NP.

DADV-A01-I03 Determinaciones, metodología y criterios de aceptación por

parámetro de validación/verificación.
Versión 1

Los métodos analíticos utilizados para evaluar la calidad de los productos farmacéuticos, están sujetos
a varios requisitos de acuerdo a la normatividad vigente, así como, con otros documentos normativos
nacionales e internacionales

La validación/verificación de un método es el proceso que establece, mediante estudios de laboratorio;

que las características de desempeño del método, satisfacen los requisitos para su aplicación
analítica.

En base a la metodología analítica, los métodos analíticos se clasifican en cuatro categorías, ya que
requieren diferentes esquemas de estudio, las cuales están indicadas en la tabla 1:

Tabla 1. Clasificación de los métodos analíticos de acuerdo a su categoría

Categoría Descripción del método

Categoría I Métodos analíticos para cuantificar a un componente específico en muestras de

producto terminado o en pruebas de estabilidad, ya sea en fármacos, aditivos o
preparados farmacéuticos, u otros analitos de interés (conservadores, solventes, etc.).

Categoría II Métodos analíticos para la determinación de impurezas (productos de degradación,

sustancias relacionadas, solventes, isómeros ópticos, etc.) en muestras de fármacos,
preparados farmacéuticos y aditivos. Estos métodos pueden incluir determinaciones
cuantitativas o pruebas límite. En estas últimas, el interés es establecer si el analito,
excede o no, un valor límite. Los métodos de pureza quedan incluidos en esta
categoría.

Categoría III Métodos analíticos utilizados en la determinación de un analito en una muestra con el
objeto de evaluar una característica de desempeño del preparado farmacéutico
(disolución, liberación controlada, entre otras).

Categoría IV Pruebas de identificación de un analito en muestras de fármacos, aditivos o

preparados farmacéuticos, cuyo propósito es establecer la presencia del analito de
interés.

(RB: 1, 2, 3 y 4.)

De acuerdo la categoría el método y si se trata de una verificación o validación del método

analítico, se deben realiza los parámetros que le correspondan conforme la tabla 2 para una
validación o tabla 3 para una verificación.
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parámetro de validación/verificación.
Versión 1

Tabla 2. Características de desempeño analítico recomendadas para la validación de un método de acuerdo a

su categoría.

Categoría II
Características de
Categoría I Cuantitativas Pruebas Categoría III Categoría IV
desempeño
límite

Especificidad/
SI SI SI * SI
Selectividad

Verificación
(adecuabilidad) SI SI SI SI NO
del sistema

Precisión del
SI SI * NO NO
sistema

Linealidad del
SI SI * * NO
sistema y Rango

Linealidad de
SI SI * * NO
método y Rango

Exactitud de
SI SI * * NO
método

Precisión de
método: SI SI NO SI NO
REPETIBILIDAD

Estabilidad
Analítica de la SI SI NO NO NO
muestra (3,6)

Precisión de
método:
SI SI NO SI NO
PRECISION
INTERMEDIA

Límite de
* * SI * *
detección

Límite de NO SI NO * NO
cuantificación

Robustez SI SI * * *

Tolerancia (1) * * * * *

* Puede ser opcional dependiendo la naturaleza del método y su aplicación.

Tabla 3. Características de desempeño analítico recomendadas para la verificación de un método de acuerdo

a su categoría.

Categoría II
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parámetro de validación/verificación.
Versión 1
Características de Categoría Cuantitativas Pruebas Categoría Categoría
desempeño I límite III ** IV

Especificidad/ SI SI SI NO SI
Selectividad

Verificación SI SI SI SI NO
(adecuabilidad) del
sistema

Precisión del SI SI * NO NO
sistema

Linealidad del SI SI * NO NO
sistema y Rango

Linealidad de NO NO NO NO NO
método y Rango

Exactitud de SI SI * NO NO
método

Precisión de NO NO NO NO NO
método:
REPETIBILIDAD

Estabilidad * * NO NO NO
Analítica de la
muestra (3,6)

Precisión de NO NO NO NO NO
método:
PRECISION
INTERMEDIA

Límite de * * SI * NO
detección

Límite de NO * NO * NO
cuantificación

Robustez NO NO * * *

Tolerancia(1) * * * * *

* Puede ser opcional dependiendo la naturaleza del método

** En la categoría III las características de desempeño son determinadas en el instrumento y/o equipo,
mientras que en el sistema de medición se realizan las características de desempeño de Especificidad,
Exactitud, Limite de detección, Limite de cuantificación y Linealidad del sistema.

A continuación se describen los lineamientos generales para cada característica de desempeño, en

términos de su definición, ejecución en el laboratorio y del análisis de los resultados
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parámetro de validación/verificación.
Versión 1
A. Especificidad/selectividad. (RB: 1 y 3)

La especificidad/ selectividad permiten investigar la influencia de otros componentes de la muestra

en las determinaciones cualitativas o cuantitativas de un método analítico.

Definición. La especificidad/selectividad, es la capacidad de un método analítico para obtener una

respuesta debida únicamente al analito de interés y no a otros componentes de la muestra, que
pueden estar presentes (especificidad) o que se pudieran presentar por efectos ambientales y/o de
interacción con los mismos componentes (selectividad) tales como: impurezas, productos de
degradación o componentes de la misma muestra.

Determinación. Para determinar la especificidad, se debe demostrar que la respuesta se debe

únicamente al analito.

Para el caso de especificidad se debe determinar, la respuesta a componentes como: aditivos,

sustancias auxiliares, sustancias relacionadas estructuralmente al fármaco, etc. Para el caso de
selectividad se debe determinar la respuesta a componentes como: sustancias de degradación del
fármaco originadas por la influencia de las condiciones de almacenamiento (temperatura,
humedad, luz, etc.) o por condiciones extremas (hidrólisis, oxidación, etc.).

Análisis de datos. Se debe presentar evidencia de que la respuesta analítica del método sea
debida únicamente al analito.

B. Verificación del sistema (Adecuabilidad del sistema en cromatografía). (RB: 1)

Si las mediciones son susceptibles a los cambios de las condiciones analíticas, éstas deben ser
controladas adecuadamente o debe incluirse en el método una nota de precaución al respecto; por
lo que es conveniente establecer una serie de pruebas de la verificación del sistema, que aseguren
un correcto funcionamiento del método, durante su uso rutinario.

Las pruebas de verificación del sistema se basan en el concepto de que: el equipo e instrumento
de medición, las operaciones analíticas y las muestras que van a ser analizadas constituyen un
sistema integral, que puede ser evaluado como tal. Las características que se establecen como
representativas de la verificación, dependen del tipo de método a ser evaluado. Estas son
importantes especialmente en el caso de los métodos cromatográficos.

Definición. La verificación del sistema son pruebas utilizadas para verificar que el sistema funciona
correctamente, con base en criterios establecidos previamente.

Esta verificación permite establecer la confiabilidad del sistema, antes del procesamiento de las
muestras durante el uso rutinario del método; también se le conoce como buen o correcto
funcionamiento del sistema.

Determinación. En función del sistema de medición, se deben establecer las características

relacionadas con su funcionamiento correcto, basadas en el tipo de equipo e instrumentación
utilizado en el método. Éstas pueden ser definidas en función de una respuesta analítica, como
puede ser sus propiedades, su variabilidad, su forma, su tiempo de respuesta, indicadores de
separación, indicadores de eficiencia, respuesta de blancos, entre otros.

En la fase de desarrollo del método, las características mencionadas anteriormente y sus criterios
de aceptación deben ser establecidas; durante la validación, la verificación debe ser únicamente
verificada.
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parámetro de validación/verificación.
Versión 1
Análisis de datos. Los criterios de aceptación deben ser cumplidos.

C Precisión del sistema (RB: *1)

El sistema: analista, equipo e instrumento de medición, soluciones de referencia, etc., originan una
variabilidad inherente asociada a la respuesta analítica (absorbancia, transmitancia, mililitros
consumidos, área del pico, altura del pico, área relativa, peso, entre otros), que en general es
aditiva a la del método, por lo que, es importante verificar, que su valor no sea una fuente
importante de la variabilidad.

Definición. La precisión del sistema es el grado de concordancia relativa de la respuesta analítica

de soluciones de referencia de concentración o magnitud conocida.

Determinación. A partir de una sustancia de referencia, el analista debe preparar por lo menos
seis soluciones que representen al 100% de la cantidad o concentración del analito en la muestra,
ya sea, por dilución o concentración del analito en la muestra, ya sea, por dilución o por pesadas
independientes y medir la respuesta dentro de una misma corrida analítica.

Análisis de datos. Calcular el coeficiente de variación de la respuesta analítica. Este valor debe
cumplir con un criterio previamente establecido en función de la naturaleza de la respuesta
analítica (física, química o biológica) o de la categoría del método.

D. Linealidad del sistema y Rango (RB = 1, 2 y 4).

Cuando la relación entre la concentración y la respuesta del analito (o sus transformaciones

matemáticas) no es lineal dentro del intervalo de trabajo, dará lugar a inexactitud del método
analítico, por lo que, es conveniente verificarlo bajo las condiciones del laboratorio.

Definición. La linealidad del sistema es la verificación de que la respuesta analítica y la

concentración del analito (puede ser una sustancia de referencia) se ajustan al método
matemático, en un intervalo de concentraciones pertinentes a la aplicación analítica.

Determinación. Se debe investigar la relación concentración-respuesta en un intervalo que incluya

al menos 5 niveles, por triplicado, de la concentración del analito. El intervalo debe incluir las
concentraciones esperadas del analito según la aplicación analítica del método.

Este concepto generalmente se denomina “curva de calibración” y es parte esencial de varios

métodos analíticos en las determinaciones cuantitativas del analito.

Análisis de datos. Estimar los parámetros del modelo basado en métodos (mínimos cuadrados,
máxima verosimilitud, etc.). Deben establecerse criterios de aceptación para definir la calidad de
ajuste al método, que como mínimo consideren un efecto significativo del método, una magnitud
mínima del coeficiente de determinación o una prueba estadística de falta de ajuste. Establecer el
rango de concentración en el que es lineal el sistema.

E. Linealidad del método y Rango.

(RB: 4 y 1)

Todo método analítico no debe presentar sesgo (error sistemático) dentro del intervalo de
cuantificación, por lo que es necesario seleccionar al menos tres niveles de concentración
 NP.DADV-A01-I03 Determinaciones, metodología y criterios de aceptación por
parámetro de validación/verificación.
Versión 1
(intervalo) que permitan demostrar exactitud y linealidad. Es necesario que el intervalo incluya los
límites de especificación de la aplicación analítica del método.

Definición de Linealidad. Es la capacidad de un método analítico para dar resultados que son
directamente proporcionales a la concentración del analito (sin sesgo) dentro de un intervalo dado.

Definición de intervalo: Es el intervalo comprendido entre las concentraciones superior e inferior

del analito (incluyendo dichas concentraciones) y para el que se ha demostrado que el analito es
cuantificado con un nivel satisfactorio de precisión, exactitud y linealidad, cuando se aplica el
método analítico.

Determinación de la Linealidad: En el estudio de laboratorio la linealidad, puede determinarse

por la aplicación del método analítico, a una muestra (placebo adicionado o muestra adicionada de
analito), obtenida de acuerdo a un procedimiento específico para su preparación. Dicha muestra
debe ser preparada a tres niveles de concentración del analito por triplicado, para ser analizadas
aplicando del método analítico. Si no es posible obtener muestras que contenga todos los
componentes del producto, la linealidad puede determinarse por comparación de los resultados
obtenidos, aplicando el método en estudio, con los resultados obtenidos al aplicar un segundo
método, bien caracterizado, en los tres niveles de concentración seleccionados. Para el caso de
los métodos analíticos comprendidos en la categoría II, el nivel inferior del intervalo debe ser
establecido a una concentración apropiada.

Como anteriormente se recomendó, las concentraciones seleccionadas para la linealidad, debe ser
como mínimo tres concentraciones y considerar los siguientes intervalos, en función de la
aplicación del método:

Categoría I

 Cuantificación de un fármaco: (materia prima o de un producto terminado): de 80 % a

120% del contenido de marbete.

 Uniformidad de contenido: de 70% a 130% de la concentración declarada en el marbete, a

menos que se justifique un intervalo masa amplio, basado en la naturaleza de la forma
farmacéutica (por ejemplo MGA 0021 inhaladores de dosis medida)

Categoría II

 Cuantificación de impureza: de 50% a 120% del contenido de la especificación.

Categoría III

 Pruebas de disolución: mínimo  20% de la especificación.

Análisis de datos. Inicialmente es recomendable hacer una gráfica con los resultados obtenidos
de la concentración adicionada contra la concentración recuperada del analito y por medio de su
examen visual, determinar una posible relación Linealidad. En caso de existir visualmente una
relación lineal, llevar a cabo el ajuste por mínimos cuadrados de la relación lineal, entre la
concentración adicionada (x) y la concentración recuperada (y). Es necesario que el análisis
2
complete la calidad de ajuste al modelo, por medio coeficiente determinación (r ), la desviación
estándar de la regresión (Sy/x) y el coeficiente de variación de la regresión (CV y/x). Puede ser
necesario establecer la linealidad basada en una prueba estadística de falta de ajuste. El sesgo del
método puede ser evaluado en función de pruebas estadísticas relacionadas a la pendiente (b) y la
ordenada al origen (a).
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parámetro de validación/verificación.
Versión 1
La exactitud se evalúa mediante el porcentaje de recobro (cociente porcentual de la concentración
recuperada entre la concentración adicionada) considerando los resultados del análisis de las
muestras. La diferencia entre valor de la media aritmética del porcentaje de recobro y el valor
verdadero aceptado (100%), mide el sesgo del método. Un método estadístico que demuestre que
la magnitud del sesgo es cero, indica que le método es exacto y lineal. En algunas circunstancias
la organización puede justificar sesgos diferentes de cero.

F. Exactitud del método.

(RB: 4 y 1)

La exactitud del método debe ser determinada a todos los métodos de carácter cuantitativo.
Nota: a la exactitud también se le relaciona con el concepto de sesgo de la medición.

Definición. La exactitud del método es la concordancia absoluta entre el resultado obtenido con el
método y la cantidad verdadera del analito presente en la muestra, a una cantidad fija.

Determinación en los métodos analíticos comprendidos en la categoría I: La exactitud debe

ser evaluada por medio de placebos o muestras adicionadas preparados de manera
independiente, al menos por sextuplicado, obtenidas de acuerdo a un procedimiento específico,
dichas muestras deben tener todos los componentes del producto y además se le debe adicionar la
concentración del analito que represente el 100%. Si no es posible obtener muestras que
contengan todos los componentes del producto, la exactitud puede determinarse por comparación
de los resultados obtenidos, aplicando el método en estudio, con los resultados obtenidos al aplicar
un segundo método que haya sido bien caracterizado y cuya exactitud ha sido establecida o
definida, con muestras que sean representativas del 100% del analito.

Determinación en los métodos analíticos comprendidos en la categoría II: En el análisis

cuantitativo de impurezas, la exactitud debe ser evaluada en muestras, al menos por sextuplicado,
del principio activo (fármaco) o del producto farmacéutico a las que se le han adicionado
cantidades conocidas y fijas de impureza de acuerdo a la especificación. Cuando no es posible
obtener muestras de ciertas impurezas o de los productos de degradación, los resultados deberán
ser comparados con los obtenidos por un método independiente.

Análisis de datos: La exactitud se evalúa mediante el porcentaje de recobro (cociente porcentual

de la concentración recuperada entre la concentración adicionada) considerando los resultados del
análisis de las muestras. La do y el valor verdadero aceptado (100%), mide el sesgo del método.
Un método estadístico que demuestre que la magnitud del sesgo es cero, indica el método es
exacto. En algunas circunstancias la organización puede justificar sesgos diferentes a cero.

El análisis de datos debe incluir la metodología estadística aplicada y los criterios de aceptación
para la exactitud del método analítico.

G. Precisión del método (repetibilidad) (*RB: 1 y 4)

Cuando un método analítico es exacto y lineal, la variabilidad de un resultado analítico se debe a

factores aleatorios, como la incertidumbre de las mediciones debidas a: la balanza analítica,
material graduado, material volumétrico, instrumentos de medición de la respuesta analítica,
corridas analíticas, analistas, laboratorios, lotes de reactivo, etc. Estos factores pueden clasificar en
factores aleatorios intramétodo, intralaboratorio e interlaboratorio. La precisión intramétodo se mide
en términos de repetibilidad, la reproducibilidad intralaboratorio se mide en términos de la precisión
intermedia, la reproducibilidad interlaboratorios se mide en términos de estudios colaborativos.

Para fines de estudio de precisión, una corrida analítica es el análisis, al menos por triplicado, de
una misma muestra de un producto, utilizando el método analítico, ejecutado por un mismo
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parámetro de validación/verificación.
Versión 1
analista, bajo las mismas condiciones de análisis (mismo reactivos, mismos equipos, mismos
instrumentos, materiales volumétricos, etc.)

La precisión interlaboratorios no está considerada

Definición: La precisión de un método analítico es el grado de concordancia relativa entre los

resultados obtenidos al aplicar el método analítico, bajo las mismas condiciones analíticas
(repetibilidad) o bajo diferentes condiciones analíticas (reproducibilidad), utilizando una muestra
homogénea. La precisión de un método analítico generalmente se expresa como la desviación
estándar o como el coeficiente de variación (desviación estándar relativa).

Precisión del Método: Repetibilidad. La repetibilidad se refiere a la variación de los resultados de

las muestras, al aplicar el método en una corrida analítica. La repetibilidad es una propiedad crítica
del método analítico por que mide la variación del método analítico en la rutina de trabajo.

Determinación: La repetibilidad se determina a partir de los resultados obtenidos de la exactitud

(porcentaje de recobro) y de la linealidad del método (porcentaje de recobro) y de la relación de la
concentración adicionada contra la concentración recuperada.

Análisis de datos. La repetibilidad se evalúa:

a) En el caso de la exactitud:
Con el coeficiente de variación del porcentaje de recobro del analito.

b) En caso de la linealidad:
Con el coeficiente de variación del porcentaje de recobro del analito, y
Con el coeficiente de variación de la relación concentración recuperada contra
concentración adicionada.

La magnitud de la repetibilidad debe satisfacer el criterio de aceptación establecido, en función de

la aplicación analítica del método de la naturaleza del sistema y de la complejidad del método,
entre otras.

H. Precisión del método: Precisión Intermedia

(RB = 1)

La precisión intermedia expresa la variación dentro de un mismo laboratorio, cuando el método

analítico se aplica a diferentes días y con diferentes analistas (condiciones de precisión
intermedia).

Determinación: La precisión intermedia de un método analítico se determina por el análisis de los

menos tres alícuotas (muestras analíticas indicadas en el método), tomadas de una muestra
homogénea; para ser analizadas en diferentes días mínimo dos y por diferentes analistas (mínimo
dos).

Análisis de datos. Se evalúa por medio del coeficiente de variación de todos los resultados
analíticos, el cual debe cumplir con el criterio de aceptación establecido.

I. Estabilidad analítica de la muestra. (RB: 3)

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parámetro de validación/verificación.
Versión 1
Definición: Propiedad de una muestra de conservar la concentración de la sustancia de interés
después de haber permanecido un tiempo determinado bajo condiciones específicas de
almacenamiento.

El analista debe establecer la etapa del análisis en la cual se desea evaluar la estabilidad, además
de determinar si en dicha etapa es posible fraccionar (muestras dependientes) o no (muestras
independientes) y las condiciones de almacenaje.

Determinación:
Para determinar la estabilidad analítica para muestras dependientes, el analista debe procesar
hasta la etapa preestablecida por lo menos por triplicado una muestra homogénea. Fraccionar
cada una de las preparaciones de acuerdo a las condiciones de almacenaje de interés. Terminar el
análisis de una de las fracciones de cada preparación (contenido/potencia/valoración inicial).
Proseguir el análisis de cada una de las fracciones al término de cada condición de almacenaje,
utilizando una solución de referencia recientemente preparada, si el método contempla el uso de
una solución de referencia. Reportar el contenido / potencia / valoración de cada fracción.

Para determinar la estabilidad analítica para muestras independientes, a partir de una muestra
homogénea, el analista debe analizar por triplicado (contenido/potencia/valoración inicial).
Simultáneamente y de la misma muestra, procesar el número de muestras necesarias para cada
condición de almacenaje hasta la etapa preestablecida (preparaciones) al menos por triplicado.
Proseguir el análisis de cada una de las preparaciones al término de cada condición de
almacenaje, utilizando una solución de referencia recientemente preparada, si el método
contempla el uso de una solución de referencia. Reportar el contenido / potencia / valoración de
cada preparación.

Análisis de datos. Calcular la media aritmética del análisis inicial (y0) y de cada condición de
almacenaje (yi). Calcular la diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición de
almacenaje respecto del análisis inicial ( | di | ).

J. Límite de detección (RB: 1, 2, 3 y 4)

El límite de detención es una característica de desempeño analítico que debe determinarse cuando
un método analítico se aplica como prueba limite.

Definición. El límite de detención (LD) es la cantidad mínima de analito en una muestra que puede
ser detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo las condiciones de aplicación del
método. Así las pruebas límite solamente indican que la cantidad de analito es superior o inferior a
la concentración establecida. El límite de detección se expresa generalmente como la
concentración indicada en el método analítico (por ejemplo el porcentaje, ppm, partes por billón,
mg/g, etc.).

Determinación para métodos no instrumentales.

El límite de detención se puede determinar empleando el procedimiento de linealidad, en el cual es
necesario generar una relación de la concentración vs respuesta analítica, con al menos tres
niveles de concentración por triplicado, lo que permite investigar la linealidad, estimar la pendiente
(b) y una medida del error de respuesta analítica (s e), como lo es la desviación estándar de
regresión (sy/x) o la desviación estándar de la ordenada de origen (Sa). También una medida de
error se obtiene con el cálculo de la desviación estándar de la respuesta analítica de la menos
cinco blancos o de cinco matrices analíticas no adicionadas de analito (Sw).

Análisis de datos para métodos no instrumentales.

El límite de detección se calcula con la siguiente ecuación:
 NP.DADV-A01-I03 Determinaciones, metodología y criterios de aceptación por
parámetro de validación/verificación.
Versión 1

LD = 3.3 (Se) / b

Dónde:
Se = Medida del error de respuesta
b = Pendiente en la curva de calibración.

Es importante establecer la linealidad ya sea basada en el coeficiente de determinación o en la

prueba de falta de ajuste, para dar validez al cálculo del LD.

Determinación para métodos instrumentales.

El límite de detección se puede determinar empleando el procedimiento basado en la “la señal-
ruido” o el de linealidad. En el primero, se evalúa obteniendo las respuestas analíticas de muestras
de concentraciones conocidas del analitio, y por el establecimiento de la respuesta analítica a una
concentración cero del analito (blanco o matriz analítica sin analito) a la que comúnmente se llama
señal-ruido.

En el procedimiento de linealidad, es necesario generar una relación concentración vs. Respuesta

analítica, con al menos tres niveles de concentración por triplicado, lo que permite investigar la
linealidad, estimar pendiente (b) y una medida del error de respuesta (se), como lo es la desviación
estándar de regresión (sy/x) o la desviación estándar de la ordenada de origen (Sa). También una
medida de error se obtiene con el cálculo de la desviación estándar de la respuesta analítica de al
menos cinco blancos o de cinco matrices analíticas no adicionadas de analito.

Análisis de datos para métodos instrumentales.

Por el procedimiento de la señal ruido, el LD es la concentración cuya respuesta analítica es la
inmediatamente superior a tres veces la señal ruido.
En el caso de la linealidad el límite de detección se calcula con la siguiente ecuación:

LD = 3.3 (Se) / b

Dónde:
Se = Medida del error de respuesta.
b = Pendiente en la curva de calibración.

Es importante establecer la linealidad ya sea basada en el coeficiente de determinación o en la

prueba de falta de ajuste, para dar validez al cálculo.

K. Límite de cuantificación (RB: 1, 2, 3 y 4)

El límite de cuantificación es una característica de desempeño analítico, que determina la

capacidad cuantitativa del método a concentraciones bajas del analito en la muestra y se debe
determinar en los métodos cuantitativos categoría II.

Definición. El límite de cuantificación (LC) es la cantidad mínima de analito en una muestra que
puede ser determinada con exactitud y precisión aceptable, bajo las condiciones de aplicación del
método. Las unidades del límite se expresan como se indica en el método analítico (por ejemplo
porcentaje, ppm, partes por billón, mg/g, etc.).

Determinación para métodos no instrumentales.

 NP.DADV-A01-I03 Determinaciones, metodología y criterios de aceptación por
parámetro de validación/verificación.
Versión 1
Es necesario generar una relación concentración adicionada vs respuesta analítica, con al menos
tres niveles de concentración por triplicado, lo que permitirá investigar la linealidad, estimar la
pendiente (b) y una medida del error la respuesta analítica (se), como lo es la desviación estándar
de la regresión (sy/x) o la desviación estándar de la ordenada de origen (s a). También una medida
del error se obtiene con el cálculo de la desviación estándar de la respuesta analítica de al menos
cinco blancos o de cincos matrices analíticas no adicionadas de analito (s w).

Análisis de datos para métodos no instrumentales.

El límite de cuantificación se calcula con la siguiente ecuación:

LD = 10 ( Se ) / b

Dónde:
Se = Medida del error de la respuesta analítica.
b = Pendiente en la curva de calibración.

Es importante establecer la Linealidad ya sea basada con el coeficiente de determinación o en la

prueba de falta de ajuste, para dar validez al cálculo del LC.

Determinación para métodos instrumentales

El límite de cuantificación se puede determinar empleando el procedimiento basado en la “la señal-
ruido” o el de linealidad. En el primero, se evalúa obteniendo las respuestas analíticas de muestras
de concentraciones conocidas del analito, y por el establecimiento de la respuesta analítica a una
concentración cero del analito (blanco o matriz analítica sin analito) a la que comúnmente se llama
señal-ruido.

En el procedimiento de Linealidad, es necesario generar una relación concentración vs. Respuesta

analítica, con al menos tres niveles de concentración por triplicado, lo que permitirá investigar la
linealidad, estimar pendiente (b) y una medida del error de respuesta (s e), como las desviación
estándar de regresión (sy/x) o la desviación estándar de la ordenada de origen (Sa). También una
medida de error se obtiene con el cálculo de la desviación estándar de la respuesta analítica de al
menos cinco blancos o de cinco matrices analíticas no adicionadas de analito (sw).

Análisis de datos para métodos instrumentales.

Por el procedimiento de la señal ruido, el LC es la concentración cuya respuesta analítica es la

inmediatamente superior a diez veces la señal ruido.
En el caso de la linealidad, el límite de cuantificación se calcula con la siguiente ecuación:

LD = 10 (Se) / b

Dónde:
Se = Medida del error de respuesta.
b = Pendiente en la curva de calibración.

Es importante establecer la Linealidad ya sea basada en el coeficiente de determinación o en la

prueba de falta de ajuste, para dar validez al cálculo.

L. Robustez. (RB=1)
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parámetro de validación/verificación.
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Los resultados de los métodos analíticos pueden ser afectados por una serie de factores
relacionados con las condiciones instrumentales o inherentes a este (por ejemplo temperatura de
la columna, presión de la columna, velocidad de flujo, pH de fases, volúmenes de solventes
orgánicos para una extracción, etc.) los cuales se presentan normalmente durante una corrida
analítica, por lo que es necesario investigar su efecto bajo pequeños cambio deliberados, fijados
por el analista, para asegurar la confiabilidad de los resultados.

Definición. Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al presentarse variaciones

pequeñas pero deliberadas, en las características normales de operación del método.

Determinación. Se deben establecer aquellos factores instrumentales (temperatura de la columna,

presión de la columna, velocidad de flujo, etc.) y/o factores no instrumentales (pH de fases,
volúmenes de solventes orgánicos para una extracción, etc.), que se consideran críticos.
Para investigación se pueden presentar los siguientes casos:

a) Investigación de tres factores como máximo. En este caso se establece un nivel inferior y uno
superior respecto del nivel normal de operación, por ejemplo si el pH de la fase móvil de la
condición normal es 5, el nivel superior puede ser 5.2 y el inferior 4.8; los cuales son cambios
pequeños deliberados. Por lo que es necesario evaluar por triplicado una misma muestra a cada
nivel, incluyendo el nivel normal. Esto debe ser realizado para cada uno de los factores a
investigar.
n
b) Investigación de cuatro a siete factores. Se debe utilizar un diseño factorial fraccionado (2 ),
conocido como diseño Placket Burman. En el NP.DADV-A02-I03 Diseño de PLACKET BURMAN,
se describe su metodología, así como su análisis para establecer ocho corridas experimentales.
NOTA: Puede ser utilizado otro diseño estadístico con más factores.

Análisis de datos para el caso de tres factores como máximo.

Calcular la media aritmética de los tres niveles (inferior, normal y superior) y la diferencia absoluta
porcentual de la media aritmética de los niveles superior e inferior comparada con el nivel normal;
estos valores no deben exceder del criterio establecido, de acuerdo con las siguientes ecuaciones:

M. Tolerancia (RB=1)

Los resultados de los métodos analíticos pueden variar por una serie de factores relacionados con
diferentes condiciones externas o no inherentes al método (por ejemplo instrumentos, marcas de
reactivos, proveedores de columnas, corridas analíticas, laboratorios, analistas, lotes de reactivos
etc.), por lo que es necesario investigar su reproducibilidad.

Definición. La tolerancia es el grado de reproducibilidad de los resultados de prueba obtenidos por

el análisis de las mismas muestras, bajo una variedad de condiciones tales como: diferentes
laboratorios, analistas, instrumentos, lotes de los reactivos, días, etc.

Determinación. Se debe establecer aquellos factores ajenos al método como: diferentes equipos,
lotes de reactivo, columnas, etc., que se puedan presentar al reproducir el método en otras
condiciones. Fijar por lo menos dos condiciones y analizar una misma muestra por lo menos por
triplicado a cada condición. Reportar los resultados de las muestras de las condiciones
investigadas.

Análisis de datos. Calcular la media aritmética, desviación estándar y coeficiente de variación

(CV) de todos los resultados de todas las condiciones investigadas. Se debe de cumplir el criterio
establecido en función con el coeficiente de variación.
 NP.DADV-A01-I03 Determinaciones, metodología y criterios de aceptación por
parámetro de validación/verificación.
Versión 1
REFERECIAS BIBLIOGRAFICAS:

1. FEUM 10ª edición páginas: 2460 al 2464, 2569 al 2580.

2. USP 32 NF27 Capitulo General <1225> y <1226>.
3. Guía de Validación de Métodos Analíticos del Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos
Biólogos México A.C. 1ª edición, 2002.
4. ICH Harmonised Tripartite Guideline, Validation of Analytical Procedures: Text and
Methodology, Q2 (R1).