UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

CALLAO
FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA Y ALIMENTOS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA DE ALIMENTOS

CURSO : Microbiología de Alimentos

TEMA : Determinación de colonias de

Escherichia coli en muestras de Hamburguesa de
Pescado

PROFESOR: Erasmo Enrique Barrientos Aguilar

INTEGRANTES:
 De La Cruz Jacobo, Lesly Brigitte
 Flores Gutierrez, Alejandra Noelia
 Jiménez Asencio, Patricia Pilar
 Juarez Sanchez, Anthony Guillermo
 Lizarribar Sánchez, Diego Alejandro
 Lucho Portal, Pablo Alfredo
 Lu, Luisa

2018

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 INDICE

1) RESUMEN ............................................................................................................................ 3
2) INTRODUCCION................................................................................................................ 4
3) OBJETIVOS ......................................................................................................................... 4
4) MARCO TEORICO............................................................................................................. 5
Número más probable .............................................................................................................. 5
PRUEBA PRESUNTIVA ................................................................................................................ 5
Preparación del medio de cultivo................................................................................. 5

Siembra ......................................................................................................................... 6

PRUEBA CONFIRMATIVA ........................................................................................................... 6

Detección de tubos positivos: ....................................................................................... 6

Interpretación de datos: ............................................................................................... 6

Preparación del medio de cultivo................................................................................. 7

Siembra ......................................................................................................................... 7

PRUEBA DETERMINATIVA ......................................................................................................... 8

FUNDAMENTO:.................................................................................................................. 8

PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO .................................................................................. 9

SIEMBRA POR AGOTAMIENTO EN ESTRÍAS ............................................................................... 9

5) PROCEDIMIENTO Y MATERIALES .......................................................................... 9

6) RESULTADOS ............................................................................................................ 11
7) DISCUSION .............................................................................................................. 11
8) CONCLUSIONES ..................................................................................................... 13
9) BIBLIOGRAFIA ......................................................................................................... 13

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 ESCHERICHIA COLI

1) RESUMEN

En 1892, Shardinger propuso el uso de E. coli como indicador de contaminación fecal. Se basó en
la premisa que E. coli es abundante en heces humanas y animales y generalmente no hallada en otros
lugares. Además, desde entonces E. coli podría ser detectada fácilmente por su capacidad de fermentar
la glucosa (más adelante cambian a la lactosa), fue más fácil aislar al saber que el patógeno es
gastrointestinal. Por lo tanto, la presencia de E. coli en alimento o agua se aceptó como indicador de
reciente contaminación fecal y posible presencia de bastos patógenos

Consecuentemente, el término "coliformes" fue fijado para describir este grupo de bacterias
entéricas. Coliformes no es una clasificación taxonómica, sino alguna definición de trabajo usada para
describir un grupo de bacterias Gram negativas, anaerobias facultativas, formas rectas que fermenta la
lactosa para producir ácido y gas dentro de 48 h a 35°C.

El grupo coliforme constituyen un grupo heterogéneo con hábitat primordialmente intestinal para la
mayoría de las especies que involucra, es constante, abundante y casi exclusivo de la materia fecal, su
capacidad de sobrevivencia y multiplicación fuera del intestino también se observan en aguas potables,
por lo que este grupo se utiliza como indicador de contaminación fecal en agua; encontrándose que
mientras mayor sea el número de coliformes en agua, mayor será la probabilidad de estar frente a una
contaminación reciente.

En esta práctica veremos los resultados del conteo de Escherichia coli por el método del Número más
probable, en productos como la hamburguesa de pescado

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 2) INTRODUCCION

Escherichia coli, originalmente conocido como bacteria coli, fue identificado en 1885 por el
pediatra alemán, Theodor Escherich. E. coli se distribuye extensamente en el intestino de seres humanos y
animales de sangre caliente, es el anaerobio facultativo predominante en el intestino y la parte de la flora
intestinal esencial que mantiene la fisiología del hospedero sano. E. coli es un miembro de la familia de las
Enterobacteriaceae, que incluye muchos géneros, incluyendo patógeno conocidos tales como Salmonellas,
Shigella, y Yersinia.

Los coliformes fecales siguen siendo el indicador estándar de elección para las aguas de los
mariscos y la cosecha de los mariscos; y el E. coli se utiliza para indicar la reciente contaminación fecal o el
proceso antihigiénico. Casi todos los métodos detectaban E. coli, coliformes totales o los coliformes fecales
son los métodos de la enumeración que se basan en la fermentación de la lactosa. El número más probable
(NMP) es un método estadístico, consiste en multipasos de análisis de las fases presuntivas, confirmadas y
terminadas. En el análisis, las diluciones seriadas de una muestra son inoculadas en caldo. Los analistas
anotan el número de tubos de gas positivos (fermentación de la lactosa), de los cuales las otras 2 fases del
análisis se realizan y en tal caso utilizan las combinaciones de resultados positivos para consultar las tablas
estadísticas, para estimar el número de organismos presentes.

Caracterizando solamente las primeras 2 fases se realizan los análisis de coliformes y coliformes
fecal, mientras que todas las 3 fases se hacen para E. coli. La prueba del NMP, 3 tubos se utiliza para
probar la mayoría de los alimentos. El NMP de 5 tubos se utiliza para el análisis de agua, los estanques de
agua y cultivo de los mariscos.

3) OBJETIVOS

 Analizar en un producto hidrobiológico como la hamburguesa de pescado para la determinación de

Escherichia. Coli mediante el método del Número Más Probable (NMP) por estrías y evaluar el conteo
de UFC en la placa de agar Salmonella Shigella (SS) y Verde Brillante (BGA).

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 4) MARCO TEORICO

Número más probable

La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del Número más Probable (NMP), se
fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y
gas al incubarlos a 35°C 1 C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares. Esta
determinación consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase confirmativa.

En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de sodio el cual permite la
recuperación de los microorganismos dañados que se encuentren presentes en la muestra y que sean
capaces de utilizar a la lactosa como fuente de carbono. Durante la fase confirmativa se emplea como
medio de cultivo caldo lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de
aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde brillante.

La determinación del número más probable de microorganismos coliformes fecales se realiza a partir de los
tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en la capacidad de las bacterias para fermentar
la lactosa y producir gas cuando son incubados a una temperatura de 44.5 0.1 C por un periodo de 24 a
48 h.

Finalmente, la búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo EC, los cuales
se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales (Agar Mac Conkey, Agar eosina azul de
metileno) y posteriormente realizando las pruebas bioquímicas básicas (IMViC) a las colonias típicas.

PRUEBA PRESUNTIVA
Preparación del medio de cultivo

Caldo Lauril Sulfato (CLS):

 Leer la etiqueta del frasco del caldo. Calcular la cantidad a usar en relación a las indicaciones en
la etiqueta.
 Pesar la cantidad de gramos del caldo que se usara en 120 mL de agua destilada.
 Disolver en dos partes, es decir, hacer caer el polvo en la botella con 60 mL de agua destilada.
Cuando esté completamente disuelta colocar los 60mL restantes.
 Calentar en el microondas por 1 minuto.
 Esterilizar el medio a 100°C por 20 minutos.
 Enfriar a 40°C-50°C.

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Siembra

 En un botella colocar 90 mL de agua peptonada, en ella colocar los 10 g del queso.

 Con una pipeta sacar 1 mL y vertirlo en un tubo con 9 mL de agua peptonada.
 Del tubo, sacar 1 mL de la dilución y vertirlo en otro tubo con 9 mL de agua peptonada.
 Sacar 1 mL de la nueva dilución, el cual es eliminado.
 Colocar en 9 tubos vacíos los tubitos Durham. Rotular 3 tubos con la dilución 10-1,3 tubos con 10-2
y 3 con 10-3.
 Colocar en los tubos rotulados 1 mL de su respectiva dilución.
 Terminado las siembras se lleva a incubar las muestras a 37°C por 24-48 horas.

PRUEBA CONFIRMATIVA
La prueba solo se realiza a las muestras positivas.

Detección de tubos positivos:

a) Turbidez: Cuando se analizan muestras que no opacan el medio de cultivo , la aparición de turbidez
luego de la incubación indica crecimiento(tubo positivo). Cuando las muestras causan turbidez, deben
emplearse otros métodos para determinar los tubos positivos.

b)Productos metabólicos finales: Detección de la producción de gas: Los gases producidos por el desarrollo
de microorganismos pueden atraparse en viales invertidos (campanita Durham) colocados en el medio de
crecimiento. Se evidencia una reacción positiva cuando el gas que se acumula en la punta de la
campanita desplaza al menos 1/5 del líquido contenido en ella.

Interpretación de datos:

Como el NMP provee una estimación del recuento de microorganismos presentes en una muestra, en las
tablas utilizadas para calcularlo se presenta la concentración más probable de microorganismos en la
muestra, para una dada combinación de tubos positivos teniendo en cuenta las diluciones empleadas.

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Cuando se emplean más de 3 diluciones de una muestra en la determinación del NMP, se utilizan los
resultados de sólo 3 diluciones consecutivas. Para seleccionar las 3 diluciones más adecuadas, se aplican las
siguientes reglas:

1.- Seleccione la dilución más alta (menor cantidad de muestra) en la que resulten todos los tubos positivos
(5/5 o 3/3) y las dos diluciones subsiguientes . Si esto no es posible, ya sea porque ninguna de las diluciones
subsiguientes a ésta, emplear las 3 últimas.

2.-Si sólo una dilución presenta tubos positivos, elegir 3 diluciones sucesivas de modo que el resultado positivo
corresponda a la dilución del medio.

3.- Si aparecen resultados positivos en la dilución siguiente a las 3 seleccionadas, sumar el número de tubos
positivos presentes en esta dilución al resultado de la dilución anterior.

Preparación del medio de cultivo

Caldo Escherichia Coli (E.C.)

 Leer la etiqueta del frasco del caldo. Calcular la cantidad a usar en relación a las indicaciones en
la etiqueta.
 Pesar la cantidad de gramos del caldo que se usara en 120 mL de agua destilada.
 Disolver en dos partes, es decir, hacer caer el polvo en la botella con 60 mL de agua destilada.
Cuando este completamente disuelta colocar los 60mL restantes.
 Calentar en el microondas por 1 minuto.
 Esterilizar el medio a 100°C por 20 minutos.
 Enfriar a 40°C-50°C.

Siembra

 Coger las muestras positivas.

 Esterilizar el asa de siembra al fuego. Destapar el tubo e introducir 1-2 veces la punta del asa de
siembra en la muestra.
 Luego se realiza las azadas en el tubo el caldo E.C.
 Esto se repite con todas las muestras positivas.
 Terminado las siembras se lleva a incubar las muestras a 44.5°C por 24-48 horas.

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PRUEBA DETERMINATIVA

ASS & BGA

FUNDAMENTO:

ASS
Medio de cultivo selectivo, adecuado para el aislamiento de microorganismos Gram negativos
tolerantes a la bilis, especialmente especies de los géneros Salmonella y Shigella, a partir de
muestras de origen clínico (deposiciones) , aguas y aguas residuales , y alimentos, así como
también otras muestras de origen industrial . Cumple los requerimientos de USP (United States
Pharmacopeia) para la realización de pruebas de control de calidad microbiológico . En Agar
Salmonella – Shigella, el mayor contenido de sales biliares y verde brillante contribuyen a un
aislamiento selectivo de Salmonellas y Shigellas, junto a una inhibición marcada o total de la
mayoría de las otras enterobacterias. El contenido de citrato ferrico y tiosulfato de sodio permite
evidenciar colonias bacterias productoras de H2S, tales como Proteus spp. y Salmonella spp., las
que se observarán coloreadas de negro con halo claro.

BGA
El Brilliant Green Agar es un medio selectivo recomendado para el aislamiento primario , o bien
después del enriquecimiento en caldo Selenito o similares, de Salmonella spp., diferentes a la S.
typhi y parathyphi . PRINCIPIO El uso de Brilliant Green Agar para islamiento de Salmonellas fue
descrito por Kristensen y cols, posteriormente ligeramente modificado, denominándose también
Brilliant Green agar modificado. Puede utilizarse para muestras clínicas y otras muestras que
puedan contener estos micoorganismos como bebidas La presencia del colorante verde brillante
proporciona selectividad al medio, de forma que la Salmonellas spp. forman colonias rosadas sobre
fondo rojo brillante, además de actuar como inhibidor de la flora acompañante. La presencia del
binomio Lactosa-Sacarosa , permite que las bacterias fermentadoras , como E.coli, aparezcan
como colonias amarillas verdosas, debido a la formación de ácidos que se ponen de manifiesto
por la presencia del colorante rojo fenol.

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PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO

 Leer la etiqueta del frasco del Agar. Calcular la cantidad a usar en relación a las indicaciones en
la etiqueta.
 Pesar la cantidad de gramos del Agar que se usara en 120 mL de agua destilada.
 Disolver en dos partes, es decir, hacer caer el polvo en la botella con 60 mL de agua destilada.
Cuando esté completamente disuelta colocar los 60mL restantes.
 Calentar en el microondas por 3 minutos.
 Esterilizar el medio a 100°C por 20 minutos.
 Enfriar a 40°C-50°C.

SIEMBRA POR AGOTAMIENTO EN ESTRÍAS

 Abrir el empaquetado de las placas Petri estériles.

 Vertir el medio dentro de la placa unos 15 mL.
 Cerrar la placa Petri y dejar hasta que solidifiquen.
 Esterilizar el asa de siembra.
 Coger el tubo e introducir el asa de 3-4 veces.
 Abrir la placa, luego introducir el asa de siembra y ejercer las estrías, moviendo el asa de extremo
a extremo.
 Empaquetar las placas e incubar a 37°C por 24-48 horas.

5) PROCEDIMIENTO Y MATERIALES

NUMERO MAS PROBABLE PARA COLIFORMES FECALES (E. Coli)

5.1. MATERIALES, REACTIVOS Y MUESTRA:

Los materiales que fueron usados en la práctica fueron previamente esterilizados.

Materiales:

1 recipiente.

2 mecheros.

20 tubos de ensayo.

18 tubos Durham.

3 pipetas de 1ml.

Asa de siembra.

2 placas Petri

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Reactivos:

120ml de Agua Pectonada.

120ml de Caldo Lauril Sulfato.

120ml de Caldo E. Coli

20ml de Agar Salmonella Shigella

20ml de Agar Verde Brillante

Muestra:

Hamburguesa de pescado

5.2. METODOS Y TECNICAS EMPLEADAS:

1. Colocar 2 mecheros alrededor de medio de trabajo.

2. Preparar los medios de cultivo según las indicaciones del Agua Peptonada y los caldos C.LS. Y
C.E.C.
3. El orden d procedimiento para el Agua Peptonada es colocar los 120ml de agua destilada y luego
colocar la cantidad de Agua Peptonada.
4. Llevarlo al microondas por 30 segundos o llevarlo a un Baño María en las jarras eléctricas a 100°C
por 20 minutos.
5. Luego dejar que se enfríen y colocarlo en la refrigeradora.
6. El orden de procedimiento para los caldos es, 60ml de agua destilada en el recipiente, el C.L.S. y
luego los otros 60ml de agua destilada para completar los 120ml.
7. Llevarlo al microondas por 30 segundos o llevarlo a un Baño María en las jarras eléctricas a 100°C
por 20 minutos.
8. Luego dejar que se enfríen y colocarlo en la refrigeradora.

V. PROCEDIMIENTO:

a) Diluir 10g de muestra (hamburguesa de pescado) en el Agua Peptonada preparada previamente.

b) Luego de remover bien la dilución, se espera a que la mayoría de la muestra de sedimente.
c) Luego se diluye 1ml en 9ml de Agua Peptonada en un tubo de ensayo. Luego diluir 1ml de esta
muestra nuevamente en otro tubo de ensayo que contiene 9ml de Agua Peptonada.
d) Así las diluciones serán en orden: 10-1, 10-2, 10-3
e) Agregar 1ml de la primera dilución (10-1) a 3 tubos de ensayo preparados con 9ml de C.L.S. (con el
tubo Durham dentro).
f) Aquí se incubarán los 9 tubos a 37°C de 24 a 48 horas.
g) Pasado este tiempo abrir cada uno de los tubos de ensayo con C.L.S. (con el tubo Durham), y
colocar el asa de siembra (remojándolas 2 veces)
h) Esta asa de siembra se colocará en tubos preparados de C.E.C. (con tubo Durham) para sembrar
las bacterias en este caldo selectivo.
i) Luego dejarlas incubar a 44.5°C de 24-48 horas.
j) Pasado este tiempo seleccionar tubos de ensayo con C.E.C., donde se presenten los Tubos Durham
mayor de 1/3 de gas dentro.
k) Sembrar en placas Petri de los agares BGA y ASS las diluciones positivas (y partir las placas en 4
cuadrantes para entender mejor.

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 6) RESULTADOS

 Para el método de NMP

IMAGEN RESULTADOS

Figura 1: Prueba determinativa.

A partir de tubos con caldo lauril sulfato
de la prueba de número más probable
de coliformes fecales,NO se obtuvieron
positivos para la dilución 10-1 10-2 10-3.
Solo presentaron turbidez en los tubos
que representa otro tipo de
microorganismos.

Figura N°1

Figura 2: Prueba Confirmativa.

Después de una incubación de 37oC
entre 24-48 hrs . Tampoco se obtuvieron
produtos metabólicos finales o presencia
de CO2, solo turbidez en todas las
diluciones.

Figura N°2

7) DISCUSION

Los moluscos de concha se recolectan siendo arrancados o rastrillados del fondo del mar (ostras, mejillones),
o excavando en la arena en marea baja (almejas y berberechos). Después de la recolección, los moluscos
se clasifican (por tamaño), se lavan y se empacan en sacos, en cajas o, simplemente se dejan
amontonados sobre la cubierta. Los moluscos se puede transportar y vender vivos al consumidor, o se
pueden procesar (desconchado) en crudo y utilizando calor. El calor aplicado en el procesamiento es sólo
el necesario para facilitar el desconchado, al provocar que el molusco relaje el músculo abductor, pero no
tiene efecto sobre la contaminación microbiana del mismo. La carne sin concha se lava, se envasa y se
vende fresca, congelada, o se somete a otros procesos y se envasa.

La mayoría de los moluscos (ostras, mejillones, almejas, berberechos) crecen y se recolectan en aguas
estuarinas superficiales y cercanas a la costa. En tal sentido, existe una gran posibilidad de que los individuos
vivos puedan estar contaminados con patógenos derivados de las aguas residuales, o con microorganismos
del medio ambiente circundante. Debido a la alimentación de los moluscos por filtración, puede estar

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presente en estos organismos una concentración alta de agentes causantes de enfermedades, lo cual
constituye un grave peligro ya que tradicionalmente, la mayoría de los moluscos se consumen crudos o muy
ligeramente cocidos. Por lo tanto, obviamente son alimentos de muy elevado riesgo, como ha sido
confirmado por los datos epidemiológicos . Es por ello que la contaminación en moluscos frescos es tan
grande y difícil de controlar.

El análisis de peligros de estos productos es bastante directo y sencillo. Los ejemplares vivos se capturan en
aguas marinas o continentales, se manipulan, y en la mayoría de los casos se elaboran sin utilizar aditivos o
preservantes químicos y por último se distribuyen utilizando como única medida de preservación la
refrigeración o la congelación. La mayor parte del pescado y de los crustáceos se cocinan antes de su
consumo, aunque en algunos países como el Japón existe la tradición de consumir el pescado crudo. La
información epidemiológica muestra que estos productos han causado cierto número de brotes de
intoxicación alimentaria, pero casi siempre han estado relacionados con la presencia de toxinas estables al
calor (biotoxinas, histamina).

El pescado vivo, los crustáceos y los productos crudos, pueden estar contaminados con diversas bacterias
patógenas que normalmente se encuentran en el medio acúatico, como C. botulinum, V.
parahaemolyticus, varios Vibrio sp., L. monocytogenes, Aeromonas sp. No obstante, sólo puede considerarse
como un peligro el desarrollo de estos organismos, ya que la patogenicidad está relacionada con las toxinas
preformadas en el alimento (C. botulinum) o se sabe que la dosis mínima infecciosa es alta (Vibrio). La
severidad de las enfermedades relacionadas con estos organismos puede ser alta (botulismo, cólera) o baja
(infecciones por Aeromonas), pero la probabilidad de causar enfermedades (riesgo) es extremadamente
baja. Las cepas patógenas necesitan temperaturas > 1°C para su crecimiento y compiten con la flora
normal de la alteración cuyo potencial de desarrollo es comparativamente mucho más alto a bajas
temperaturas. Así, es probable que los productos se deterioren antes de que ocurra la producción de toxinas
o el desarrollo de gran número de patógenos. El riesgo se elimina completamente cuando las productos se
cocinan antes de su consumo.

Las bacterias patógenas del reservorio humano/animal (Salmonella, E. coli, Shigella, Staphylococcus aureus)
pueden contaminar al ejemplar vivo según la zona de pesca, y puede ocurrir una contaminación posterior
durante el desembarco y el procesamiento

En Escherichia coli, la contaminación cruzada, unas prácticas deficientes de manipulación e higiene y el

contacto con agua contaminada dan lugar a la presencia de la bacteria en el pescado y el marisco. La
bacteria también se puede acumular en moluscos como las ostras. El consumo de productos crudos o
insuficientemente cocidos, o de productos cocidos que hayan sufrido contaminación cruzada puede
provocar una intoxicación alimentaria. Los síntomas suelen ser diarrea, dolor abdominal y náuseas.

Desafortunadamente, no es posible controlar el gran número de peligros de alto riesgo relacionados con el
consumo de moluscos crudos. No es posible identificar PCC-1 para peligros serios, tales como la
contaminación de moluscos vivos y muertos con agentes causantes de enfermedades. Estos peligros se
pueden reducir, pero no eliminar, por medio de:

 Control del medio ambiente de los moluscos vivos.

 Higiene en la planta, incluido el control de la calidad del agua.

La Unión Europea (UE, antes CEE) no ha especificado valores microbiológicos de referencia para la calidad
del agua en zonas de cultivo. En su lugar, la UE ha puesto un valor microbiológico de referencia (Directiva de
la Unión Europea 91/492/EEC) en los moluscos para consumo directo (EEC 1991a):

<300 coliformes fecales/100 g de carne o

<230 E. coli/100 g de carne (basado en el ensayo de NMP)

La FDA (1989) de los Estados Unidos de América, también especifica como valor microbiológico de
referencia para los moluscos <230 como NMP de coliformes fecales por 100 g de carne

Comparando esta información con los resultados obtenidos en el laboratorio obtendremos que la muestra
de mixtura de mariscos fresca sobrepasa los límites permitidos por la FDA y la UE , y otras normas en general
a nivel mundial.

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 8) CONCLUSIONES

 Se analizó en la hamburguesa de pescado, no hubo productos metabólicos finales ( CO2 ) en los

resultados obtenidos en la prueba presuntiva y confirmativa solamente presentó turbidez en los tubos,
por lo que no se hizo la prueba determinativa como se ha mostrado anteriormente en las figura que
están en los resultados. También al realizar los análisis microbiológicos en las muestras mediante el NMP
obtuvimos la muestra ha sido adecuadamente manipulado ya que la ausencia de E. coli fue nula. sin
embargo en al presentarse turbidez representa otro tipo de carga microbiana.

9) BIBLIOGRAFIA

 DELGADO, C y TORRES M.; “Evaluación bacteriológica de quesos frescos artesanales

comercializados en Lima, Perú, y la supuesta acción bactericida de Lactobacillus spp.”; Revista Panaméricana de
Salud Pública; obtenido de http://revista.paho.org/index.php?a_ID=587#qdr02
 FAO; ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS PRODUCTOS PESQUEROS
http://www.fao.org/docrep/003/T1768S/T1768S06.htm
 FAO; DIRECTRICES PARA LA INSPECCIÓN DEL PESCADO BASADA EN LOS RIESGOS
ftp://ftp.fao.org/docrep/fao/012/i0468s/i0468s00.pdf
 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO; Método para la determinación de bacterias
coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli por la técnica de diluciones en tubo múltiple
(número más probable o NMP)
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/P7_NMPcoliformes_19617.pdf
 MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS
http://www.qo.fcen.uba.ar/quimor/wp-content/uploads/2012/03/Guia-Micro-Alim-Mod-
II_2012.pdf

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