Unión de los fragmentos de un ADN vector

Dependiendo del tipo de diana sobre la que actué la enzima de restricción se deberán
realizar diferentes procesos:
 Enzima EcoR I, los extremos monocatenarios que se obtienen son cohesivos.
 Enzima Hae III, con fragmentos de ADN un trozo de cadena sencilla formado por
un solo tipo de nucleótido, por la transferasa terminal. En los extremos del
plásmido agregaremos fragmento formado por la repetición del nucleótido de
complementario al anterior para formar extremos cohesivos artificiales.
La enzima de restricción usado, al producir las uniones correspondientes por
complementariedad de bases, la ADN ligasa sella las discontinuidades entre los
fragmentos.

Introducción del ADN recombinante de la célula receptora

Se incuba un plásmido obtenido de la recombinación junto con el cultivo de bacterias
específicamente seleccionados. En condiciones adecuadas, el plásmido se incorpora a
las células bacterianas.

Identificación del ADN clonado

Aunque las condiciones sean más favorables, en cada fase se produce errores que
afectan tanto a la unión entre el plásmido y el ADN que se tiene que clonar como la
incorporación del plásmido a las células bacterianas. Por eso en el cultivo se
encuentra:
 Células que se han incorporado el plásmido y contiene el fragmento de ADN que
se desee clonar. Resistentes al antibiótico A pero sensibles al antibiótico B.
 Células que han incorporado un plásmido que no contienen el fragmento de AND.
Son resistentes a los dos antibióticos.
 Células que no han incorporado el plásmido. Son sensibles a los dos ambiticos.
Para la identificación se obtiene una placa de cultivo de bacterias así como su placa
de calco. Diccionario
*Diana: diana de restricción, secuencia de ADN reconocida por una enzima de restricción.
*Enzima: son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas
*Monocatenarios: es un virus en el que el material genético está compuesto por ADN de cadena sencilla
y se replica usando una ADN polimerasa
*Transferasa: es una enzima que cataliza la transferencia de un grupo funcional, por ejemplo un metilo o
un grupo fosfato, de una molécula donadora a otra aceptora
*Plásmido: son moléculas de ADN extracromosómico generalmente circular que se replican y transmiten
independientes del ADN cromosómico.
*ADN ligasa: es una enzima de tipo ligasa que forma enlaces covalentes
 Unión de los fragmentos de un ADN vector

Introducción del ADN recombinante de la célula receptora

Identificación del ADN clonado

Placa de cultivo y colonias Terciopelo y placa de cultivo

Fuentes: Libro,
https://www.google.com.ec/search?biw=1600&bih,
https://es.wikipedia.org/wiki/Enzima