Filtración por membrana

García Arenas, María Camila1; Méndez Arteaga, Ingry Vanessa2; Quijano Plata, Paula
Silvana3; Restrepo Cavieles, Andrea Juliana4, Sierra Orejarena, Laura Fernanda5.
Estudiantes Bacteriología y Laboratorio Clínico. Facultad de ciencias de la salud, Universidad de Santander.
Correo electrónico: bacteriologíaylabclínico@mail.udes.edu.co

Fecha de entrega: 9 de octubre de 2019. Bucaramanga, Colombia.

Introducción
El agua es un excelente disolvente y un medio que favorece la forma de vida biológica, por
ello la calidad del agua potable debería estar asegurada y controlada por medio de
especificaciones de seguridad del agua, y normas reguladoras, por ello se analiza las
características microbiológicas, uno de los métodos empleados son la filtración por
membrana el cual se define como el mecanismo mediante el cual se atrapan en la superficie
de la membrana microorganismos cuyo tamaño es mayor que el tamaño del poro 0.45 um,
esto gracias a que una bomba eléctrica ejerce una presión diferencial sobre la muestra de
agua haciendo que se filtre. Los contaminantes de tamaño menor que el del poro atraviesan
la membrana o se quedan retenidos en su interior, las bacterias que quedan atrapadas en
la superficie de la membrana son llevadas a un medio de enriquecimiento selectivo que
permite un recuento directo de los microorganismos presentes en una muestra de agua. 1,2
Los principales riesgos asociados con el consumo de agua potable son de origen biológico,
existen variedad de enfermedades de focos infecciosos cuya incidencia depende de la
calidad del agua. Estas enfermedades pueden estar causadas por bacterias, virus,
protozoos o gusanos, otros microorganismos presentes en el agua incluyen hongos, algas,
rotíferos o crustáceos, entre los microorganismos encontrados están los coliformes, estos
forman parte de varios géneros como: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter,
etc. Se encuentran en el intestino del hombre y de los animales, pero también en otros
ambientes: agua, suelo, plantas, cáscara de huevo, etc. La presencia de Coliformes sugiere
fallas en la eficacia del tratamiento y la integridad del sistema de distribución. 3
El objetivo de la práctica consistió en determinar la presencia de Coliformes totales,
coliformes fecales, Pseudomonas spp y bacterias mesófilas por el método de Filtración por
Membrana.
Palabras claves: contaminación, calidad, microbiología.
Metodología

Resultados
Los resultados de esta práctica estuvieron
constituidos por la determinación de pH,
temperatura y análisis microbiológico de
agua potable por medio del método de
filtración de membrana, con el fin de
identificar coliformes totales y fecales (ver
Imagen 1), Pseudomonas sp (ver Imagen
2), Aerobios mesófilos (ver Imagen 3) y
mohos y levaduras (ver Imagen 4). Los
resultados obtenidos se evidencian a
continuación:

Imagen 1. Coliformes totales y

fecales en agar Chromo.

Coliformes totales (colonias rosadas y

azules): 428 UFC/100mL
Coliformes fecales (Colonias azules):
243 UFC/100 mL
Cálculos:
Total de coliformes/100ml=
Nº de colonias típicas * 100
mL de muestra filtrada
Total coliformes totales/100 mL: TNTC
Imagen 2. Agar Cetri con presencia Imagen 3. Agar Baird Parket con
de contaminación por hongo presencia de aerobios mesófilos.
filamentoso. Reporte: 75 UFC/100 mL
R

Imagen 4. Agar rosa de bengala con

presencia de mohos y levaduras.

Reporte mohos: 5 UFC/100 mL

Reporte levaduras: 350 UFC/100 mL

FICHA TÉCNICA

Nombre del Producto: Agua Lote: --

Fecha Toma de Muestra: Análisis:

25 de Septiembre del 2019 Control de inocuidad industrial:
Filtración por membrana

CARACTERISTICAS DEL PRODUCTO:

Numero CAS: 7732-18-5
Formula química: H2O
Color: Incoloro
Olor: Inoloro
Textura: Liquida
Aspecto: Cristalino

Medición:
• pH: 7.0
• Temperatura: 29 °C
Fabricado por:
AMB
Dirección: Diagonal 32 No. 30A – 51 Parque del agua
Norma:
Resolución 2115/2007
Resolución 12186/1991
Discusión y conclusión
Existen diferentes criterios aplicados al
agua con el fin de que esta sea apta para
el consumo humano, entre ellas se
encuentran características físicas,
químicas y microbiológicas. Con respecto
a los compuestos químicos, entre ellos se
encuentran el amonio, arsénico, bario.
Cianuro libre, níquel, aluminio, sulfatos,
zinc, plomo, entre otros, que son
reconocidos por sus efectos adversos a
nivel de la salud humana y animal,
además de generar mayores
consecuencias económicas4.
Por otro lado, las características
microbiológicas se determinan en la
mayoría de los casos por medio del
método de filtración por membrana, el
cual permite el crecimiento, la
identificación y el recuento de las colonias
de los microorganismos retenidos en la
superficie por la cual se filtra un volumen
conocido de agua. Por medio de este
método se determina la cantidad o UFC
de coliformes totales, fecales,
Pseudomonas, aerobios mesófilos y
mohos y levaduras.
Por lo tanto, en la práctica llevada a cabo
se identificó el crecimiento de 428
UFC/100mL de coliformes totales y
teniendo en cuenta la Resolución 2115
del 2007 cuando se obtienen recuentos
totales que superen las 200 UFC/100 mL
se interpreta como un resultado erróneo
debido a la superpoblación bajo
condiciones de hacinamiento. Asimismo,
se obtuvo un recuento de 243 UFC/mL de
coliformes fecales que corresponderían al
microorganismo Escherichia coli, el cual
es un bacilo Gram negativo fermentador
de la lactosa a temperaturas de 35 – 37°C
por medio de sus enzimas galactosidasa
y glucoronidasa, además es uno de los
principales indicadores de contaminación
fecal a nivel del agua5.
Adicionalmente, también se llevó a cabo
el procedimiento para la identificación de
gérmenes acuáticos típicos,
principalmente Pseudomonas spp, debido
a que este microorganismo que se
encuentra ampliamente distribuido en la
naturaleza y es considerado un agente
patógeno oportunista en el humano. Sin
embargo, en la práctica no se logró
evidenciar su crecimiento debido al
extenso tiempo de incubación que
permitió la colonización por hongos
filamentosos a nivel del agar. Por último,
se realizó la identificación de gérmenes
de origen telúrico, que principalmente son
especies esporuladas o de origen fúngico,
en este caso se evidencio el crecimiento
tanto de mohos como de levaduras por
medio del agar rosa Bengala 4,5.
Según la Resolución citada anteriormente
las características microbiológicas del
agua apta para el consumo humano
deben enmarcarse en valores máximos
aceptables desde el punto de vista
microbiológico, los cuales corresponden a
0 UFC/mL tanto para coliformes totales
como para fecales, 0 UFC /100 ml para
Pseudomonas spp y 0 UFC/mL para
mohos y levaduras4. El Decreto 1575 del
2006 establece el Sistema para la
protección y control de la calidad del Agua
para consumo humano, el cual define
agua potable o agua para consumo
humano como aquella que cumple con las
características físicas, químicas y
microbiológicas, teniendo en cuenta lo
anterior el agua empleada para la práctica
tiene un concepto sanitario desfavorable,
el cual es definido como el riesgo
inminente para la salud de los usuarios y
que además no da cumplimiento con lo
establecido por la norma. Sin embargo, es
necesario repetir la práctica realizada, con
el fin de identificar de una manera más
precisa las UFC en el tiempo establecido
de incubación6.
En conclusión, el análisis de la calidad del
agua debe realizarse de manera periódica
con el fin de comprobar y evaluar el riesgo
que esta puede presentar para el
consumo humano y la salud pública,
asimismo la identificación de las buenas
prácticas sanitarias que estén
implementadas por las empresas
distribuidoras.
Anexos: Preguntas
1. Fundamentos de medios de cultivo
y métodos rápidos para el recuento
microbiológico de aguas.
Rosa de bengala: Esta fórmula fue
preparada con un pH neutro, desviándose
del medio acidificado usual. Varias
investigaciones han encontrado que un
pH neutro con la adición de un agente
selectivo ha sido exitoso en apoyar el
crecimiento de hongos y restringir el
crecimiento bacteriano. El agar rosa de
bengala suplementado con cloranfenicol
es una modificación de la fórmula del agar
rosa de bengala con clortetraciclina de
Jarvis. El cloranfenicol se recomienda
como el agente selectivo en medios
fúngicos con un pH neutro debido a su
estabilidad térmica y amplio espectro
antibacteriano.El agar rosa de bengala
con cloranfenicol se recomienda en los
métodos estándar para la enumeración de
levaduras y mohos a partir de alimentos y
agua. El agar rosa de bengala con
cloranfenicol también se conoce como el
agar rosa de bengala y agar rosa de
bengala-extracto de malta.
Agar Chromo: Este medio contiene
substratos cromogénicos específicos, los
cuales son escindidos o rotos
químicamente por enzimas específicas
producidas por el Enterococcus spp, E.
coli y por coliformes. Además, este
contiene triptofano, el cual indica actividad
de la triptofanasa deaminasa, indicando a
su vez la presencia de Proteus spp.,
Morganella spp. y Providencia spp. El
substrato cromogénico X-glucósido, está
dirigido hacia la actividad de la enzima B-
glucosidasa, permitiendo la detección
específica del enterococo a través de la
formación de colonias azules. El otro
cromógeno, el Red-Galactosidasa, es
dirigido a la enzima B-galactosidasa, la
cual es producida por el E. coli, resultando
en colonias rosadas. El método de uso es
similar al de los agares tradicionales,
tanto el método de siembra como los
recuentos, la diferencia es que este se
facilita por los colores específicos de cada
especie y los repiques para los
antibiogramas son más precisos y evitan
casi en su totalidad las mezclas de
colonias, el cual, es la principal causa de
los resultados anómalos en los
antibiogramas. El medio de cultivo
cromogénico, tiene múltiples ventajas
sobre el método tradicional de siembra en
agar Sangre/MacConkey como son: la
siembra directa en un solo medio, el
aislamiento e identificación directa en el
mismo plato de siembra hasta en el 83%
de los casos, disminución en los tiempos
de identificación hasta en 24 horas o más,
disminución de las necesidades de
realizar repiques o subcultivos y de test
adicionales o series bioquímicas de
identificación, asegura el crecimiento de
la totalidad de los gérmenes patógenos
urinarios, previene la formación de velo
por las especies de Proteus spp. Fácil
diferenciación de floras mixtas. Adicional
a todo esto se encuentra la disminución
de costos hasta en un 60%, debido a la
utilización de menos agares tanto para
siembra inicial como repiques, la no
utilización de pruebas adicionales o series
bioquímicas ya sea manuales o
automatizadas, y la disminución de
tiempo bacteriólogo por la no realización
de estos procesos
Agar Cetrimide: El agar cetrimide se
fundamenta en la capacidad que tiene el
medio para favorecer el crecimiento de P.
aeruginosa, estimular la producción de
sus pigmentos y a su vez inhibir el
crecimiento de otros microorganismos.
Estas propiedades se deben a la función
que cumplen cada uno de sus
componentes. La peptona de gelatina
presente sirve como fuente de nitrógeno,
vitaminas y minerales. El glicerol o
glicerina funciona como fuente de
carbono.
Por su parte, la cetrimida (bromuro de cetil
trimetil amonio) es la sustancia que inhibe
el crecimiento de otras bacterias
diferentes a P. aeruginosa, incluyendo
otras especies pertenecientes al mismo
género. La inhibición se produce porque
la cetramida actúa como un detergente
catiónico, logrando desestabilizar
la membrana plásmatica de la mayoría de
las bacterias, a excepción de P.
aeruginosa y algunas otras que logran
sobrevivir. Por otra parte, contiene cloruro
de magnesio y sulfato de potasio. Estos
compuestos estimulan la expresión
fenotípica relacionada con la capacidad
de Pseudomonas aeruginosa de producir
diversos pigmentos, entre ellos:
piocianina, pioverdina, piorrubina,
piomelanina y fluoresceína. Finalmente,
contiene agar-agar, que le da la
consistencia sólida.
Agar Baird Parker: Se utilizan diversos
medios para el aislamiento de
Staphylococcus aureus, que desempeña
un papel muy importante en los casos de
intoxicación por alimentos e infecciones
clínicas humanas. La fórmula del presente
agar Baird-Parker fue publicada en 1962.
Es un medio parcialmente selectivo que
utiliza la capacidad de los estafilococos de
reducir el telurito a telurio y detectar la
lecitinasa a partir de la lecitina del huevo.
El agar Baird-Parker se utiliza
ampliamente y se incluye en numerosos
procedimientos estándar para el análisis
de alimentos, cosméticos o agua de
piscinas con el fin de detectar la presencia
de Staphylococcus aureus. Asimismo,
puede utilizarse para el aislamiento de S.
aureus a partir de muestras clínicas y
también se denomina agar huevo-telurito-
glicina-piruvato (ETGPA). BD Baird-
Parker Agar contiene las fuentes de
carbono y nitrógeno necesarias para el
crecimiento. La glicina, el cloruro de litio y
el telurito potásico actúan como agentes
selectivos. La yema de huevo constituye
el sustrato para determinar la producción
de lecitinasa y, además, la actividad de
lipasa. Los estafilococos producen
colonias de color de gris oscuro a negro
debido a la reducción del telurito; los
estafilococos que producen lecitinasa
descomponen la yema de huevo y crean
zonas transparentes alrededor de las
colonias correspondientes. Es posible que
se forme una zona de precipitación debido
a la actividad de lipasa. El medio no debe
utilizarse para el aislamiento de
estafilococos diferentes de S. aureus7.
2. Tipos de E.coli que pueden
producir infecciones
intestinales en el hombre.
E. coli enteropatógeno: se caracteriza
por la lesión histopatológica de la
superficie apical de los enterocitos,
conocida como "Adherencia y y
Esfascelamiento". Afecta la mucosa
intestinal al conducir a la disolución del
borde en cepillo por vesiculación de las
microvellosidades,con pérdida de
disacaridasas, lo que a su vez altera la
absorción y conduce a la producción de
una diarrea secretora, que puede estar
asociada a fiebre
• E. coli enteroinvasiova: como
manifestaciones clínicas tiene
evacuaciones de escasas
 acompañadas de moco y sangre, merogonias, gametogonias y
dolor abdominal tipo cólico y fiebre esporogonias), orden Eucoccidiorida (hay
• E. coli enterohemorrágica: esquizogonia), suborden Eimeriorina (se
caracterizado por diarrea de inicio desarrollan macro y microgametos de
brusco con dolor abdominal. Las forma independiente, y el zigoto es
evacuaciones líquidas se acompañan inmóvil) y familia Cryptosporidiae (los
de una descarga hemorrágica. El ooquistes presentan cuatro esporozoitos
síndrome urémico hemolítico es una y ciclo vital monoxeno, es decir, con un
de las principales causas de daño solo hospedador) 9.
renal en niños, se define por la
4. IRCA y PICCAP
presencia de anemia hemolítica
microangiopática, insuficiencia renal IRCA: Índice de Riesgo de la Calidad del
aguda y trombocitopenia. Agua para el consumo humano
• E. coli enteroagregativa: produce
una diarrea secretora acuosa con PICCAP: Programa Interlaboratorio de
moco y sangre, y febrícula Control de Calidad de Aguas Potables 6.
• E. coli enterotoxigénica: Bibliografía
presentándose de ocho a 12
evacuaciones al día por un periodo de 1. Ayalaa M, Mesa G, Montoya L,
cuatro a cinco días 8 Procesos de membranas para el
tratamiento de agua residual
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Mastigophora, agente causal de la 2. Navarro M ,Gatian S.
giardiasis. Se multiplica por división DETERMINACIÓN DE
binaria en la superficie de las primeras ESCHERICHIA COLI Y
porciones del intestino delgado, a un pH COLIFORMES TOTALES EN AGUA
ligeramente alcalino que favorece su POR EL MÈTODO DE FILTRACIÒN
desarrollo y existe evidencia genética y POR MEMBRANA EN AGAR
epidemiológica sobre su capacidad de CHROMOCULT, IDEAM. [Internet]
recombinación sexual. Presenta dos [Consultado el 4 octubre de 2019]
formas: trofozoíto y quiste con un ciclo Disponible en:
biológico sencillo. El trofozoíto prolifera http://www.ideam.gov.co/documents/
(se multiplica) y el quiste es la forma 14691/38155/Coliformes+totales+y+E
infectante. .+coli+en+Agua+Filtraci%C3%B3n+p
or+Membrana.pdf/5414795c-370e-
Cryptosporidium parvum: Es un
protozoo intrecelular. se encuadra dentro 48ef-9818-ec54a0f01174
del Phylum Apicomplexa (presentan 3. Anselme C, Jacobs J, TRATAMIENTO
complejo apical), clase Sporozoasida DEL AGUA POR PROCESOS DE
MEMBRANA CAP 10, Institute for
(reproducción sexual y asexual con
Polymer Science Universidad de
formación de ooquistes), subclase
Stellenbosch, [Internet]. 2017.
Coccidiasina (el ciclo presenta
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