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03-09-2008
PROCEDIMIENTO RECUENTO DE Revisión: 0
AREOBIOS MESOFILOS EN LECHE UHT
Fecha revisión:
03-09-2008
Sección Microbiología PRT- 712.02-078 Página 1 de 9
de Alimentos
1. OBJETIVO
Conocer la calidad microbiológica de la leche sometida a ultra alta temperatura de acuerdo a lo
establecido en el Reglamento Sanitario de los Alimentos.
3. FUNDAMENTO
Los productos procesados a ultra alta temperatura (UHT) son sometidos entre 135°C a 140°C
por 2 a 4 minutos, empacados asépticamente. Productos lácteos de baja acidez. Estos productos
están regulados según Food Drugs Administration como productos enlatados o conservas de baja
acidez.
4. REFERENCIAS
4.1 Standard Methods for the examination of Dairy Products, 17 Edición del 2004, capítulos 3,
4, y 9.
4.2 BAM online carpeta 21A, enero 2001.
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5. TERMINOLOGÍA
5.1 No Aplica
7. DESARROLLO
7.1 Recibir las muestras recepcionadas por el laboratorio 340 según PRT-712-01-001 y PRT-
712.01-002.
7.3 Siembra:
7.3.1 Cumplido el tiempo de incubación, retirar los envases y mantener a temperatura ambiente
el tiempo suficiente para que se enfríen y adquieran la temperatura ambiental antes de
analizar.
7.3.2 Procesar la muestra preferentemente en Cámara de Flujo Laminar. Si no dispone de
Cámara Flujo laminar, abra y siembre los envases en mesón frente a un mechero.
7.3.3 Un vez que los envases adquieren la temperatura ambiente, nuevamente desinfecte con
alcohol 70% en la superficie donde será abierto.
7.3.4 Para abrir los envases utilice material estéril.
7.3.5 Si los envases presentan condiciones normales, homogenice la muestra antes de abrir,
invirtiendo 25 veces el contenedor.
7.3.6 Abrir cuidadosamente y obtener la alícuota analítica de 1mL para siembra directa y si se
requiere realizar diluciones medir 11 mL y diluir en 99 mL del diluyente seleccionado.
7.3.7 El tiempo estimado entre la homogeneización y la remoción del volumen analítico no
debe exceder los 3 min.
7.3.8 Cuando se realiza sólo control de esterilidad comercial, se puede puncionar el envase con
una jeringa estéril y obtener el volumen de muestra necesario para análisis.
7.3.9 Agregar 15 a 20 mL de agar Plate Count previamente fundido y mantenido a 47°C ± 2°C.
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7.3.10 Mezclar 5 veces siguiendo la dirección de las manecillas del reloj, 5 veces con
movimientos horizontales, 5 veces con movimientos contrario a las manecillas del reloj y
finalmente 5 veces con movimientos verticales).
7.3.11 Una vez solidificado el agar, invertir rápidamente las placas.
7.3.12 Incubar a 32°C ± 1°C por 48 horas.
• Si hay menos de 10 colonias por cm², contar las colonias en 12 cuadrados, seleccionar 6
cuadrados consecutivos horizontales de la placa y 6 cuadrados consecutivos formando
ángulo recto, contar cada cuadrado sólo una vez
• Si hay más de 10 colonias por cm² contar las colonias en cuatro de tales porciones.
En ambos casos, multiplicar el número promedio de las colonias contadas por cm² por el área
de la placa usada para estimar el número de colonias por placa. Cada laboratorio debe
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determinar el área en cm² de las placas usadas. Registre los valores obtenidos e indique como
recuento estimado.
• Si hay mas de 100 colonias por cm², registrar como >100 col / cm².
Los laboratorios con un 5 % de placas cubiertas con más de 1/4 de las placas con crecimiento
invasivo, deberían tomar medidas inmediatas, para eliminar este problema (reducir la humedad
ambiente en la cámara o estufa de incubación y mezclar cuidadosamente el agar con la siembra).
7.4.4 Para los cálculos del Recuento Standard en placa considerar sólo los dos primeros dígitos.
Si el tercer dígito es 6, 7, 8 o 9 adicionar una unidad al segundo dígito. Si el tercer dígito
es 1, 2, 3 o 4 considerar solamente los dos primeros dígitos. Cuando el tercer dígito es 5,
agregar una unidad al segundo dígito si este es impar y mantener el segundo dígito si este
es par.
Usar ceros para los demás dígitos hacia la derecha.
Ejemplo
Lectura calculada RAM
12.700 13.000
12.400 12.000
15.500 16.000
14.500 14.000
7.4.5.2 Si los recuentos de las placas de dos diluciones consecutivas caen dentro del rango
25-250 colonias calcular el RAM según la siguiente fórmula:
N= ΣC
[ ( 1 x n1 ) + ( 0.1 x n2 ) ] x d
donde :
N = número de colonias por ml o g de producto
Σ C = suma de todas las colonias contadas en todas las placas
n1 = número de placas contadas de la menor dilución.
n2 = número de placas contadas de la dilución consecutiva.
d = dilución de la cuál fué obtenido el primer recuento
Ejemplo
1 : 100 1 :1000
232 y 244 33 y 28
N = 232 + 244 + 33 + 28
[( 1 x 2 )+( 0.1 x 2 )] x 0,01
= 537
0.022
= 24.409 = 24000
7.4.5.3 Cuando los recuentos de las placas en duplicado caen tanto dentro como fuera del
rango 25-250 colonias, usar sólo aquellos recuentos que estén dentro de este rango.
Ejemplo
1 : 100 1 : 1.000 R A M ( mL o g )
18 2 < 2.500 recuento en placa estimado (RPES)
0 0 < 2.500 recuento en placa estimado (RPES)
7.4.8 Todas las placas con más de 100 colonias promedio por cm².
Estimar que el R A M es mayor de 100 veces la mayor dilución sembrada, por el área de placa
utilizada y por el recíproco de la dilución.
Ejemplo
1 : 100 1 : 1.000 R A M ( mL o g )
TNPC 7.150* > 6.500.000 * ( RPES )
TNPC 6.490** >5.700.000 **( RPES )
* basado en un área de placa de 65 cm² ( 9 cm Ø )
** basado en un área de placa de 57 cm² ( 8,5 cm Ø )
7.4.9 Todas las placas con crecimiento invasivo, presencia de inhibidores o accidente de
laboratorio.
Informar según corresponda.
7.5 Informe
7.5.1 Informar el recuento de aerobios mesófilos (RAM) en unidades formadoras de colonias
(ufc) por mililitro o gramo según corresponda.
Expresar el Resultado con sólo un número entero y un decimal multiplicado por 10
elevado a la potencia correspondiente. Ej 2.400 → 2,4 x 103 ufc / g o mL.
7.5.2 El Reglamento Sanitario de los Alimentos para las leches clase UHT exige recuentos de
aerobios mesófilos < 1, por lo tanto cuando no se presente desarrollo informe como < 1
(recuento en placa estimado).
8. REGISTROS
9. TABLA DE MODIFICACIONES
10. ANEXOS
Registro de resultados análisis RAM, S. aureus, mohos y levaduras en muestras de alimentos y
agua.