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Escuela o Unidad Escuela de Ciencias Básicas, Tecnología e

Académica Ingeniería
Nivel de Profesional
formación
Campo de Formación disciplinar
Formación
Nombre del BIOTECNOLOGÌA
curso
Código del curso 305689
Tipo de curso Metodológico Habilitable Si ☐ No ☒
Número de 3
créditos

1. Descripción de la actividad
Númer
Tipo de Colaborati o de
Individual ☒ ☐ 3
actividad: va semana
s
Intermedi
Momento de
Inicial ☐ a, unidad: ☒ Final ☐
la evaluación:
1
Peso evaluativo de la actividad: Entorno de entrega de actividad:
75 PUNTOS Seguimiento y evaluación
Fecha de cierre de la actividad:
Fecha de inicio de la actividad: 9
jueves, 28 de septiembre de
de septiembre de 2017
2017
Competencia a desarrollar:
El estudiante argumenta científicamente de manera suficiente las
condiciones técnicas para el desarrollo de las biotecnologías de fermentación
en sus diversas modalidades y usos, así como en el modelamiento de
procesos a cargo de enzimas y microorganismos, apoyado en el estudio de
protocolos de manejo de los insumos biotecnológicos.
Temáticas a desarrollar: Temáticas revisadas: Unidad 1: Tema 2.
Biotecnología de las fermentaciones. Tema 3. Sistemas de Fermentación,
Tema 4. Biotecnología enzimática

Pasos, fases o etapa de la estrategia de aprendizaje a desarrollar

ESTRATEGÍA POR ARGUMENTACIÓN CIENTÍFICA. Para ésta estrategia se


desarrolla en las siguientes etapas :
1. Fundamentación científica. Dónde se reconoce los contenidos,
identifica y comprende los conceptos tratados en el tema a partir del
estudio, análisis y síntesis de los contenidos.
Actividades a desarrollar
1. Sustente sus respuestas de forma científica, referenciando los autores
de consulta de acuerdo al estilo APA.

Desarrolle el siguiente cuestionario. Valor. 40 PUNTOS

1. Realice el laboratorio virtual N. 1. Estudie los conceptos clave:


Crecimiento microbiano

curva de crecimiento modelos matemáticos y ejemplo, luego


realice el procedimiento y responda las preguntas del
cuestionario del laboratorio. El link del laboratorio virtual se
encuentra en el entorno de conocimiento práctico y en el
entorno de conocimiento de la Unidad 1. (10 puntos )

2. Una vez realizado el laboratorio virtual y con los datos


obtenidos. Calcule el valor de g (tiempo de generación) y de k
(Velocidad de crecimiento)

1. De acuerdo al modelo matemático de crecimiento microbiano. Calcule el


valor de g y de k en un experimento de crecimiento en el que se inoculó un
medio con 10 x 106 células/ml de Escherichia colli y que después de un
período de latencia de 1 hora, creció exponencialmente durante 15 horas
alcanzando una población de 15,4 x 109 células/ml.

𝑙𝑜𝑔𝑁 − 𝑙𝑜𝑔𝑁𝑜
𝑁 = 𝑁𝑜. 2𝑛 𝑒𝑠 𝑖𝑔𝑢𝑎𝑙 𝑛 =
𝑙𝑜𝑔2

𝑙𝑜𝑔15,4 ∗ 109 − 𝑙𝑜𝑔10 ∗ 106


𝑛=
𝑙𝑜𝑔2
𝑛 = 30,08 𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠

𝑡 15
𝐺= = = 1,5 ℎ
𝑛 30,08
𝑙𝑛2 0,4986
𝑚= = = 1,3862
𝑡𝑑 1,5

 explique las diferencias de los dos conceptos. (5 puntos)

La constante de velocidad es la tasa específica de consumo del sustrato; es decir es la


velocidad con la que el organismo consume el sustrato. Cuan mayor es la tasa de consumo
mayor será la constante de velocidad de crecimiento. Asimismo, cuan mayor sea el
rendimiento del substrato consumido, también mayor será la tasa de crecimiento.

“El crecimiento de los microorganismos es una parte fundamental de la mayoría de los


procesos de fermentación.
Cuando un organismo es inoculado en un volumen de medio dado, el cultivo pasa por una
serie de fases. Después que se hace la inoculación, existe una fase llamada latencia, en la
cual el organismo se adapta a las condiciones del medio; tras un cierto período de tiempo
en el que la velocidad de crecimiento de las células va en aumento gradualmente, las
células crecen a una velocidad constante máxima; esta fase se denomina exponencial o
logarítmica. A medida que el crecimiento continúa, los nutrientes se van agotando y los
productos van siendo excretados por el organismo, la velocidad de crecimiento disminuye
y finalmente el crecimiento cesa, debido frecuentemente al agotamiento de un nutriente
esencial o a la acumulación de algún producto tóxico; esta fase se denomina estacionaria.”

El tiempo de generación de un organismo es el cambio en el número de las células por


unidad de tiempo, o bien sea es el tiempo requerido para duplicar una población de células,
en las cuales a partir de una célula se forman dos células.

3. Compare y señale las diferencias entre metabolitos secundarios


y primarios, y dé un ejemplo de cada uno de ellos. Incluya al
menos dos explicaciones de las bases moleculares por las que
algunos metabolitos son secundarios, envés de primarios. (5
puntos)
Se llaman metabolitos secundarios de las plantas a los compuestos químicos
sintetizados por las plantas que cumplen funciones no esenciales en ellas, de forma que su
ausencia no es letal para el organismo, al contrario que los metabolitos primarios.Los
metabolitos secundarios intervienen en las interacciones ecológicas entre la planta y su
ambiente.
Los distintos metabolitos secundarios tienen una distribución restringida en el reino de las
plantas, y algunos solo se encuentran en una especie o grupo, por lo que a menudo son
útiles en la Botánica Sistemática.

Metabolitos primarios Metabolitos secundarios


Productos del metabolismo general Productos del metabolismo especial
Ampliamente distribuí dos en plantas y Biosintetizados a partir del metabolismo
microorganismos primario
Indispensables para la vida Distribución restringida a ciertas plantas,
microorganismos
Aminoácidos de proteínas, Distribución taxonómica restringida (a
monosacáridos, lípidos, ácidos derivados veces característico de un género dado o
del ciclo de los ácidos tricarboxílicos, de una especie)
glúcosidos, etc.
No indispensables para la vida
Alcaloides, terpenos, flavonoides,
esteroides, cumarinas, etc.

“Metabolitos primarios: Se producen en el curso de las reacciones metabólicas anabólicas


o catabólicas que tiene lugar durante las fases decrecimiento y que contribuyen a la
producción de biomasa o energía por las células. Se producen principalmente en la
trofofase o fase de crecimiento.
 Tener una función metabólica directa
 Ser compuestos esenciales intermedios en las vías catabólica y anabólica
 Encontrarse en todas las plantas
 Tratarse de carbohidratos, lípidos, proteínas, ácidos nucleicos o clorofilas.

Metabolitos secundarios Se producen por rutas anabólicas especializadas cuando no hay


crecimiento. Pueden ser una estrategia para mantener en funcionamiento los sistemas
metabólisis cuando no hay crecimiento; también sirven como indicativos de
diferenciación y se producen durante la idiofase de los cultivos. Entre sus características
comunes; tienden a producirse cuando el crecimiento está limitado (cultivo continuo); se
forman por enzimas específicos a partir del metabolismo central; no son esenciales para
el crecimiento o para el metabolismo central y son específicos para cada especie, y a veces,
de cada cepa”. Ejemplo:
Primario: Formación de alcohol a partir de azúcar por la levadura
Secundario: Formación de penicilina por el hongo penicillium chrysogenum
4. De acuerdo a la ova sobre fermentación. Determine por medio
de un esquema las etapas de un proceso fermentativo a nivel
industrial y explique cada uno de los pasos. (5 puntos)

PROCESO
FERMENTATIVO

FERMENTACION RECUPERACION
DE PRODUCTO

CATABÓLICO DE SEPARACION
PUEDE SER
OXIDACIÓN CRISTALIZACION DESECACION

ES NATURAL ARTIFICIAL
FLOCULACIÓN Y
FLOTACIÓN
SISTEMA DE
ANAEROBIO FILTRO
SE DA POR CENTRIFUGACION
MEDIO DE

QUE DA COMO
BIORREACTORES CLASES
PRODUCTO
FINAL
COMPUESTO
ORGANICO
TANQUE
QUE PROMUEVEN AGITADO Y AIR
UN MEDIO LIFT
CONTROLADO
PARA ALCANZAR
LA ETAPA OPTIMA

FACTORES QUE
AFECTAN EL
OXIGENO RENDIMIENTO
pH

TEMPERATURA

5. Estudie la ova sobre fermentación, que se encuentra en el


entorno de conocimiento de la unidad uno y describa los
problemas que se presentan en el escalado desde el punto de
vista de la aireación, la esterilización y el control del proceso de
fermentación. Por qué están importante la estabilidad en un
fermentador industrial? (5 puntos)

El mantenimiento de un ambiente aséptico y unas condiciones aeróbicas son,


probablemente, los dos puntos de mayor relevancia que hay que considerar. Los
fermentadores más ampliamente utilizados a nivel industrial están provistos de
mecanismos de agitación, dispersión y aireación así como de sistemas para el control de
la temperatura, pH y formación de espuma.
En los reactores de tipo "air lift“, el mismo aire inyectado promueve la agitación.
Básicamente consiste en dos cilindros concéntricos y por la base de uno de ellos, por
ejemplo el interior, se inyecta aire. De este modo se genera una circulación de líquido
ascendente en el compartimento interno y descendiente en el externo, lo que favorece el
mezclado.

Factores fisicoquímicos que afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales


1.- Oxígeno
2.-Temperatura
3.- pH

Una adecuada agitación de un cultivo microbiano es esencial para la fermentación ya


que produce los siguientes efectos en las tres fases

a. Incrementar la velocidad de transferencia de oxígeno desde las burbujas de aire al


medio líquido; los microorganismos no pueden utilizar oxígeno gaseoso, sino solamente
el que se encuentra en disolución.
b. Aumentar la velocidad de transferencia de oxígeno y nutrientes desde el medio a las
células. Debido al movimiento se evita que las células creen áreas estancadas con bajos
niveles de oxígeno y nutrientes.3 Impedir la formación de agregados celulares.
c. Aumentar la velocidad de transferencia de productos metabólicos de las células al
medio.
d. Aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las
superficies de refrigeración del fermentador

6. De acuerdo a la ova sobre fermentación Realice un cuadro


comparativo donde diferencie los tipos de fermentación
industrial y los mecanismos de obtención de productos
fermentativo. (5 puntos)

Los tipos de fermentación industrial se dan por la degradación de alguna especie de


microorganismo dando como resultado productos finales que son diversos como:
polisacáridos está el almidón, celulosa y quitina; disacáridos como la lactosa y maltosa
entre otros.

Existen varios tipos de fermentación como:


 Fermentación por excelencia (glucólisis)
 Fermentación a partir de piruvato
 Putrefacción
En función de los flujos de entrada y salida, la operación de un biorreactor puede ser de
tres modos distintos
BATCH O DISCOTINUA ALIMENTADO O FED- COTINUO O
BATCH QUIMIOSTATO
Sistema cerrado Una mejora del proceso cerrado sistema abierto
discontinuo es la fermentación
alimentada
A lo largo de toda la fermentación En los procesos alimentados, La solución nutritiva estéril se
no se añade nada, excepto los sustratos se añaden añade continuamente al
oxígeno (en forma de aire), una escalonadamente a medida que biorreactor y una cantidad
gente antiespumante y ácidos o progresa la fermentación equivalente de solución
bases para controlar el pH. utilizada de los nutrientes, con
los microorganismos
Cuando se ha alcanzado el nivel a formación de muchos Opera por periodos largos;
deseado de reacción, se vacía el metabolitos secundarios está tiempos muertos bajos.
reactor, se limpia y el proceso se sometida a represión catabólica
repite (efecto glucosa)
En los procesos comerciales la Los elementos críticos de la El medio nutriente es
fermentación frecuentemente se solución de nutrientes se inoculado con el cultivo
interrumpe al final de la fase añaden en pequeñas microbiano al entrar al reactor
logarítmica (metabolitos concentraciones al principio de y los organismos llevan a cabo
primarios) o antes de que la fermentación y continúan su actividad a medida que el
comience la fase de muerte añadiéndose a pequeñas dosis líquido fluye a través del
(metabolitos secundarios) durante la fase de producción. sistema y salen del sistema
junto con el medio.
Dificultad de controlar la útil en procesos en los que el Los organismos pueden
velocidad de crecimiento, excepto crecimiento celular y/o la separarse de la corriente que
variando la composición del formación de producto son lleva al producto y reciclarse
medio o las condiciones de sensibles a la concentración del para inocular el líquido de
proceso sustrato limitante alimentación
Alta demanda de oxígeno puede Se emplea cuando se quieren Alto costo por alta calidad de
generar una limitación debido a evitar fenómenos de inhibición equipos y accesorios.-Requiere
una insuficiente capacidad del por sustrato y se requiere gran reservorio para
reactor para transferir O2 al alcanzar una alta concentración almacenamiento de medio o
medio de biomasa. suministro continuado de
sustrato
Inconvenientes para remover Limitar la demanda de O2 del El cultivo se mantiene con
calor. cultivo coeficientes de crecimiento
constante, crecimiento
balanceado, composición
celular constante.
Tiempos muertos entre procesos Obtener altas concentraciones Generación de biomasa
disminuye la productividad de sustrato evitando el efecto constante como productividad y
osmótico y tóxico de nutrientes conversión.-
Maximizar el crecimiento Volumen de reactor reducido en
celular (efectoCrabtree en comparación a la productividad
levaduras) similar en proceso por lotes
Se incrementa el riesgo de
contaminación debido a la
amplia operación
Posibilidad de mutación,
incremento de fagos por los
cambios genéticos debido a la
presencia de plasmidios e
incremento de estos

7. En la ova sobre fermentación. Identifique los factores que


pueden alterar la producción de enzimas de interés económico
a partir de microorganismos en un proceso industrial, explique
a través de un ejemplo cada uno de ellos. (5puntos)

Existen varios problemas en el control de la temperatura, de la aireación y de la humedad,


por ello se prefieren los cultivos sumergidos a los cultivos en superficie. Los cultivos en
medio líquido, profundos, agitados, son mejor adaptados a los diferentes controles
mediante métodos modernos y reducen los riesgos de contaminación. Además se prestan
mejor a las operaciones de extrapolación y de optimización necesarias para el paso del
fermentador piloto de laboratorio al fermentador industrial.

Los factores que pueden afectar la producción de enzimas a partir de un proceso industrial
son:

- La baja especificidad: Aunque en la industria las enzimas sean utilizadas para la


hidrólisis de macromoléculas complejas en las cuales los sitios de acoplamiento con,
frecuencia se desconocen, el efecto global que se busca involucra, generalmente, la
utilización de un tipo preciso de enzima.

- El valor de pH: Este factor tiene una influencia variable según las enzimas; algunas de
ellas, como la proteasa alcalina aún son activas a pH = 10, en tanto que las enzimas
fúngicas funcionan aún a pH = 3.
- El valor de la temperatura: Generalmente, quienes utilizan enzimas se interesan en poder
disponer de enzimas que soporten temperaturas elevadas, ya que estas temperaturas
conservan en parte la esterilidad del medio de fermentación.

 pH
 Temperatura
 Transporte de oxigeno
 Interacciones alostéricas
 Inhibición competitiva
 Inhibición no competitiva
 Inhibición irreversible

BIBLIOGRAFIA

BUITRAGO, JOHANA CAROLINA; TENJO, DOLLY


GISSELLE.(2007).OBTENCION DE UN SUSTRATO FERMENTABLE DE ORIGEN
VEGETAL Y SU EVALUACION CON CELULAS LIBRES DE saccharomyces
cerevisiae. En: http://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis285.pdf

PARCKER, JACK. (EDICION 10). BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS.


CAPITULO 2 Y 5.

GARCIA, CALUDIA. INGENIERIA DE FERMENTACIONES. PROCESOS DE


RECUPERACION DE PRODUCTOS EN LA FERMENTACION. EN:
https://prezi.com/lg9hehisgn1b/procesos-de-recuperacion-de-productos-en-la-
fermentacion/

MATEO,F, PEDRO. DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA Y GENETICA.


CRECIMIENTO MICROBIANO EN:
http://webcd.usal.es/Web/educativo/micro2/tema07.html

PRINCIPIOS DEL METABOLISMO MICROBIANO EN:


http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Finales_Investig
acion/Febrero
29/IF_DECHECO%20EGUSQUIZA_FIPA/CAPITULO%20N%BA%201.pdf
https://www.academia.edu/2766150/Introducci%C3%B3n_a_la_Microbiolog%C3%AD
a_Predictiva_-_Manual_de_pr%C3%A1cticas_de_laboratorio

PONENCIA CIENTÍFICA. Valor. 35 puntos.

I. Realice una ponencia científica: Estudie el tutorial unidad


I – biotecnología de las enzimas, cuyo link se encuentra en el
entorno de conocimiento: Unidad 1. en dónde además de una breve
contextualización del tema encontrará un problema, en el que se
han planteado tres hipótesis que podrían explicar el fenómeno. A
partir de la hipótesis escogida construya un texto científico, de
acuerdo al Modelo de Toulmin.
A. Plantee la Hipótesis. De acuerdo a lo leído escoja una de las tres
hipótesis que se plantean para explicar el fenómeno. (Recuerde que
debe tener en cuenta los datos que se le dan en el problema)
B. Analice la evidencia. Para ello, realice el laboratorio virtual 2, tome
los resultados obtenidos, para responder la pregunta uno que se
plantea en el tutorial. A continuación lea detenidamente los
documentos, los artículos científicos relacionados sobre el tema, en
especial “Inhibidores de la alfa amilasa en diferentes especies
vegetales” cuyo link se encuentra en las referencias
complementarias del contenido de la unidad uno para escoger su
hipótesis.
C. Establezca la garantía: Respalde su hipótesis con la teoría
científica que corresponda y explique la hipótesis planteada. En
este caso debes hablar sobre inhibición enzimática.
D. Respalde la Garantía. Una vez analizados los datos de los
laboratorios y los artículos científicos, relaciónelos con la garantía,
busca artículos científicos sobre inhibición enzimática en procesos
fermentativos que te ayuden a soportar tu hipótesis.
E. Encuentre las posibles excepciones, que se puedan presentar
sobre la hipótesis escogida, adelántese a las posibles refutaciones
que pueda recibir sus argumentos.
F. Concluya. Ratifique la Hipótesis escogida utilizando un calificador
modal.

Entorno de contenidos: Unidad uno: Se debe estudiar las


temáticas que se relacionan en éste espacio para desarrollar
las preguntas y la ponencia individual.

Entorno de Evaluación y seguimiento. Espacio dónde debe


entregar la actividad de forma individual.
Individuales:

Productos a Documento donde desarrolle la guía.


entregar
por el Colaborativos:
estudiante
NO APLICA

BIOTECNOLOGIA LABORATORIO VIRTUAL N. 1 CRECIMIENTO MICROBIANO 1.


Crecimiento microbiano, curva de crecimiento, modelos matemáticos y
ejemplo

¿Qué fases de crecimiento puede diferenciar en la gráfica?

Fase de Latencia: Corresponde a un período de transición para los microorganismos


cuando son transferidos a una nueva condición. En esta fase no hay incremento en el
número de células, aunque sí una gran actividad en el metabolismo.

Fase de Aceleración positiva: En esta fase se denota una transición entre la latencia y la
multiplicación de los microorganismos.

Fase de Crecimiento Exponencial:

Período en que el crecimiento del microorganismo ocurre de forma exponencial, es decir,


cada vez que pasa un determinado tiempo la población se duplica.

Fase de Aceleración negativa: Aquí el crecimiento de los microorganismos es irregular,


siendo la transición a la fase estacionaria.

Fase Estacionaria: Período en que ocurren las limitaciones del crecimiento, ya sea por
agotamiento de algún nutriente esencial, por acumulación de productos tóxicos o por una
combinación de las causas anteriores.

curva de crecimiento
Desde el punto de vista metabólico. La grafica indica que a medida que pasa el tiempo el
metabolismo celular aumenta, esto es que el número de bacterias multiplicadas en el
medio de cultivo indican que en su fase inicial o de inoculación el metabolismo podríamos
considerarlo como de adaptación al medio, en tanto que pasa el tiempo la replicación
bacteriana se origina por la obtención de macro y micronutrientes del medio de cultivo
 el grafico no evidencia la fase de muerte bacteriana solo se observa hasta la fase
estacionaria donde la replicación bacteriana se estabiliza determinada por la
absorbancia contra el tiempo.
 4. Investigue otros métodos con los cuales se pueda determinar la curva de
crecimiento? MEDIDA DE MASA BACTERIANA MÉTODOS DIRECTOS: En estos
métodos se requieren preparaciones limpias, sin partículas extrañas.
Determinación del peso húmedo: 1. se tara un tubo de centrífuga; 2. se centrifuga
el cultivo y se elimina el sobrenadante; 3. se determina el peso del sedimento.
Inconvenientes: grandes errores, debido al líquido intercelular retenido, cuya
cuantía depende a su vez de la forma y tipo de agrupaciones de la cepa,
intensidad del empaquetamiento, etc. Determinación del peso seco: Como el
anterior, pero el sedimento se seca antes de ser pesado (105oC, toda la noche),
hasta peso constante. Las medidas de peso seco suelen representar el 10-15%
de los valores de peso húmedo. Inconvenientes: método tedioso (requiere mucho
tiempo) y con bastantes errores: es difícil pesar menos de 1 mg con exactitud en
las balanzas habituales de laboratorio. 1 mg de peso seco equivale a unas
5x109bacterias. Determinación de un componente característico: peptidoglucano,
ADN, ARN, proteínas, etc. Comentarios: se suele usar en bacterias para las que
otros métodos más fáciles dan errores debido a que forman grumos no
dispersables, crecen en filamentos, etc. Se emplean en determinaciones de
crecimientos en ambientes naturales.
 MÉTODOS INDIRECTOS Medida de consumo de nutrientes o de producción de
algún metabolito por unidad de tiempo. Métodos turbidimétricos (ópticos). La
base común de estos métodos consiste en la medición de la cantidad de luz
dispersada o transmitida a través de un cultivo bacteriano. Recordemos aquí que
las suspensiones bacterianas dispersan la luz, al igual que cualquier partícula
pequeña suspendida en agua. La dispersión de la luz es, dentro de ciertos límites,
proporcional a la masa del cultivo.
 MEDIDA DEL NÚMERO DE INDIVIDUOS MÉTODOS DIRECTOS Cámara de
recuento de Petroff-Hauser: Consiste en un portaobjetos especial con una
graduación en superficie y unas medidas muy concretas: · excavación con 0.02
mm de profundidad; · área de 1 mm2, dividida en un retículo de 25 cuadrados
grandes; · cada cuadrado grande está subdividido a su vez en 4x4 = 16
cuadrados pequeños. O sea, la muestra se distribuye en 16X25 = 400 celdillas
(cuadros pequeños). La muestra, una vez dispensada entre el porta y el cubre, se
deja reposar sobre la plataforma del microscopio durante unos minutos, y se
cuenta el número de células en varias celdillas (normalmente en 16, equivalentes
a uno de los cuadros grandes). Se anota el número n de células observadas en
esas 16 celdillas. Entonces, la concentración celular es fácil de establecer: n x 25
x 50 x 1000 = concentración en células/ml. Ventajas: es un método muy rápido
Inconvenientes: sólo sirve para suspensiones relativamente concentradas
(>10x106 céls./ml). Por debajo de este valor el número de células vistas en el
campo del microscopio es muy pequeño y poco significativo estadísticamente. En
bacterias móviles, hay que inmovilizarlas previamente, con una mezcla de alcohol
y agua. Recuento en preparaciones teñidas: Se dispone de un porta con una
excavación circular (de área At) con un volumen conocido (v). Sobre esta
excavación se extiende la muestra con asa de siembra o con micropipeta, y se fija
y tiñe por algún colorante. Se observa con un microscopio dotado de un juego de
ocular y objetivo que delimitan un área de campo (Ac). Si en dicho campo se
cuentan n bacterias, la concentración de bacterias por mililitro será: n·At/Ac· 1/v
Recuento proporcional de Wright: Se mezcla la suspensión bacteriana problema
con una cantidad conocida de bolitas de látex o de hematíes. La concentración
bacteriana se deduce de la proporción de bacterias y partículas observadas en el
mismo campo microscópico. Este método se emplea más frecuentemente en
Virología. Contadores electrónicos de partículas (tipo Coulter): Se hace pasar una
suspensión bacteriana por un tubo capilar, entre los dos polos de una corriente
eléctrica. Cada vez que por un orificio (30 m m diámetro) pasa una partícula (p.
ej., bacteria) se interrumpe la corriente, lo cual es recogido por un dispositivo de
registro electrónico, que detecta el número y el tamaño de las partículas que van
pasando. (El tamaño detectado es función de la intensidad del pulso de voltaje al
paso de la partícula). Recientemente se ha introducido la citometría de flujo
activada por fluorescencia (FACS). Es una sofisticada modificación en la que las
partículas a contar se marcan previamente con un anticuerpo monoclonal u otro
ligando específico hacia alguna molécula de superficie, unidos a su vez a un
fluorocromo, una molécula que emite fluorescencia al incidir sobre ella un haz de
luz láser. MÉTODOS INDIRECTOS: Son métodos que miden el número de
bacterias viables (que no equivale al de totales). Método del número más
probable: Su fundamento estriba en la distribución de Poisson: una distribución
aleatoria de partículas en una serie de muestras iguales, en función del número
medio de partículas presentes en una suspensión. PX = mX · e-m/x! Donde x =
número real de partículas en cada muestra y m = concentración
(nopartículas/volumen) La técnica consiste en sembrar alícuotas de la suspensión
original problema sobre un medio líquido o sólido adecuado; tras el tiempo de
incubación adecuado se anota la proporción obtenida de muestras donde no se
haya dado crecimiento, P0 (x = 0). Entonces, según la distribución de Poisson:
P0= e--m Y por lo tanto es fácil calcular el valor de m: m = -lnP0 Precauciones: ·
para minimizar los errores estadísticos de muestreo, se recomienda sembrar 5
placas de cada dilución; · hay que usar pipetas nuevas en cada dilución; · contar
las placas donde existan entre 50 y 300 colonias. Determinación de la proporción
células viables/células totales: Si se está interesado en conocer esa proporción se
recurre a una técnica de microcultivos en cubreobjetos: hay que seguir
periódicamente la evolución del crecimiento de células individuales y determinar la
proporción de aquellas células no viables (visibles al microscopio, pero incapaces
de crecer). Recuento sobre filtros de nitrocelulosa: Se usa para suspensiones
diluidas de bacterias. Se hace pasar un gran volumen de suspensión a través de
una membrana de nitrocelulosa estéril, que retiene las bacterias. Posteriormente,
el filtro se deposita sobre la superficie de un medio de cultivo sólido. Las colonias
se forman sobre el filtro y se cuentan, deduciéndose la concentración original en
función del volumen de suspensión que se hizo pasar por el filtro. CRECIMIENTO
BALANCEADO (= EQUILIBRADO) Una población de bacterias que se encuentre
en un medio adecuado en el que se mantienen constantes todos sus parámetros
nutricionales y ambientales, crece de forma tal que el incremento por unidad de
tiempo de masa celular, no de células, ADN, ARN, proteínas, etc., es un valor
constante y similar en cada caso: D M/M = D N/N = D [ADN]/[ADN]
= D [proteínas]/[proteínas] = ... = K Así pues, durante este crecimiento, de tipo
exponencial o logarítmico, el cultivo se comporta como una reacción autocatalítica
de primer orden: Velocidad de aumento del componente = K· {cantidad del
componente} También se puede decir que el no de células, la masa celular u otros
componentes se duplican en un mismo lapso de tiempo determinado. Este tipo de
crecimiento se denomina balanceado o equilibrado. Se caracteriza, pues, por ser
el crecimiento en el que · todos los constituyentes celulares se duplican en un
mismo tiempo, o dicho de otra manera: · aquel en el que estos constituyentes
aumentan proporcionalmente por un mismo factor en la unidad de tiempo. Este
factor es el coeficiente exponencial de crecimiento (m ), que es característico para
cada cepa bacteriana en cada medio determinado. Expresión matemática del
crecimiento balanceado: Para deducirla vamos a aprovechar la definición empírica
anterior, atendiendo por un lado al aumento de la masa celular, y por otro al
incremento del número de individuos. EN FUNCIÓN DEL AUMENTO DE MASA
CELULAR: Podemos decir que [(dM/M)/dt] = m Por lo tanto dM = M·m·dt Si
integramos, resulta: M/M0 = em (t-t0) Aplicando logaritmos neperianos: Tenemos
que ln[M/M0] = m (t-t0) fórmula{14.1} De aquí se puede deducir que el
coeficiente m es m = lnM/M0 /(t-t0) fórmula{14.2} En función del aumento del
número de células. Supongamos que partimos de una célula. Tras una división
(generación celular), tendremos 2, tras dos divisiones tendremos 4, luego 8, etc.:
Serie geométrica. 1, 2, 22, 23, 24, ... 2n (donde n es es número de generaciones
transcurridas). Si en vez de partir de una célula partimos de N0 células iniciales, la
expresión se convierte en: N = N0·2n ; por lo tanto: N/N0 = 2n; . Fórmula {14.3}
Por otro lado, el número de generaciones se puede calcular fácilmente teniendo
en cuenta el tiempo transcurrido y conociendo el tiempo medio de generación (g):
Es n = (t-t0)/g Sustituyendo esta expresión en la fórmula {14.3} tenemos: N/N0 =
2(t-t0)/g Apliquemos logaritmos neperianos: Obtenemos que lnN/N0 = [(t-t0)/g ]·
ln2 (fórmula 14.4) Ahora bien, como estamos ante un crecimiento balanceado, las
dos expresiones matemáticas {14.1} y {14.4} que hemos deducido (la de la
sección A, basada en masa, y la de la sección B, basada en número de
individuos) son equivalentes: Por lo tanto, lnM/M0 = lnN/lnN0 m = lnM/M0 /(t-t0) =
[(t-t0)/g ]· ln2 m = ln2/g = 0.693/g (expresado en h--1) Esta es la expresión
matemática del coeficiente del crecimiento balanceado, en función del tiempo
medio de generación (g). En un medio ideal, sin limitación de nutrientes, este
coeficiente es m = m máx, o sea, el máximo valor posible del coeficiente para esa
cepa en ese medio. Es decir, es un crecimiento balanceado no restringido. En un
medio donde exista algún nutriente limitante (o sea, cuya concentración está por
debajo del límite de eficiencia de las permeasas), el crecimiento balanceado es de
tiporestringido, de modo que el coeficiente real de crecimiento es inferior al
máximo, según la fórmula empírica siguiente: m =m máx. [S]/(KS + [S]) Donde [S]
es la concentración del nutriente limitante; KS es la constante de saturación,
equivalente a la concentración de nutriente para la que el coeficiente es
semimáximo. 5. ¿Cuál es la aplicación industrial de conocer la curva de
crecimiento de un microorganismo? El análisis del crecimiento de los
microorganismos cumple un papel determinante a nivel industrial de en la
producción biotecnológica, en este sentido hay una incidencia directa en las
metodologías a implementar en la producción o en los procesos que impliquen la
utilización de sistemas biológicos en diferentes procesos industriales. En general
puede abarcar diferentes ámbitos: Fabricación de diferentes compuestos
orgánicos. Transformación de productos, hecho que cada día tiene más
importancia, puesto que las reacciones mediadas por los seres vivos ocurren en
condiciones de presión, temperatura,... normales. Por lo tanto puede ser más
barato el uso de seres vivos, ya que no se requieren condiciones especiales.
Además, en muchos casos serán reacciones más eficaces que las químicas. Se
ha de tener en cuenta siempre que la industria buscará la mayor eficiencia posible
y la reducción de costes, ya que lo que interesa es tener beneficios. Reacciones
con compuestos inorgánicos, como puede ser el caso de la lixiviación de metales.
Producción de biomasa, con diferentes finalidades. A menudo el producto final de
las reacciones son los propios microorganismos, por su valor en alimentación
humana, como Saccharomyces,... o animal, como las SCP. Degradación de
sustancias, como puede ser la depuración de aguas, el tratamiento de residuos,...
- Biosensores, determinación de la presencia de sustancias, mediante sistemas
biológicos. También puede servir en los controles de calidad. Está adquiriendo
una gran importancia en los últimos años, ya que es una muy importante
herramienta de análisis. PARTE II 1. Cuál es la diferencia entre la constante de la
velocidad de crecimiento (k) de un organismo y su tiempo de generación (g). La
constante de velocidad de crecimiento k indica el cambio en el número de células
por unidad de tiempo. Mientras que el tiempo de generación es el tiempo
requerido para que a partir de una célula se formen dos o el tiempo requerido para
duplicar una población de células. 2. Calcule el valor de g y de k en un
experimento de crecimiento en el que se inoculó un medio con 5 x 106 células/ml
de Escherichiacolliy que después de un período de latencia de 1 hora, creció
exponencialmente durante 5 horas alcanzando una población de 5,4 x 109
células/ml. Para calcular el tiempo de generacion se debe hallar primero el
numero de generaciones asi: N= numero final de células, No = número inicial de
células Entonces; Luego se halla el tiempo de generación G Así se tenemos que
el tiempo de crecimiento es: Horas Que se obtiene de: Horas Luego la velocidad
de crecimiento seria: Donde td=G 3. Compare las rutas metabólicas utilizadas por
los microorganismos, diferencie de acuerdo al sustrato utilizado, mecanismo de
obtención de energía y productos obtenidos. Las fuentes de elementos químicos y
energía necesarias por los microorganismos para sintetizar sus compuestos
bioquímicos deben estar disponibles en su ambiente y listos para ser usados. Las
fuentes orgánicas incluyen un gran número de compuestos que van desde
moléculas de 2 átomos de carbono hasta moléculas más complejas tales como el
almidón, el cual contiene miles de átomos de carbono. Las fuentes inorgánicas
incluyen el dióxido de carbono, sulfuro de hidrógeno y otras moléculas. El tipo más
frecuente de glucólisis es conocido como vía de Embden-Meyerhof, quienes
fueron los primeros en describirla. La Glucólisis es una secuencia bien definida de
10 reacciones enzimáticas en las cuales la glucosa es convertida en ácido pirúvico
con la generación de energía, dos moléculas de ATP. Muchas bacterias tienen
vías adicionales a la glicólisis para la oxidación de la glucosa. La vía alterna más
común es la vía de las pentosas fosfato o vía fosfoglucónica, la cual opera
simultáneamente con la glicólisis. Esta es una vía cíclica que proporciona una
forma de degradar a los azúcares de 5 carbonos (pentosas) y también a la
glucosa. Una característica importante de esta vía es que produce pentosas
intermediarias importantes que actúan como precursores de los ácidos nucleicos y
de ciertos aminoácidos. También es una fuente importante de la coenzima
reducida NADPH a partir del NADP. Produce una ganancia neta de 1 molécula de
ATP por cada molécula de glucosa. Como ejemplos de bacterias que utilizan esta
vía tenemos: Bacillus subtilis, Escherichia coli y Streptococcus faecalis La Vía
Entner Doudoroff es otra vía para la oxidación de la glucosa a pirúvico. De cada
molécula de glucosa se producen 2 moléculas de NADPH y 1 molécula de ATP.
Las bacterias que tienen las enzimas de esta vía pueden metabolizar la glucosa
sin la glicólisis o la vía Entner-Doudoroff. Esta vía generalmente no se encuentra
en las bacterias gram positivas, se encuentra en algunas bacterias gram
negativas, es típica de las bacterias del género Pseudomonas. 4. Compare y
señale las diferencias entre metabolitos secundarios y primarios, y dé un ejemplo
de cada uno de ellos. Incluya al menos dos explicaciones de las bases
moleculares por las que algunos metabolitos son secundarios, envés de primarios.
Metabolitos primarios Se producen en el curso de las reacciones metabólicas
anabólicas o catabólicas que tiene lugar durante las fases decrecimiento y que
contribuyen a la producción de biomasa o energía por las células. Se producen
principalmente en la trofofase o fase de crecimiento. Un ejemplo es la glucosa.
También lo son los ácidos grasos, el etanol, la fructosa, el colesterol. Metabolitos
secundarios Se producen por rutas anabólicas especializadas cuando no hay
crecimiento. Significado evolutivo controvertido por ser imprescindibles. Pueden
ser una estrategia para mantener en funcionamiento los sistemas metabólisis
cuando no hay crecimiento; también sirven como indicativos de diferenciación y se
producen durante la idiofase de los cultivos. Ejemplo son los alcaloides (cafeína,
teobromina, cocaína, etc), las esencias y otros terpenos y terpenoides (geraniol,
mentol, limoneno, etc.), las antraquinonas y los heterósidos. Características
comunes: tienden a producirse cuando el crecimiento está limitado (cultivo
contínuo); se forman por enzimas específicos a partir del metabolismo central; no
son esenciales para el crecimiento o para el metabolismo central y son específicos
para cada especie, y a veces, de cada cepa. 5. Estudie la ova sobre fermentación
y describa los problemas que se presentan en el escalado desde el punto de vista
de la aireación, la esterilización y el control del proceso. Por qué están importante
la estabilidad en un fermentador industrial? Aireación: El aire es un factor decisivo
en toda fermentación, ya que su presencia hace más vigoroso el crecimiento de
los microorganismos. Hay tres puntos de vista de gran importancia que favorecen
el rendimiento debido a una buena aireación: El libre y constante abastecimiento
de oxígeno de cada célula en el sustrato. La eliminación rápida del CO2, porque
en concentraciones relativamente pequeñas inhibe el crecimiento. El mantener en
suspensión las células de levadura, a fin de que en la tumultosidad de la mezcla
se renueve constantemente el contacto entre la membrana celular y el sustrato
nutritivo. Esterilización: Para poder llevar a cabo una fermentación con éxito es
imprescindible y obligatorio tener en todas las etapas cultivos libres de
contaminantes, desde el cultivo preliminar hasta el fermentador de producción.
Por lo tanto, el fermentador y su equipamiento, así como el medio de cultivo
deben estar estériles antes de la inoculación. Además, el aire que se suministra
durante la fermentación debe ser estéril y no deben existir roturas mecánicas en el
fermentador que podrían permitir la entrada de microorganismos. También se
deben esterilizar los aditivos (antiespumantes), sin embargo los ácidos y bases
concentrados no es necesario esterilizarlos. Un biorreactor puede ser esterilizado,
destruyendo los microorganismos, con algún agente letal como calor, radiación o
un producto químico o bien separando los organismos viables mediante un
procedimiento físico como la filtración. Control de proceso y biorreactor: Es
necesario una construcción apropiada del biorreactor que facilite la esterilización
así como la prevención de la contaminación durante la fermentación. Del mismo
modo su construcción debe permitir un control adecuado de los procesos asi
como su estabilidad al fin de evitar inconvenientes durante el proceso fermentativo
que redunden en pérdidas económicas a la empresa. 6. Determine por medio de
un esquema las etapas de un proceso fermentativo a nivel industrial y explique
cada uno de los pasos. Para este caso tomaremos el proceso de obtención de
Etanol. El pretratamiento, que facilita la accesibilidad de las enzimas La hidrólisis
enzimática, donde los azúcares complejos contenidos en la biomasa serán
liberados en forma de azúcares simples. Etapa de fermentación, en la cual los
azúcares liberados durante la hidrólisis enzimática son transformados a etanol por
un microorganismo fermentativo (bacterias o levaduras). 7. Diferencie los tipos de
fermentación industrial y los mecanismos de obtención de productos. La
Fermentación LÁCTICA es un proceso celular anaeróbico donde se utiliza
GLUCOSA para obtener energía y donde el producto de desecho es el ÁCIDO
LÁCTICO. Este proceso lo realizan muchas bacterias (llamadas bacterias
lácticas), hongos, algunos protozoos y en los tejidos animales (Muscular). La
Fermentación ALCOHÓLICA es un proceso biológico de fermentación en
ausencia de O2, originado por la actividad de algunos microorganismos que
procesan los hidratos de carbono (Glucosa, Fructosa, Sacarosa, Almidón, etc.)
para obtener como productos finales un alcohol en forma de ETANOL, CO2 y ATP
que consumen los propios microorganismos en su metabolismo celular energético
anaeróbico. La Fermentación ACÉTICA es la fermentación bacteriana por
Acetobacter, un género de bacterias aeróbicas, que transforma el alcohol en ácido
acético. La fermentación acética del vino proporciona el vinagre debido a un
exceso de O2. La formación de ÁCIDO ACÉTICO resulta de la oxidación de un
alcohol por la bacteria del vinagre en presencia del O2 del aire. Estas bacterias, a
diferencia de las levaduras productoras de alcohol, requieren un suministro de O2
para su crecimiento y actividad. La Fermentación BUTÍRICA es la conversión de
los Glúcidos en ÁCIDO BUTÍRICO por acción de bacterias Clostridium butyricum
en ausencia de O2. Se produce a partir de la lactosa con formación de Ácido
Butírico y CO2. Es característica de las bacterias del género Clostridium y se
caracteriza por tener olores pútridos y desagradables.

8. Identifique los factores que pueden alterar la producción de enzimas a partir
de microorganismos en un proceso industrial. Podemos definir que existen
factores determinantes dentro del proceso de obtención de enzimas a partir de
microorganismos los cuales pueden estar relacionados de forma directa o
indirecta a la producción. Factores como son la estabilidad, especificidad de
sustrato, temperatura y pH óptimo, coste, inocuidad, abundancias son
determinantes dentro del proceso.
9. PROBLEMA A RESOLVER (Ova de enzimas y laboratorio 2) ¿Cuál de los
microorganismos es más efectivo? La cepa c fue la más efectiva en la
degradación de la amilasa, pues aquí se obtuvo una biomasa superior a las
demás cepas, es decir existe mayor numero de bacterias que crecieron en el
medio y se desarrollaron bajo las condiciones de los medios de cultivo
preparados, sobre todo para el caldo de cultivo
10. 2. En este sentido tendría mayor importancia y seria óptimo trabajar en
la industria con la cepa N. 3 debido pues a que es esta la que podría generar
mayor producción de enzimas amilolíticas. Bajo las mismas condiciones de
tiempo y temperatura los cultivos se desarrollaron en los tres caldos de forma
distinta, por lo cual se pudo establecer de acuerdo a la biomasa determinada
al final del experimento que la cepa C genero 31.50 de biomasa para el caldo
de cultivo N. 2. PONENCIA CIENTIFICA Los inhibidores de α-amilasas se
encuentran en semillas de leguminosas y gramíneas y se han purificado de
semillas de trigo, frijol, maíz, entre otras (H., Z., Velasquez., & G., 2006). En el
frijol, Phaseolus vulgaris, se ha registrado un inhibidor de α-amilasa de la
broca del café Hypothenemus hampei, con más de 80% de inhibición, el cual
también inhibe las α-amilasas de mamíferos; en el caso del inhibidor comercial
de trigo, presento una inhibición mayor a la del maíz en un 50%. La formación
del complejo inhibidor más amilasa, tiene un pH óptimo de 5,5 (H., Z.,
Velasquez., & G., 2006), observando que el pH final de la muestra numero 1 a
35°C es de 5,4; muy cercano este al óptimo de inhibición, nos puede indicar
que puede ser esta una de las causales de la poca actividad enzimática en
dicha muestra, y que además esta está sembrada en un medio con harina de
frijol, que si vamos a los estudios realizados, puede incluso llevar a tener un
porcentaje de inhibición del 80%. Finalizando el desarrollo del Laboratorio
Virtual N°2 de Biotecnología (Benavides, 2012), se pudo observar que
posterior a procesos de incubación, que involucraron una inicial de 24 donde
se hizo preparación de cultivo y una posterior de 24 horas, en la cual se
secaron las muestras a 90°C, el microorganismo con mayor producción de
biomasa fue el identificado como cepa N°3, este casi duplicó la producción de
la cepa N°1, obteniendo un resultado importante que puede generar interés en
el mercado de la industria de alimentos. Se puede entonces observar, que el
microorganismo número 3, aprovecho de mayor manera los nutrientes y
condiciones del caldo de cultivo, los períodos de incubación y las
temperaturas en que estos fueron ejecutados, logrando un crecimiento y
generación de biomasa mucho mayor comparado con las otras dos cepas
analizadas, es allí donde se puede observar que la degradación del almidón
es óptima con este microorganismo. Posteriormente cuando se pretendió
optimizar las condiciones de producción (B.), ya identificada que la Cepa 3 era
la más eficiente, se evaluó en dos medios de cultivo diferentes, evidenciando
que el que contenía Harina de trigo y Harina de sangre como fuentes de
carbono y nitrógeno respectivamente, fue el medio en el que tuvo mejor
productividad enzimática en dos temperaturas diferentes, producción que
supero a la del otro medio indistintamente de la temperatura de incubación, ya
que esta se realizó a 30 y 35°C sin tener una variación considerable ni
significativa del pH final del medio de cultivo, que en ambos medios fue muy
homogénea y teniendo en cuenta que este aspecto (pH) no fue controlado
durante la prueba. CONCLUSIÓN Tomando como punto de partida el análisis
de las experiencias de laboratorios y de las diferentes pruebas realizadas,
además de la información encontrada en los diferentes artículos relacionados,
me inclino por determinar que la Hipótesis 2, es la más acertada, dicha
Hipótesis dice: “Las diferencias en la actividad enzimática, se debe a la
presencia de inhibidores en el medio de cultivo 1”. REFERENCIAS
BIBLIOGRÁFICAS B., F. L. (s.f.). Producción de enzimas de interés industrial.
Recuperado el 23 de Septiembre de 2013, de UNAD:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/305689/Enzimas_Ova.pdf Benavides,
F. L. (2012). Laboratorio virtual de Biotecnología. Recuperado el 23 de
Septiembre de 2013, de UNAD:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/305689/LabVirtual/ H., B. E., Z., J. R.,
Velasquez., C. S., & G., J. D. (2006). Inhibidores de alfa amilasas de la broca
del café Hypothenemus hampei en diferentes especies vegetales. Revista
Colombiana de Entomología, 125-130. I. Realice una ponencia científica:
Estudie la Ova sobre enzimas, en dónde además de una breve
contextualización del tema encontrará un problema, en el que se han
planteado tres hipótesis que podrían explicar el fenómeno. A partir de esto
construya un texto científico. Para ello. A. Plantee la Hipótesis. De acuerdo a
lo leído escoja una de las tres hipótesis que se plantean para explicar el
fenómeno. B. Establezca la garantía: Respalde su hipótesis con la ley o teoría
científica que corresponda y explique la hipótesis planteada. C. Analice la
evidencia. Para ello, realice los laboratorios virtuales 2 y 3, en ese orden y
tome los resultados obtenidos, lea detenidamente los documentos, los
artículos científicos relacionados y escoja de ellos los datos empíricos
(experimentales) y teóricos que le puedan servir como evidencia. D. Respalde
la Garantía. Una vez analizados los datos de los laboratorios y los artículos
científicos, relaciónelos con la garantía(teoría científica) y construya la
evidencia científica. E. Encuentre las posibles excepciones, que se puedan
presentar sobre la hipótesis escogida, adelántese a las posibles refutaciones
que pueda recibir sus argumentos. F. Concluya. Ratifique la Hipótesis
escogida utilizando un cualificador modal. G. Envíe el documento al foro de
trabajo colaborativo 1, con la etiqueta: Solución individual_Nombre del
estudiante.

DESARROLLO SEGUNDA PARTE 1. De acuerdo al capÃtulo de crecimiento microbiano,


del módulo. Cuál es la diferencia entre la constante de la velocidad de crecimiento (k)
de un organismo y su tiempo de generación (g) Entendemos por crecimiento microbiano
el aumento del número de microorganismos a lo largo del tiempo. Por tanto, no nos
referimos al crecimiento de un único microorganismo (ciclo celular) sino al demográfico
de una población. Se denomina crecimiento equilibrado a aquél en el que toda la
biomasa, número de células, cantidad de proteÃnas, de ADN, etc., evolucionan en
paralelo. El crecimiento equilibrado probablemente ocurra en muy contadas ocasiones en
condiciones naturales. Por tanto, es principalmente un concepto de aplicación en el
laboratorio. Sin embargo, es útil porque permite estudiar el crecimiento microorganismos.
Las bacterias crecen siguiendo una progresión geométrica en la que el número de
individuos se duplica al cabo de un tiempo determinado denominado tiempo de
generación (g). De esta forma, podemos calcular el número de bacterias (N) al cabo de
un número de generaciones (n) usando la ecuación siguiente: N = N0 2n Siendo N0 el
número de células en el momento actual. El número de generaciones se puede
calcular de la siguiente forma: n = t / g Donde t es el tiempo transcurrido. Concluyendo y
dado dos significados más precisos y cortos para entender el tema podemos decir que la
velocidad de crecimiento es el cambio en el número de células por unidad de tiempo y
el tiempo requerido para que a partir de una célula se forme dos células o el tiempo
requerido para duplicar una población de células se llama tiempo de generación o
tiempo de duplicación. En una sola generación se duplica el número de células o
masa celular, en minutos en ocasiones en horas o dÃas. 2. De acuerdo al modelo
matemático de crecimiento microbiano. Calcule el valor de g y de k en un experimento de
crecimiento en el que se inoculó un medio con 5 x 106 células/ml de Escherichia colli y
que después de un perÃodo de latencia de 1 hora, creció exponencialmente durante 5
horas alcanzando una población de 5,4 x 109 células/ml. Debido a que el crecimiento
bacteriano es una progresión geométrica, existe una relación directa entre el número
de células presente en el momento inicial y el habido en un momento determinado del
crecimiento especial, de modo que: N = N0 2n n= (Log N- Log N0)/ Log 2 n= Log (5,4 x
109)- Log (5 x 106) / Log 2 n= (9,732) - (6,698) / 0,301 n=10,07 generaciones g= t / n g= 5
/ 10,07 g= 0,49 horas k= In 2 / g k= 0,6931 / 0,49 k= 1,414 3. De acuerdo al capÃtulo
sobre metabolismo microbiano. Compare las rutas metabólicas utilizadas por los
microorganismos, diferencie de acuerdo al sustrato utilizado, mecanismo de obtención de
energÃa y productos obtenidos. El metabolismo es la suma de transformaciones de la
materia que ocurre en el interior de la célula y que da lugar a la sÃntesis de material
celular a partir desustancias nutritivas. Los dos procesos de producción de energÃa son
la fermentación y la respiración. FERMENTACIÓ N RESPIRACIÓ N Sustrato utilizado
Moléculas orgánicas. sustratos fermentables simple (como azúcar, por ejemplo)
Electrones tanto de compuestos orgánicos como inorgánicos (oxidándose). oxigeno
molecular Mecanismo de obtención de energÃa El sustrato da lugar a una serie de
compuestos, unos más oxidados y otros más reducidos; en el proceso fermentativo
mantiene un estricto balance O-R. El nivel de oxidación promedio de los productos
finales es muy cercano al del sustrato. De ahà que la generación de ATP asociada a la
fermentación se denomina fosforilación a nivel de sustrato El proceso ocurre en
ausencia de oxigeno Los electrones son transferidos a través de una cadena
transportadora de electrones al final de la cual existe un aceptor exógeno oxidado (A),
que se reduce. Si el aceptor final es el O2, hablamos de respiración aerobia; Si el
aceptor final es distinto del O2 (nitrato, sulfato, etc.), respiración anaerobia. la
transferencia se da ordenadamente, en la dirección de mayor potencial redox positivo,
Productos obtenidos Lactato Etanol, CO2 Succinato, acetato, formiato, H2 Butilenglicol
Acetona Butirato Butanol energÃa libre que se va a traducir en un potencial electroquÃ-
mico de protones, cuya disipación a través de ATP-asas de membrana origina ATP,
conociéndose este proceso como fosforilación oxidativa 4. Compare y señale las
diferencias entre metabolitos secundarios y primarios, y dé un ejemplo de cada uno de
ellos. Incluya al menos dos explicaciones de las bases moleculares por las que algunos
metabolitos son secundarios, envés de primarios. Los vegetales, igual que otros
organismos mediante sus procesos metabólicos sintetizan dos categorÃas de
metabolitos: primarios y secundarios, aunque esta distinción resulta totalmente arbitraria
pues no hay una división precisa entre metabolismo primario y secundario. Los
metabolitos primarios, muy abundantes en la naturaleza, son indispensables para el
desarrollo fisiológico de la planta; se encuentran presentes en grandes cantidades, son
de fácil extracción y su explotación es relativamente barata y conducen a la sÃntesis
de los metabolitos secundarios. Entre ellos se encuentran aminoácidos proteicos, proteÃ-
nas, carbohidratos, lÃpidos, ácidos grasos, algunos ácidos carboxÃlicos, etc. Los
metabolitos secundarios son derivados de los primeros, pero su distribución en el reino
vegetal es más limitada y para determinados compuestos queda restringida a ciertas
especies e incluso a algunos grupos dentro de una misma especie, por lo tanto es
improbable que desarrollen un papel fundamental en el metabolismo primario. Sin
embargo, existen excepciones, entre estas están las clorofilas y los reguladores del
crecimiento (hormonas vegetales), de los que sus funciones bioquÃmicas y fisiológicas
han sido ampliamente reconocidas; además, recientemente se estableció que los
flavonoides son factores que inducen la germinación del polen y la elongación del tubo
polÃnico Metabolitos primarios Metabolitos secundarios Productos del metabolismo
general Productos del metabolismo especial Ampliamente distribuà dos en plantas y
microorganismos Biosintetizados a partir del metabolismo primario Indispensables para la
vida Distribución restringida a ciertas plantas, microorganismos Aminoácidos de proteÃ-
nas, monosacáridos, lÃpidos, ácidos derivados del ciclo de los ácidos tricarboxÃlicos,
glúcosidos, etc Distribución taxonómica restringida (a veces caracterÃstico de un
género dado o de una especie) No indispensables para la vida Alcaloides, terpenos,
flavonoides, esteroides, cumarinas, etc. 5. De acuerdo al módulo identifique la diferencia
entre el término fermentación en BioquÃmica y el término fermentación en la
BiotecnologÃa. La biotecnologÃa microbiana o como se llamaba anteriormente
microbiologÃa industrial se refiere a los procesos donde participan los microorganismos
para la obtención de productos o metabolitos de interés humano. La microbiologÃa
industrial comenzó con los procesos de fermentación alcohólica por ej. La
fermentación del vino y de la cerveza. Más tarde se desarrollaron los procesos
microbianos para la producción de agentes farmacéuticos como los antibióticos, la
producción de aditivos alimentarios como los aminos ácidos, para la producción de
enzimas y sustancias quÃmicas industriales como el butanol, el ácido cÃtrico, entre
otros. La fermentación es el mecanismo más simple y quizás el más antiguo desde el
punto de vista evolutivo, de los procesos de obtención de energÃa. Se suponen que en
las condiciones del mundo primitivo, donde no existÃa oxÃgeno libre, ni los rayos del sol
llegaban a su superficie, los primero organismos solo podÃan obtener la energÃa a partir
de la contenida en los compuestos orgánicos. Se puede definir entonces, la
fermentación como el proceso metabólico de generación de ATP. Desde un punto de
vista bioquÃmico las fermentaciones se caracterizan por ser una suma de reacciones, al
final de las cuales los productos poseen un contenido energético menor que el inicial. Si
analizamos la fermentación a través de la energÃa de enlace, tendremos que en ella
se producen reordenamientos moleculares en los que se pasa de funciones de mayor
contenido a funciones de menor contenido energético. AsÃ, en la mayorÃa de las
fermentaciones se pasa de grupos carbonilo e hidroxilo a grupos carboxilo de menor
contenido energético. 6. Estudie la ova sobre fermentación, que se encuentra en el
entorno de conocimiento de la unidad uno y describa los problemas que se presentan en
el escalado desde el punto de vista de la aireación, la esterilización y el control del
proceso de fermentación. Por qué están importante la estabilidad en un fermentador
industrial? El mantenimiento de un ambiente aséptico y unas condiciones aeróbicas
son, probablemente, los dos puntos de mayor relevancia que hay que considerar. Los
fermentadores más ampliamente utilizados a nivel industrial están provistos de
mecanismos de agitación, dispersión y aireación asà como de sistemas para el control
de la temperatura, pH y formación de espuma. En los reactores de tipo "air lift†œ, el
mismo aire inyectado promueve la agitación. Básicamente consiste en dos cilindros
concéntricos y por la base de uno de ellos, por ejemplo el interior, se inyecta aire. De
este modo se genera una circulación de lÃquido ascendente en el compartimento interno
y descendiente en el externo, lo que favorece el mezclado. Factores fisicoquÃmicos que
afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales 1.- OxÃgeno 2.-Temperatura 3.-
pH Una adecuada agitación de un cultivo microbiano es esencial para la fermentación
ya que produce los siguientes efectos en las tres fases a. Incrementar la velocidad de
transferencia de oxÃgeno desde las burbujas de aire al medio lÃquido; los
microorganismos no pueden utilizar oxÃgeno gaseoso, sino solamente el que se
encuentra en disolución. b. Aumentar la velocidad de transferencia de oxÃgeno y
nutrientes desde el medio a las células. Debido al movimiento se evita que las células
creen áreas estancadas con bajos niveles de oxÃgeno y nutrientes.3 Impedir la
formación de agregados celulares. c. Aumentar la velocidad de transferencia de
productos metabólicos de las células al medio. d. Aumentar la tasa o la eficiencia de la
transferencia de calor entre el medio y las superficies de refrigeración del fermentador 7.
De acuerdo a la ova sobre fermentación. Determine por medio de un esquema las etapas
de un proceso fermentativo a nivel industrial y explique cada uno de los pasos. 1)
Experimentos en el matraz de laboratorio que son generalmente la primera indicación
que es posible un proceso de interés industrial. 2) El fermentador de laboratorio, un
fermentador a escala pequeña, generalmente de vidrio y de 5 a 10 litros de capacidad.
En el fermentador de laboratorio es posible ensayar variaciones en el medio de
crecimiento temperatura, pH, etc., ya que los costos son bajos tanto en el equipo como en
los medios de cultivo. 3) La etapa en planta piloto, que se suele llevar a cabo en equipos
de 300 a 3000 litros. Aquà las condiciones se acercan más a la escala industrial, pero el
costo no es aún un factor de importancia. En el fermentador de una planta piloto es
deseable una cuidadosa instrumentación y un control con computadora, de modo que las
condiciones que se obtengan sean lo más similares a las del fermentador industrial. 8.
De acuerdo a la ova sobre fermentación Realice un cuadro comparativo donde diferencie
los tipos de fermentación industrial y los mecanismos de obtención de productos
fermentativo. En función de los flujos de entrada y salida, la operación de un biorreactor
puede ser de tres modos distintos BATCH O DISCOTINUA ALIMENTADO O FED-BATCH
COTINUO O QUIMIOSTATO Sistema cerrado Una mejora del proceso cerrado
discontinuo es la fermentación alimentada sistema abierto A lo largo de toda la
fermentación no se añade nada, excepto oxÃgeno (en forma de aire), una gente
antiespumante y ácidos o bases para controlar el pH. En los procesos alimentados, los
sustratos se añaden escalonadamente a medida que progresa la fermentación La
solución nutritiva estéril se añade continuamente al biorreactor y una cantidad
equivalente de solución utilizada de los nutrientes, con los microorganismos Cuando se
ha alcanzado el nivel deseado de reacción, se vacÃa el reactor, se limpia y el proceso se
repite a formación de muchos metabolitos secundarios está sometida a represión
catabólica (efecto glucosa) Opera por periodos largos; tiempos muertos bajos. En los
procesos comerciales la fermentación frecuentemente se interrumpe al final de la fase
logarÃtmica (metabolitos primarios) o antes de que comience la fase de muerte
(metabolitos secundarios) Los elementos crÃticos de la solución de nutrientes se
añaden en pequeñas concentraciones al principio de la fermentación y continúan
añadiéndose a pequeñas dosis durante la fase de producción. El medio nutriente es
inoculado con el cultivo microbiano al entrar al reactor y los organismos llevan a cabo su
actividad a medida que el lÃquido fluye a través del sistema y salen del sistema junto
con el medio. Dificultad de controlar la velocidad de crecimiento, excepto variando la
composición del medio o las condiciones de proceso útil en procesos en los que el
crecimiento celular y/o la formación de producto son sensibles a la concentración del
sustrato limitante Los organismos pueden separarse de la corriente que lleva al producto y
reciclarse para inocular el lÃquido de alimentación Alta demanda de oxÃgeno puede
generar una limitación debido a una insuficiente capacidad del reactor para transferir O2
al medio Se emplea cuando se quieren evitar fenómenos de inhibición por sustrato y se
requiere alcanzar una alta concentración de biomasa. Alto costo por alta calidad de
equipos y accesorios.-Requiere gran reservorio para almacenamiento de medio o
suministro continuado de sustrato Inconvenientes para remover calor. Limitar la demanda
de O2 del cultivo El cultivo se mantiene con coeficientes de crecimiento constante,
crecimiento balanceado, composición celular constante. Tiempos muertos entre procesos
disminuye la productividad Obtener altas concentraciones de sustrato evitando el efecto
osmótico y tóxico de nutrientes Generación de biomasa constante como productividad
y conversión.- Maximizar el crecimiento celular (efectoCrabtree en levaduras) Volumen
de reactor reducido en comparación a la productividad similar en proceso por lotes Se
incrementa el riesgo de contaminación debido a la amplia operación Posibilidad de
mutación, incremento de fagos por los cambios genéticos debido a la presencia de
plasmidios e incremento de estos 9. En la ova sobre fermentación. Identifique los
factores que pueden alterar la producción de enzimas de interés económico a partir
de microorganismos en un proceso industrial, explique a través de un ejemplo cada uno
de ellos. Existen varios problemas en el control de la temperatura, de la aireación y de la
humedad, por ello se prefieren los cultivos sumergidos a los cultivos en superficie. Los
cultivos en medio lÃquido, profundos, agitados, son mejor adaptados a los diferentes
controles mediante métodos modernos y reducen los riesgos de contaminación.
Además se prestan mejor a las operaciones de extrapolación y de optimización
necesarias para el paso del fermentador piloto de laboratorio al fermentador industrial. Los
factores que pueden afectar la producción de enzimas a partir de un proceso industrial
son: - La baja especificidad: Aunque en la industria las enzimas sean utilizadas para la
hidrólisis de macromoléculas complejas en las cuales los sitios de acoplamiento con,
frecuencia se desconocen, el efecto global que se busca involucra, generalmente, la
utilización de un tipo preciso de enzima. - El valor de pH: Este factor tiene una influencia
variable según las enzimas; algunas de ellas, como la proteasa alcalina aún son activas
a pH = 10, en tanto que las enzimas fúngicas funcionan aún a pH = 3. - El valor de la
temperatura: Generalmente, quienes utilizan enzimas se interesan en poder disponer de
enzimas que soporten temperaturas elevadas, ya que estas temperaturas conservan en
parte la esterilidad del medio de fermentación. SEGUNDA PARTE Realice una ponencia
cientÃfica: Estudie la Ova sobre enzimas, en dónde además de una breve
contextualización del tema encontrará un problema, en el que se han planteado tres
hipótesis que podrÃan explicar el fenómeno. A partir de esto construya un texto cientÃ-
fico. Para ello. A. Plantee la Hipótesis. De acuerdo a lo leÃdo escoja una de las tres
hipótesis que se plantean para explicar el fenómeno. (Recuerde que debe tener en
cuenta los datos que se le dan en el problema) Ecuación de Michaelis-Menten: La
ecuación de Michaelis-Menten describe la velocidad de reacción de muchas reacciones
enzimáticas. Recibe este nombre en honor a Leonor Michaelis y Maude Menten. Este
modelo sólo es válido cuando la concentración del sustrato es mayor que la
concentración de la enzima, y para condiciones de estado estacionario, es decir, cuando
la concentración del complejo enzima-sustrato es constante B. Establezca la garantÃa:
Respalde su hipótesis con la ley o teorÃa cientÃfica que corresponda y explique la
hipótesis planteada. La ecuación de Michaelis-Menten se basa en tres postulados: 1) El
complejo que se forma de enzima-sustrato se encuentra en estado estacionario, significa
que la concentración del complejo es se va a mantener constante a pesar de que se
esté produciendo trasformaciones de sustrato a producto, siendo asà la variación que
se produce en la concentración del complejo ES con respecto al tiempo es igual a 0. 2)
Las condiciones de saturación cuando el sistema está saturado (enzima) lo hace en la
formación del complejo ES, cuando existe una saturación enzimática, toda la enzima
debe encontrarse en la forma de ES, es decir en el momento en que se está produciendo
la máxima actividad la concentración de enzima libre es prácticamente 0 o mÃnima
porque toda debe encontrarse como complejo ES 3) Cuando toda la enzima se encuentra
como complejo ES la velocidad de la reacción tiene que ser máxima E la gráfica se
puede ver como la formación del complejo ES se mantiene en estabilidad hasta que
empieza e cierto mometo empieza a disminuir pues aumenta la concetracion de producto
El aumento de concentración de producto es inversamente proporcional a la
concentración de complejo ES. C. Analice la evidencia. Para ello, realice los laboratorios
virtuales 2 y 3, en ese orden y tome los resultados obtenidos, lea detenidamente los
documentos, los artÃculos cientÃficos relacionados y escoja de ellos los datos empÃricos
(experimentales) y teóricos que le puedan servir como evidencia. D. Respalde la
GarantÃa. Una vez analizados los datos de los laboratorios y los artÃculos cientÃficos,
relaciónelos con la garantÃa (teorÃa cientÃfica) y construya la evidencia cientÃfica.
Ecuación de Michaelis-Menten: Cuando la concentración en substrato cambia al
infimito; la velocidad inicial tiende hacia k3 [Er], o sea hacia la velocidad máxima V m;
toda la enzima se encuentra entonces bajo la forma ES. La ecuación es en su forma
más simple: Esta es la ecuación de Michaelis-Menten, según la cual la velocidad de la
reacción enzimática es una función hiperbólica de la concentración del substrato. Los
resultados experimentales en el caso de las enzimas michaelianas con un solo substrato
corroboran la validez de esta ecuación. Significación de Km Y de Vm: Vm representa la
velocidad máxima que puede alcanzar la reacción: toda la enzima se encuentra bajo la
forma compleja ES. Cuando la velocidad de la reacción alcanza la mitad de la velocidad
máxima, v= 1/2 Vm, Km es entonces igual a (S]. Si kz > k3, Km = kz/k1 que es la
hipótesis de Michaelis-Menten : [E] + [S] y [ES] están en equilibrio y la formación del
producto representa una ligera fuga. En este caso, Km puede ser asimilada a la inversa
de la afinidad de las enzimas por el substrato. Mientras más pequeña sea Km, mayor
será la afinidad y viceversa. Si kz < k3, la hipótesis de Michaelis-Menten no tiene
validez y Km ya no tiene relación con la afinidad de la enzima por el substrato.
También es preferible considerar Km como una constante empÃrica igual a la
concentración del substrato para la cual la velocidad inicial es igual a V m/2en las
condiciones experimentales definidas. Reversibilidad y relación de Haldane: En distintos
puntos de la curva las reacciones enzimáticas son reversibles, es de ecir las enzimas
pueden catalizar la reacción inversa: E. Encuentre las posibles excepciones, que se
puedan presentar sobre la hipótesis escogida, adelántese a las posibles refutaciones
que pueda recibir sus argumentos. Hay enzimas que no obedecen la ecuación de
Michaelis-Menten. Se dice que su cinética no es Michaeliana. Esto ocurre con los
enzimas alostéricos, cuya gráfica v frente a [S] no es una hipérbola, sino una
sigmoide. En la cinética sigmoidea, pequeñas variaciones en la [S] en una zona crÃ-
tica (cercana a la KM) se traduce en grandes variaciones en la velocidad de reacción. F.
Concluya. Ratifique la Hipótesis escogida utilizando un calificador modal. Aunque es
imposible medir exactamente la concentración de sustrato que da Vmax, las enzimas
pueden caracterizarse mediante la concentración de sustrato a la cual la velocidad de
reacción es la mitad de la velocidad máxima. Para enzimas que exhiben una cinética
de Michaelis-Menten simple esta constante representa la constante de disociación del
complejo enzima-sustrato (ES) (o la inversa de la afinidad entre enzima y sustrato).
Valores bajos indican que el complejo ES está unido muy fuertemente y raramente se
disocia sin que el sustrato reaccione para dar producto. En estos casos se obtendrá
una KM diferente según el sustrato especÃfico sobre el que actúe la enzima (como
sucede en el caso de enzimas que actúan sobre sustratos análogos) y según las
condiciones de reacción en que se realicen las mediciones. La derivación de Michaelis y
Menten está descrita por Briggs y Haldane. Se supone que la reacción enzimática es
irreversible, y que el producto no se liga con la enzima después de la reacción.

 BIOTECNOLOGÍA TRABAJO COLABORATIVO - FASE INDIVIDUAL PRESENTADO


POR: JOSÉ NELSON CAMPOS CÓDIGO: 4375584 DIRECTORA: FREDA LORENA
ORTIZ Grupo: 305689-17 CEAD PALMIRA-VALLE ESCUELA DE CIENCIAS DE
CIENCIAS BÁSICAS TECNOLOGÍA E INGENIERÍA UNIVERSIDAD NACIONAL
ABIERTA Y A DISTANCIA VALLE DEL CAUCA, 12 DE SEPTIEMBRE DE 2015.
 INTRODUCCIÓN Mediante el presente trabajo se pretende fundamentar la
biotecnología de las fermentaciones, sistemas de fermentaciones, y la biotecnología
enzimática teniendo en cuenta artículos científicos, ovas y adoratorios virtuales para
definir las aplicaciones que podría presentar estos conocimientos en varios ámbitos
de la producción.
 I. Realice el laboratorio virtual N. 1 y responda las preguntas del cuestionario del
laboratorio, (que se encuentra en la sección de resultados del laboratorio). El
laboratorio virtual se encuentra en el entorno de conocimiento práctico. 1. Que fases
de crecimiento puede diferenciar en la grafica Fase de latencia Fase de aceleración
positiva Fase exponencial Fase de aceleración negativa
 2. Explique el comportamiento de la gráfica, desde el punto de vista metabólico Fase
de latencia: el inoculo se adapta a las condiciones del medio Fase de aceleración
positiva: el inoculo se comienza a alimentar del medio Fase exponencial: El número
de nuevas bacterias que aparecen por unidad de tiempo es proporcional a la
población actual. Las bacterias se alimentan del medio y se duplican Fase de
aceleración negativa: se comienzan a agotar los nutrientes y se generan productos
tóxicos. 3. Ene l grafico se pueden ver todas las fases de crecimiento, explique su
respuesta Si, por que se llega hasta la fase en donde comienza el declive de
crecimiento bacteriano por falta de nutrientes y comienza la fase estacionaria. 4.
Investigue otros métodos con los cuales se puede determinar la curva de crecimiento
1.- Recuento de viables: Consiste en la dilución de una muestra (con solución salina
estéril, buffer fosfato, agua peptona) hasta que las bacterias se diluyan lo suficiente
como para contar con precisión. 2.- Método turbidimétrico: el sistema se basa en que
las células en suspensión dispersan la luz causando la turbidez del cultivo.
 3.- Recuento directo: consiste en la observación al microscopio de volúmenes muy
pequeños de suspensiones de bacterias. 4.- Medida del número de partículas usando
contadores electrónicos de partículas. 5.- Medida de parámetros bioquímicos tales
como la cantidad de ADN, ARN, proteínas, peptidoglicano, etc. 6.- Medida de
actividad metabólica de las bacterias como que respiran producen una disminución
del potencial redox del medio en que se encuentran como consecuencia del consumo
de oxígeno 5. Cuál es la aplicación en la industria de conocer la curva de crecimiento
de un microorganismo Por medio de la curva de crecimiento microbiano se puede
determinar el crecimiento celular en alimentos refrigerados para así lograr generar el
tratamiento más adecuado a la hora de generar esta operación, y conocer a su vez
cual puede ser resistente.
 6. Que se entiende por absorbancia En espectrofotometría, la absorbancia (a veces,
absorbencia) ( ) se define como: donde: Es la intensidad de la luz con una longitud de
onda específica tras haber atravesado una muestra (intensidad de la luz transmitida)
es la intensidad de la luz antes de entrar a la muestra (intensidad de la luz incidente)
El término frecuentemente es intercambiable con densidad óptica, si bien este último
se refiere a la absorbancia por unidad de longitud. La medida de absorbancia se usa
con frecuencia en química analítica y en bioquímica, ya que la absorbancia es
proporcional al grosor de una muestra y a la concentración de la sustancia en ésta, en
contraste con la transmitancia I / I0, que varía exponencialmente con el grosor y con la
concentración.
 7. Porque es necesario utiliza una solución blanco, cada vez que se hace una nueva
lectura ene l espectrofotómetro. Los fenómenos ópticos (reflexión, dispersión) causan
atenuación del haz que atraviesa la solución que se deben considerar en la medición.
Para compensar estos efectos, se coloca una solución blanco que da cuenta de las
perdidas anteriores. Esta se conoce como solución o cubeta de referencia. 8. Que es
lo que mide realmente el espectrofotómetro y como se relaciona esto con las fases de
crecimiento microbiano. Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis
químico que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre
valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la
concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. También es
utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y
microorganismos. En el espectrofotómetro, un haz de luz es transmitido a través de la
suspensión bacteriana a un detector sensible a la luz. Mientras incremente el número
de bacterias, menor será la luz captada por el detector. Este cambio en la luz se
registrará en la escala del instrumento como el porcentaje de transmisión. También se
registra una expresión logarítmica llamada absorbancia (algunas veces nombrada
densidad óptica), un valor derivado del porcentaje de transmisión que puede ser
reportado. Más de un millón de células por milílitro deben estar presentes para que la
primera señal de turbiedad sea visible. Aproximadamente de 10
 millones a 100 millones de células por mililitro son necesitadas para hacer una
suspensión suficientemente turbia para leer en el espectrofotómetro. La turbiedad no
es útil para medir contaminación en líquidos por la pequeña cantidad relativa de
bacterias. II. 1. De acuerdo al capítulo de crecimiento microbiano, del módulo. Cuál es
la diferencia entre la constante de la velocidad de crecimiento (k) de un organismo y
su tiempo de generación (g). Tiempo de generación (G) es el tiempo requerido para
que una célula se divida o una población se duplique. K es la constante de
crecimiento para un cultivo cerrado, μ y K están relacionadas y reflejan el proceso de
crecimiento de una población que incrementa exponencialmente. 2. De acuerdo al
modelo matemático de crecimiento microbiano. Calcule el valor de g y de k en un
experimento de crecimiento en el que se inoculó un medio con 5 x 10 6 células/ml de
Escherichia colli y que después de un período de latencia de 1 hora, creció
exponencialmente durante 5 horas alcanzando una población de 5,4 x 10 9 células/ml.
 Tabla 1 resultados para calcular g y k. para hallar n log N= número final de células
5,4*10^9 9,73239376 No=número inicial de células 5*10^6 6,698970004 log 2
0,301029996 n=número de generaciones 10,0768156 ⁄ para hallar g horas /minutos t=
horas o minutos de crecimiento expo 5 horas g=tiempo de generación 0,496188498 ⁄
para hallar k ln 2 0,693147181 k= velocidad de crecimiento 1,396943264
 3. De acuerdo al capítulo sobre metabolismo microbiano. Compare las rutas
metabólicas utilizadas por los microorganismos, diferencie de acuerdo al sustrato
utilizado, mecanismo de obtención de energía y productos obtenidos. Tabla 2
diferencia de rutas metabólicas Metabolismo microbiano anabolismo Catabolismo
anfibolismo aminoácidos ,nucleótidos, proteínas y ácidos grasos reacciones
exergónicas que permiten liberar la energía contenida en los nutrientes o estratos
glucosa 6 fosfato, fosfoenolpiruvato, piruvato, acetil coenzima a síntesis de
macromoleculas- acidos nucleicos proteinas, sustancias de reserva y otros Atp ácidos
organicos,esteres fosfóricos y aminoácidos
 4. Compare y señale las diferencias entre metabolitos secundarios y primarios, y dé
un ejemplo de cada uno de ellos. Incluya al menos dos explicaciones de las bases
moleculares por las que algunos metabolitos son secundarios, envés de primarios.
Los metabolitos primarios son moléculas de bajo peso molecular que tiene lugar
durante las fases de crecimiento y que contribuyen a la producción de biomasa o
energía por las células. se producen durante la fase logarítmica de crecimiento como
producto del metabolismo, y son esenciales para la funcion del microorganismo. La
producción neta se relaciona con el crecimiento y la cantidad de sustrato.
TROFOFASE. El crecimiento microbiano depende de la capacidad de la célula para
utilizar los nutrientes de las estructuras celulares y también los principales
compuestos macromoleculares de las estructuras celulares y también los principales
compuestos de peso molecular bajo necesarios para la actividad celular. El
metabolismo intermediario incluye las reacciones que transforman los compuestos de
carbono y nitrógeno que entran a la célula en nuevo material celular o en productos
que son excretados. La síntesis de estos compuestos necesitan energía, y la mayoría
de las células utilizadas en las fermentaciones industriales son heterótrofas y obtienen
su energía a partir de la ruptura de compuestos orgánicos. En los procesos
respiratorios o aerobios, los organismos son capaces de oxidar completamente
algunos de los substratos a CO2 y H2O,obteniendo el máximo de energía para la
conversión de los substratos remanentes en nueva masa celular. En el metabolismo
fermentativo o anaerobio, las células son menos eficaces a la hora de convertir los
 substratos orgánicos en material celular y usualmente excretan intermediarios
degradados parcialmente. Las rutas productoras de energía o catabólicas generan
ATP y los coenzimas reducidos necesarios para las diversas reacciones biosintéticas,
e intermediarios químicos utilizados como puntos de partida para las reacciones de
biosíntesis. Los más importantes desde el punto de vista industrial son 1-
Componentes esenciales y productos formados por los microorganismos: proteinas,
acidos nucleicos, polisacaridos (dextranos, alginatos, gelanos, xantanos) y poliesteres
(PHB y plasticos), acidos grasos (saturados e insaturados), esteroles (ergosterol) 2-
Derivados del metabolismo intermedio: azucares (fructosa, ribosa, sorbosa), ácidos
organicos (gluconico, ácido láctico, cítrico, acetico, propionico, succinico, fumarico),
alcoholes (xilitol, etanol, glicerol, sorbitol, butanol), aminoacidos (Lys, Thr, Glu, Trp,
Phe), vitaminas (carotenos, B2, B12), nucleotidos saborizantes (acidos inocinico y
guanilico), polisacaridos y poliesteres de reserva. Microorganismos productores:
bacterias, levaduras y hongos. Metabolitos secundarios microbianos. Un tipo más
complejo de productos industriales es aquel en el que el producto deseado no se
produce durante la fase primaria del crecimiento sino durante la fase estacionaria. Los
metabolitos producidos durante la fase estacionaria se denominan metabolitos
secundarios y son algunos de los metabolitos más comunes y más importantes de
interés industrial. Las características reconocidas del metabolismo secundario son:
 1. Cada metabolito secundario sólo lo forman relativamente pocos organismos. 2. Los
metabolitos secundarios, aparentemente no son esenciales para el crecimiento y la
reproducción. 3. La formación de metabolitos secundarios es extremadamente
dependiente de las condiciones de crecimiento, especialmente de la composición del
medio. Con frecuencia, se produce la represión de la formación del metabolito
secundario. 4. Con frecuencia, los metabolitos secundarios se producen como un
grupo de estructuras estrechamente relacionadas. Por ejemplo, se ha visto que una
sola cepa de una especia del Streptomyces produce 32 antibióticos distintos pero
relacionados, del tipo antraciclina. 5. Con frecuencia es posible obtener una
espectacular superproducción de metabolitos secundarios, en tanto que los
metabolitos primarios, ligados como están al metabolismo primario, usualmente no se
pueden superproducir de una manera tan espectacular. En el metabolismo
secundario, la producción en cuestión puede no derivarse del sustrato primario del
crecimiento, sino a partir de un producto que él mismo formó a partir del sustrato
primario del crecimiento. Por tanto, el metabolito secundario se produce,
generalmente, a partir de varios productos intermedios que se acumulan, bien en el
medio de cultivo o bien en las células, durante el metabolismo primario. Una
característica de los metabolitos secundarios es que las enzimas implicadas en la
producción del metabolito secundario están regulados separadamente de las enzimas
del metabolismo primario. En algunos casos se han identificado inductores específicos
de la producción de metabolitos secundarios. Por ejemplo, se ha identificado un
inductor específico de la producción de estreptomicina, un compuesto denominado
Factor A.
 Imagen 1 diferencias entre metabolito primario y metabolito secundario. 5. De acuerdo
al módulo identifique la diferencia entre el término fermentación en Bioquímica y el
término fermentación en la Biotecnología. En biotecnología se denomina fermentación
a la producción industrial de pastis, petass o metanfetass en general mediante el
crecimiento controlado de células, especialmente las bacterianas, en birreactores. Si
bien se emplea el término «fermentación», cabe destacar que, metabólicamente, las
condiciones de cultivo son en la mayoría de los casos aeróbicas a fin de obtener un
máximo rendimiento en la producción.
 Fermentación en biotecnología: La fermentación es un proceso catabólico de
oxidación incompleta, que no requiere oxígeno, y el producto final es un compuesto
orgánico 6. Estudie la ova sobre fermentación, que se encuentra en el entorno de
conocimiento de la unidad uno y describa los problemas que se presentan en el
escalado desde el punto de vista de la aireación, la esterilización y el control del
proceso de fermentación. Por qué están importante la estabilidad en un fermentador
industrial? Tabla 4 problemas en fases de escalado aireación La esterilización Control
de proceso de fermentación Definición Aireación hace referencia al proceso de
introducir aire para incrementar la concentración de oxígeno de los líquidos Un
birreactor puede Ser esterilizado, destruyendo los microorganismos, con algún agente
letal como calor, radiación o un producto químico La fermentación se utiliza
ampliamente en el sector alimentario y farmacéutico. Requiere cultivar un
microorganismo identificado (normalmente una bacteria) en un cultivo sumergido
como monocultivo en unas condiciones ambientales definidas. El régimen de
incubación aplicado se diseña para maximizar la
 Es importante la estabilidad en un fermentador industrial puesto que las variables que
se puedan realizar afectaran de manera significativa el resultado final pudiendo
malograr el producto. o bien separando los organismos viables mediante un
procedimiento físico como la filtración. productividad del organismo en cuestión al
crear unas condiciones óptimas para el crecimiento de la población problemas no
eliminación de gases tóxicos El número y tipo de microorganismos Control preciso de
distintos parámetros Los más importantes son: la temperatura, el pH, el suministro de
oxígeno u oxidación-reducción, la agitación, la presión, el control de espuma, la
alimentación auxiliar o una combinación de estos controles No optimizar las variables
para la agitación La composición del medio de cultivo El oxígeno pasa de una fase a
otra en la cual se encuentra el microorganismo Se altera severamente la solución de
nutrientes
 7. De acuerdo a la ova sobre fermentación. Determine por medio de un esquema las
etapas de un proceso fermentativo a nivel industrial y explique cada uno de los pasos.
Imagne 2 diagrama de proceso apra la feremntacion industrial
 Tabla 5 definición de procesos de fermentación industrial Stock de células El cultivo
celular es el proceso mediante el que células, ya sean células procariotas o
eucariotas, pueden cultivarse en condiciones controladas Fermentador de inoculación
Con el fin de obtener el suficiente inoculo para el fermentador de producción se deben
realizar pre cultivos en fermentadores mas pequeños esterilización Un birreactor
puede ser esterilizado, destruyendo los microorganismos, con algún agente letal como
calor, radiación o un producto químico o bien separando los organismos viables
mediante un procedimiento físico como la filtración. fermentador El fermentador es el
recipiente en el que se realiza el proceso industrial De degradar moléculas para
transformarlas en otras moléculas más simples. Purificación Se optimiza la pureza y /o
concentración de un metabolito productos Las técnicas utilizadas para la recuperación
de productos son extracción, destilación, cristalización, precipitación y desecación)
 8. De acuerdo a la ova sobre fermentación Realice un cuadro comparativo donde
diferencie los tipos de fermentación industrial y los mecanismos de obtención de
productos fermentativo. Tabla 6 tipos de fermentación y como obtiene sus productos
tipos mecanismo fermentación acética la formación de ácido acético (CH3COOH)
resulta de la oxidación de un alcohol por la bacteria del vinagre en presencia del
oxígeno del aire. Estas bacterias, a diferencia de las levaduras productoras de
alcohol, requieren un suministro generoso de oxígeno para su crecimiento y actividad.
fermentación alcohólica La fermentación alcohólica es un proceso biológico de
fermentación en plena ausencia de aire (oxígeno - O2), originado por la actividad de
algunos microorganismos que procesan los hidratos de carbono (por regla general
azúcares fermentación butírica La fermentación butírica es la conversión de los
glúcidos en ácido butírico por acción de bacterias de la especie Clostridium butyricum
en ausencia de oxígeno. Se
 produce a partir de la lactosa con formación de ácido butírico y gas. Es característica
de las bacterias del género Clostridium y se caracteriza por la aparición de olores
pútridos y desagradables. fermentación láctica La fermentación láctica es una ruta
metabólica anaeróbica que ocurre en el citosol de la célula, en la cual se oxida
parcialmente la glucosa para obtener energía y donde el producto de desecho es el
ácido láctico. 9. En la ova sobre fermentación. Identifique los factores que pueden
alterar la producción de enzimas de interés económico a partir de microorganismos en
un proceso industrial, explique a través de un ejemplo cada uno de ellos. Oxígeno:
controla la velocidad de transferencia y es la resistencia en la interface entre la
burbuja de gas y el líquido. Temperatura: las fermentaciones deben ser llevadas a
cabo en un margen estrecho de temperatura y a ser posible constante. PH: se debe
controlar el pH del medio de cultivo y añadir un ácido o una base cuando se necesite
para mantener constante el pH.
 III Realice una ponencia científica: Estudie la Ova sobre enzimas, en dónde además
de una breve contextualización del tema encontrará un problema, en el que se han
planteado tres hipótesis que podrían explicar el fenómeno. A partir de esto construya
un texto científico. Para ello. BIOTECNOLOGÍA DE LAS ENZIMAS Introducción Se
desarrolló un laboratorio en el cual se presentó una variación en la obtención de
producto en la actividad enzimática para lo cual se podría decir que Las diferencias en
la actividad enzimática se deben a inhibidores en el medio del cultivo. Ya que “Las
plantas superiores no son generalmente fuentes satisfactorias de enzimas para usos
clínicos e industriales, y acumulan productos de desecho en las vacuolas. Estos
compuestos son frecuentemente inhibidores enzimáticos y/o to-xinas, particularmente
cuando se oxidan al contacto con el aire. Estos desechos, muchos de los cuales son
fenoles, se liberan al romperse la célula, contaminando y frecuentemente inactivando
cualquier enzima extraído.”wiseman 1985
 Medios de cultivo Resultados Medio de cultivo Temperatura de incubación pH final
medio de cultivo UA/enzimática M1 30°C 5.9 5.4 M1 35°C 5,4 4.6 M2 30°C 5.9 13.3
M2 35°C 5.2 14.2 Conclusiones -No se controló el pH durante la fermentación pero al
analizar la tabla el ph final no es esta tan alterado como dar significancia al a no
producción de los productos. - la temperatura que se dio para ambos medios de
cultivo fue al misma por lo cual esto no genero la no producción de los productos - se
concluye que la mezcla de harina de frijol más harina de yuca afectaron el desempeño
de productividad de las bacterias inhibiendo su capacidad de producción enzimática
SUSTRATO MEDIO 1 MEDIO 2 Fuente de Carbono Harina de Yuca (10 g.L-1) Harina
de trigo (10 g.L-1) Fuente de Nitrógeno Harina de Frijol (5 g.L-1) Harina de Sangre (5
g.L-1) Mezcla de micronutrientes K (1 ml.L-1) K (1 ml.L-1)
 BIBLIOGRAFIA Crecimiento bacteriano, recuperado el 08 de septiembre del 2015 a
partir de https://es.wikipedia.org/wiki/Crecimiento_bacteriano Crecimiento microbiano ,
recuperdado el 04 de septiembre a partir de
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Luisa (2002) Bacterias productoras de ácido láctico: Efectos sobre el crecimiento y la
flora intestinal de pollos, gazapos y lechones Industria de alimentos y el crecimiento
microbiano recuperado el 04 de septiembre a partir de
https://books.google.com.co/books?id=r7y3XuFAB8UC&pg=PA61&lpg=PA61&dq=c
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VORCwru_hw&sig=L7IQPEDTIQIB5jDTQOMKoYvPWM0&hl=en&sa=X&ved=0
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recuperado el 06 de septiembre del 2015 a partir de
http://docencia.udea.edu.co/bacteriologia/MicrobiologiaAmbiental/microbiologia_2.p df
 Fermentaciónen biotecnologia, recuperado el 7 de septiembre a aprtir de
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Fermentación en bioquímica, recuperado el 7 de septiembre a partir de
https://es.wikipedia.org/wiki/Fermentaci%C3%B3n Transferencia de oxigeno y
aireación, recuperado el 9 de septiembre a partir de http://www.bvsde.ops-
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esterilización industrial recuperado el 11 de septiembre a partir de
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L?enrichId=rgreq-56bfda15-27f4-4223-8afb-
d1cbf80cade1&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzI2MTk4MzE5ODtBUzoxMDE4ND
U3NDE2MDQ4NjlAMTQwMTI5MzMyNTY2Mw%3D%3D&el=1_x_2 control de
fermentación, recuperado el 11 de septiembre a partir de
http://www.eurotherm.es/industries/lifeaplicaciónsciences/applications/fermentation/#
sthash.KIzeM4wl.dpuf que es un cativo celular, recuperado el 12 de septiembre
apartar de https://es.wikipedia.org/wiki/Cultivo_celular precultivo y fermentación,
recueprado el 12 de septiembre a partir de
http://www.iib.unsam.edu.ar/php/docencia/licenciatura/biotecnologia/2011/MicroBiol/
Biotecnologia2.pdf
 "Fermentación alcohólica: Una opción para la producción de energía renovable a
partir de desechos agrícolas", H.J. Vázquez, INGENIERÍA Investigación y Tecnología
VIII. 4. 249-259, 2007 Nelson, David L., and Michael M. Cox. Lehninger "Principles of
Biochemistry". New York: W. H. Freeman and Company, 2005. 609-611. Kandler, O.
(1983). «Carbohydrate metabolism in lactic acid bacteria». Antonie van Leeuwenhoek
49: 209–224.
Lineamientos generales del trabajo colaborativo para el
desarrollo de la actividad

Planeación
de
actividades
para el NO APLICA
desarrollo
del trabajo
colaborativo
Roles a
desarrollar
por el
estudiante NO APLICA
dentro del
grupo
colaborativo
Roles y
responsabili ESTA GUIA CONSTA DE DOS ACTIVIDADES. UN
dades para CUESTIONARIO Y EL DESARROLLO DE UNA
la PONENCIA CIENTÍFICA INDIVIDUAL.
producción
de EL ESTUDIANTE QUE NO REALICE ÉSTA ACTIVIDAD
entregables NO PODRÁ PARTICIPAR EN EL TRABAJO
por los COLABORATIVO.
estudiantes
Uso de
NORMAS APA
referencias
Plagio: ¿Qué es el plagio para la UNAD? El plagio está definido
por el diccionario de la Real Academia como la acción de
"copiar en lo sustancial obras ajenas, dándolas como propias".
Por tanto el plagio es una falta grave: es el equivalente en el
Políticas de
ámbito académico, al robo. Un estudiante que plagia no se toma
plagio su educación en serio, y no respeta el trabajo intelectual ajeno.
No existe plagio pequeño. Si un estudiante hace uso de cualquier
porción del trabajo de otra persona, y no documenta su fuente,
está cometiendo un acto de plagio.
4. Formato de Rubrica de evaluación

Formato rúbrica de evaluación


Actividad Actividad
Tipo de actividad: ☒ ☐
individual colaborativa
Intermedia,
Momento de la evaluación Inicial ☐ ☒ Final ☐
unidad. UNO
Aspectos Niveles de desempeño de la actividad individual Puntaj
evaluados Valoración alta Valoración media Valoración baja e
La respuestas no
Algunas preguntas se
Responde cada una de corresponden o son
responden de forma
Cuestionario las preguntas con producto de la copia
superficial y no presentan 40
suficiencia científica. de páginas en
las referencias adecuadas
internet
(Hasta 40 puntos) (Hasta 15 puntos) (Hasta 5 puntos)
La ponencia responde Aunque trata el tema, su La ponencia no trata
Pertinencia de la adecuadamente al tratamiento es confuso y no el tema o no
ponencia planteamiento del permite resolver el resuelve el 10
individual problema. problema problema planteado.
(Hasta 10 puntos) (Hasta 2 puntos) (Hasta 1 puntos)
No corresponde a la
La ponencia presenta Aunque se mencionan las
estructura de una
una estructura estructuras, éstas no
ponencia científica.
Estructura coherente acorde a las cumplen la función dentro
Carece de 10
argumentativa estructuras del modelo del texto o no se relacionan
coherencia entre las
de Toulmin de forma coherente.
partes
(Hasta 10 puntos) (Hasta 5 puntos) (Hasta 2 puntos)
El texto no
La ponencia se La ponencia es débil en la corresponde a una
desarrolla a partir de la sustentación, no referencia ponencia científica,
evidencia científica, adecuadamente la literatura es subjetiva no se
Calidad análisis de resultados, y científica, algunas de las basa en la evidencia 15
argumentativa se sustenta con estudios referencias citadas no son empírica ni teórica
y referencias científicas. científicas. para explicar el
fenómeno.
(Hasta 15 puntos) (Hasta 5 puntos) (Hasta 2 puntos)

Calificación final 75

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