Obtención de bioetanol a partir del bagazo cervecero
Carlos Caizaa , Luis Cumbalb
a Carrera de Ingenierı́a en Biotecnologı́a, Universidad de las Fuerzas Armadas-ESPE
b Centro de Nanociencia y Nanotecnologı́a, Universidad de las Fuerzas Armadas-ESPE
chcaiza@espe.edu.ec, lhcumbal@espe.edu.ec
Resumen— El Bagazo Cervecero (BC) es el principal
desecho en una cervecerı́a. Este material tiene un alto conteni-
do de biomasa lignocelulósica, fuente importante de azúcares
para la producción de etanol. El presente trabajo tiene como
objetivo obtener bioetanol a partir de los residuos sólidos cer-
veceros empleando Saccharomyces cerevisiae en la fermenta-
ción. En el desarrollo experimental el BC se trató con solu-
ciones de ácido sulfúrico y nı́trico en concentraciones de 3 %,
5 %, 7 % y 9 % (v/v) en relación 1:3 (g BC : mL solución). La
mezcla se llevó al autoclave para la hidrólisis a 15 psi y 121o C
por 15 y 30 min para luego ajustar el pH a 4.5-5.0 con una
solución de hidróxido de sodio al 10 % (w/v). Para la fermen-
tación del extracto se empleó S. cerevisiae (0.5, 1.0 y 2.0 g de
levadura por L) y el proceso duró siete dı́as. Empleando análi-
sis de varianza, prueba de Tukey y Duncan, se analizaron las
medidas de grados Brix antes y después de la fermentación. Se
determinó que el mejor tratamiento de conversión de celulosa
a azúcares fue con ácido sulfúrico al 3 % (v/v), una digestión
por 30 min y 2.0 g de levadura por L de extracto. Se replicó
el mejor tratamiento y se determinó una producción de 0.04 g
de bioetanol por cada gramo de BC.
Palabras Clave— Bagazo Cervecero, Bioetanol, Biomasa
Celulúsica, Hidrólisis
Abstract— Brewer’s Spent Grain (SG) is the main waste
product in a brewery. This material has a high lignocellulo-
sic content, an important source of sugars in the production
of ethanol. The current work aims to obtain bioethanol from
the fermentation of solid beer waste using Saccharomyces ce-
revisiae. In the development of the experiment SG was treated
with solutions of sulfuric acid and nitric acid in concentrations
of 3 %, 5 %, 7 % and 9 % (v/v) at a ration of 1:3 (g SG:mL so-
lution). The mixture was autoclaved for hydrolysis at 15 psi
and 121 o C for 15 and 30 min and the pH later adjusted to
4.5- 5.0 utilizing a 10 % sodium hydroxide solution (w/v). S.
cerevisiae (0.5, 1.0 and 2.0 g of yeast per L) was used to fer-
ment the extract for 7 days. Degrees Brix were measured and
analyzed before and after fermentation; using variance anal-
yisis, Tukey and Duncan tests, It was determined that the best
treatment for the conversion of cellulose to sugars was sulfu-
ric acid at 3 % (v/v), applied for 30 min and 2.0 g of yeast per
L of extract. The best treatment was repeated and 0.04 g of
bioethanol per gram of SG was produced.
Keywords— Brewer’s Spent Grain, Bioethanol, Lignocellu-
losic Content, Hydrolysis.
I. I NTRODUCCI ÓN
La cerveza es la quinta bebida más consumida en el mun-
do después del té, bebidas gaseosas, leche y café. Su produc-
ción global se estima excedió los 1.35 billones de hectolitros
en el 2002 y para el 2011 se tuvo la cifra de 1.75 billones
[1]. Como resultado del proceso de elaboración de cerveza
se tienen residuos lı́quidos y sólidos. Los desechos en mayor
volumen son sólidos provenientes de los granos empleados
(cebada y trigo principalmente) denominados Bagazo Cer-
vecero (BC), el cual luego de un proceso de separación pue-
de representar hasta un 85 % del total de residuos en una
cervecerı́a estándar. Una cifra referencial mostró que en el
2013 hubo un aproximado de 38.6 millones de toneladas de
BC [2].
El BC puede ser empleado como materia prima para la
obtención de bioetanol ya que posee una gran cantidad de
biomasa lignocelulósica, cadenas de celulosa y hemicelulo-
sa que pueden ser transformadas en compuestos fermenta-
bles como glucosa, xilosa o sacarosa [3]. Según [3] la com-
posición porcentual del BC es, en promedio, 16.8-21.9 %
celulosa, 28.4-29.6 % hemicelulosa, 21.7-23.0 % lignina y
15.3-24.6 % proteı́na.
La biomasa lignocelulósica puede ser hidrolizada em-
pleando ácidos fuertes, como ácido nı́trico y sulfúrico, y
temperaturas superiores a 90 o C para generar azúcares li-
bres [4]. En el proceso de hidrólisis se pueden emplear áci-
dos concentrados o ácidos diluı́dos, el costo de generación
aumenta con el uso de ácidos concentrados pero la eficien-
cia de extracción de azúcares también es mayor [5].
La transformación de azúcares a bioetanol se realiza utili-
zando microorganismos fermentadores, Saccharomyces ce-
revisiae entre ellos, que toman los azúcares como fuente de
energı́a para metabolizarlos en bioetanol y dióxido de car-
bono [6]. El proceso de fermentación dura varios dı́as y, al
finalizar el lı́quido fermentado es destilado mediante proce-
sos como destilación simple, destilación fraccionada o des-
tilación extractora en función a la pureza que se desea [7].
La destilación sirve para separar el bioetanol del agua para
que pueda ser aprovechado como combustible en vehı́culos
de combustión interna, ya sea de manera pura o en mezcla
con gasolina; de esta manera se logra disminuir la emisión
de gases tóxicos [8].
II. M ÉTODO
A. Materia Prima
El BC fue donado por las cervecerı́as Quinde Brewery
Cı́a. Ltda. y Doggerlander Brewing Co., Pichincha, Ecuador.
Las muestras fueron tomadas directamente de las plantas de
producción. En fundas plásticas de cierre hermético se reco-
R
lectó aproximadamente un kilogramo de BC. Las muestras
fueron tomadas de las marmitas de maceración y filtrado,
luego fueron trasladadas en recipientes térmicamente aisla-
dos hacia el laboratorio donde se las sometió a un proceso
de secado a 60 o C por 24 h y posteriormente fueron almace-
nadas en refrigeración a 4o C.
B. Reactivos quı́micos
Se utilizaron soluciones de ácido nı́trico (HN O3 ) y ácido
sulfúrico (H2 SO4 ) en concentraciones de 3 %, 5 %, 7 % y
9 % (v/v) para la hidrólisis, una solución de hidróxido de
sodio (N aOH) al 10 % (w/v) para ajustar el pH del mosto
extraı́do.
Para la cuantificación de glucosa se utilizó el método del
ácido 3,5-dinitrosalicı́lico (DNS). El reactivo se preparó de
acuerdo al método propuesto por [9] en el que se añade 0.1
g de ácido dinitrosalicı́lico (DNS) y 3 g de tartrato de sodio-
potasio a 8 mL de hidróxido de sodio (N aOH) 0.5 N y se
calienta suavemente para disolver los reactivos. El volumen
se completa hasta 10 mL con agua destilada.
C. Pre-tratamiento
Se trituró las muestras de BC para aumentar el área su-
perficial antes de realizar la hidrólisis ácida e incrementar la
eficiencia de este proceso.
D. Hidrólisis ácida
Los ensayos de hidrólisis se llevaron a cabo en tubos
plásticos para centrı́fuga de 50 mL de capacidad. Para la di-
gestión se utilizó una relación 1 : 3 (w/v) de BC triturado
con la solución ácida, 10 g de BC se mezclaron con 30 mL
de la solución digestora (ácido nı́trico o ácido sulfúrico). El
proceso hidrolı́tico se llevó a cabo en autoclave a 15 psi de
presión y 121o C de temperatura por lapso de 15 y 30 min
para los diferentes tratamientos. Al finalizar la hidrólisis, se
midió el pH de cada repetición y se ajustó a un rango en-
tre 4,5 − 5,0 con solución alcalina de hidróxido de sodio
(N aOH) al 10 % (w/v), luego se dejó en reposo las mues-
tras por 5 min y se las llevó a centrı́fuga a 3000 rpm por 10
min para eliminar el material sólido aún existente. Se extra-
jo el sobrenadante y se esterilizó en autoclave a 15 psi de
presión y 121o C de temperatura por 15 min. Finalmente, se
cuantificó la glucosa presente en el extracto utilizando un
refractómetro manual para medir los grados Brix y también
mediante el método por el reactivo DNS.
E. Fermentación
E.1 Activación de levadura seca
Para iniciar el proceso de fermentación se activó levadura
seca de la casa comercial Levapan
, especie Saccharomy-
ces cerevisiae empleando agua destilada. Según los trata-
mientos, se necesitó tres cantidades diferentes de levadura.
Para ello se pesó y añadió 0.05, 0.10 y 0.20 g de levadura en
erlenmeyers con 100 mL de agua destilada cada uno, luego
se agitó cada recipiente y se los dejó reposar por 30 min en
incubadora a 32o C.
E.2 Pruebas de fermentación
Los ensayos de fermentación se realizaron en tubos de en-
sayo de 25 mL de capacidad, se colocaron 15 mL de mosto
extraı́do y se añadió un mililitro de levadura lı́quida activa-
da previamente. Para esta etapa se tuvo un diseño factorial
2x4x2x3 con cinco repeticiones, o sea un total de 240 expe-
rimentaciones individuales, los tubos de ensayo se incuba-
ron a 28 o C sin agitación. La variable de respuesta fueron los
grados Brix, se midieron cada 24 h durante siete dı́as hasta
que el valor medido fue estable; es decir, cuando el proceso
de fermentación terminó. Utilizando el análisis de varianza
(ANOVA) y los pruebas estadı́sticas de Tukey y Duncan se
determinó el mejor tratamiento de hidrólisis y fermentación.
F. Producción de bioetanol a escala piloto
En base a los resultados y rendimientos que se obtuvo en
los apartados anteriores con ensayos pequeños, se realizó el
escalado del mejor tratamiento a un volumen de dos litros.
Para esto se pesó 350 g de BC triturado y se lo hidrolizó con
1050 mL de solución ácida. Como se describe en las seccio-
nes anteriores, se autoclavó la mezcla y se ajustó el pH con
aproximadamente 800 mL de hidróxido de sodio. Al empe-
zar la fermentación se tuvo 1800 mL de mosto. Se realiza-
ron tres réplicas a escala piloto y con el fermento obtenido
se procedió a los ensayos de destilación.
G. Ensayos de destilación
Se realizaron dos etapas de destilación: por rotavapor y
fraccionada. En la destilación por rotavapor se colocaron
500 mL de fermento en el balón de extracción y se fijaron
las condiciones: 80 mbar de presión de vacı́o, 60 o C tempe-
ratura del baño marı́a y 8.2 o C temperatura del refrigerante.
El proceso duró dos horas aproximadamente, hasta que se
tuvo 200-250 mL en el balón de recolección. El proceso se
repitió una segunda vez para aumentar la concentración de
etanol. Posteriormente, el lı́quido condensado en el balón de
recolección se almacenó y cuantificó. Luego se llevó el eta-
nol extraı́do en el rotavapor a una columna de destilación
fraccionada para aumentar su pureza a valores superiores al
90 % (v/v). Finalmente el bioetanol fue cuantificado y alma-
cenado para determinar su calidad.
H. Cuantificación de grados brix y glucosa
H.1 Grados Brix
En la evaluación de grados brix se utilizó un refractóme-
tro (Atago
R
). Gotas del extracto centrifugado se deposita-
ron sobre el cristal del refractómetro y se observó el valor
marcado sobre la escala de grados brix.
H.2 Glucosa
La cuantificación de glucosa del extracto hidrolı́tico se
realizó por el método de espectofotometrı́a de UV. Prime-
ro se preparó una Curva de Calibración empleando una so-
lución patrón de glucosa con una concentración de 20 g/L,
para esto se disolvió 2 g de glucosa en 90 mL de agua y
se llevó a un volumen de 100 mL. Con la solución patrón
se prepararon doce diluciones a concentraciones de 15, 10,
8, 6, 4, 2, 1, 0.8, 0.6, 0.4, 0.2 y 0.1 g/L. Para la lectura de
absorbancia, en tubos de cristal de 20 mL se puso 1 mL de
cada dilución y se añadió 1 mL de reactivo DNS. Los tubos
se colocaron en baño marı́a a 95 o C por 5 min. Se dejó en-
friar hasta temperatura ambiente y se añadió 10 mL de agua
destilada. Se agitó y realizó la lectura a 540 nm en espectro-
fotómetro. Los valores obtenidos se anotaron para preparar
la curva de calibración. Las muestras se prepararon de ma-
nera idéntica a los patrones y se procedió a la lectura de la
absorbacia junto con el blanco a la misma longitud de onda
antes descrita.
I. Determinación del porcentaje de bioetanol
El porcentaje de bioetanol se determinó utilizando al-
coholı́metro (AllAF rance
R
) con termómetro y escala en
grados Gay-Lussac. Para el análisis se midió 100 mL de
extracto destilado en una probeta, luego se sumergió el al-
coholı́metro, se anotó y corrigió el valor observado en la
escala.
III. A N ÁLISIS DE R ESULTADOS
A. Hidrólisis ácida y extracción de glucosa
Al aplicar la hidrólisis ácida al BC se logró la conver-
sión de celulosa y hemicelulosa en azúcares. Se cuantificó
la glucosa presente en el mosto extraı́do como función de
los grados Brix y los resultados obtenidos se muestran en
la figura 1. Estos resultados mostraron que para un tiempo
de 15 min de hidrólisis, la mayor conversión y extracción
de glucosa sucedió en el tratamiento S9 donde se cuantificó
11.9 o Bx, mientras que el tratamiento S3 reportó la menor
extracción de glucosa con un promedio de 8.1 o Bx. Para 30
min de hidrólisis la mayor extracción se observó en el tra-
tamiento S9 con un valor de 13.9 o Bx y la menor para el
tratamiento N3 con 10.3 o Bx.
14
t1: 15 min
12 t2: 30 min
Grados Brix iniciales
10
8
6
4
Co:t1 Co:t2 N3:t1 N3:t2 N5:t1 N5:t2 N7:t1 N7:t2 N9:t1 N9:t2 S3:t1 S3:t2 S5:t1 S5:t2 S7:t1 S7:t2 S9:t1 S9:t2
Tratamientos
Co: control, N: ác. nítrico, S: ác. sulfúrico
Figura. 1: Diagrama de barras para la extracción de glucosa
por hidrólisis.
Según [10], [11], [12] y [13], a mayor tiempo de reac-
ción hidrolı́tica se genera mayor conversión de celulosa a
glucosa, xilosa y arabinosa; también la concentración del
ácido está relacionada directamente con la concentración de
azúcares obtenidos; es decir, a mayor concentración, mayor
extracción. Esto se explica ya que en la conversión de celu-
losa a glucosa se produce la ruptura del enlace glicosı́dico,
para lo cual se requiere que en el medio acuoso existan ca-
tiones libres de hidrógeno. A mayor número de cationes H +
ocurre mayor ruptura de enlaces; es decir mayor producción
a glucosa [14].
El ácido nı́trico reporta mejor conversión a azúcares para
hidrólisis a temperaturas menores a 80 o C y tiempos supe-
riores a 2 h [3, 15, 16]. Por otro lado, se ha reportado mayor
eficiencia en la extracción de azúcares con ácido sulfúrico
para temperaturas de reacción, mayores a 120o C, pero con
tiempos de hidrólisis de 10-15 min [13, 17].
La temperatura es un factor determinante en un proce-
so hidrolı́tico. Se conoce que a mayor temperatura el pro-
ceso de hidrólisis se acelera y tiene mayor eficiencia [14].
Un aumento de temperatura se traduce en un aumento de
energı́a del sistema, lo que permite romper los enlaces en las
moléculas de celulosa. Para tratamientos con temperaturas
superiores a 160o C se han reportado eficiencias de hidróli-
sis mayores al 65 % trabajando con ácido sulfúrico diluido
[14, 18].
En relación al tiempo de digestión hidrolı́tica se ha repor-
 12 14

A: 1 g de levadura
A: 1 g de levadura
12 B: 2 g de levadura
10 B: 2 g de levadura
C: 0.5 g de levadura
C: 0.5 g de levadura
10

Grados Brix finales

Grados Brix finales

4
4

2 2
Co:A Co:B Co:C N3:A N3:B N3:C N5:A N5:B N5:C N7:A N7:B N7:C N9:A N9:B N9:C S3:A S3:B S3:C S5:A S5:B S5:C S7:A S7:B S7:C S9:A S9:B S9:C Co:A Co:B Co:C N3:A N3:B N3:C N5:A N5:B N5:C N7:A N7:B N7:C N9:A N9:B N9:C S3:A S3:B S3:C S5:A S5:B S5:C S7:A S7:B S7:C S9:A S9:B S9:C

Co: control, N: ác. nítrico, S: ác. sulfúrico Co: control, N: ác. nítrico, S: ác. sulfúrico

Figura. 2: Diagrama de barras de grados brix al finalizar la Figura. 3: Diagrama de barras de grados brix al finalizar la
fermentación al emplear diferentes cantidades de levadura. fermentación empleando diferentes cantidades de levadura.
Hidrólisis por 15 min. Hidrólisis por 30 min.

B.2 Efecto de los ácidos empleados en la hidrólisis

tado que a mayor tiempo de exposición del material lignoce-
lulósico a la solución ácida existe una mayor degradación de En los ensayos de fermentación se cuantificó el consu-
celulosa [14], pero también se conoce que ocurre la conver- mo de glucosa en función del tiempo. La figura 2 indica el
sión de los azúcares extraı́dos a subproductos no deseados consumo de glucosa en función de la cantidad de levadura
como furfural o compuestos fenólicos [19]. Es decir, que a empleada en la fermentación para el tratamiento hidrolı́tico
mayor tiempo de hidrólisis ocurre una conversión de azúca- por 15 min, mientras que la figura 3 muestra el consumo de
res a compuestos no deseados y muchas veces tóxicos. glucosa para la hidrólisis por 30 min.

Los datos obtenidos en el desarrollo del presente proyec- Las figuras 2 y 3 muestran que el mayor consumo de glu-
to indican que hay mayor extracción de azúcares con altas cosa sucedió al emplear bajas concentraciones de ácidos.
concentraciones de ácido y tiempos largos de reacción hi- Por otro lado, la fermentación no ocurrió, o fue ineficiente,
drolı́tica sin embargo, también se presentan desventajas al para altas concentraciones de ácido. Se conoce de estudios
momento de utilizar estos tratamientos como el aumento en anteriores que en el proceso de hidrólisis se generan com-
costo de proceso y la generación de subproductos tóxicos puestos tóxicos; según [20], el ácido nı́trico genera mayor
para los organismos fermentadores [4, 19, 20]. concentración de sustancias tóxicas, principalmente com-
puestos alifáticos y fenólicos, a tiempos de digestión cor-
tos (¡30 min). Esto se evidencia en una menor variación de
El análisis estadı́stico de Anova Multifactorial y Prueba
grados Brix que se observa para los tratamientos con ácido
de Duncan con un nivel de significancia del 95 % (α = 0,05)
nı́trico. También se observa en la figura 3 que no hubo con-
mostraron que el tratamiento con ácido sulfúrico al 9 % de
sumo de glucosa con el tratamiento con ácido sulfúrico al
concentración (v/v) reportó mayor extracción de azúcares
9 % (v/v) y 30 min de digestión, lo que muestra la presencia
con una media de 12.92 o Bx y un tiempo de reacción de 30
de compuestos tóxicos o inhibidores de levaduras como el
min a 121 o C.
furfural y el hidroximetifurfural (HMF).

B. Evaluación de la fermentación empleando S. cerevisiae El furfural es un inhibidor en el crecimiento de S. cere-

visiae en el proceso de fermentación, por su parte el HMF
B.1 Elección del microorganismo para la fermentación tiene efectos sobre la enzima alcohol deshidrogensa y, los
compuestos alifáticos y fenólicos se cree se acumulan en la
En el presente trabajo se utilizó S. cerevisiae en la fer- membrana de las células de levadura por interacciones elec-
mentación por su gran adaptación a diferentes ambientes, su trostáticas e impiden el transporte de iones a través de ésta;
elevada capacidad de crecimiento y mutiplicación, su ace- es decir bloquean el proceso de ósmosis [19, 20, 23]. Los
lerado metabolismo y su gran tolerancia a elevadas concen- compuestos tóxicos son generados de los azúcares extraı́dos
traciones de etanol [21], además se ha demostrado que esta de la celulosa y a partir de la lignina [20]. El mecanismo de
levadura puede fermentar una amplia variedad de azúcares acción para la formación de subproductos tóxicos es la des-
[22]. Se eligió S. cerevisiae de la casa comercial Levapan
R
hidratación de azúcares (como glucosa o fructosa) por pre-
por su bajo costo y alta disponibilidad en el mercado. sencia de un ácido fuerte. Para la glucosa, primero ocurre la
isomerización a fructosa por acción de la temperatura, lue-
go un protón donado por el ácido es captado por el azúcar
para que ocurra la liberación de una molécula de agua del
azúcar y se obtiene como resultado una molécula de HMF.
Al igual que en la hidrólisis de celulosa, mientras mayor
cantidad de iones hidrógeno libres existan, se genera mayor
producción de HMF [24]. Este hecho explica que al emplear
ácido sulfúrico por tiempos prolongados de hidrólisis se ge-
nera una mayor cantidad de HMF que resulta tóxico para
las levaduras. La formación de fenoles o ácidos alifáticos
se produce por la despolimerización de lignina por hidro-
genación, este proceso es favorecido a temperaturas cerca-
nas a las 100 o C y presiones elevadas. En estas condiciones,
los enlaces estructurales de la lignina sufren rupturas, siendo
este proceso acelerado mediante la adición de catalizadores
ácidos en el medio [25]. La formación de fenoles o com-
puestos alifáticos es un proceso que ocurre en menor tiempo
a la formación de HMF, por ello que a periodos cortos de
digestión se puede encontrar una mayor concentración de
fenoles que de furfural o HMF [25].
Según los análisis estadı́sticos al 95 % de significancia
(α = 0,05), el tratamiento donde hubo mayor consumo de
azúcares; es decir, mayor variación de grados Brix, fue al
emplear ácido sulfúrico al 3 % (v/v) de concentración y una
hidrólisis por 30 min a 121 o C. Es ente caso el valor repor-
tado a los siete de fermentación fue 4.17 o Bx.
B.3 Efecto de la cantidad de levadura empleada
Como se observa en las figuras 2 y 3 el mayor consu-
mo de glucosa se obtuvo al emplear una mayor cantidad de
levaduras. Según datos reportados por [26] y [27], la eficien-
cia del proceso de fermentación, transformación de glucosa
a etanol, depende directamente de la cantidad de levadura
utilizada. Se conoce que a mayor número de células de le-
vadura presentes en el mosto existe una mayor producción
de etanol [22], esto debido a que cada célula de levadura se
encarga de metabolizar una molécula de glucosa a la vez, a
mayor número de células de levadura mayor transformación
de glucosa a etanol. Sin embargo, también existen lı́mites,
según [28] y [22] un excesivo número de células de levadu-
ra provoca una inhibición por competición en la fermenta-
ción; es decir, una baja producción de etanol. Por otro lado
cuando hay pocas células en el medio, la fermentación pue-
de retrasarse o inhibirse debido a que las células no llegan
a adaptarse a las condiciones del medio donde deben crecer.
La cantidad de levadura que se emplea en la fermentación
es análoga a un proceso enzima-sustrato, donde las enzimas
son las células de levadura y el sustrato la glucosa en el me-
dio. En el trabajo desarrollado por [27] se describe que en
la relación enzima/sustrato puede existir inhibición compe-
titiva o inhibición por sustrato, en ambos casos el proceso
general se ve atenuado.
Paralelamente, el proceso fermentativo es más rápido con
una mayor cantidad de levaduras. En el presente trabajo se
observó que el tiempo promedio de fermentación con 1 g de
levadura fue de 5 o 6 dı́as mientras que cuando se utilizó 2 g
el tiempo fue de 4 o 5 dı́as. Datos similares se han reportado
en los estudios de [26]. El tiempo promedio de transforma-
ción de glucosa a etanol depende también de la concentra-
ción inicial de azúcar [22] y del estado de las células de S.
cerevisiae, es decir de su viabilidad [6]. Al utilizar levadura
seca para la fermentación es necesario una activación previa
y ası́ garantizar una buena viabilidad de las células [6]. De
manera general un proceso normal de fermentación puede
durar de cuatro a diez dı́as. Esto se ha reportado en los tra-
bajos de [26] y [7].
El tratamiento con mayor consumo de glucosa fue al uti-
lizar 2 g de levadura por cada litro de mosto. Con un nivel de
significancia del 95 % se determinó una media de 6.14 o Bx
a los siete dı́as de fermentación.
C. Ensayo piloto
Con el tratamiento empleando ácido sulfúrico al 3 % (v/v)
en un proceso hidrolı́tico por 30 min y 2 g de levadura en la
fermentación se realizaron ensayos piloto a volúmenes de
1600 mL para la cuantificación de glucosa, destilación y pu-
rificación de bioetanol.
C.1 Cuantificaión de glucosa
Los ensayos de cuantificación de glucosa reportaron una
concentración promedio de glucosa de 10.79 g/L o, expre-
sada en función de la materia prima (el bagazo), 0.05 g/g.
El valor reportado en este trabajo es inferior a 0.29 g/g re-
portado en otra investigación con bagazo cervecero y ácido
sulfúrico para la hidrólisis [6]. La diferencia está en los tra-
tamientos empleados; mientras que en el presente trabajo
se aplicó únicamente hidrólisis ácida, en otra investigación
se realizó una hidrólisis enzimática posterior a la hidróli-
sis ácida lo que aumenta la conversión de celulosa a gluco-
sa por acción de la enzimas empleadas. En general, la ac-
ción de enzimas especı́ficas aumenta el rendimiento de un
proceso, para la hidrólisis de celulosa se puede utilizar un
conjunto de varias enzimas por separado o simultáneamen-
te. Las enzimas comúnmente empleadas han sido: celulasa,
β-glucosidasa, hemicelulasa y xilanasa. Estas enzimas son
especı́ficas para degradar la biomasa lignocelósica del BC;
además que todas tienen una temperatura común de trabajo.
C.2 Destilación, purificación y cuantificación de bioetanol C.3 Costo de producción
El análisis del costo aproximado de producción de bio-
En el cuadro I se indica el detalle de la destilación por etanol a nivel de laboratorio se muestra en el cuadro II. Se
partes. La primera etapa se realizó en rotavapor (I y II) don- reportó un valor de 1.65 usd por litro. Según [31] y [8] el
de la extracción de etanol duró aproximadamente dos horas costo de producción de bioetanol a partir de bagazo de mal-
y se obtuvo una mezcla de etanol y agua con una pureza de ta en E.E.U.U. es de 0.44 usd por litro, es decir el costo de
44.89 % que concuerda con los datos reportados por [29]. producción para este trabajo es mucho mayor a los datos
Esto significa que una extracción en rotavapor tiene una efi- reportados bibliográficamente. Esta diferencia se debe a la
ciencia similar a una destilación simple en columna. La se- escala de producción, a mayor escala los costos se reducen;
gunda etapa, destilación fraccionada (III), reportó el aumen- también el uso de enzimas que degradan con mayor eficien-
to de la pureza de etanol con un valor medio de 95.47 %, da- cia la celulosa reduce el costo de generación aumentando el
to similar al reportado por [7]. Se observa que en esta etapa volumen de etanol producido [1, 30].
se alcanzó una alta concentración de etanol debido a que en
TABLA II: Detalle del costo de producción de bioetanol a
ésta realmente se puede separar únicamente los compuestos
partir del BC.
ligeros y volátiles. Para obtener etanol anhı́drido (>99 % de
pureza) existen varios métodos de extracción. Una alternati- Detalle Costo (USD/L)
va se plantea en el trabajo de [7], donde se realizó una desti-
Reactivos 1.35
lación extractiva con sales (cloruro de calcio, entre otras) y
se logró alcanzar purezas superiores al 99.1 % (v/v). Levadura seca 0.06
Consumo energético 0.24
Total 1.65
TABLA I: Volúmenes y purezas de etanol con destilación en
rotavapor y destilación fraccionada.
IV. C ONCLUSIONES
I II III Los resultados del presente estudio muestran que el BC
(mL) % Etanol (mL) % Etanol (mL) % Etanol puede ser tratado con ácidos fuertes para extraer azúcares
605 15.33 210.7 44.89 16.3 95.47 fermentables, como glucosa, y producir bioetanol por fer-
mentación alcohólica empleando S. cerevisiae. Altas con-
centraciones de ácido reportan mayor extracción de azúca-
Según [8], la pureza adecuada para emplear el bioetanol
res pero también la generación de productos tóxicos, como
como combustible depende de la mezcla en que sea utiliza-
furfural y HMF, que inhiben o suprimen la fermentación.
do. Como combustible puro, es decir, para motores que sólo
funcionen a base de bioetanol, la pureza de éste debe ser ma-
La producción de bioetanol es proporcional a la cantidad
yor al 99 %, o sea bioetanol anhidro; mientras que cuando se
de azúcares extraı́dos. En este trabajo se logró una produc-
emplean mezclas de bioetanol y gasolina, se requiere pure-
ción de 0.04 g de bioetanol por g de BC con un costo de 1.65
zas mayores al 90 %.
usd por L.

El cuadro I indica que al final del proceso de destilación R EFERENCIAS

se obtuvo como promedio 16.3 mL de bioetanol al 95.47 %
(v/v) de pureza. Esto significa que se obtuvo 15.56 mL de
etanol puro partiendo de 350 g de bagazo triturado, es de-
cir 0.04 g de etanol por g de BC. Este valor es menor a los
reportados por [30] y [3]. La diferencia se debe a que en
el presente proyecto no se utilizó enzimas para degradar la
celulosa y aumentar la cantidad de glucosa disponible. Otra
justificación está en el microorganismo empleado en la fer-
mentación. Mientras que este proyecto utilizó S. cerevisiae
para el proceso de fermentación, otras investigaciones han
utilizado organismos como Pichia stipitis o Kluyveromyces
marxianus por su habilidad para metabolizar azúcares que
S. cerevisiae no puede como xilosa y arabinosa [30].
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