: M. hominis se ha asociado con pelonefritis, enfermedad inflamatoria plvica y fiebre post-parto (fiebre puerperal). El U. urealyticum se asocia con uretritis no gonoccica. B. Epidemiologa: La colonizacin con M. hominis y U. urealyticum puede ocurrir durante el nacimiento pero en la mayora de los casos la infeccin se autolimita. Slo en un pequeo nmero de casos la colonizacin persiste. Sin embargo, las tasas de colonizacin se incrementan cundo los individuos comienzan a ser sexualmente activos. Aproximadamente el 15% se colonizan con M. hominis y entre un 45% a 75% con U. urealyticum. Se trata de portadores asintomticos aunque los microorganismos pueden ser patgenos oportunistas. C. Diagnstico de laboratorio - El diagnstico de Laboratorio es a travs de cultivo. D. Tratamiento y Prevencin - Tratamiento debido a que los mycoplasmas carece de pared celular, las penicilinas y cefalosporinas son ineficaces. Los antibiticos de eleccin son tetraciclina (solamente adultos) y eritromicina. Como medidas de prevencin son apropiadas bien la abstinencia o el uso de barreras fsicas de proteccin.

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REFERENCIAS SELECCIONADAS: ALAMANOS et al., 2000: A community waterborne outbreak of gastro-enteritis attributed to Shigella sonnei. Epidemiology and Infection, 125:499503. BRADSHAW J. 1995. Microbiologa de Laboratorio. 5ta. edicin. El Manual Moderno. Mxico. 235 p. BROCK, T. D. MADIGAN, M.T. 2003. Microbiologa. 10 Edicin. Edit. Prentice Hall Hispanoamericana S.A. Mxico. GAMAZO C, LOPEZ I, DIAZ R. 2005. Manual Prctico de Microbiologa. 3 edicin, Editorial Masson, S. A Barcelona Espaa. GRANADOS R, VILLAVERDE M. 1997. Microbiologa. Bacteriologa: caractersticas y clasificacin. Editorial Paraninfo. Madrid. Espaa. HOLT J (ed.). 1993. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. William & Wilkins. Baltimore. 653 p. INSTITUTO NACIONAL DE SALUD 1999. Bioseguridad en los laboratorios. Lima-Per. JAWETZ, E. Melnick J.L.; ADELBERG. et.al. 2008. Microbiologa Mdica. 19 Edicin. Edit. Manual Moderno S.A. Mxico. JOKLIK W, WTLLET H and AMOS H. 1998. Microbiologa de Zinzzer. 20ava. edicin. Edit. Mdica Panamericana. Bs.As. 1453 p. MENDO R 1995. Medios de Cultivo en Microbiologa. 4ta. edicin. Edit. Trilce S.A. UNMSM. Per. 134 p. MURRAY, P. R, et. al. 2002. Microbiologa Mdica. 4 Edicin. Edit. Grficos, S.A. Espaa. PEGRAM GC, ROLLINS N Y ESPAY Q, 1998: Estimating the cost of diarrhoea and epidemic dysentery in Kwa-Zulu-Natal and South Africa. Water SA, 24:1120. PRESCOTT. L. M.; HARLEY. J. P.; KLEIN. D. A. 2002. Microbiologa. 5 Edicin. Edit. Mac Graw Hill-Interamericana. Espaa. ROMERO, C.R. 2007. Microbiologa y Parasitologa Humana. 3 Edicin. Edit. Mdica Panamericana S.A. Mxico. TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. 2007. Introduccin a la Microbiologa. 9 Edicin. Edit. Mdica Panamericana. Buenos AiresArgentina. WARREN L. 2006. Microbiologa e Inmunologa Mdica. 8 edicin. Ed. Mc Grow - Hill - interamericana. Espaa. WASHENTON C, STEPHEN D, WILIAM M, GARY W, PAUL C y GAIL L 2008. Diagnstico Microbiologico. 6 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires.

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