GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS

EDITADA POR EL COLEGIO NACIONAL DE QUÍMICOS FARMACÉUTICOS BIÓLOGOS MÉXICO, A. C.

OBJETIVO:

Establecer los lineamientos generales mínimos necesarios para llevar a cabo el proceso de
validación de métodos analíticos.

JUSTIFICACIÓN:

Un método analítico es la descripción de la secuencia de actividades, recursos materiales y
parámetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el análisis de un componente
específico(analito) de una muestra.
La validación es el proceso por el cual se demuestra, por estudios de laboratorio, que la
capacidad del método satisface los requisitos para la aplicación analítica deseada; esta actividad
se justifica por los siguientes aspectos:
- Moral y Ética,
- Aseguramiento de calidad,
- Económica, y
- Regulatoria.

DEFINICIONES:

- Adecuabilidad del sistema.-Verificación de que el sistema opera con base a criterios que
permitan asegurar la confiabilidad de los resultados de un método analítico.
- Analito.-Componente específico de una muestra a medir.
- Calibración.-Conjunto de operaciones que determinan la relación entre los valores
indicados por un instrumento de medición y los valores conocidos correspondientes a
un patrón de referencia.
- Documentación.-Conjunto de información que sustenta una actividad realizada.
- Especificaciones.-Descripción del material que incluye la definición de sus propiedades
y características, con las tolerancias de variación de los parámetros de calidad.
- Especificidad.-Capacidad de un método analítico para obtener una respuesta debida
únicamente al analito de interés.
- Estudio colaborativo.-Reproducibilidad realizada en distintos laboratorios, por
diferentes químicos.
- Exactitud.-Concordancia entre un valor obtenido empleando el método y el valor de
referencia.
- Estabilidad analítica de la muestra.-Propiedad de una muestra preparada, de conservar
su integridad fisicoquímica y la concentración del analito, después de almacenarse por
un tiempo y condiciones determinadas.
- Intervalo.-Concentraciones incluidas entre la concentración superior e inferior del
analito (incluyendo éstas), para las cuales se ha demostrado que el método es preciso,
exacto y lineal.
- Límite de cuantificación.-Concentración mínima del analito que se puede determinar
con precisión y exactitud aceptables.
- Límite de detección.-Concentración mínima del analito que puede ser detectada, pero no
necesariamente cuantificada.
- Linealidad.-Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos directamente o por
una transformación matemática, son proporcionales a la concentración del analito.
- Metodología de prueba.-Procedimiento para determinar si un producto o materia prima
cumple con las especificaciones establecidas.
- Método analítico.-descripción de la secuencia de actividades, materiales y parámetros
que se deben cumplir para llevar a cabo el análisis de un componente específico de la
muestra.
- Método analítico desarrollado internamente.-Método desarrollado por el propio
laboratorio.
- Método analítico indicativo de estabilidad.-Método cuantitativo capaz de detectar
variaciones en las propiedades del material evaluado, debido a las condiciones de
almacenaje.
- Método analítico oficial.-Método que aparece en la literatura oficial reconocida.
- Método analítico no oficial.-Método que no aparece en la literatura oficial reconocida.
- Muestra.-Porción del material a evaluar.
- Muestra analítica.-Porción del material a evaluar de acuerdo al método analítico.
- Muestra adicionada.-Porción representativa del material a evaluar, a la que se le
adicionan cantidades conocidas del analito.
- Parámetros de desempeño.-Parámetro específico a estudiar en un protocolo de
validación.
- Placebo analítico.-Muestra que contiene todos los componentes de un producto a
excepción del analito.
- Placebo adicionado.-Muestra e un placebo analítico al cual se le adiciona una cantidad
conocida del analito.
- Precisión.-Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el
procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra
homogénea.
- Precisión intermedia.-Precisión de un método analítico, expresada como la
concordancia relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas en un
mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos días.
- Proporcionalidad.-Relación establecida por una ecuación matemática entre los
resultados obtenidos por dos métodos analíticos.
- Protocolo de validación,.Descripción de pruebas específicas para demostrar que un
proceso da resultados que cumplen con los criterios preestablecidos de manera
consistente.
- Recobro.-Cantidad del analito determinada en el placebo adicionado, empleando el
método analítico.
- Repetibilidad.-Precisión de un método analítico, expresada como la concordancia
obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un solo analista, usando
los mismos instrumentos y métodos.
- Reproducibilidad.-.Precisión de un método analítico, expresada como la concordancia
entre determinaciones independientes realizadas por diferentes laboratorios.
- Revalidación.-comprobación de que el método analítico mantiene su desempeño cuando
existen cambios en la composición del producto, en el método analítico.
- Robustez.-Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al presentarse
variaciones pequeñas pero deliberadas, en los parámetros normales de operación del
método.
- Sustancia de referencia.-Sustancia de uniformidad reconocida destinada a utilizarse en
comprobaciones analíticas físicas, químicas o microbiológicas en el transcurso de las
cuales se comparan con la sustancia en evaluación.
- Sustancia de referencia primaria.-Sustancia que es designada por tener la más alta
calidad microbiológica, cuyas propiedades se aceptan sin referencia a otras sustancias.
- Sustancia de referencia secundaria.-Sustancia cuyas propiedades se asignan por
comparación con una sustancia de referencia primaria, o bien, cuando es certificada
mediante un procedimiento científicamente reconocido.
- Tolerancia.-Reproducibilidad de los resultados analíticos obtenidos por el análisis de la
misma muestra bajo diferentes condiciones normales de operación. La robustez y la
tolerancia son conceptos diferentes, ya que el primero se refiere a la influencia de
factores internos del método, mientras que la tolerancia se refiere a factores externos del
método.
- Validación del método analítico.-Proceso por el cual se demuestra, por estudios de
laboratorio, que la capacidad del método satisface los requisitos para la aplicación
analítica deseada.

CLASIFICACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS:

Los métodos se clasifican bajo los siguientes criterios:
- En función de su estado regulatorio:
a) Métodos farmacopeicos
b) Métodos no farmacopeicos
- En función de su aplicación (NOM-059-SSA1 y NOM-073-SSA1):
a) Métodos para producto a granel,
b) Métodos para producto terminado,
c) Métodos para muestra primaria, y
d) Métodos indicadores de estabilidad.
- En función de la naturaleza de la respuesta analítica:
a) Métodos físico-químicos.- cuando la respuesta es de carácter físico
(absorción de luz, emisión de luz, voltaje, etc.) o químico(consumo de
iones –OH, consumo de un acomplejante, etc.)
b) Métodos biológicos.- cuando la respuesta es de carácter biológico
(crecimiento de microorganismos, protección, muerte, etc.)
- En función de su propósito analítico:
a) Métodos para cuantificar el analito(contenido o potencia)
b) Métodos para establecer la presencia del analito a un limite.
c) Métodos para identificar el analito.
Esta clasificación se utiliza para establecer los parámetros de desempeño a estudiar en la
validación del método analítico.
Cualquier método analítico puede estar constituido por técnicas de separación, extracción, etc.
, y por técnicas de medición (espectrofotometría, volumetría, colorimetría, potenciometría,
etc.) que permiten medir la respuesta del analito en la muestra. A esta técnica se le denomina
Sistema de Medición.
- En función de la naturaleza del sistema de medición:
a) Métodos en los cuales el instrumento de medición de la respuesta
analítica, permite medir una señal de ruido (cromatógrafo de
líquidos y de gases, espectrofotómetros, etc.)
b) Métodos en los cuales el instrumento de medición no permite medir
una señal de ruido (buretas, medidor de halos, potenciómetros, etc.)
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO:

En función de la aplicación analítica de un método, se indican los parámetros de desempeño a
estudiar.
PRUEBAS DE IMPUREZAS
PARÁMETRO DE
DESEMPEÑO
CONTENIDO/
POTENCIA /
VALORACIÓN
CONTENIDO/
VALORACIÓN
LIMITE IDENTIFICACIÓN
PRECISIÓN/ ADECUABILIDAD
DEL SISTEMA
SÍ SÍ SÍ *
LINEALIDAD DEL SISTEMA SÍ SÍ NO NO
ESPECIFICIDAD
2
SÍ SÍ SÍ SÍ
EXACTITUD Y REPETIBILIDAD SÍ SÍ NO NO
LINEALIDAD DEL MÉTODO SÍ SÍ NO NO
PRESICIÓN DEL MÉTODO O
PRECISIÓN INTERMEDIA
2

SÍ SÍ NO NO
ESTABILIDAD ANALÍTICA
2

DE LA MUESTRA
* * NO NO
LIMITE DE DETECCION NO NO SÍ NO
LIMITE DE CUANTIFICACION NO SÍ NO NO
ROBUSTEZ * * * NO
TOLERANCIA * * * NO

*Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza del método.
1. La falta de especificidad de un método analítico, puede ser compensada por otra
alternativa analítica de soporte, como por ejemplo cromatografía de capa fina.
2. También es definido como un estudio de tolerancia.
3. Un método que es exacto y lineal, por definición es específico al placebo analítico o a los
otros componentes de la muestra.

DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN:

- Precisión del Sistema:
+Metodología.- Preparar por lo menos un sextuplicado de soluciones a la
concentración del analito que represente la concentración de la solución de
referencia utilizada o en ciertos casos, la concentración que represente el 100%
de la muestra procesada para su medición; preparadas por dilución o por pesadas
independientes. Medir la respuesta analítica bajo las mismas condiciones.

Calcular S y CV de la respuesta analítica;


+Criterios de aceptación:
CV s 1.5% para métodos físico-químicos
CV s 3% para métodos biológicos
Valores superiores u otro criterio de aceptación deben ser justificados.

Las formulas y el procedimiento se encuentra en el anexo 1.

- Adecuabilidad del sistema (Métodos cromatográficos):
+Metodología.- Inyectar por quintuplicado la solución de adecuabilidad,
reportar la respuesta del analito, calcular el CV y para cada inyección:
Factor capacidad (K’), resolución (si procede, R), retención relativa (si procede,
Rr), factor de coleo (T), número de platos teóricos (N).

+Criterios de aceptación:

CV s 2% para respuesta analítica.
Valores superiores deben ser justificados.

Para cada inyección, se recomienda:
K’>2 ; R>2 ; T<2

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 2.

La evaluación de adecuabilidad del sistema permite verificar que el sistema de
medición funcione adecuadamente, independiente de las condiciones
ambientales.
Antes de la validación del método analítico deben establecerse los criterios para
la operación del sistema para ser evaluados en la validación y verificados de
manera rutinaria al emplear el método analítico. Por ejemplo en el caso de
método volumétricos, el volumen de la titulación de blancos y/o de un volumen
específico de la solución de referencia; en el caso de métodos fotométricos la
lectura de soluciones blanco.

- Linealidad del sistema:
+Metodología.- Preparar por lo menos por triplicado 5 niveles de concentración
(intervalo) de la solución de referencia ya sea por dilución o por pesadas
independientes. La concentración central debe ser igual a la que se prepara la
solución de referencia en el método o la que represente el 100% en la muestra
procesada para su medición.
Medir la respuesta analítica bajo las mismas condiciones de medición, reportar la
relación concentración vs respuesta analítica.
Calcular b
1
, b
0
, r
2
, IC(|
1
).

El intervalo esta en función del propósito del método y se expresa como % de la
concentración de la solución de referencia o en función del contenido del analito
en la muestra.

Para contenido/potencia/valoración se sugiere un mínimo de ±20%

Para contenido/valoración de impurezas desde un nivel apropiado hasta un 20%
por arriba de la especificación.

Para métodos indicadores de estabilidad desde un nivel apropiado hasta un 120%

Es critico que el intervalo no excluya valores de concentración que
potencialmente puedan dar lugar al contenido del analito en la muestra.

+Criterios de aceptación:

r
2
> 0.98
IC(|
1
), no debe incluir el cero

Otro criterio de aceptación debe ser justificado.

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 3.

Es conveniente trazar la gráfica de la concentración (x) vs la respuesta analítica
(y), incluyendo en ella la ecuación, línea de ajuste y el coeficiente de
determinación.

- Especificidad:
+Metodología.- Establecer las posibles sustancias interferentes y adicionar
cantidades conocidas de éstas, solas o combinadas a la muestra y evaluar su
respuesta bajo las mismas condiciones de análisis.

En métodos de identificación seleccionar sustancias que potencialmente
interfieran en la determinación con base en la estructura del analito.

Para métodos de contenido/ potencia/ valoración, se analizan placebos del
producto y cuando proceda sustancias relacionadas, precursores, homólogos y
una mezcla de ellos con el producto.

Para métodos de contenido/ valoración de impurezas, se adicionan éstas al
analito en niveles que incluya la especificación. Cuando no se dispone de las
impurezas, el analito se somete a condiciones que generen su inestabilidad
química y aplicar el método.

Para métodos de límite de impurezas se analizaran las muestras de impurezas
individualmente, el producto y la mezcla de éstos.

Para métodos indicadores de inestabilidad, si se cuenta con los productos de
degradación, preparar muestras con placebos adicionado de éstos, el placebo
adicionado de analito, el placebo adicionado de analito y productos de
degradación y se analizan con el método.
Si no se cuenta con los productos de degradación se puede favorecer la
inestabilidad del analito en la muestra:

1) Someter el analito, el placebo y la muestra a temperaturas de 20°C por debajo
del punto de fusión del analito de 2 a 4 semanas.
2) Exponer el analito, placebo y muestra a luz UV, fluorescente y/o humedad
relativa.
3) Hacer soluciones del analito, ajustando el pH de 1 a 2 y/o de 10 a 12 y
someterlas a 60°C – 80°C.
4) Adicionar peróxido de hidrógeno para favorecer la oxidación del analito.

El tiempo y las condiciones se seleccionan con el fin de degradar al analito a
niveles del 15 al 30%. Estos estudios no se realizan en analitos con propiedades
reactivas.

Para métodos no selectivos, la especificidad se sustenta con los resultados de
exactitud y linealidad, si el método cumple con los criterios de aceptación.

+Criterios de aceptación:

La respuesta del método solo se deberá al analito.

- Exactitud y Repetibilidad del método:
+Metodología:

A)Conociendo los componentes de la muestra se preparará el placebo analítico.
A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra analítica por
sextuplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de
este en la muestra. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad por
sextuplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de
este en la muestra. El mismo analista analizara los placebos adicionados
utilizando de referencia la sustancia empleada en la adición al placebo analítico
en las mismas condiciones. Determinar la cantidad recuperada del analito.

B)Si no se conocen los componentes de la muestra, con el método se determina
el contenido del analito y se preparan 6 muestras adicionadas del analito hasta
completar el 100% de éste en la muestra. Las muestras adicionadas se analizan
usando como referencia la sustancia empleada en la adición de la muestra.
Determinar la cantidad recuperada del analito.

La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método.

Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo analítico, al obtener el
cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresada
en porcentaje.

Calcular ŷ, S, CV e IC(u) del porcentaje de recobro.

+Criterios de aceptación:

IC(u) debe incluir el 100% o que el promedio aritmético del % de
recobro se incluya en el intervalo:
98-102% método cromatográfico
98-102% método volumétrico
97-103% método químico o espectrofotométrico
95-105% método microbiológico
CV del porcentaje de recobro:
No mayor de 2% en método cromatográfico
No mayor de 2% en método volumétrico
No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico
No mayor de 5% en método microbiológico
No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la
especificación del analito en la muestra.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 4.
- Linealidad del método:
+Metodología:

A) Conociendo los componentes de la muestra se preparará el placebo analítico.
A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra analítica por
triplicado, se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de este
en la muestra. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad del
analito (intervalo) y preparar el placebo adicionado por triplicado a cada nivel
manteniendo constante la cantidad de placebo analítico en los tres niveles. El
mismo analista analizara los placebos adicionados utilizando de referencia la
sustancia empleada en la adición al placebo analítico en las mismas condiciones.
Determinar la cantidad recuperada del analito.

B) Si no se conocen los componentes de la muestra, con el método se determina
el contenido del analito y se preparan 3 muestras adicionadas del analito hasta
completar el 100% de éste en la muestra. Seleccionar dos niveles superior e
inferior de la cantidad del analito (intervalo) y preparar la muestra adicionada
por triplicado a cada nivel manteniendo constante la cantidad de muestra en los
tres niveles Las muestras adicionadas se analizan usando como referencia la
sustancia empleada en la adición de la muestra. Determinar la cantidad
recuperada del analito.
La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método.

El intervalo de la concentración del analito adicionado depende del propósito del
método y debe incluir la especificación. La siguiente tabla sugiere intervalos
para el estudio de linealidad, en la cual la especificación se maneja como
porcentaje, por ejemplo el 100% puede representar 100mg/g de muestra, 10ppm,
5mg/ml, etc.

PROPÓSITO ESPECIFICACIÓN INTERVALO MÍNIMO
CONTENIDO/ POTENCIA/
VALORACIÓN
LÍMITE INFERIOR (L
I
)
LIMITE SUPERIOR (L
S
)
L
I
–10% A L
S
+10%
EJEMPLO

VALORACIÓN

90% - 110%
80% a 120%
Por lo tanto los niveles podrían
Ser 80%, 100% y 120%


UNIFORMIDAD DE DOSIS

75% - 125%
60% a 140%
Por lo tanto los niveles podrían
Ser 60%, 100% y 140%


DISOLUCIÓN
Q = 75%
En el caso conservador de llegar a
tercera etapa, ninguna unidad es menor a
Q –25%
40% a 130%
Por lo tanto los niveles podrían
Ser 40%, 100% y 130%

CONTENIDO/ VALORACIÓN
PARA PRUEBAS DE
IMPUREZAS

LIMITE SUPERIOR (L
S
)

L
S
– 20% a L
S
+20%
EJEMPLO

Sustancias Relacionadas

No debe contener más de 100%
80% a 120%
Por lo tanto los niveles podrían
Ser 80%, 100% y 120%
Reportar la relación cantidad adicionada vs cantidad recuperada. Utilizar el
método de estimación por mínimos cuadrados y calcular b
1
, b
0
, r
2
, IC(|
1
), IC(|
0
)
y CV
y/x
.
Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo o muestra adicionada al
obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada
expresada en porcentaje. Calcular ŷ, S, CV, IC(u) del porcentaje de recobro.

+Criterios de aceptación:

1) Cantidad adicionada vs cantidad recuperada:
r
2
> 0.98
El IC(|
1
) debe incluir la unidad
El IC(|
0
) debe incluir el cero
El CV
y/x
del porcentaje de recobro:
No mayor de 2% en método es cromatográfico
No mayor de 2% en método volumétrico
No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico
No mayor de 5% en método microbiológico
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación
del analito en la muestra.

2) Porcentaje de recobro:

El IC(u) debe incluir el 100% o el promedio aritmético del % de recobro
se incluya en el intervalo:
98-102% método cromatográfico
98-102% método volumétrico
97-103% método químico o espectrofotométrico
95-105% método microbiológico
CV del porcentaje de recobro:
No mayor de 2% en método cromatográfico
No mayor de 2% en método volumétrico
No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico
No mayor de 5% en método microbiológico
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación
del analito en la muestra.

Otro criterio de aceptación debe ser justificado.

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 5.

Es conveniente trazar la gráfica de la cantidad adicionada (x) vs la cantidad
recuperada (y), incluyendo en ella la ecuación, línea de ajuste y el coeficiente de
determinación.

- Precisión del Método (Precisión Intermedia o Tolerancia interdía / analista):
+Metodología.- Analizar por triplicado una muestra homogénea del producto
que tenga un nivel cercano o igual al 100% (para contenido/potencia/valoración)
o una muestra cuyo contenido este incluido en el intervalo lineal de
concentración de linealidad de método (para impurezas) en dos días diferentes y
por dos analistas diferentes. Reportar el contenido/potencia/valoración del
analito de todas las muestras.

Calcular ŷ, S, CV del contenido/potencia/valoración, utilizando todos los
resultados obtenidos.

+Criterios de aceptación:
CV s 2% para métodos cromatográficos y volumétricos
CV s 3% para métodos químicos o espectrofotométricos
CV s 5% para métodos biológicos
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del
analito en la muestra.

Valores superiores deben ser justificados.

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 6.

Los resultados pueden ser analizados utilizando otros métodos estadísticos
apropiados que permitan sustentar que la precisión del método es aceptable.
Puede ser utilizado un modelo estadístico lineal de diseño experimental ya que
es de utilidad cuando se quiere determinar el grado de tolerancia del método a
fuentes de variación como estimar la variabilidad entre analistas o entre días.

- Estabilidad Analítica de la Muestra:
+Metodología.- Establecer la etapa de análisis en la cual se desea evaluar la
estabilidad, determinar si en dicha etapa es posible fraccionar (muestras
dependientes) o no (muestras independientes) y las condiciones de almacenaje.

En muestras dependientes, determinar la estabilidad analítica procesando hasta la
etapa preestablecida por triplicado una muestra homogénea, fraccionar cada
preparación de acuerdo a las condiciones de almacenaje de interés. Terminar el
análisis de una de las fracciones de cada preparación
(contenido/potencia/valoración), seguir el análisis de cada una de las fracciones
al término de cada condición de almacenaje utilizando una solución de
referencia recientemente preparada. Reportar el contenido/potencia/valoración
de cada fracción.

En muestras independientes, determinar la estabilidad analítica a partir de una
muestra homogénea, analizando por triplicado (contenido/potencia/valoración
inicial). Simultáneamente y de la misma muestra, procesar el número de
muestras necesarias para cada condición de almacenaje hasta la etapa
preestablecida (preparaciones) por triplicado, seguir el análisis de cada una de
las preparaciones al término de cada condición de almacenaje utilizando una
solución de referencia recientemente preparada. Reportar el
contenido/potencia/valoración de cada preparación.

Calcular ŷ
0
, ŷ
1
, |d
i
|.



+Criterios de aceptación:
|d
i
| s 2% métodos cromatográficos y volumétricos
|d
i
| s 3% para métodos químicos o espectrofotométricos
|d
i
| s 5% para métodos biológicos

No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del
analito en la muestra.

Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 7.

Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos como la
distribución t de Dunnett.

- Límite de Detección:

1)LD con base en señal de Ruido:
+Metodología.- Se aplica en métodos que utilizan instrumentos para medir la
respuesta analítica y presentan una señal de ruido basal.
Determinar la respuesta de blancos (reactivos. Placebos analíticos, etc.) y la
respuesta de muestras analíticas (analitos, placebos adicionados, etc.) en un
intervalo del analito que incluya la especificación de la prueba de impureza
limite. Determinar la cantidad del analito que genere una respuesta con respecto
al blanco en una proporción de 3 a 1, lo que corresponde a la concentración
asociada al limite de detección.

+Criterios de aceptación:

El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.

2)LD con base en curva de calibración y desviación estándar de los blancos:
+Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezas
limite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Simultáneamente
preparar 5 blancos. Medir las respuestas analíticas. Para la curva de calibración,
sin incluir los blancos, calcular b
1
, r
2
e IC(|
1
).
Para los blancos, calcular S
b
de los blancos.
Calcular el límite de detección:

LD=(3.3 × S
b
) /b
1


El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señal
de ruido.





+Criterios de aceptación:
r
2
> 0.98
IC(|
1
), no debe incluir el cero.
El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

3)LD con base en la curva de calibración y la desviación estándar de regresión:
+Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezas
limite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Medir las
respuestas analíticas.
Calcular b
1
, r
2
, S
y/x
, IC(|
1
).
Calcular el límite de detección:

LD=(3.3 × S
y/x
) /b
1


El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señal
de ruido.

+Criterios de aceptación:
r
2
> 0.98
IC(|
1
), no debe incluir el cero.
El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

4)LD con base en la curva de calibración y la desviación estándar de la
ordenada al origen:
+Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezas
limite, ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Medir las
respuestas analíticas.
Calcular b
1
, r
2
, S
bo
, IC(|
1
).
Calcular el límite de detección:

LD=(3.3 × S
bo
) /b
1


El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señal
de ruido.
+Criterios de aceptación:
r
2
> 0.98
IC(|
1
), no debe incluir el cero.
El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 8.
- Limite de cuantificación:
1)Señal de Ruido:
+Metodología.- Se aplica en métodos que utilizan instrumentos para medir la
respuesta analítica y presentan una señal de ruido basal.
Determinar la señal de blancos (reactivos. Placebos analíticos, etc.) y la señal de
muestras analíticas (analitos, placebos adicionados, etc.) a concentraciones
conocidas del analito, inferiores o que incluya la especificación del contenido /
valoración de la prueba de impurezas. Determinar la cantidad del analito cuya
señal sea similar o mayor al blanco en una proporción de 10 a 1, lo que
corresponde a la concentración asociada al limite de detección. Verificar que
dicha cantidad corresponda al limite de cuantificación, evaluando la exactitud y
Repetibilidad del valor estimado.

+Criterios de aceptación:

El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba
de impurezas.

2)LC con base en curva de calibración y desviación estándar de los blancos:
+Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la
prueba de impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del analito.
Simultáneamente, preparar 5 blancos. Medir las respuestas analíticas. Calcular
b
1
, r
2
e IC(|
1
).
Para los blancos, calcular S
b
de los blancos.
Calcular el límite de cuantificación:

LD=(10 × S
b
) /b
1


Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite de
cuantificación.

+Criterio de aceptación:
r
2
> 0.98
IC(|
1
), no debe incluir el cero.
El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba
de impurezas.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

3)LC con base en la curva de calibración en la desviación estándar de
regresión:
+Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la
prueba de impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del analito.
Medir las respuestas analíticas.
Calcular b
1
, r
2
, S
y/x
, IC(|
1
).
Calcular el límite de cuantificación:

LC=(10 × S
y/x
) /b
1


Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite de
cuantificación.

+Criterios de aceptación:
r
2
> 0.98
IC(|
1
), no debe incluir el cero.
El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba
de impurezas.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

4)LC con base en la curva de calibración y la desviación estándar de la
ordenada al origen:
+Metodología.- Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales.
Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
valores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la
prueba de impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del analito.
Medir las respuestas analíticas.
Calcular b
1
, r
2
, S
bo
, IC(|
1
).
Calcular el límite de cuantificación:

LC=(3.3 × S
bo
) /b
1


Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite de
cuantificación.
+Criterios de aceptación:
r
2
> 0.98
IC(|
1
), no debe incluir el cero.
El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba
de impurezas.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 9.

- Robustez:
+Metodología.- Establecer los factores instrumentales (temperatura y presión
de la columna) y/o no instrumentales (pH de fases) relacionados al método y
sean críticos. En condiciones normales y distintas de operación, analizar la
muestra por triplicado. Reportar el contenido/potencia/valoración del analito en
la muestra de condiciones normal y distintas, expresadas como %.
Calcular ŷ
0
, ŷ
1
, |d
i
|.

+Criterios de aceptación:
|d
i
| s 2% métodos cromatográficos y volumétricos
|d
i
| s 3% para métodos químicos o espectrofotométricos
|d
i
| s 5% para métodos biológicos
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del
analito en la muestra.

Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 10.

Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos como la
distribución t de Dunnett (para 3 o más condiciones) o t de Student (para 2
condiciones), incluyendo la condición normal.

- Tolerancia:
+Metodología.- Establecer los factores ajenos al equipo (diferentes equipos,
lotes de reactivos) que se presentan al reproducir el método en otras condiciones
de uso. Fijar 2 condiciones de uso y analizar la muestra por triplicado a cada
condición. Reportar el contenido/potencia/valoración del analito en todas las
muestras.
Calcular y, S y CV del contenido/potencia/valoración.

+Criterios de aceptación:
CV s 2% métodos cromatográficos y volumétricos
CV s 3% para métodos químicos o espectrofotométricos
CV s 5% para métodos biológicos
No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del
analito en la muestra.

Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 11.

Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos. Uno de
ellos es aplicar un análisis de varianza con un criterio de clasificación para
determinar si al menos una de las condiciones de uso es diferente, si se concluye
que si, se realiza una prueba estadística de comparaciones múltiples para
identificar aquellas condiciones que dan lugar a resultados diferentes.

SUSTANCIAS DE REFERENCIA:

Las sustancias de referencia constituyen un componente propio del método y una herramienta
en la evaluación de los parámetros de desempeño, lo que permite establecer la confiabilidad de
la metodología. Para su adquisición se debe contar con procedimientos para su manejo y
aplicación, así como registros del uso y con la documentación que avale una buena práctica de
manejo de dichas sustancias.

- Manejo.- Cada sustancia de referencia debe almacenarse, manejarse y utilizarse de
acuerdo con las especificaciones correspondientes. Cualquier condición especial de
almacenamiento debe indicarse en el marbete y (o) certificado analítico.
Todas las sustancias deben contar con su identificación y registro, teniendo como
mínimo las siguientes:

Para sustancias de referencia primarias:
A) Nombre de la sustancia de referencia,
B) Cantidad,,
C) Lote del producto,
D) Clave (para uso interno)
E) Fecha de adquisición,
F) Pureza (potencia),
G) Fecha de caducidad
H) Riesgo potencial de manejo, e
I ) Indicaciones especiales.
Para sustancias de referencia secundaria:
A) Nombre de la sustancia de referencia,
B) Cantidad certificada,
C) Lote interno,
D) Clave,
E) Fecha de certificación, y
F) Potencia en relación con la sustancia de referencia.
La información mínima para su registro es:
A) Nombre,
B) Lote,
C) Clave de identificación interna,
D) Procedencia (USP, BP, COSUFAR, etc.),
E) Fecha de adquisición,
F) Fecha de empleo,
G) Uso,
H) Cantidad empleada,
I) Cantidad remanente,
J) Analista que la utiliza, y
K) Caducidad
Para las sustancias de referencia secundaria, conviene además:
A) Nombre,
B) Lote,
C) Cálculos para obtener la potencia,
D) Gráficas,
E) Certificado de análisis del material
En la validación de métodos, estos registros son críticos.
Se debe contar con lineamientos que aseguren la no-utilización de sustancias de
referencia caducas.

- Tratamiento:
Cualquier tratamiento previo al que deba someterse la sustancia de referencia lo
debe contemplar la propia metodología, o en su caso, debe especificarse en su
marbete.

Si la sustancia de referencia debe secarse antes de utilizarse, se deberán seguir
las instrucciones de la etiqueta o certificado de análisis; se realizará en otro
envase al original y el excedente se desechará.



- Procedencia:
Algunos centros especializados que proveen sustancias de referencia son:
*British Pharmacopoeia (BP), European Pharmacopoeia (EP)
*European Pharmacopoeia Chemical Refernce Substances (EPCRS),
*Comité de Sustancias Farmacéuticas de Referencia (COSUFAR)
*Organización Mundial de la Salud (OMS)
*Secretaría de Salud (SSA), y
*United States Pharmacopeia (USP)

REVALIDACIÓN:

Se deben establecer y justificar criterios apropiados para revalidación de métodos analíticos, así
como mantener un control de cambios. Cualquier cambio crítico a un método analítico da lugar
a uno nuevo y por lo tanto requiere de una validación como tal.
La siguiente tabla establece cambios en el método, su impacto y el parámetro de desempeño a
revalidar:

CAMBIO IMPACTA PARÁMETRO A REVALIDAR
DISPOSITIVO DE MEDICIÓN
DEL INSTRUMENTO DE
MEDICIÓN
VARIACIÓN EN SISTEMA
DE MEDICIÓN
PRECISIÓN DEL SISTEMA
ADECUABILIDAD DEL SISTEMA
CONCENTRACIÓN DE LA
SOLUCIÓN DE REFERENCIA
EXACTITUD DEL MÉTODO LINEALIDAD DEL SISTEMA Y
EXACTITUD DEL MÉTODO
FORMULACIÓN DEL
PRODUCTO
EXACTITUD DEL MÉTODO EXACTITUD Y REPETIBILIDAD
DEL MÉTODO
LINEALIDAD DEL MÉTODO
ESPECIFICIDAD
EQUIPOS VARIACIÓN DEL MÉTODO TOLERANCIA
PROVEEDOR DE COLUMNAS VARIACIÓN DEL MÉTODO TOLERANCIA

COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS:

Cuando se quieren comparar 2 métodos para aplicaciones de contenido/potencia/valoración, se
emplean los siguientes procedimientos:

- Estudio de Comparación de Parámetros de Desempeño:
Se utiliza cuando los dos métodos han sido validados y se quiere comparar sus
parámetros de desempeño. En función a su aplicación analítica se indican los
parámetros de desempeño a estudiar:

CAMBIO CONTENIDO/POTENCIA/VALORACIÓN PARÁMETRO A REVALIDAR
ESPECIFICIDAD

PARÁMETROS EXACTITUD Y REPETIBILIDAD

DE LINEALIDAD DEL MÉTODO

DESEMPEÑO PRECISION DEL MÉTODO O PRECISIÓN INTERMEDIA

Los parámetros analíticos a comparar, así como los criterios para establecer la igualdad
de dichos parámetros, son los siguientes:




1) Especificidad:
Debe cumplir para cada método analítico, demostrando su especificidad o
exactitud.
2) Repetibilidad en exactitud:
+Metodología.- De los datos de exactitud y Repetibilidad utilizar la información
del porcentaje de recobro. Calcular S
2
del porcentaje de recobro de cada
método.
+Criterios de aceptación:
El intervalo de confianza para la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 12.
3) Repetibilidad en Linealidad del Método:
+Metodología.- De los datos de linealidad del método, utilizar la información
del porcentaje de recobro. Calcular la S
2
del porcentaje de recobro de cada
método.
+Criterios de aceptación:
El intervalo de confianza para la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 13.

4)Exactitud:
+Metodología.- De los datos de exactitud y Repetibilidad, utilizar la
información del porcentaje de recobro. Calcular la S
2
, ŷ del porcentaje de
recobro de cada método.
+Criterios de aceptación:
El intervalo de confianza para la diferencia de las 2 medias poblacionales del
porcentaje de recobro, debe incluir el valor de cero.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.
El análisis estadístico de los resultados, presenta 2 situaciones:
a)Los métodos tienen la misma Repetibilidad (varianzas iguales)
b)Los métodos tienen diferente Repetibilidad (varianzas diferentes);
por lo tanto se tiene que realizar el estudio de comparación de Repetibilidad de
ambos métodos.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 14.

5) Linealidad del Método:
+Metodología.- De los datos de linealidad utilizar la información del porcentaje
de recobro así como la cantidad adicionada y la cantidad recuperada de cada
método. Calcular la

+Criterios de aceptación:
Anexo 15.
6) Precisión del Método:
+Metodología.- De los datos de precisión del método, utilizar la información del
contenido/potencia/valoración del analito de cada método. Calcular S
2
1
y S
2
2
.
+Criterios de aceptación:
El intervalo de confianza para la razón de varianzas, debe incluir el valor de 1.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo16.

- Estudio de Correlación:
Se utiliza cuando se comparan dos métodos cuyos resultados se expresan en
unidades diferentes.
Se aplica a métodos de contenido/valoración/potencia y los parámetros a evaluar
son:

1) Proporcionalidad:
No necesariamente establecen equivalencia de resultados, sino proporcionalidad,
ya que en muchas ocasiones la respuesta analítica es diferente.

a) Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar un placebo
analítico.
+Metodología.-Preparar una cantidad suficiente de placebo analítico con los
componentes que están comúnmente en la muestra, de tal modo que pueda ser
analizado por ambos métodos en tres diferentes niveles del analito, que incluya
la especificación.
Del placebo analítico preparado adicionarle analito al nivel inferior. Fraccionar
en tres muestras y analizar cada muestra por ambos métodos bajo las mismas
condiciones de cada método para determinar el contenido/valoración/potencia.
Repetir este procedimiento con el nivel del 100% superior.
Reportar la relación contenido/valoración/potencia de cada método en cada
muestra del método a comparar (y), método de referencia (x). Calcular b
1
, b
0
, r
2
,
IC(|
1
), CV
y/x
.

b) No se conocen los componentes de la muestra.
+Metodología.- Seleccionar 9 muestras del producto cuyo nivel del analito
cumpla con la especificación, fijar una etapa de los métodos analíticos en los
cuales transfiera una mayor o menor cantidad e la muestra con el objeto de poder
variar el nivel del analito. Tener 3 muestras con nivel bajo, 3 niveles
correspondientes al 100% y 3 con un nivel alto del analito. Las 9 muestras se
analizan por ambos métodos en las mismas condiciones analíticas de cada
método. Determinar el contenido/valoración/potencia de cada muestra.
Reportar la relación contenido/valoración/potencia del método a comparar (y), el
método de referencia (x). Calcular b
1
, b
0
, r
2
, IC(|
1
), CV
y/x
.
+Criterios de aceptación:
El IC(|
1
) no debe incluir el cero.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo17.

2) Precisión:
El método no oficial deberá tener una precisión igual a mejor que el método
oficial, o que su precisión sea aceptable para la aplicación analítica.
Inicialmente se debe establecer el método de referencia y el método a comparar.
+Metodología.-Tanto con el método de referencia como el método a comparar,
dos analistas en dos días deben analizar por triplicado muestras independientes
(pesadas o alícuotas) de un lote homogéneo de producto, cuyo nivel de analito
esté incluido dentro de la especificación. Reportar el
contenido/potencia/valoración del analito de todas las muestras en % para ambos
métodos.

+Criterios de aceptación:
El intervalo de confianza unilateral inferior, para la razón de varianzas del
método a comparar respecto del método de referencia, no debe exceder el valor
de 1.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse.
Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 18.

DOCUMENTACIÓN:

Las actividades de la validación de un método analítico deben ser sustentadas por los siguientes
documentos:
a) Protocolo, cuyo contenido es:
1. Titulo
2. Propósito u Objetivo,
3. Responsabilidades,
4. Plan de prueba describiendo los parámetros de desempeño que permitan
verificar la aplicación analítica deseada,
5. Criterios de aceptación para cada parámetro,
6. Formato de registro de resultados.
b) Reporte, cuyo contenido es:
1. Titulo,
2. Resultados,
3. Análisis de resultados,
4. Confrontación contra los criterios de aceptación,
5. Conclusión
Es crítico documentar los registros analíticos; dicha documentación deberá estar ordenada y
disponible, en responsabilidad del área de calidad.

CONCORDANCIA CON GUIAS INTERNACIONALES:

Esta guía es equivalente a:
 Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures
ICH-Q2Q, March 1995
 Guideline on the Validation of Analytical Procedures, Methodology,
Availability. Notice ICHQ2B.
 USP24. Validation of Compendial Methods.
 Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods CDER.
November 1994, CMC 3.












BIBLIOGRAFIA:

 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 7a Ed. México (2000).
 Métodos Analíticos Validación Guías Generales de Validación de la DGCIS,
SSA (1989).
 Ley General de Salud (1997)
 NMX-CC-1-1990 Sistemas de Calidad Vocabulario
 NMX-CC-2-1990 Sistemas de Calidad- Gestión de Calidad, Guía para la
Selección, el Uso de Normas de Aseguramiento de Calidad.
 Reglamento de Insumos para la Salud (1998).
 Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-1993. Buenas prácticas de
fabricación para establecimientos de la industria químico farmacéutica
dedicados a la fabricación de medicamentos.
 NOM-177-SSA1-1998 “Que establece las pruebas y procedimientos para
demostrar que un medicamento es intercambiable”
 Guidance for Industry Bioanalytical methods Validation for Human Studies,
December, 1998 FDA.
 Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures ICH-Q2A,
March 1995.
 Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods, CDER,
November 1994, CMC 3.
 Guideline for Industry Analytical Procedures and Methods Validation, August
2000, FDA.
 Guideline for submitting Samples and Analytical Data for Methods Validation,
February 1987, FDA.
 ICH Harmonised Tripartile Guideline Validation Analytical Procedures
Methodology 6 Nov 1996.
 USP24, Validation of Compendial Methods.
 Norma Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-1993, Estabilidad de medicamentos.
 Diseño y Análisis de Experimentos, Montgomery D. C., Grupo Editorial
Iberoamérica, 3ª Ed. México (1991).





















ANEXOS:







NUMERO CONTENIDO
1 FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL SISTEMA
2 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ADECUABILIDAD DEL SISTEMA
3 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA
4 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA EXACTITUD Y Repetibilidad
DEL MÉTODO
5 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL MÉTODO
6 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISION DEL MÉTODO
(PRECISIÓN INTERMEDIA)
7 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ESTABILIDAD ANALÍTICA
DE LA MUESTRA
8 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE DETECCIÓN
9 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE CUANTIFICACION
10 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ROBUSTEZ
11 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA TOLERANCIA
12 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD Y EXACTITUD
PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
13 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD EN
LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
14 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN EXACTITUD PARA COMPARACIÓN
DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
15 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN LINEALIDAD DEL MÉTODO
PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
16 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN PRECISIÓN DEL
MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
17 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PROPORCIONALIDAD DE
MÉTODOS EN ESTUDIOS DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE
2 MÉTODOS ANALÍTICOS
18 FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL MÉTODO
EN ESTUDIO DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
19 TABLA ESTADÍSTICA DE LA DISTRIBUCIÓN t DE Student
20 TABLAS ESTADÍSTICAS DE LA DISTRIBUCIÓN F DE FISHER
21 COMENTARIOS RESPECTO A LOS CÁLCULOS Y REGLAS DE REDONDEO















ANEXO 1. FÓRMULAS Y PROCEDIMEITN O DE CÁLCULO PARA PRECISIÓN
DEL SISTEMA.

A)FORMULAS:
Media Aritmética
n
¯
=
y
y

Desviación Estándar

( ) ( )
( ) 1
2 2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
n
S
y y


Coeficiente de variación

100 *
y
S
CV =

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n.
Calcular ŷ y S
Calcular el CV


ANEXO 2. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA
ADECUABILIDAD DEL SISTEMA.

A)FORMULAS:
Media Aritmética
n
¯
=
y
y
Desviación estándar

( ) ( )
( ) 1
2 2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
n
S
y y

Coeficiente de variación

100 *
y
S
CV =
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n.
Calcular ŷ y S
Calcular el CV

ANEXO 3. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD
DEL SISTEMA.

A)FORMULAS:
Pendiente
( )
¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷
÷
=
2 2
1
x x n
y x xy n
b
Ordenada al origen
n
x b y
b
¯ ¯
÷
=
1
0
Coeficiente de determinación
( ) ( )( ) ( )
( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 2 2 2 2
2
2
¯ ¯ ¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷ ÷
÷
=
y y n x x n
y x xy n
r

Intervalo de confianza para la pendiente
IC(|
1
) = b
1
± t
0.975,n-2
S
b1

( )
¯
¯
÷
=
n
x
x
S S x y b
2
2
1
/ 1

2
2 1
/
÷
÷ ÷
=
¯ ¯ ¯
n
y b xy b y
S
o
x y
t
0.975, n-2
= Referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de
Student.

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ex, Ey, Ex
2
, Ey
2
, Exy, y determinar n.
Calcular b
1
, b
0
, r
2

Calcular el S
y/x
y S
b’

Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-2
y calcular IC(|
1
)


ANEXO 4. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA EXACTITUD
Y REPETIBILIDAD DEL MÉTODO.
A)FORMULAS:
Media aritmética
n
¯
=
y
y
Desviación estándar

( ) ( )
( ) 1
2 2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
n
S
y y



Coeficiente de variación
100 *
y
S
CV =
Intervalo de confianza para la media poblacional
n
S
t y IC n 1 , 975 . 0 ) ( ÷ ± = μ
t
0.975, n-1
Referirse al anexo 19 para determinar el valor de t de
Student
n = numero de recobros.

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n.
Calcular ŷ y S
Calcular el CV
Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-1
y calcular IC(u)


ANEXO 5. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD
DEL MÉTODO.
5.1 CANTIDAD ADICIONADA VS CANTIDAD RECUPERADA
A)FORMULAS:
Pendiente
( )
¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷
÷
=
2 2
1
x x n
y x xy n
b
Ordenada al origen
n
x b y
b
¯ ¯
÷
=
1
0

Coeficiente de determinación

( ) ( )( ) ( )
( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 2 2 2 2
2
2
¯ ¯ ¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷ ÷
÷
=
y y n x x n
y x xy n
r

Intervalo de confianza para la pendiente
IC(|
1
) = b
1
± t
0.975,n-2
S
b’

( )
¯
¯
÷
=
n
x
x
S S x y b
2
2
1
/ '

2
2 1
/
÷
÷ ÷
=
¯ ¯ ¯
n
y b xy b y
S
o
x y
t
0.975, n-2
= Referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de
Student.


Intervalo de confianza para la ordenada al origen
IC(|
o
) = b
o
± t
0.975,n-2
S
bo


( )
( )
¯
¯
÷
+ =
n
x
x
x
n
S S x y bo
2
2
2 1
/

n
x
x
¯
=
Coeficiente de variación de regresión

100
/
/ × =
y
x y
x y
S
CV

n
¯
=
y
y

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ex, Ey, Ex
2
, Ey
2
, Exy, y determinar n.
Calcular b
1
, b
0
, r
2

Calcular el S
y/x
y S
b’

Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-2
y calcular IC(|
1
)
Calcular x y S
bo

Calcular IC(b
0
)
Calcular el CV
y/x

5.2 PORCENTAJE DE RECOBRO
A)FORMULAS:
Media aritmética
n
¯
=
y
y

Desviación estándar

( ) ( )
( ) 1
2 2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
n
S
y y


Coeficiente de variación

100 *
y
S
CV =
Intervalo de confianza para la media poblacional

n
S
t y IC n 1 , 975 . 0 ) ( ÷ ± = μ

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n.
Calcular ŷ y S
Calcular el CV
Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-1
y calcular IC(u)


ANEXO 6. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN
DEL MÉTODO (PRECISIÓN INTERMEDIA).
A)FORMULAS:
Media aritmética
n
¯
=
y
y
Desviación estándar

( ) ( )
( ) 1
2 2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
n
S
y y


Coeficiente de variación

100 *
y
S
CV =

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n.
Calcular ŷ y S
Calcular el CV


ANEXO 7. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA
ESTABILIDAD ANALÍTICA DE LA MUESTRA.
A)FORMULAS:
Media aritmética del análisis inicial

o n
0
¯
=
y
y0
n
o
= número de muestras del análisis inicial
Media aritmética del análisis de cada condición de almacenaje

1 n
¯
=
1
1
y
y
n
1
= número de muestras del análisis de la i-ésima condición de almacenaje


Diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición de
almacenaje respecto de la media aritmética del análisis inicial
0 1 y y di ÷ =

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey
0
, Ey
1
, Ey
2
, Ey
3
y determinar n
o
, n
1
, n
2
, n
3

Calcular ŷ
o
, ŷ
1
, ŷ
2
, ŷ
3

Calcular |d
i
|


ANEXO 8. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE
DETECCIÓN.
8.1 SEÑAL RUIDO
Tabular los resultados.
8.2 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN
ESTÁNDAR DE LOS BLANCOS
A)FORMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACIÓN:
Pendiente
( )
¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷
÷
=
2 2
1
x x n
y x xy n
b

Coeficiente de determinación

( ) ( )( ) ( )
( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 2 2 2 2
2
2
¯ ¯ ¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷ ÷
÷
=
y y n x x n
y x xy n
r

Intervalo de confianza para la pendiente

IC(|
1
) = b
1
± t
0.975,n-2
S
b1

( )
¯
¯
÷
=
n
x
x
S S x y b
2
2
1
/ 1

2
2 1
/
÷
÷ ÷
=
¯ ¯ ¯
n
y b xy b y
S
o
x y

n
x b y
b
¯ ¯
÷
=
1
0
Intervalo de confianza para la pendiente
t
0.975, n-2=
referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de
Student



B)FORMULA PARA LOS BLANCOS
Desviación estándar de los blancos

( ) ( )
( ) 1
2 2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
n
Sb
y y

n = numero de blancos

C)FORMULA PARA EL LIMITE DE DETECCIÓN

1
3 . 3
b
S
LD
b ×
=


D)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIÓN
Tabular los resultados
Calcular Ex, Ey, Ex
2
, Ey
2
, Exy, y determinar n.
Calcular b
1
, r
2

Calcular el S
y/x
y S
b1
, b
o

Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-2
y calcular IC(|
1
)
E)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOS
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
, y determinar n.
Calcular S
b

Calcular el LD

8.3 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADA EN LA DESVIACIÓN
ESTÁNDAR DE REGRESIÓN
A)FORMULAS
Pendiente
( )
¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷
÷
=
2 2
1
x x n
y x xy n
b

Coeficiente de determinación

( ) ( )( ) ( )
( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 2 2 2 2
2
2
¯ ¯ ¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷ ÷
÷
=
y y n x x n
y x xy n
r

Intervalo de confianza para la pendiente

IC(|
1
) = b
1
± t
0.975,n-2
S
b1

( )
¯
¯
÷
=
n
x
x
S S x y b
2
2
1
/ 1

2
2 1
/
÷
÷ ÷
=
¯ ¯ ¯
n
y b xy b y
S
o
x y

n
x b y
b
¯ ¯
÷
=
1
0

t
0.975, n-2=
referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

Limite de detección
1
/ 3 . 3
b
S
LD
x y ×
=

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO
Tabular los resultados
Calcular Ex, Ey, Ex
2
, Ey
2
, Exy, y determinar n.
Calcular b
1
, r
2

Calcular el S
y/x
y S
b’
, b
o

Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-2
y calcular IC(|
1
)
Calcular el limite de detección
8.4 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN
ESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN
A)FORMULAS
Pendiente
( )
¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷
÷
=
2 2
1
x x n
y x xy n
b

Coeficiente de determinación

( ) ( )( ) ( )
( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 2 2 2 2
2
2
¯ ¯ ¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷ ÷
÷
=
y y n x x n
y x xy n
r

Intervalo de confianza para la pendiente
IC(|
1
) = b
1
± t
0.975,n-2
S
b1

( )
¯
¯
÷
=
n
x
x
S S x y b
2
2
1
/ 1

2
2 1
/
÷
÷ ÷
=
¯ ¯ ¯
n
y b xy b y
S
o
x y

n
x b y
b
¯ ¯
÷
=
1
0
t
0.975, n-2=
referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

Desviación estándar de la ordenada al origen

( )
( )
¯
¯
÷
+ =
n
x
x
x
n
S S x y bo
2
2
2 1
/

n
x
x
¯
=

Limite de detección

1
3 . 3
b
S
LD
bo ×
=

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO
Tabular los resultados
Calcular Ex, Ey, Ex
2
, Ey
2
, Exy, y determinar n.
Calcular b
1
, r
2

Calcular el S
y/x
y S
b’
, b
o

Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-2
y calcular IC(|
1
)
Calcular x y S
bo

Calcular el LD


ANEXO 9. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE
CUANTIFICACIÓN.
9.1 SEÑAL RUIDO
Tabular los resultados.
8.2 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN
ESTÁNDAR DE LOS BLANCOS
A)FORMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACIÓN:
Pendiente
( )
¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷
÷
=
2 2
1
x x n
y x xy n
b
Coeficiente de determinación

( ) ( )( ) ( )
( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 2 2 2 2
2
2
¯ ¯ ¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷ ÷
÷
=
y y n x x n
y x xy n
r

Intervalo de confianza para la pendiente

IC(|
1
) = b
1
± t
0.975,n-2
S
b1

( )
¯
¯
÷
=
n
x
x
S S x y b
2
2
1
/ 1
2
2 1
/
÷
÷ ÷
=
¯ ¯ ¯
n
y b xy b y
S
o
x y

n
x b y
b
¯ ¯
÷
=
1
0
t
0.975, n-2=
referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

B)FORMULA PARA LOS BLANCOS
Desviación estándar de los blancos

( ) ( )
( ) 1
2 2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
n
Sb
y y

n = número de blancos

C)FORMULA PARA EL LIMITE DE CUANTIFICACIÓN

1
10
b
S
LC
b ×
=

D)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIÓN
Tabular los resultados
Calcular Ex, Ey, Ex
2
, Ey
2
, Exy, y determinar n.
Calcular b
1
, r
2

Calcular el S
y/x
y S
b’
, b
o

Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-2
y calcular IC(|
1
)
E)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOS
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
, y determinar n.
Calcular S
b
Calcular el LC
9.3 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADA EN LA DESVIACIÓN
ESTÁNDAR DE REGRESIÓN
A)FORMULAS
Pendiente
( )
¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷
÷
=
2 2
1
x x n
y x xy n
b

Coeficiente de determinación

( ) ( )( ) ( )
( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 2 2 2 2
2
2
¯ ¯ ¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷ ÷
÷
=
y y n x x n
y x xy n
r





Intervalo de confianza para la pendiente

IC(|
1
) = b
1
± t
0.975,n-2
S
b1

( )
¯
¯
÷
=
n
x
x
S S x y b
2
2
1
/ 1

2
2 1
/
÷
÷ ÷
=
¯ ¯ ¯
n
y b xy b y
S
o
x y

n
x b y
b
¯ ¯
÷
=
1
0
t
0.975, n-2=
referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

Limite de cuantificación

1
/ 10
b
S
LC
x y ×
=

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO
Tabular los resultados
Calcular Ex, Ey, Ex
2
, Ey
2
, Exy, y determinar n.
Calcular b
1
, r
2

Calcular el S
y/x
y S
b’
, b
o

Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-2
y calcular IC(|
1
)
Calcular el LC

9.4 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN
ESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN
A)FORMULAS
Pendiente
( )
¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷
÷
=
2 2
1
x x n
y x xy n
b

Coeficiente de determinación

( ) ( )( ) ( )
( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 2 2 2 2
2
2
¯ ¯ ¯ ¯
¯ ¯ ¯
÷ ÷
÷
=
y y n x x n
y x xy n
r







Intervalo de confianza para la pendiente

IC(|
1
) = b
1
± t
0.975,n-2
S
b1

( )
¯
¯
÷
=
n
x
x
S S x y b
2
2
1
/ 1

2
2 1
/
÷
÷ ÷
=
¯ ¯ ¯
n
y b xy b y
S
o
x y

n
x b y
b
¯ ¯
÷
=
1
0
t
0.975, n-2=
referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student

Desviación estándar de la ordenada al origen

( )
( )
¯
¯
÷
+ =
n
x
x
x
n
S S x y bo
2
2
2 1
/

n
x
x
¯
=

Limite de cuantificación

1
10
b
S
LC
b ×
=

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO
Tabular los resultados
Calcular Ex, Ey, Ex
2
, Ey
2
, Exy, y determinar n.
Calcular b
1
, r
2

Calcular el S
y/x
y S
b’
, b
o

Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-2
y calcular IC(|
1
)
Calcular x y S
bo

Calcular el LC










ANEXO 10. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA ROBUSTEZ.
A)FORMULAS:
Media aritmética de la condición de operación.
0
0
n
y
yo
¯
=
n
o
= numero e muestras de la condición normal de operación

Media aritmética del análisis de cada condición de operación diferente a
la condición normal
1
1
1
n
y
y
¯
=
n
1
= numero de muestras de la i-esima condición de operación

Diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición respecto de
la media aritmética de la condición normal.

0 1 y - y = i d

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey
0
, Ey
1
, Ey
2
, y determinar n
o
, n
1
, n
2
.
Calcular ŷ
o
, ŷ
1
, ŷ
2
.
Calcular |d
i
|


ANEXO 11. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA
TOLERANCIA
A)FORMULAS:
Media aritmética
n
¯
=
y
y

Desviación estándar


( ) ( )
( ) 1
2 2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
n
S
y y


Coeficiente de variación

100 *
y
S
CV =


B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n.
Calcular ŷ y S
Calcular el CV


ANEXO 12. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA
REPETIBILIDAD EN EXACTITUD PARA COMPARACIÓN DE 2
MÉTODOS ANALÍTICOS.
A)FORMULAS:
Varianza
( )
( ) 1
2 2
2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
y y n
S
Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza
para la razón de varianzas, se debe establecer.
S
1
2
= varianza menor
S
2
2
= varianza menor

Intervalo de confianza para la razón de varianzas.

1 , 1 , 975 . 0
1
2
1
1 , 1 , 025 . 0
1
2
1 2 1 2
2
2
2
22
2
2
÷ ÷ s s ÷ ÷ × × n n n n F
S
S
F
S
S
σ
σ


F
0.025,n2-1, n1-1
y F
0.975, n2-1, n1-1
= Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher
n
2
-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n
1
-1 son los grados de libertad de la varianza
menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.
.n
1
= numero de recobros del método de varianza menor
.n
2
= numero de recobros del método de varianza mayor

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n para cada método analítico
Calcular la varianza de cada método
Determinar la varianza mayor (S
2
2
) y la varianza menor (S
1
2
)
Determinar en el anexo 20 F
0.025, n2-1, n1-1
y F
0.925, n2-1, n1-1

Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.

ANEXO 13. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA
REPETIBILIDAD EN LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA
COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS.
A)FORMULAS:
Varianza

( )
( ) 1
2 2
2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
y y n
S

Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza
para la razón de varianzas, se debe establecer.
S
1
2
= varianza menor
S
2
2
= varianza menor
Intervalo de confianza para la razón de varianzas.

1 , 1 , 975 . 0
1
2
1
1 , 1 , 025 . 0
1
2
1 2 1 2
2
2
2
22
2
2
÷ ÷ s s ÷ ÷ × × n n n n F
S
S
F
S
S
σ
σ


F
0.025,n2-1, n1-1
y F
0.975, n2-1, n1-1
= Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher
n
2
-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n
1
-1 son los grados de libertad de la varianza
menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.
.n
1
= numero de recobros del método de varianza menor
.n
2
= numero de recobros del método de varianza mayor

B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular el porcentaje de recobro de cada muestra en cada método (y), al
obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad
adicionada expresada en porcentaje.
Calcular Sy, Sy
2
y determinar n para cada método analítico
Calcular la varianza de cada método
Determinar la varianza mayor (S
2
2
) y la varianza menor (S
1
2
)
Determinar en el anexo 20 F
0.025 n2-1, n1-1
y y F
0.925, n2-1, n1-1
y
Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.


ANEXO 14. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN EXACTITUD
PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS.
14.1 COMPARACIÓN DE Repetibilidad DE AMBOS MÉTODOS:
A)FORMULAS:
Varianza

( )
( ) 1
2 2
2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
y y n
S

Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza
para la razón de varianzas, se debe establecer.
S
1
2
= varianza menor
S
2
2
= varianza menor

Intervalo de confianza para la razón de varianzas.

1 , 1 , 975 . 0
1
2
1
1 , 1 , 025 . 0
1
2
1 2 1 2
2
2
2
22
2
2
÷ ÷ s s ÷ ÷ × × n n n n F
S
S
F
S
S
σ
σ


F
0.025,n2-1, n1-1
y F
0.975, n2-1, n1-1
= Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher
n
2
-1 son grados de libertad de la varianza mayor, que corresponden a los grados
de libertad del numerador; y n
1
-1 son los grados de libertad de la varianza
menor, que corresponden a los grados de libertad del denominador.
.n
1
= numero de recobros del método de varianza menor
.n
2
= numero de recobros del método de varianza mayor
14.2 IGUAL REPETIBILIDA (VARIANZAS EQUIVALENTES):
A)FORMULAS:
Media aritmética del método 1.

1
1
1
n
y
y
¯
=

Media aritmética del método 2.

2
2
2
n
y
y
¯
=

Varianza del método 1.

( )
( ) 1
2 2
2
1 1
1 1 1
1
÷
÷
=
¯ ¯
n n
y y n
S


Varianza del método 2.

( )
( ) 1
2 2
2
2 2
2 2 2
2
÷
÷
=
¯ ¯
n n
y y n
S
Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.

( ) ( ) 2 975 . 0 2 1 2 1 n n t IC + ± = ÷ 2 1 y - y μ μ


B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n para cada método analítico
Calcular la varianza de cada método
Determinar la varianza mayor (S
2
2
) y la varianza menor (S
1
2
)
Determinar en el anexo 20 F
0.025, n2-1, n1-1
y F
0.925, n2-1, n1-1

Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.
Tabular otra vez los resultados.
Calcular Ey
1
, Ey
2
, Ey
1
2
, Ey
2
2
, y determinar n
1
y n
2
.
Calcular ŷ
1
, ŷ
2

Calcular S
1
2
, S
2
2

Determinar en el anexo 19 t
0.975, n1+n2
y calcular IC(u
1
-u
2
)
14.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES):
A)FORMULAS:
Media aritmética del método 1.
Media aritmética del método 2.
Varianza del método 1.
Varianza del método 2.
Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n para cada método analítico
Calcular la varianza de cada método
Determinar la varianza mayor (S
2
2
) y la varianza menor (S
1
2
)
Determinar en el anexo 20 F
0.025, n2-1, n1-1
y F
0.925, n2-1, n1-1

Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.
Tabular otra vez los resultados.
Calcular Ey
1
, Ey
2
, Ey
1
2
, Ey
2
2
, y determinar n
1
y n
2
.
Calcular ŷ
1
, ŷ
2

Calcular S
1
2
, S
2
2

Calcular gl
Determinar en el anexo 19 t
0.975, gl
y calcular IC(u
1
-u
2
)





ANEXO 15. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN LINEALIDAD
DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS
ANALÍTICOS.
15.1 CANTIDAD ADICIONADA (x) VS CANTIDAD RECUPERADA (y):
A)FORMULAS:
Sumatorias
Pendiente del método 1.
Pendiente del método 2.
Ordenada al origen del método 1.
Ordenada al origen del método 2.
Desviación estándar de regresión.
Intervalo de confianza para la diferencia de las 2 pendientes.
Intervalo de confianza para la diferencia de las ordenadas al origen
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ex
1
, Ex
1
2
, Ex
2
, Ex
2
2
, Ey
1
, Ey
1
2
, Exy
1
, Ey
2
, Ey
2
2
, Exy
1
y
determinar n
1
y n
2
.
Calcular b
11
, b
12
, b
01
, b
o2

Calcular S
x/y
y S
b11
– S
b12

Determinar en el anexo 19 t
0.97523,
y calcular IC(|
1
-|
2
)
Calcular x
1
, x
2
, S
bo1
-S
bo2

Calcular IC(|
01
-|
02
)
15.2 PORCENTAJE DE RECOBRO:
15.2.1 COMPARACIÓN DE Repetibilidad DE AMBOS MÉTODOS
A)FORMULAS:
Varianza
Intervalo de confianza para la razón de varianzas.
15.2.2 IGUAL Repetibilidad (VARIANZAS EQUIVALENTES)
A)FORMULAS:
Media aritmética del método 1.
Media aritmética del método 2.
Varianza del método 1.
Varianza del método 2.
Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.
15.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES):
A)FORMULAS:
Media aritmética del método 1.
Media aritmética del método 2.
Varianza del método 1.
Varianza del método 2.
Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n para cada método analítico
Calcular la varianza de cada método
Determinar la varianza mayor (S
2
2
) y la varianza menor (S
1
2
)
Determinar en el anexo 20 F
0.025, n2-1, n1-1
y F
0.925, n2-1, n1-1

Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.
Tabular otra vez los resultados.

Calcular Ey
1
, Ey
2
, Ey
1
2
, Ey
2
2
, y determinar n
1
y n
2
.
Calcular ŷ
1
, ŷ
2

Calcular S
1
2
, S
2
2

Determinar en el anexo 19 t
0.975, gl
y calcular IC(u
1
-u
2
)

ANEXO 16. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN PRECISIÓN DEL
MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS.
A)FORMULAS:
Varianza
Intervalo de confianza para la razón de varianzas.
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados
Calcular Ey, Ey
2
y determinar n para cada método analítico
Calcular la varianza de cada método
Determinar la varianza mayor (S
2
2
) y la varianza menor (S
1
2
)
Determinar en el anexo 20 F
0.025, n2-1, n1-1
y F
0.925, n2-1, n1-1

Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.

ANEXO 17. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA
PROPORCIONALIDAD DE MÉTODOS EN ESTUDIO DE
CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS
ANALÍTICOS.
A)FORMULAS:
Pendiente
Ordenada al origen
Coeficiente de determinación
Intervalo de confianza para la pendiente
Coeficiente de variación de regresión.
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados (datos primarios)
Calcular Ex, Ey, Ex
2
, Ey
2
, Exy, y determinar n.
Calcular b
1
, b
0
, r
2

Calcular el S
y/x
y S
b’

Determinar en el anexo 19 t
0.975, n-2
y calcular IC(|
1
)

ANEXO 18. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN
DEL MÉTODO EN ESTUDIOS DE CORRELACIÓN PARA
COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS
A)FORMULAS:
Varianza del método oficial.
Varianza del método no oficial.
Limite unilateral inferior de confianza para la razón de varianzas.
B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO:
Tabular los resultados (datos primarios)
Calcular Ey
1
, Ey
1
2
, Ey
2
, Ey
2
2
, y determinar n
1
y n
2
.
Calcular la varianza del método oficial y del método no oficial.
Determinar en el anexo 20 F
0.05
Calcular el limite unilateral inferior de confianza para la razón de
varianzas.

ANEXO 19. TABLA ESTADÍSTICA DE LA DISTRIBUCIÓN t DE Student.

GRADOS DE
LIBERTAD
t
0.975
GRADOS DE
LIBERTAD
t
0.975
GRADOS DE
LIBERTAD
t
0.975

1 12.706 26 2.056 51 2.008
2 4.303 27 2.052 52 2.007
3 3.182 28 2.048 53 2.006
4 2.776 29 2.045 54 2.005
5 2.571 30 2.042 55 2.004
6 2.447 31 2.040 56 2.003
7 2.365 32 2.037 57 2.002
8 2.306 33 2.035 58 2.002
9 2.262 34 2.032 59 2.001
10 2.228 35 2.030 60 2.000
11 2.201 36 2.028 61 2.000
12 2.179 37 2.026 62 1.999
13 2.160 38 2.024 63 1.998
14 2.145 39 2.023 64 1.998
15 2.131 40 2.021 65 1.997
16 2.120 41 2.020 66 1.997
17 2.110 42 2.018 67 1.996
18 2.101 43 2.017 68 1.995
19 2.093 44 2.015 69 1.995
20 2.086 45 2.014 70 1.994
21 2.080 46 2.013 71 1.994
22 2.074 47 2.012 72 1.993
23 2.069 48 2.011 73 1.993
24 2.064 49 2.010 74 1.993
25 2.060 50 2.009 75 1.992






























































                     

Linealidad.-Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos directamente o por una transformación matemática, son proporcionales a la concentración del analito. Metodología de prueba.-Procedimiento para determinar si un producto o materia prima cumple con las especificaciones establecidas. Método analítico.-descripción de la secuencia de actividades, materiales y parámetros que se deben cumplir para llevar a cabo el análisis de un componente específico de la muestra. Método analítico desarrollado internamente.-Método desarrollado por el propio laboratorio. Método analítico indicativo de estabilidad.-Método cuantitativo capaz de detectar variaciones en las propiedades del material evaluado, debido a las condiciones de almacenaje. Método analítico oficial.-Método que aparece en la literatura oficial reconocida. Método analítico no oficial.-Método que no aparece en la literatura oficial reconocida. Muestra.-Porción del material a evaluar. Muestra analítica.-Porción del material a evaluar de acuerdo al método analítico. Muestra adicionada.-Porción representativa del material a evaluar, a la que se le adicionan cantidades conocidas del analito. Parámetros de desempeño.-Parámetro específico a estudiar en un protocolo de validación. Placebo analítico.-Muestra que contiene todos los componentes de un producto a excepción del analito. Placebo adicionado.-Muestra e un placebo analítico al cual se le adiciona una cantidad conocida del analito. Precisión.-Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homogénea. Precisión intermedia.-Precisión de un método analítico, expresada como la concordancia relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas en un mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos días. Proporcionalidad.-Relación establecida por una ecuación matemática entre los resultados obtenidos por dos métodos analíticos. Protocolo de validación,.Descripción de pruebas específicas para demostrar que un proceso da resultados que cumplen con los criterios preestablecidos de manera consistente. Recobro.-Cantidad del analito determinada en el placebo adicionado, empleando el método analítico. Repetibilidad.-Precisión de un método analítico, expresada como la concordancia obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un solo analista, usando los mismos instrumentos y métodos. Reproducibilidad.-.Precisión de un método analítico, expresada como la concordancia entre determinaciones independientes realizadas por diferentes laboratorios. Revalidación.-comprobación de que el método analítico mantiene su desempeño cuando existen cambios en la composición del producto, en el método analítico. Robustez.-Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al presentarse variaciones pequeñas pero deliberadas, en los parámetros normales de operación del método.

   

Sustancia de referencia.-Sustancia de uniformidad reconocida destinada a utilizarse en comprobaciones analíticas físicas, químicas o microbiológicas en el transcurso de las cuales se comparan con la sustancia en evaluación. Sustancia de referencia primaria.-Sustancia que es designada por tener la más alta calidad microbiológica, cuyas propiedades se aceptan sin referencia a otras sustancias. Sustancia de referencia secundaria.-Sustancia cuyas propiedades se asignan por comparación con una sustancia de referencia primaria, o bien, cuando es certificada mediante un procedimiento científicamente reconocido. Tolerancia.-Reproducibilidad de los resultados analíticos obtenidos por el análisis de la misma muestra bajo diferentes condiciones normales de operación. La robustez y la tolerancia son conceptos diferentes, ya que el primero se refiere a la influencia de factores internos del método, mientras que la tolerancia se refiere a factores externos del método. Validación del método analítico.-Proceso por el cual se demuestra, por estudios de laboratorio, que la capacidad del método satisface los requisitos para la aplicación analítica deseada.

CLASIFICACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS: Los métodos se clasifican bajo los siguientes criterios:  En función de su estado regulatorio: a) Métodos farmacopeicos b) Métodos no farmacopeicos  En función de su aplicación (NOM-059-SSA1 y NOM-073-SSA1): a) Métodos para producto a granel, b) Métodos para producto terminado, c) Métodos para muestra primaria, y d) Métodos indicadores de estabilidad.  En función de la naturaleza de la respuesta analítica: a) Métodos físico-químicos.- cuando la respuesta es de carácter físico (absorción de luz, emisión de luz, voltaje, etc.) o químico(consumo de iones –OH, consumo de un acomplejante, etc.) b) Métodos biológicos.- cuando la respuesta es de carácter biológico (crecimiento de microorganismos, protección, muerte, etc.)  En función de su propósito analítico: a) Métodos para cuantificar el analito(contenido o potencia) b) Métodos para establecer la presencia del analito a un limite. c) Métodos para identificar el analito. Esta clasificación se utiliza para establecer los parámetros de desempeño a estudiar en la validación del método analítico. Cualquier método analítico puede estar constituido por técnicas de separación, extracción, etc. , y por técnicas de medición (espectrofotometría, volumetría, colorimetría, potenciometría, etc.) que permiten medir la respuesta del analito en la muestra. A esta técnica se le denomina Sistema de Medición.  En función de la naturaleza del sistema de medición: a) Métodos en los cuales el instrumento de medición de la respuesta analítica, permite medir una señal de ruido (cromatógrafo de líquidos y de gases, espectrofotómetros, etc.) b) Métodos en los cuales el instrumento de medición no permite medir una señal de ruido (buretas, medidor de halos, potenciómetros, etc.)

PARÁMETROS DE DESEMPEÑO: En función de la aplicación analítica de un método, se indican los parámetros de desempeño a estudiar.
PRUEBAS DE IMPUREZAS
PARÁMETRO DE DESEMPEÑO PRECISIÓN/ ADECUABILIDAD DEL SISTEMA LINEALIDAD DEL SISTEMA ESPECIFICIDAD2 EXACTITUD Y REPETIBILIDAD LINEALIDAD DEL MÉTODO PRESICIÓN DEL MÉTODO O PRECISIÓN INTERMEDIA2 ESTABILIDAD ANALÍTICA2 DE LA MUESTRA LIMITE DE DETECCION LIMITE DE CUANTIFICACION ROBUSTEZ TOLERANCIA CONTENIDO/ CONTENIDO/ POTENCIA / VALORACIÓN VALORACIÓN SÍ SÍ SÍ SÍ SÍ SÍ SÍ * NO NO * * SÍ SÍ SÍ SÍ SÍ * NO SÍ * * LIMITE IDENTIFICACIÓN

SÍ NO SÍ NO NO NO NO SÍ NO * *

* NO SÍ NO NO NO NO NO NO NO NO

*Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza del método. 1. La falta de especificidad de un método analítico, puede ser compensada por otra alternativa analítica de soporte, como por ejemplo cromatografía de capa fina. 2. También es definido como un estudio de tolerancia. 3. Un método que es exacto y lineal, por definición es específico al placebo analítico o a los otros componentes de la muestra. DETERMINACIONES, METODOLOGÍA Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN:  Precisión del Sistema: Metodología.- Preparar por lo menos un sextuplicado de soluciones a la concentración del analito que represente la concentración de la solución de referencia utilizada o en ciertos casos, la concentración que represente el 100% de la muestra procesada para su medición; preparadas por dilución o por pesadas independientes. Medir la respuesta analítica bajo las mismas condiciones. Calcular S y CV de la respuesta analítica; Criterios de aceptación: CV  1.5% para métodos físico-químicos CV  3% para métodos biológicos Valores superiores u otro criterio de aceptación deben ser justificados. Las formulas y el procedimiento se encuentra en el anexo 1.  Adecuabilidad del sistema (Métodos cromatográficos): Metodología.- Inyectar por quintuplicado la solución de adecuabilidad, reportar la respuesta del analito, calcular el CV y para cada inyección: Factor capacidad (K’), resolución (si procede, R), retención relativa (si procede, Rr), factor de coleo (T), número de platos teóricos (N).

Valores superiores deben ser justificados.  Linealidad del sistema: Metodología. Medir la respuesta analítica bajo las mismas condiciones de medición.Preparar por lo menos por triplicado 5 niveles de concentración (intervalo) de la solución de referencia ya sea por dilución o por pesadas independientes. . El intervalo esta en función del propósito del método y se expresa como % de la concentración de la solución de referencia o en función del contenido del analito en la muestra. Criterios de aceptación: r2  0. Antes de la validación del método analítico deben establecerse los criterios para la operación del sistema para ser evaluados en la validación y verificados de manera rutinaria al emplear el método analítico. b0. Calcular b1. no debe incluir el cero Otro criterio de aceptación debe ser justificado. Para contenido/potencia/valoración se sugiere un mínimo de 20% Para contenido/valoración de impurezas desde un nivel apropiado hasta un 20% por arriba de la especificación. en el caso de métodos fotométricos la lectura de soluciones blanco. La evaluación de adecuabilidad del sistema permite verificar que el sistema de medición funcione adecuadamente. Para métodos indicadores de estabilidad desde un nivel apropiado hasta un 120% Es critico que el intervalo no excluya valores de concentración que potencialmente puedan dar lugar al contenido del analito en la muestra. IC(1). r2.. independiente de las condiciones ambientales. R>2 . La concentración central debe ser igual a la que se prepara la solución de referencia en el método o la que represente el 100% en la muestra procesada para su medición. el volumen de la titulación de blancos y/o de un volumen específico de la solución de referencia. Por ejemplo en el caso de método volumétricos. Para cada inyección.Criterios de aceptación: CV  2% para respuesta analítica. reportar la relación concentración vs respuesta analítica.98 IC(1). T<2 Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 2. se recomienda: K’>2 .

incluyendo en ella la ecuación. Para métodos no selectivos. ajustando el pH de 1 a 2 y/o de 10 a 12 y someterlas a 60°C – 80°C. el placebo y la muestra a temperaturas de 20°C por debajo del punto de fusión del analito de 2 a 4 semanas. placebo y muestra a luz UV. Para métodos de límite de impurezas se analizaran las muestras de impurezas individualmente. Es conveniente trazar la gráfica de la concentración (x) vs la respuesta analítica (y). si se cuenta con los productos de degradación. homólogos y una mezcla de ellos con el producto. precursores. El tiempo y las condiciones se seleccionan con el fin de degradar al analito a niveles del 15 al 30%. la especificidad se sustenta con los resultados de exactitud y linealidad. 4) Adicionar peróxido de hidrógeno para favorecer la oxidación del analito. si el método cumple con los criterios de aceptación. el placebo adicionado de analito y productos de degradación y se analizan con el método. línea de ajuste y el coeficiente de determinación.. se analizan placebos del producto y cuando proceda sustancias relacionadas. Estos estudios no se realizan en analitos con propiedades reactivas. fluorescente y/o humedad relativa. En métodos de identificación seleccionar sustancias que potencialmente interfieran en la determinación con base en la estructura del analito.Establecer las posibles sustancias interferentes y adicionar cantidades conocidas de éstas. 2) Exponer el analito. Para métodos de contenido/ potencia/ valoración. el analito se somete a condiciones que generen su inestabilidad química y aplicar el método. solas o combinadas a la muestra y evaluar su respuesta bajo las mismas condiciones de análisis. Criterios de aceptación: . el placebo adicionado de analito. 3) Hacer soluciones del analito. preparar muestras con placebos adicionado de éstos. se adicionan éstas al analito en niveles que incluya la especificación. Para métodos de contenido/ valoración de impurezas.  Especificidad: Metodología. Para métodos indicadores de inestabilidad. Si no se cuenta con los productos de degradación se puede favorecer la inestabilidad del analito en la muestra: 1) Someter el analito. Cuando no se dispone de las impurezas. el producto y la mezcla de éstos.Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 3.

Criterios de aceptación: IC() debe incluir el 100% o que el promedio aritmético del % de recobro se incluya en el intervalo: 98-102% método cromatográfico 98-102% método volumétrico 97-103% método químico o espectrofotométrico 95-105% método microbiológico CV del porcentaje de recobro: No mayor de 2% en método cromatográfico No mayor de 2% en método volumétrico No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico No mayor de 5% en método microbiológico No mayor a una magnitud preestablecida. Las muestras adicionadas se analizan usando como referencia la sustancia empleada en la adición de la muestra. se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de este en la muestra. El mismo analista analizara los placebos adicionados utilizando de referencia la sustancia empleada en la adición al placebo analítico en las mismas condiciones. Determinar la cantidad recuperada del analito. Determinar la cantidad recuperada del analito. al obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresada en porcentaje. S. Calcular ŷ. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad por sextuplicado. se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de este en la muestra. La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método. B)Si no se conocen los componentes de la muestra. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 4. A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra analítica por  . Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo analítico.La respuesta del método solo se deberá al analito. con el método se determina el contenido del analito y se preparan 6 muestras adicionadas del analito hasta completar el 100% de éste en la muestra. CV e IC() del porcentaje de recobro. Linealidad del método: Metodología: A) Conociendo los componentes de la muestra se preparará el placebo analítico.  Exactitud y Repetibilidad del método: Metodología: A)Conociendo los componentes de la muestra se preparará el placebo analítico. A la cantidad de placebo analito equivalente a una muestra analítica por sextuplicado. acorde a la especificación del analito en la muestra.

Determinar la cantidad recuperada del analito. La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método. Criterios de aceptación: . Q –25% LIMITE SUPERIOR (LS) LS – 20% a LS +20% CONTENIDO/ VALORACIÓN PARA PRUEBAS DE IMPUREZAS EJEMPLO Sustancias Relacionadas 80% a 120% No debe contener más de 100% Por lo tanto los niveles podrían Ser 80%. Utilizar el método de estimación por mínimos cuadrados y calcular b1. El intervalo de la concentración del analito adicionado depende del propósito del método y debe incluir la especificación.110% 80% a 120% Por lo tanto los niveles podrían Ser 80%. El mismo analista analizara los placebos adicionados utilizando de referencia la sustancia empleada en la adición al placebo analítico en las mismas condiciones. IC() del porcentaje de recobro. CV. PROPÓSITO CONTENIDO/ POTENCIA/ VALORACIÓN ESPECIFICACIÓN LÍMITE INFERIOR (LI) LIMITE SUPERIOR (LS) INTERVALO MÍNIMO LI –10% A LS +10% EJEMPLO VALORACIÓN 90% . IC(1). ninguna unidad es menor a 100% y 130% Ser 40%. Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo o muestra adicionada al obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresada en porcentaje. por ejemplo el 100% puede representar 100mg/g de muestra. 10ppm. B) Si no se conocen los componentes de la muestra.125% DISOLUCIÓN Q = 75% 40% a 130% En el caso conservador de llegar tanto los niveles podrían Por lo a tercera etapa. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad del analito (intervalo) y preparar la muestra adicionada por triplicado a cada nivel manteniendo constante la cantidad de muestra en los tres niveles Las muestras adicionadas se analizan usando como referencia la sustancia empleada en la adición de la muestra. Determinar la cantidad recuperada del analito. Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad del analito (intervalo) y preparar el placebo adicionado por triplicado a cada nivel manteniendo constante la cantidad de placebo analítico en los tres niveles. r2. IC(0) y CVy/x. 100% y 120% Reportar la relación cantidad adicionada vs cantidad recuperada. 5mg/ml. se adicionara la cantidad de analito correspondiente al 100% de este en la muestra. b0. en la cual la especificación se maneja como porcentaje. 100% y 120% 60% a 140% Por lo tanto los niveles podrían Ser 60%. etc. La siguiente tabla sugiere intervalos para el estudio de linealidad. con el método se determina el contenido del analito y se preparan 3 muestras adicionadas del analito hasta completar el 100% de éste en la muestra. 100% y 140% UNIFORMIDAD DE DOSIS 75% . Calcular ŷ. S.triplicado.

 Precisión del Método (Precisión Intermedia o Tolerancia interdía / analista): Metodología. CV del contenido/potencia/valoración. Otro criterio de aceptación debe ser justificado..Analizar por triplicado una muestra homogénea del producto que tenga un nivel cercano o igual al 100% (para contenido/potencia/valoración) o una muestra cuyo contenido este incluido en el intervalo lineal de concentración de linealidad de método (para impurezas) en dos días diferentes y por dos analistas diferentes. Es conveniente trazar la gráfica de la cantidad adicionada (x) vs la cantidad recuperada (y). Criterios de aceptación: CV  2% para métodos cromatográficos y volumétricos . S. incluyendo en ella la ecuación. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 5. utilizando todos los resultados obtenidos. 2) Porcentaje de recobro: El IC() debe incluir el 100% o el promedio aritmético del % de recobro se incluya en el intervalo: 98-102% método cromatográfico 98-102% método volumétrico 97-103% método químico o espectrofotométrico 95-105% método microbiológico CV del porcentaje de recobro: No mayor de 2% en método cromatográfico No mayor de 2% en método volumétrico No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico No mayor de 5% en método microbiológico No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del analito en la muestra. Reportar el contenido/potencia/valoración del analito de todas las muestras.1) Cantidad adicionada vs cantidad recuperada: r2 > 0. Calcular ŷ. línea de ajuste y el coeficiente de determinación.98 El IC(1) debe incluir la unidad El IC(0) debe incluir el cero El CVy/x del porcentaje de recobro: No mayor de 2% en método es cromatográfico No mayor de 2% en método volumétrico No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico No mayor de 5% en método microbiológico No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del analito en la muestra.

CV  3% para métodos químicos o espectrofotométricos CV  5% para métodos biológicos No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del analito en la muestra. En muestras independientes. En muestras dependientes. determinar si en dicha etapa es posible fraccionar (muestras dependientes) o no (muestras independientes) y las condiciones de almacenaje. fraccionar cada preparación de acuerdo a las condiciones de almacenaje de interés. Reportar el contenido/potencia/valoración de cada preparación. procesar el número de muestras necesarias para cada condición de almacenaje hasta la etapa preestablecida (preparaciones) por triplicado. ŷ1. Reportar el contenido/potencia/valoración de cada fracción. Calcular ŷ0. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 6.Establecer la etapa de análisis en la cual se desea evaluar la estabilidad. . analizando por triplicado (contenido/potencia/valoración inicial). seguir el análisis de cada una de las preparaciones al término de cada condición de almacenaje utilizando una solución de referencia recientemente preparada. di.. seguir el análisis de cada una de las fracciones al término de cada condición de almacenaje utilizando una solución de referencia recientemente preparada. determinar la estabilidad analítica a partir de una muestra homogénea. Criterios de aceptación: di  2% métodos cromatográficos y volumétricos di  3% para métodos químicos o espectrofotométricos di  5% para métodos biológicos No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del analito en la muestra. Puede ser utilizado un modelo estadístico lineal de diseño experimental ya que es de utilidad cuando se quiere determinar el grado de tolerancia del método a fuentes de variación como estimar la variabilidad entre analistas o entre días. Terminar el análisis de una de las fracciones de cada preparación (contenido/potencia/valoración). determinar la estabilidad analítica procesando hasta la etapa preestablecida por triplicado una muestra homogénea. Simultáneamente y de la misma muestra. Los resultados pueden ser analizados utilizando otros métodos estadísticos apropiados que permitan sustentar que la precisión del método es aceptable.  Estabilidad Analítica de la Muestra: Metodología. Valores superiores deben ser justificados.

etc. 2)LD con base en curva de calibración y desviación estándar de los blancos: Metodología..3  Sb) /b1 El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señal de ruido.) a valores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezas limite. 3)LD con base en la curva de calibración y la desviación estándar de regresión: .) en un intervalo del analito que incluya la especificación de la prueba de impureza limite. no debe incluir el cero. El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite. Calcular el límite de detección: LD=(3.) y la respuesta de muestras analíticas (analitos.  Límite de Detección: 1)LD con base en señal de Ruido: Metodología. placebos adicionados. calcular b1. Para la curva de calibración. Determinar la respuesta de blancos (reactivos. Para los blancos. lo que corresponde a la concentración asociada al limite de detección.Se aplica en métodos que utilizan instrumentos para medir la respuesta analítica y presentan una señal de ruido basal. Simultáneamente preparar 5 blancos.Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado. r2 e IC(1). Medir las respuestas analíticas. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 7. Criterios de aceptación: r2  0. calcular Sb de los blancos. Determinar la cantidad del analito que genere una respuesta con respecto al blanco en una proporción de 3 a 1.Se aplica tanto a métodos instrumentales como no instrumentales. Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito. sin incluir los blancos. ya sea por dilución o pesada independiente del analito.98 IC(1). etc. Criterios de aceptación: El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite. Placebos analíticos. placebos. Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos como la distribución t de Dunnett. etc. Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.

3  Sbo) /b1 El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señal de ruido.) a concentraciones conocidas del analito.. Medir las respuestas analíticas. r2. Calcular el límite de detección: LD=(3. placebos. Determinar la cantidad del analito cuya  . Calcular b1. etc. r2. Placebos analíticos. ya sea por dilución o pesada independiente del analito. El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite. El LD debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas limite. Limite de cuantificación: 1)Señal de Ruido: Metodología.98 IC(1). no debe incluir el cero. Calcular b1. Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito. IC(1). Criterios de aceptación: r2  0. Determinar la señal de blancos (reactivos.Metodología.) a valores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezas limite.98 IC(1). Calcular el límite de detección: LD=(3.) a valores menores o que incluya la especificación de la prueba de impurezas limite. Sbo. Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado. placebos adicionados. Sy/x. ya sea por dilución o pesada independiente del analito. placebos.Se aplica en métodos que utilizan instrumentos para medir la respuesta analítica y presentan una señal de ruido basal. Medir las respuestas analíticas.Se aplica tanto a métodos instrumentales como no instrumentales.) y la señal de muestras analíticas (analitos. inferiores o que incluya la especificación del contenido / valoración de la prueba de impurezas.Se aplica tanto a métodos instrumentales como no instrumentales. IC(1). no debe incluir el cero. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 8.3  Sy/x) /b1 El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señal de ruido. 4)LD con base en la curva de calibración y la desviación estándar de la ordenada al origen: Metodología. Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado. etc. Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito. Criterios de aceptación: r2  0. etc. etc.

El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba de impurezas. evaluando la exactitud y Repetibilidad del valor estimado. etc. Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito. Calcular el límite de cuantificación: LC=(10  Sy/x) /b1 Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite de cuantificación. preparar 5 blancos. Calcular el límite de cuantificación: LD=(10  Sb) /b1 Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite de cuantificación. Criterios de aceptación: El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba de impurezas. Calcular b1. Sy/x. etc.señal sea similar o mayor al blanco en una proporción de 10 a 1. r2 e IC(1). Para los blancos. Criterios de aceptación: . lo que corresponde a la concentración asociada al limite de detección.) a valores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la prueba de impurezas. placebos.) a valores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la prueba de impurezas. Simultáneamente. Medir las respuestas analíticas. ya sea por dilución o pesada independiente del analito. 3)LC con base en la curva de calibración en la desviación estándar de regresión: Metodología. Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito. r2. ya sea por dilución o pesada independiente del analito.98 IC(1). Calcular b1. no debe incluir el cero. IC(1). Verificar que dicha cantidad corresponda al limite de cuantificación. placebos. Criterio de aceptación: r2  0. 2)LC con base en curva de calibración y desviación estándar de los blancos: Metodología.Se aplica tanto a métodos instrumentales como no instrumentales.Se aplica tanto a métodos instrumentales como no instrumentales. Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado. Medir las respuestas analíticas. calcular Sb de los blancos.

IC(1). Reportar el contenido/potencia/valoración del analito en la muestra de condiciones normal y distintas.Se aplica tanto a métodos instrumentales como no instrumentales. Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado. En condiciones normales y distintas de operación. Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado. 4)LC con base en la curva de calibración y la desviación estándar de la ordenada al origen: Metodología.Establecer los factores instrumentales (temperatura y presión de la columna) y/o no instrumentales (pH de fases) relacionados al método y sean críticos. expresadas como %. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 9. ya sea por dilución o pesada independiente del analito. Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito.98 IC(1). no debe incluir el cero. Medir las respuestas analíticas. . Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 10. Criterios de aceptación: di  2% métodos cromatográficos y volumétricos di  3% para métodos químicos o espectrofotométricos di  5% para métodos biológicos No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del analito en la muestra. etc.3  Sbo) /b1 Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del limite de cuantificación.r2  0. placebos. analizar la muestra por triplicado. ŷ1. no debe incluir el cero. r2.  Robustez: Metodología.98 IC(1). El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba de impurezas. El LC debe ser menor a la especificación del contenido/ valoración de la prueba de impurezas. Sbo. Calcular el límite de cuantificación: LC=(3.) a valores menores o que incluya la especificación de contenido/ valoración de la prueba de impurezas. Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado.. Calcular b1. Criterios de aceptación: r2  0. di. Calcular ŷ0.

Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser justificado. . Fijar 2 condiciones de uso y analizar la muestra por triplicado a cada condición. Criterios de aceptación: CV  2% métodos cromatográficos y volumétricos CV  3% para métodos químicos o espectrofotométricos CV  5% para métodos biológicos No mayor a una magnitud preestablecida acore a la especificación del analito en la muestra. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 11. lo que permite establecer la confiabilidad de la metodología. Calcular y. S y CV del contenido/potencia/valoración. Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos. si se concluye que si. así como registros del uso y con la documentación que avale una buena práctica de manejo de dichas sustancias. lotes de reactivos) que se presentan al reproducir el método en otras condiciones de uso. Para su adquisición se debe contar con procedimientos para su manejo y aplicación. C) Lote del producto.. teniendo como mínimo las siguientes: Para sustancias de referencia primarias: A) Nombre de la sustancia de referencia.  Manejo.Establecer los factores ajenos al equipo (diferentes equipos. F) Pureza (potencia). B) Cantidad.Cada sustancia de referencia debe almacenarse. incluyendo la condición normal. Cualquier condición especial de almacenamiento debe indicarse en el marbete y (o) certificado analítico.. se realiza una prueba estadística de comparaciones múltiples para identificar aquellas condiciones que dan lugar a resultados diferentes.  Tolerancia: Metodología.Los resultados pueden ser analizados con otros métodos estadísticos como la distribución t de Dunnett (para 3 o más condiciones) o t de Student (para 2 condiciones). Reportar el contenido/potencia/valoración del analito en todas las muestras. D) Clave (para uso interno) E) Fecha de adquisición. manejarse y utilizarse de acuerdo con las especificaciones correspondientes. SUSTANCIAS DE REFERENCIA: Las sustancias de referencia constituyen un componente propio del método y una herramienta en la evaluación de los parámetros de desempeño. Uno de ellos es aplicar un análisis de varianza con un criterio de clasificación para determinar si al menos una de las condiciones de uso es diferente. Todas las sustancias deben contar con su identificación y registro..

etc. B) Lote. D) Gráficas. C) Clave de identificación interna. estos registros son críticos. B) Lote. y K) Caducidad Para las sustancias de referencia secundaria. COSUFAR. B) Cantidad certificada. y . I) Cantidad remanente. se deberán seguir las instrucciones de la etiqueta o certificado de análisis. D) Procedencia (USP. *Comité de Sustancias Farmacéuticas de Referencia (COSUFAR) *Organización Mundial de la Salud (OMS) *Secretaría de Salud (SSA). Si la sustancia de referencia debe secarse antes de utilizarse.G) Fecha de caducidad H) Riesgo potencial de manejo. European Pharmacopoeia (EP) *European Pharmacopoeia Chemical Refernce Substances (EPCRS). E) Certificado de análisis del material En la validación de métodos. se realizará en otro envase al original y el excedente se desechará.  Tratamiento: Cualquier tratamiento previo al que deba someterse la sustancia de referencia lo debe contemplar la propia metodología. E) Fecha de adquisición. conviene además: A) Nombre.  Procedencia: Algunos centros especializados que proveen sustancias de referencia son: *British Pharmacopoeia (BP). J) Analista que la utiliza. Se debe contar con lineamientos que aseguren la no-utilización de sustancias de referencia caducas. e I ) Indicaciones especiales. F) Fecha de empleo. C) Cálculos para obtener la potencia. BP. y F) Potencia en relación con la sustancia de referencia. o en su caso. C) Lote interno. H) Cantidad empleada.). debe especificarse en su marbete. D) Clave. G) Uso. La información mínima para su registro es: A) Nombre. E) Fecha de certificación. Para sustancias de referencia secundaria: A) Nombre de la sustancia de referencia.

*United States Pharmacopeia (USP) REVALIDACIÓN: Se deben establecer y justificar criterios apropiados para revalidación de métodos analíticos. son los siguientes: 1) Especificidad: Debe cumplir para cada método analítico. su impacto y el parámetro de desempeño a revalidar: CAMBIO DISPOSITIVO DE MEDICIÓN DEL INSTRUMENTO DE MEDICIÓN CONCENTRACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE REFERENCIA FORMULACIÓN DEL PRODUCTO IMPACTA VARIACIÓN EN SISTEMA DE MEDICIÓN EXACTITUD DEL MÉTODO EXACTITUD DEL MÉTODO PARÁMETRO A REVALIDAR PRECISIÓN DEL SISTEMA ADECUABILIDAD DEL SISTEMA LINEALIDAD DEL SISTEMA Y EXACTITUD DEL MÉTODO EXACTITUD Y REPETIBILIDAD DEL MÉTODO LINEALIDAD DEL MÉTODO ESPECIFICIDAD TOLERANCIA TOLERANCIA EQUIPOS PROVEEDOR DE COLUMNAS VARIACIÓN DEL MÉTODO VARIACIÓN DEL MÉTODO COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS: Cuando se quieren comparar 2 métodos para aplicaciones de contenido/potencia/valoración. La siguiente tabla establece cambios en el método.. 2) Repetibilidad en exactitud: Metodología. . así como mantener un control de cambios. Cualquier cambio crítico a un método analítico da lugar a uno nuevo y por lo tanto requiere de una validación como tal. demostrando su especificidad o exactitud. así como los criterios para establecer la igualdad de dichos parámetros. se emplean los siguientes procedimientos:  Estudio de Comparación de Parámetros de Desempeño: Se utiliza cuando los dos métodos han sido validados y se quiere comparar sus parámetros de desempeño. Calcular S2 del porcentaje de recobro de cada método. En función a su aplicación analítica se indican los parámetros de desempeño a estudiar: CAMBIO CONTENIDO/POTENCIA/VALORACIÓN PARÁMETRO A REVALIDAR ESPECIFICIDAD EXACTITUD Y REPETIBILIDAD LINEALIDAD DEL MÉTODO PRECISION DEL MÉTODO O PRECISIÓN INTERMEDIA PARÁMETROS DE DESEMPEÑO Los parámetros analíticos a comparar.De los datos de exactitud y Repetibilidad utilizar la información del porcentaje de recobro.

presenta 2 situaciones: a)Los métodos tienen la misma Repetibilidad (varianzas iguales) b)Los métodos tienen diferente Repetibilidad (varianzas diferentes). Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse. Se aplica a métodos de contenido/valoración/potencia y los parámetros a evaluar son: 1) Proporcionalidad: .De los datos de linealidad utilizar la información del porcentaje de recobro así como la cantidad adicionada y la cantidad recuperada de cada método. por lo tanto se tiene que realizar el estudio de comparación de Repetibilidad de ambos métodos.Criterios de aceptación: El intervalo de confianza para la razón de varianzas. debe incluir el valor de cero.De los datos de linealidad del método. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo16. debe incluir el valor de 1. 5) Linealidad del Método: Metodología. Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse... Calcular la S2 del porcentaje de recobro de cada método. Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 14. Criterios de aceptación: El intervalo de confianza para la diferencia de las 2 medias poblacionales del porcentaje de recobro. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 13. Calcular la Criterios de aceptación: Anexo 15. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 12. debe incluir el valor de 1. Calcular S21 y S22. 3) Repetibilidad en Linealidad del Método: Metodología. El análisis estadístico de los resultados.. ŷ del porcentaje de recobro de cada método.De los datos de precisión del método. Criterios de aceptación: El intervalo de confianza para la razón de varianzas. Criterios de aceptación: El intervalo de confianza para la razón de varianzas. 4)Exactitud: Metodología. 6) Precisión del Método: Metodología. utilizar la información del porcentaje de recobro. Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse. utilizar la información del porcentaje de recobro..De los datos de exactitud y Repetibilidad.  Estudio de Correlación: Se utiliza cuando se comparan dos métodos cuyos resultados se expresan en unidades diferentes. debe incluir el valor de 1. utilizar la información del contenido/potencia/valoración del analito de cada método. Calcular la S2.

Reportar el contenido/potencia/valoración del analito de todas las muestras en % para ambos métodos. sino proporcionalidad. Reportar la relación contenido/valoración/potencia del método a comparar (y). Tener 3 muestras con nivel bajo. Criterios de aceptación: El IC(1) no debe incluir el cero. CVy/x. Calcular b1.. que incluya la especificación. Inicialmente se debe establecer el método de referencia y el método a comparar. no debe exceder el valor de 1. Calcular b1. Metodología. o que su precisión sea aceptable para la aplicación analítica. de tal modo que pueda ser analizado por ambos métodos en tres diferentes niveles del analito. método de referencia (x). r2. . CVy/x.No necesariamente establecen equivalencia de resultados. Criterios de aceptación: El intervalo de confianza unilateral inferior. Determinar el contenido/valoración/potencia de cada muestra. fijar una etapa de los métodos analíticos en los cuales transfiera una mayor o menor cantidad e la muestra con el objeto de poder variar el nivel del analito. Del placebo analítico preparado adicionarle analito al nivel inferior. Repetir este procedimiento con el nivel del 100% superior. dos analistas en dos días deben analizar por triplicado muestras independientes (pesadas o alícuotas) de un lote homogéneo de producto. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo 18. IC(1). Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse. Cualquier otro criterio de aceptación deberá justificarse. b0. el método de referencia (x). 3 niveles correspondientes al 100% y 3 con un nivel alto del analito. Metodología. cuyo nivel de analito esté incluido dentro de la especificación. b0. para la razón de varianzas del método a comparar respecto del método de referencia. b) No se conocen los componentes de la muestra. a) Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar un placebo analítico. Metodología. 2) Precisión: El método no oficial deberá tener una precisión igual a mejor que el método oficial. IC(1).Seleccionar 9 muestras del producto cuyo nivel del analito cumpla con la especificación. r2. Las formulas y el procedimiento se encuentran en el anexo17.-Tanto con el método de referencia como el método a comparar. Las 9 muestras se analizan por ambos métodos en las mismas condiciones analíticas de cada método. Fraccionar en tres muestras y analizar cada muestra por ambos métodos bajo las mismas condiciones de cada método para determinar el contenido/valoración/potencia.-Preparar una cantidad suficiente de placebo analítico con los componentes que están comúnmente en la muestra. Reportar la relación contenido/valoración/potencia de cada método en cada muestra del método a comparar (y). ya que en muchas ocasiones la respuesta analítica es diferente.

BIBLIOGRAFIA:  Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. 7a Ed. Análisis de resultados. 4. Validation of Compendial Methods. CONCORDANCIA CON GUIAS INTERNACIONALES: Esta guía es equivalente a:  Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures ICH-Q2Q.  Métodos Analíticos Validación Guías Generales de Validación de la DGCIS. 3. CMC 3. Titulo 2. 6.DOCUMENTACIÓN: Las actividades de la validación de un método analítico deben ser sustentadas por los siguientes documentos: a) Protocolo. cuyo contenido es: 1. Responsabilidades. cuyo contenido es: 1. 5. Conclusión Es crítico documentar los registros analíticos. 5. dicha documentación deberá estar ordenada y disponible. en responsabilidad del área de calidad. Formato de registro de resultados. November 1994.  USP24. México (2000). 3. Availability. Criterios de aceptación para cada parámetro. Propósito u Objetivo.  Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods CDER. Titulo. Confrontación contra los criterios de aceptación. b) Reporte. Notice ICHQ2B.  Ley General de Salud (1997)  NMX-CC-1-1990 Sistemas de Calidad Vocabulario . 2. SSA (1989). March 1995  Guideline on the Validation of Analytical Procedures. Plan de prueba describiendo los parámetros de desempeño que permitan verificar la aplicación analítica deseada. Methodology. 4. Resultados.

México (1991). March 1995. Estabilidad de medicamentos.  USP24. Montgomery D. Validation of Compendial Methods. Buenas prácticas de fabricación para establecimientos de la industria químico farmacéutica dedicados a la fabricación de medicamentos.  Norma Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-1993. 3ª Ed.  Diseño y Análisis de Experimentos..Gestión de Calidad.  Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-1993. FDA. el Uso de Normas de Aseguramiento de Calidad. CMC 3. 1998 FDA. NMX-CC-2-1990 Sistemas de Calidad. August 2000. FDA. December.  Guideline for Industry: Text on Validation of Analytical Procedures ICH-Q2A.  NOM-177-SSA1-1998 “Que establece las pruebas y procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable”  Guidance for Industry Bioanalytical methods Validation for Human Studies. November 1994. Guía para la Selección.  Guideline for submitting Samples and Analytical Data for Methods Validation.  Guideline for Industry Analytical Procedures and Methods Validation. ANEXOS: .  ICH Harmonised Tripartile Guideline Validation Analytical Procedures Methodology 6 Nov 1996. CDER. Grupo Editorial Iberoamérica.  Reglamento de Insumos para la Salud (1998). C. February 1987.  Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods.

FÓRMULAS Y PROCEDIMEITN O DE CÁLCULO PARA PRECISIÓN DEL SISTEMA.NUMERO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 CONTENIDO FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL SISTEMA FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ADECUABILIDAD DEL SISTEMA FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA EXACTITUD Y Repetibilidad DEL MÉTODO FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL MÉTODO FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISION DEL MÉTODO (PRECISIÓN INTERMEDIA) FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ESTABILIDAD ANALÍTICA DE LA MUESTRA FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE DETECCIÓN FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE CUANTIFICACION FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA ROBUSTEZ FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA TOLERANCIA FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD Y EXACTITUD PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD EN LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN EXACTITUD PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN PRECISIÓN DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PROPORCIONALIDAD DE MÉTODOS EN ESTUDIOS DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS FORMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL MÉTODO EN ESTUDIO DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS TABLA ESTADÍSTICA DE LA DISTRIBUCIÓN t DE Student TABLAS ESTADÍSTICAS DE LA DISTRIBUCIÓN F DE FISHER COMENTARIOS RESPECTO A LOS CÁLCULOS Y REGLAS DE REDONDEO ANEXO 1. A)FORMULAS: Media Aritmética .

A)FORMULAS: Media Aritmética DE CALCULO PARA y Desviación estándar y n S n y 2   y 2 nn  1 Coeficiente de variación CV  B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y. y2 y determinar n. A)FORMULAS: Pendiente . y2 y determinar n. Calcular ŷ y S Calcular el CV ANEXO 2. S *100 y FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO ADECUABILIDAD DEL SISTEMA. Calcular ŷ y S Calcular el CV ANEXO 3.y Desviación Estándar y n S n y 2   y 2 nn  1 Coeficiente de variación CV  S *100 y B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y.

975. A)FORMULAS: Media aritmética y y n Desviación estándar S n y 2   y 2 nn  1 Coeficiente de variación S *100 y Intervalo de confianza para la media poblacional CV  . FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA EXACTITUD Y REPETIBILIDAD DEL MÉTODO. b0. n-2 y calcular IC(1) Sy / x   y 2  b  xy  b  y 1 o ANEXO 4.975. y2. xy.n-2Sb1 1 Sb1  Sy / x  x 2  x2  n n2 t0. B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular x. r2 Calcular el Sy/x y Sb’ Determinar en el anexo 19 t0. x2.b1  n xy   x y n x 2   x 2 Ordenada al origen b0   y b x 1 n Coeficiente de determinación n xy    x y 2 r2  n x2   x2n y 2   y 2 Intervalo de confianza para la pendiente IC(1) = b1  t0. y determinar n. y. Calcular b1.975. n-2 = Referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student.

n-2Sbo .975.975. S n Referirse al anexo 19 para determinar el valor de t de B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y.975. n-1 Student n = numero de recobros.1 CANTIDAD ADICIONADA VS CANTIDAD RECUPERADA A)FORMULAS: Pendiente n xy   x y b1  n x 2   x 2 Ordenada al origen  y  b1 x b0  n Coeficiente de determinación r2  n xy    x y 2 n x2   x2n y 2   y 2 Intervalo de confianza para la pendiente IC(1) = b1  t0.IC ( μ )  y  t 0.975. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LINEALIDAD DEL MÉTODO. n-1 y calcular IC() ANEXO 5.975.n-2Sb’ 1 Sb '  Sy / x  x 2  x2  n Sy / x  n2 t0.975. y2 y determinar n. Calcular ŷ y S Calcular el CV Determinar en el anexo 19 t0.  y 2  b  xy  b  y 1 o Intervalo de confianza para la ordenada al origen IC(o) = bo  t0. n-2 = Referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student. n  1 t0. 5.

Calcular b1. y. y2 y determinar n. n  1 B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y. y2. S n . r2 Calcular el Sy/x y Sb’ Determinar en el anexo 19 t0. n-2 y calcular IC(1) Calcular x y Sbo Calcular IC(b0) Calcular el CVy/x 5. xy. y determinar n.975.975.2 PORCENTAJE DE RECOBRO A)FORMULAS: Media aritmética y y n Desviación estándar S n y 2   y 2 nn  1 Coeficiente de variación S *100 y Intervalo de confianza para la media poblacional CV  IC ( μ )  y  t 0. b0. x2.Sbo  Sy / x 1  n x 2  x2   x 2 n n Coeficiente de variación de regresión x x CVy / x  Sy / x  100 y y y n B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular x.

Calcular ŷ y S Calcular el CV Determinar en el anexo 19 t0. Calcular ŷ y S Calcular el CV ANEXO 7.975. A)FORMULAS: Media aritmética y y n Desviación estándar S n y 2   y 2 nn  1 Coeficiente de variación CV  S *100 y B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y. y2 y determinar n. n-1 y calcular IC() ANEXO 6. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE ESTABILIDAD ANALÍTICA DE LA MUESTRA. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL MÉTODO (PRECISIÓN INTERMEDIA). A)FORMULAS: Media aritmética del análisis inicial y0  CALCULO PARA y 0 no no = número de muestras del análisis inicial Media aritmética del análisis de cada condición de almacenaje n1 n1 = número de muestras del análisis de la i-ésima condición de almacenaje Diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición de almacenaje respecto de la media aritmética del análisis inicial di  y1  y 0 y1  y 1 .

n-2Sb1 Intervalo de confianza para la pendiente Sb1  Sy / x 1  x2  Sy / x  1  x 2 n o  y 2  b  xy  b  y n2 1 n Intervalo de confianza para la pendiente t0. y1. 8.975. n3 Calcular ŷo. ŷ1. n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student b0   y b x B)FORMULA PARA LOS BLANCOS Desviación estándar de los blancos . y3 y determinar no.B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y0. y2. 8. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE DETECCIÓN. n1.2 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE LOS BLANCOS A)FORMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACIÓN: Pendiente n xy   x y b1  n x 2   x 2 Coeficiente de determinación r2  n xy    x y 2 n x2   x2n y 2   y 2 IC(1) = b1  t0.1 SEÑAL RUIDO Tabular los resultados. ŷ3 Calcular di ANEXO 8. n2. ŷ2.975.

y. bo Determinar en el anexo 19 t0.975.3  Sb b1 D)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIÓN Tabular los resultados Calcular x.Sb  nn  1 n = numero de blancos n y 2   y 2 C)FORMULA PARA EL LIMITE DE DETECCIÓN LD  3. r2 Calcular el Sy/x y Sb1. x2.n-2Sb1 Intervalo de confianza para la pendiente Sb1  Sy / x 1  x2  Sy / x  1  x 2 n o  y 2  b  xy  b  y n2 . y determinar n. Calcular b1.3 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADA EN LA DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE REGRESIÓN A)FORMULAS Pendiente n xy   x y b1  n x 2   x 2 Coeficiente de determinación r2  n xy    x y 2 n x2   x2n y 2   y 2 IC(1) = b1  t0. Calcular Sb Calcular el LD 8. y2. y2. n-2 y calcular IC(1) E)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOS Tabular los resultados Calcular y. y determinar n. xy.975.

xy. y2.4 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN A)FORMULAS Pendiente n xy   x y b1  n x 2   x 2 Coeficiente de determinación r2  n xy    x y 2 n x2   x2n y 2   y 2 Intervalo de confianza para la pendiente IC(1) = b1  t0.975. n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student Limite de detección LD  3. n-2 y calcular IC(1) Calcular el limite de detección 8. r2 Calcular el Sy/x y Sb’. bo Determinar en el anexo 19 t0.n-2Sb1 Sb1  Sy / x 1  x2  Sy / x  1  x 2 n o  y 2  b  xy  b  y n2 1 n t0.b0   y b x 1 n t0.975.975. y. Calcular b1. x2.975. y determinar n. n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student b0   y b x Desviación estándar de la ordenada al origen .3  Sy / x b1 B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO Tabular los resultados Calcular x.

n-2 y calcular IC(1) Calcular x y Sbo Calcular el LD ANEXO 9.Sbo  Sy / x 1  n x 2  x2  x n  x 2 n x Limite de detección LD  3.975. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA LIMITE DE CUANTIFICACIÓN. 9. x2. 8. Calcular b1.2 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE LOS BLANCOS A)FORMULAS PARA LA CURVA DE CALIBRACIÓN: Pendiente n xy   x y b1  n x 2   x 2 Coeficiente de determinación r2  n xy    x y 2 n x2   x2n y 2   y 2 IC(1) = b1  t0.3  Sbo b1 B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO Tabular los resultados Calcular x. bo Determinar en el anexo 19 t0.n-2Sb1 Intervalo de confianza para la pendiente Sb1  Sy / x 1  x2   x 2 n .1 SEÑAL RUIDO Tabular los resultados. xy. y.975. r2 Calcular el Sy/x y Sb’. y determinar n. y2.

975. xy. y determinar n. x2. Calcular Sb Calcular el LC 9.Sy / x   y 2  b  xy  b  y 1 o n2 1 n t0. n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student b0   y b x B)FORMULA PARA LOS BLANCOS Desviación estándar de los blancos Sb  nn  1 n = número de blancos n y 2   y 2 C)FORMULA PARA EL LIMITE DE CUANTIFICACIÓN LC  10  Sb b1 D)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA CURVA DE CALIBRACIÓN Tabular los resultados Calcular x. y2. y2. Calcular b1.975. r2 Calcular el Sy/x y Sb’. y.3 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADA EN LA DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE REGRESIÓN A)FORMULAS Pendiente n xy   x y b1  n x 2   x 2 Coeficiente de determinación r2  n xy    x y 2 n x2   x2n y 2   y 2 . bo Determinar en el anexo 19 t0. y determinar n. n-2 y calcular IC(1) E)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA LOS BLANCOS Tabular los resultados Calcular y.

975. Calcular b1. y determinar n.n-2Sb1 Sb1  Sy / x 1  x2  Sy / x  1  x 2 n o  y 2  b  xy  b  y n2 1 n t0. n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student b0   y b x Limite de cuantificación LC  10  Sy / x b1 B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO Tabular los resultados Calcular x.4 CURVA DE CALIBRACIÓN BASADO EN LA DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE LA ORDENADA AL ORIGEN A)FORMULAS Pendiente n xy   x y b1  n x 2   x 2 Coeficiente de determinación r2  n xy    x y 2 n x2   x2n y 2   y 2 . y.975. y2. r2 Calcular el Sy/x y Sb’. bo Determinar en el anexo 19 t0. x2. xy.975. n-2 y calcular IC(1) Calcular el LC 9.Intervalo de confianza para la pendiente IC(1) = b1  t0.

y.975. Calcular b1.975.975. n-2 y calcular IC(1) Calcular x y Sbo Calcular el LC . n-2= referirse al anexo 19 para determinar el valor de la t de Student b0   y b x Desviación estándar de la ordenada al origen Sbo  Sy / x 1  n x 2  x2  x n  x 2 n x Limite de cuantificación LC  10  Sb b1 B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO Tabular los resultados Calcular x. xy.n-2Sb1 Sb1  Sy / x 1  x2  Sy / x  1  x 2 n o  y 2  b  xy  b  y n2 1 n t0. bo Determinar en el anexo 19 t0. r2 Calcular el Sy/x y Sb’. x2. y determinar n. y2.Intervalo de confianza para la pendiente IC(1) = b1  t0.

y determinar no.ANEXO 10. n1.y0 B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y0. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO PARA ROBUSTEZ. Calcular ŷo. Calcular di ANEXO 11. ŷ1. di  y1 . FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO TOLERANCIA A)FORMULAS: Media aritmética y y n Desviación estándar DE CALCULO PARA S n y 2   y 2 nn  1 Coeficiente de variación CV  S *100 y B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y. . ŷ2. n2. y2 y determinar n. y1.  y0 yo  n0 no = numero e muestras de la condición normal de operación Media aritmética del análisis de cada condición de operación diferente a la condición normal  y1 y1  n1 n1 = numero de muestras de la i-esima condición de operación Diferencia absoluta de la media aritmética de cada condición respecto de la media aritmética de la condición normal. y2. A)FORMULAS: Media aritmética de la condición de operación.

S12= varianza menor S22= varianza menor Intervalo de confianza para la razón de varianzas.n2-1.975. S12= varianza menor S22= varianza menor . que corresponden a los grados de libertad del numerador.n1 = numero de recobros del método de varianza menor . FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO REPETIBILIDAD EN LINEALIDAD DEL MÉTODO COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS. n1-1 Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA REPETIBILIDAD EN EXACTITUD PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS. n 2  1. n1-1 y F0.025.025.975. n2-1. A)FORMULAS: Varianza n y 2   y 2 S2  nn  1 Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza para la razón de varianzas. n 2  1.n2 = numero de recobros del método de varianza mayor B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y. y n1-1 son los grados de libertad de la varianza menor. S 22  F 0.025. . n1  1  σ 22 σ 12 S 12  S 22  F 0. y2 y determinar n para cada método analítico Calcular la varianza de cada método Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S12) Determinar en el anexo 20 F0. se debe establecer. A)FORMULAS: Varianza PARA PARA S2  n y 2   y 2 nn  1 Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza para la razón de varianzas. n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor. n1-1y F0.Calcular ŷ y S Calcular el CV ANEXO 12.925. ANEXO 13. que corresponden a los grados de libertad del denominador. n2-1. n2-1. n1  1 S 12 F0. se debe establecer.

975. n1-1 y F0.n1 = numero de recobros del método de varianza menor . S 22  F 0.975.n2 = numero de recobros del método de varianza mayor B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular el porcentaje de recobro de cada muestra en cada método (y). n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor.975. que corresponden a los grados de libertad del denominador. y n1-1 son los grados de libertad de la varianza menor.1 COMPARACIÓN DE Repetibilidad DE AMBOS MÉTODOS: A)FORMULAS: Varianza S2  n y 2   y 2 nn  1 Nota: Calcular la varianzas de cada método y para fines de cálculo del intervalo de confianza para la razón de varianzas. al obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresada en porcentaje. . n 2  1. se debe establecer. S 22  F 0. n1-1 = Referirse al anexo 20 para determinar el valor de la F de Fisher n2-1 son grados de libertad de la varianza mayor.n1 = numero de recobros del método de varianza menor .n2 = numero de recobros del método de varianza mayor . . n1  1  σ 22 σ 12 S 12  S 22  F 0.Intervalo de confianza para la razón de varianzas. 14. que corresponden a los grados de libertad del numerador.025. n1-1y y F0. ANEXO 14. n2-1. Calcular Sy.925. n2-1. n1-1 y F0. n1  1 S 12 F0.025.025. n2-1.025. n 2  1.025 n2-1. que corresponden a los grados de libertad del denominador.n2-1. n1-1y Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas. y n1-1 son los grados de libertad de la varianza menor. n 2  1. n1  1  σ 22 σ 12 S 12  S 22  F 0. que corresponden a los grados de libertad del numerador. n1  1 S 12 F0. Sy2 y determinar n para cada método analítico Calcular la varianza de cada método Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S12) Determinar en el anexo 20 F0. S12= varianza menor S22= varianza menor Intervalo de confianza para la razón de varianzas. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN EXACTITUD PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS.975. n 2  1.n2-1.

Calcular y1. n1-1 Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas. y n2 2 S 12  n1 y12   y12 n1n1  1 Varianza del método 2. n1-1y F0. IC μ 1  μ 2   y1 .025. n1+n2 y calcular IC(1-2) 14. n2-1. y12. . ŷ2 Calcular S12. n2n 2  1 Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.y2   t 0.2 IGUAL REPETIBILIDA (VARIANZAS EQUIVALENTES): A)FORMULAS: Media aritmética del método 1. y determinar n1 y n2. Calcular ŷ1.975n1  n 22 S 22  n2 y 22   y 2 2 B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y. y1  y n1 1 Media aritmética del método 2. Media aritmética del método 2.975.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES): A)FORMULAS: Media aritmética del método 1. Tabular otra vez los resultados. y2  Varianza del método 1. S22 Determinar en el anexo 19 t0. Varianza del método 2. y2 y determinar n para cada método analítico Calcular la varianza de cada método Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S12) Determinar en el anexo 20 F0. y2.14. Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales. n2-1.925. Varianza del método 1. y22.

y1.1 CANTIDAD ADICIONADA (x) VS CANTIDAD RECUPERADA (y): A)FORMULAS: Sumatorias Pendiente del método 1. Pendiente del método 2. Calcular b11. Sbo1-Sbo2 Calcular IC(01-02) 15. n1-1 Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas.025. n2-1. x22. y12. b12. xy1 y determinar n1 y n2. y2 y determinar n para cada método analítico Calcular la varianza de cada método Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S12) Determinar en el anexo 20 F0. Ordenada al origen del método 1. Ordenada al origen del método 2. ŷ2 Calcular S12. . Calcular y1. S22 Calcular gl Determinar en el anexo 19 t0. bo2 Calcular Sx/y y Sb11 – Sb12 Determinar en el anexo 19 t0. Media aritmética del método 2. 15. 15. xy1.975. gl y calcular IC(1-2) ANEXO 15. n1-1y F0. y determinar n1 y n2. x2. Varianza del método 1. x2. y2. x12. y22. Intervalo de confianza para la diferencia de las ordenadas al origen B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular x1.97523. b01. y22. n2-1. y calcular IC(1-2) Calcular x1.2.2. Calcular ŷ1.1 COMPARACIÓN DE Repetibilidad DE AMBOS MÉTODOS A)FORMULAS: Varianza Intervalo de confianza para la razón de varianzas. Desviación estándar de regresión. Tabular otra vez los resultados.2 IGUAL Repetibilidad (VARIANZAS EQUIVALENTES) A)FORMULAS: Media aritmética del método 1. y12.2 PORCENTAJE DE RECOBRO: 15. y2.B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y.925. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN LINEALIDAD DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS. Intervalo de confianza para la diferencia de las 2 pendientes.

y2 y determinar n para cada método analítico Calcular la varianza de cada método Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S12) Determinar en el anexo 20 F0.925. A)FORMULAS: Varianza Intervalo de confianza para la razón de varianzas. ANEXO 17. x2. y2 y determinar n para cada método analítico Calcular la varianza de cada método Determinar la varianza mayor (S22) y la varianza menor (S12) Determinar en el anexo 20 F0. y2. y22. Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales.025.975.025. Intervalo de confianza para la diferencia de 2 medias poblacionales. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PROPORCIONALIDAD DE MÉTODOS EN ESTUDIO DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS. y.925. y determinar n. n2-1. n1-1 Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas. B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados (datos primarios) Calcular x. Tabular otra vez los resultados. y2. S22 Determinar en el anexo 19 t0. gl y calcular IC(1-2) ANEXO 16. r2 . n2-1. y12.3 DIFERENTE REPETIBILIDAD (VARIANZAS DIFERENTES): A)FORMULAS: Media aritmética del método 1. B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y. y determinar n1 y n2. n1-1y F0. n1-1 Calcular el intervalo de confianza para la razón de varianzas. ŷ2 Calcular S12. b0. Calcular ŷ1.Varianza del método 2. Calcular b1. n2-1. B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados Calcular y. xy. A)FORMULAS: Pendiente Ordenada al origen Coeficiente de determinación Intervalo de confianza para la pendiente Coeficiente de variación de regresión. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO EN PRECISIÓN DEL MÉTODO PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS. 15. Calcular y1. Media aritmética del método 2. Varianza del método 2. n2-1. n1-1y F0. Varianza del método 1.

024 2.030 2.05 Calcular el limite unilateral inferior de confianza para la razón de varianzas.994 1.303 3.994 1.035 2.447 2.056 2.009 GRADOS DE LIBERTAD 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 t0.995 1. n-2 y calcular IC(1) ANEXO 18.014 2.020 2.086 2.011 2.010 2.182 2.037 2.042 2.110 2.975 12.262 2.995 1.048 2.012 2.706 4.999 1.007 2. y determinar n1 y n2.064 2.028 2.997 1. Varianza del método no oficial.002 2.045 2.160 2.003 2.Calcular el Sy/x y Sb’ Determinar en el anexo 19 t0.120 2.201 2.131 2.069 2.998 1.006 2.026 2.993 1.101 2.021 2.002 2.017 2.998 1. Calcular la varianza del método oficial y del método no oficial.571 2.306 2.074 2.993 1.013 2.992 .365 2.000 2.975 2.060 GRADOS DE LIBERTAD 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 t0. B)PROCEDIMIENTO DE CÁLCULO: Tabular los resultados (datos primarios) Calcular y1.023 2. Limite unilateral inferior de confianza para la razón de varianzas.015 2.996 1.776 2.001 2.997 1.228 2.093 2. FÓRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CALCULO PARA PRECISIÓN DEL MÉTODO EN ESTUDIOS DE CORRELACIÓN PARA COMPARACIÓN DE 2 MÉTODOS ANALÍTICOS A)FORMULAS: Varianza del método oficial.040 2. ANEXO 19.052 2. TABLA ESTADÍSTICA DE LA DISTRIBUCIÓN t DE Student.032 2.145 2. y2.993 1.080 2. y12. GRADOS DE LIBERTAD 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 t0.008 2. Determinar en el anexo 20 F0.179 2. y22.975.005 2.004 2.000 1.018 2.975 2.

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