TRABAJO INDIVIDUAL 1

BIOTECNOLOGÍA
PARTE A.

PRESENTADO POR:

SANDRA M. RUEDA VELASCO

CÓDIGO: 63497339

PRESENTADO A:

FEDRA LORENA ORTIZ

DIRECTOR DE GRUPO

GRUPO: 305689_4

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD.

INGENIERIA DE ALIMENTOS
BIOTECNOLOGIA
MARZO 2 2016
 I. Fundamentación científica.

Cuestionario.

1. Realice el laboratorio virtual N. 1(Crecimiento microbiano y responda las

preguntas del cuestionario del laboratorio).
a) Qué fases de crecimiento puede diferenciar en la gráfica?

Fase de Latencia
Fase de Aceleración Positiva
Fase Exponencial
Fase Aceleración Negativa
Fase Estacionaria

b) Explique el comportamiento de la gráfica, desde el punto de vista metabólico

Antes de que la célula se divida deben ocurrir muchas reacciones químicas denominadas
metabolismo, estas reacciones metabólicas se dividen en dos: reacciones catabólicas que son
aquellas que rompen moléculas para liberar energía y reacciones anabólicas que son las que
almacenan energía.
La mayoría de los microorganismos son capaces de sintetizar algunos compuestos que necesitan;
mientras que en algunos casos es necesario suministrarlos en el medio de cultivo.
Las vitaminas son factores necesarios para el crecimiento, muchas de estas funcionan formando
parte de coenzimas. La mayor parte de los microorganismos son capaces de sintetizar todos los
componentes de sus coenzimas, sin embargo muchos no son capaces y necesitan que les sean
suministrados en forma de vitaminas. Las principales vitaminas que requieren los
microorganismos son tiamina, biotina, piridoxina.
Los medios de cultivos son soluciones nutritivas que se usan para dar los micro y macro
nutrientes que ellos necesitan; estos permiten el buen crecimiento del microorganismo.

En la saccharomyces cerevisiae del estudio del primer laboratorio se observa que va creciendo su
metabolismo para producción de etanol. A medida que va creciendo el microorganismo el etanol
va inhibiendo el crecimiento causando daños en el ADN mitocondrial de las células e inactiva
algunas de las enzimas como la hexoquinasa y la dehidrogenasa. Cuando la saccharomyces
cerevisiae crece en presencia de etanol incrementa la cantidad de ácidos grasos insaturados como
una alternativa ante el estrés que se genera por la toxicidad del etanol.
En su etapa de crecimiento ella puede llevar a cabo un metabolismo respiratorio o fermentativo
según la concentración de oxígeno. Cuando esta se encuentra en condiciones anaerobiosis el
crecimiento celular es lento ocasionando una producción de etanol alta.

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 c) En el gráfico es posible observar todas las fases de crecimiento? Explique su
respuesta

No, porque en el gráfico solo se muestra la fase estacionaria, no se evidencia una fase de
Muerte.

d) Investigue otros métodos con los cuales se pueda determinar la curva de crecimiento

Determinación en continuo:
 Hay administración constante del medio de cultivo
 El sustrato no es limitante
 Depende de la tasa de dilución

e) Cuál es la aplicación industrial de conocer la curva de crecimiento de un

microorganismo?

El conocimiento de la evolución del cultivo a inocular o utilizarnos permite observar cómo va

desarrollándose el microorganismo, como va consumiendo el sustrato, como se va acumulando el
producto a partir de la fermentación, cuánto tiempo se demora en desarrollar el producto y
cuánto tiempo se demora el microorganismo en morir. Teniendo estos datos la industria puede
realizar una proyección de la formulación para la realización de los productos.

f) Que entiende por absorbancia

La absorbancia es la relación directa de la cantidad de energía luminosa después de pasar por un

material entre la cantidad de la energía luminosa antes de pasar, es decir: la intensidad de la luz
con una longitud de onda específica y que es pasada por una muestra y es la intensidad de la luz
antes de que entre a la muestra.

g) Por qué es necesario utilizar una solución blanco, cada vez que se hace una nueva
lectura en el espectrofotómetro?

Calibrarlo, que tenga un punto cero para poder hacer las lecturas.

h) Qué es lo que mide realmente el espectrofotómetro y como se relaciona esto con las
fases de crecimiento microbiano?

El espectrofotómetro mide la intensidad de luz y se relaciona con las fases del crecimiento
microbiano en cuanto a que el valor de la absorbancia se ve incrementado por el efecto pantalla
que logran hacer los microorganismos y la solución.

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 2. Cuál es la diferencia entre la constante de la velocidad de crecimiento (k) de un
organismo y su tiempo de generación (g).

La constante de velocidad es la tasa específica de consumo del sustrato; es decir es la velocidad

con la que el organismo consume el sustrato. Cuan mayor es la tasa de consumo mayor será la
constante de velocidad de crecimiento. Asimismo, cuan mayor sea el rendimiento del substrato
consumido, también mayor será la tasa de crecimiento.

“El crecimiento de los microorganismos es una parte fundamental de la mayoría de los procesos
de fermentación.
Cuando un organismo es inoculado en un volumen de medio dado, el cultivo pasa por una serie
de fases. Después que se hace la inoculación, existe una fase llamada latencia, en la cual el
organismo se adapta a las condiciones del medio; tras un cierto período de tiempo en el que la
velocidad de crecimiento de las células va en aumento gradualmente, las células crecen a una
velocidad constante máxima; esta fase se denomina exponencial o logarítmica. A medida que el
crecimiento continúa, los nutrientes se van agotando y los productos van siendo excretados por el
organismo, la velocidad de crecimiento disminuye y finalmente el crecimiento cesa, debido
frecuentemente al agotamiento de un nutriente esencial o a la acumulación de algún producto
tóxico; esta fase se denomina estacionaria.”

El tiempo de generación de un organismo es el cambio en el número de las células por unidad de

tiempo, o bien sea es el tiempo requerido para duplicar una población de células, en las cuales a
partir de una célula se forman dos células.

3. De acuerdo al modelo matemático de crecimiento microbiano. Calcule el valor de g

y de k en un experimento de crecimiento en el que se inoculó un medio con 10 x 10 6
células/ml de Escherichia colli y que después de un período de latencia de 1 hora,
creció exponencialmente durante 15 horas alcanzando una población de 15,4 x 10 9
células/ml.

logN −logNo
N=No . 2n es igual n=
log 2

log 15,4∗10 9−log 10∗106

n=
log 2
n=30,08 generaciones

t 15
G= = =1,5 h
n 30,08

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 ln 2 0,4986
m= = =1,3862
td 1,5

4. De acuerdo al capítulo sobre metabolismo microbiano.Realice un cuadro

comparativo de las rutas metabólicas utilizadas por los microorganismos,
diferencie de acuerdo al sustrato utilizado, mecanismo de obtención de energía y
productos obtenidos.

FERMENTACIÓN RESPIRACIÓN
Sustrato utilizado Moléculas orgánicas. Electrones tanto de
sustratos fermentables compuestos orgánicos como
simple (como azúcar, por inorgánicos (oxidándose).
ejemplo) oxigeno molecular
Mecanismo de obtención El sustrato da lugar a una Los electrones son
de energía serie de compuestos, unos transferidos a través de una
más oxidados y otros más cadena transportadora de
reducidos; en el proceso electrones al final de la cual
fermentativo mantiene un existe un aceptor exógeno
estricto balance O-R. El oxidado (A), que se reduce.
nivel de oxidación Si el aceptor final es el O2,
promedio de los productos hablamos de respiración
finales es muy cercano al aerobia; Si el aceptor final
del sustrato. De ahí que la es distinto del O2 (nitrato,
generación de ATP sulfato, etc.), respiración
asociada a la fermentación anaerobia.
se denomina fosforilación a la transferencia se da
nivel de sustrato ordenadamente, en la
El proceso ocurre en dirección de mayor
ausencia de oxigeno potencial redox positivo,
Productos obtenidos Lactato energía libre que se va a
Etanol, CO2 traducir en un potencial
Succinato, acetato, electroquímico de protones,
formiato, H2 cuya disipación a través de
Butilenglicol ATP-asas de membrana
Acetona origina ATP, conociéndose
Butirato este proceso como
Butanol fosforilación oxidativa

A este conjunto de procesos, se le conoce como metabolismo y consiste de un gran número de

reacciones químicas destinadas a transformar las moléculas nutritivas en elementos que
posteriormente serán utilizados para la síntesis de los componentes estructurales; como pueden
ser las proteínas. Otra parte importante del metabolismo es la de transformar y conservar la
energía que está contenida en una reacción química en algún proceso que requiera de energía,
como puede ser el trabajo o el movimiento.

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Metabolismo bacteriano.
 El metabolismo de la bacteria está adaptado para el crecimiento veloz y transcurre entre
10 y 100 veces más rápido que en las células humanas.
 La bacteria tiene mayor versatilidad en cuanto al tipo de nutrientes que puede utilizar
para obtener energía.
 La bacteria tiene mayor versatilidad en la utilización de oxidantes y no están limitadas al
sólo uso del O2.
 Existe una gran diversidad de requerimiento nutricional entre las bacterias debido a que
ella no poseen todos los caminos biosintéticos.

TIPOS DE METABOLISMO

 Según la forma en la que el organismo obtiene el carbono para la construcción de la

masa celular:
Autótrofo: El carbono se obtiene del dióxido de carbono (CO2)
Heterótrofo: El carbono se obtiene de compuestos orgánicos (glucosa)
 Según la forma en la que el organismo obtiene los equivalentes reductores para la
conservación de la energía o en las reacciones biosintéticas.
Litotrofo: Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos inorgánicos.
Organotrofo: Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos orgánicos.
 Según la forma en la que obtiene la energía para vivir:
Quimiotrofo: La energía se obtiene de compuestos químicos externos.
Fototrofo: La energía se obtiene de la luz.

Catabolismo y Anabolismo

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Catabolismo: Degradación enzimática de macromoléculas, lípidos, hidratos de carbono y
proteínas.

Rutas Metabolicas

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 5. Compare y señale las diferencias entre metabolitos secundarios y primarios, y dé
un ejemplo de cada uno de ellos. Incluya al menos dos explicaciones de las bases
moleculares por las que algunos metabolitos son secundarios, envés de primarios.

Metabolitos primarios Metabolitos secundarios

Productos del metabolismo general
Ampliamente distribuí dos en plantas y
microorganismos
Indispensables para la vida
Aminoácidos de proteínas,
monosacáridos, lípidos, ácidos derivados
del ciclo de los ácidos tricarboxílicos,
glúcosidos, etc.
Productos del metabolismo especial
Biosintetizados a partir del metabolismo
primario
Distribución restringida a ciertas plantas,
microorganismos
Distribución taxonómica restringida (a
veces característico de un género dado o
de una especie)
No indispensables para la vida
Alcaloides, terpenos, flavonoides,
esteroides, cumarinas, etc.

“Metabolitos primarios: Se producen en el curso de las reacciones metabólicas anabólicas o

catabólicas que tiene lugar durante las fases decrecimiento y que contribuyen a la producción de
biomasa o energía por las células. Se producen principalmente en la trofofase o fase de
crecimiento.
 Tener una función metabólica directa

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  Ser compuestos esenciales intermedios en las vías catabólica y anabólica
 Encontrarse en todas las plantas
 Tratarse de carbohidratos, lípidos, proteínas, ácidos nucleicos o clorofilas.

Metabolitos secundarios Se producen por rutas anabólicas especializadas cuando no hay

crecimiento. Pueden ser una estrategia para mantener en funcionamiento los sistemas metabólisis
cuando no hay crecimiento; también sirven como indicativos de diferenciación y se producen
durante la idiofase de los cultivos. Entre sus características comunes; tienden a producirse
cuando el crecimiento está limitado (cultivo continuo); se forman por enzimas específicos a
partir del metabolismo central; no son esenciales para el crecimiento o para el metabolismo
central y son específicos para cada especie, y a veces, de cada cepa”. Ejemplo:
Primario: Formación de alcohol a partir de azúcar por la levadura
Secundario: Formación de penicilina por el hongo penicillium chrysogenum

6. De acuerdo al módulo identifique a partir de ejemplos la diferencia entre el término

fermentación en Bioquímica y el término fermentación en la Biotecnología.

La biotecnología microbiana o como se llamaba anteriormente microbiología industrial se refiere

a los procesos donde participan los microorganismos para la obtención de productos o
metabolitos de interés humano. La microbiología industrial comenzó con los procesos de
fermentación alcohólica por ej. La fermentación del vino y de la cerveza. Más tarde se
desarrollaron los procesos microbianos para la producción de agentes farmacéuticos como los
antibióticos, la producción de aditivos alimentarios como los aminos ácidos, para la producción
de enzimas y sustancias químicas industriales como el butanol, el ácido cítrico, entre otros.
La fermentación es el mecanismo más simple y quizás el más antiguo desde el punto de vista
evolutivo, de los procesos de obtención de energía. Se suponen que en las condiciones del
mundo primitivo, donde no existía oxígeno libre, ni los rayos del sol llegaban a su superficie, los
primero organismos solo podían obtener la energía a partir de la contenida en los compuestos
orgánicos. Se puede definir entonces, la fermentación como el proceso metabólico de generación
de ATP.

Desde un punto de vista bioquímico las fermentaciones se caracterizan por ser una suma de
reacciones, al final de las cuales los productos poseen un contenido energético menor que el
inicial. Si analizamos la fermentación a través de la energía de enlace, tendremos que en ella se
producen reordenamientos moleculares en los que se pasa de funciones de mayor contenido a
funciones de menor contenido energético. Así, en la mayoría de las fermentaciones se pasa de
grupos carbonilo e hidroxilo a grupos carboxilo de menor contenido energético.

7. Estudie la ova sobre fermentación, que se encuentra en el entorno de conocimiento de

la unidad uno y describa los problemas que se presentan en el escalado desde el punto

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 de vista de la aireación, la esterilización y el control del proceso de fermentación. Por
qué están importante la estabilidad en un fermentador industrial?

El mantenimiento de un ambiente aséptico y unas condiciones aeróbicas son, probablemente, los

dos puntos de mayor relevancia que hay que considerar. Los fermentadores más ampliamente
utilizados a nivel industrial están provistos de mecanismos de agitación, dispersión y aireación
así como de sistemas para el control de la temperatura, pH y formación de espuma.
En los reactores de tipo "air lift“, el mismo aire inyectado promueve la agitación. Básicamente
consiste en dos cilindros concéntricos y por la base de uno de ellos, por ejemplo el interior, se
inyecta aire. De este modo se genera una circulación de líquido ascendente en el compartimento
interno y descendiente en el externo, lo que favorece el mezclado.

Factores fisicoquímicos que afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales

1.- Oxígeno
2.-Temperatura
3.- pH

Una adecuada agitación de un cultivo microbiano es esencial para la fermentación ya que

produce los siguientes efectos en las tres fases

a. Incrementar la velocidad de transferencia de oxígeno desde las burbujas de aire al medio

líquido; los microorganismos no pueden utilizar oxígeno gaseoso, sino solamente el que se
encuentra en disolución.
b. Aumentar la velocidad de transferencia de oxígeno y nutrientes desde el medio a las células.
Debido al movimiento se evita que las células creen áreas estancadas con bajos niveles de
oxígeno y nutrientes.3 Impedir la formación de agregados celulares.
c. Aumentar la velocidad de transferencia de productos metabólicos de las células al medio.
d. Aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies
de refrigeración del fermentador

8. Determine por medio de un esquema las etapas de un proceso fermentativo a nivel

industrial y explique cada uno de los pasos.

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 PROCESO
FERMENTATIVO

FERMENTACION RECUPERACION
DE PRODUCTO

CATABÓLICO DE SEPARACION
PUEDE SER
OXIDACIÓN CRISTALIZACION DESECACION

ES NATURAL ARTIFICIAL
FLOCULACIÓN Y
FLOTACIÓN
SISTEMA DE
ANAEROBIO FILTRO
SE DA POR CENTRIFUGACION
MEDIO DE

QUE DA COMO
BIORREACTORES CLASES
PRODUCTO
FINAL
COMPUESTO
ORGANICO
TANQUE
QUE PROMUEVEN AGITADO Y AIR
UN MEDIO LIFT
CONTROLADO
PARA ALCANZAR
LA ETAPA OPTIMA

FACTORES QUE
AFECTAN EL
OXIGENO RENDIMIENTO
pH

TEMPERATURA

9. De acuerdo a la ova sobre fermentación Realice un cuadro comparativo donde

diferencie los tipos de fermentación industrial y los mecanismos de obtención de productos
fermentativo.

Los tipos de fermentación industrial se dan por la degradación de alguna especie de

microorganismo dando como resultado productos finales que son diversos como: polisacáridos
está el almidón, celulosa y quitina; disacáridos como la lactosa y maltosa entre otros.

Existen varios tipos de fermentación como:

 Fermentación por excelencia (glucólisis)
 Fermentación a partir de piruvato
 Putrefacción
En función de los flujos de entrada y salida, la operación de un biorreactor puede ser de tres
modos distintos

BATCH O DISCOTINUA ALIMENTADO O FED- COTINUO O

BATCH QUIMIOSTATO
Sistema cerrado Una mejora del proceso sistema abierto
cerrado discontinuo es la
fermentación alimentada
A lo largo de toda la En los procesos alimentados, La solución nutritiva estéril se

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fermentación no se añade nada, los sustratos se añaden añade continuamente al
excepto oxígeno (en forma de escalonadamente a medida que biorreactor y una cantidad
aire), una gente antiespumante y progresa la fermentación equivalente de solución
ácidos o bases para controlar el utilizada de los nutrientes, con
pH. los microorganismos

Cuando se ha alcanzado el nivel a formación de muchos Opera por periodos largos;

deseado de reacción, se vacía el metabolitos secundarios está tiempos muertos bajos.
reactor, se limpia y el proceso se sometida a represión catabólica
repite (efecto glucosa)
En los procesos comerciales la Los elementos críticos de la El medio nutriente es inoculado
fermentación frecuentemente se solución de nutrientes se con el cultivo microbiano al
interrumpe al final de la fase añaden en pequeñas entrar al reactor y los
logarítmica (metabolitos concentraciones al principio de organismos llevan a cabo su
primarios) o antes de que la fermentación y continúan actividad a medida que el
comience la fase de muerte añadiéndose a pequeñas dosis líquido fluye a través del
(metabolitos secundarios) durante la fase de producción. sistema y salen del sistema
junto con el medio.
Dificultad de controlar la útil en procesos en los que el Los organismos pueden
velocidad de crecimiento, crecimiento celular y/o la separarse de la corriente que
excepto variando la composición formación de producto son lleva al producto y reciclarse
del medio o las condiciones de sensibles a la concentración del para inocular el líquido de
proceso sustrato limitante alimentación
Alta demanda de oxígeno puede Se emplea cuando se quieren Alto costo por alta calidad de
generar una limitación debido a evitar fenómenos de inhibición equipos y accesorios.-Requiere
una insuficiente capacidad del por sustrato y se requiere gran reservorio para
reactor para transferir O2 al alcanzar una alta concentración almacenamiento de medio o
medio de biomasa. suministro continuado de
sustrato
Inconvenientes para remover Limitar la demanda de O2 del El cultivo se mantiene con
calor. cultivo coeficientes de crecimiento
constante, crecimiento
balanceado, composición
celular constante.
Tiempos muertos entre procesos Obtener altas concentraciones Generación de biomasa
disminuye la productividad de sustrato evitando el efecto constante como productividad
osmótico y tóxico de nutrientes y conversión.-
Maximizar el crecimiento Volumen de reactor reducido
celular (efectoCrabtree en en comparación a la
levaduras) productividad similar en
proceso por lotes
Se incrementa el riesgo de
contaminación debido a la
amplia operación
Posibilidad de mutación,

12
 incremento de fagos por los
cambios genéticos debido a la
presencia de plasmidios e
incremento de estos

10. En la ova sobre fermentación. Identifique los factores que pueden alterar la producción
de enzimas de interés económico a partir de microorganismos en un proceso industrial,
explique a través de un ejemplo cada uno de ellos.

Existen varios problemas en el control de la temperatura, de la aireación y de la humedad, por

ello se prefieren los cultivos sumergidos a los cultivos en superficie. Los cultivos en medio
líquido, profundos, agitados, son mejor adaptados a los diferentes controles mediante métodos
modernos y reducen los riesgos de contaminación. Además se prestan mejor a las operaciones de
extrapolación y de optimización necesarias para el paso del fermentador piloto de laboratorio al
fermentador industrial.

Los factores que pueden afectar la producción de enzimas a partir de un proceso industrial son:

- La baja especificidad: Aunque en la industria las enzimas sean utilizadas para la hidrólisis de
macromoléculas complejas en las cuales los sitios de acoplamiento con, frecuencia se
desconocen, el efecto global que se busca involucra, generalmente, la utilización de un tipo
preciso de enzima.

- El valor de pH: Este factor tiene una influencia variable según las enzimas; algunas de ellas,
como la proteasa alcalina aún son activas a pH = 10, en tanto que las enzimas fúngicas funcionan
aún a pH = 3.

- El valor de la temperatura: Generalmente, quienes utilizan enzimas se interesan en poder

disponer de enzimas que soporten temperaturas elevadas, ya que estas temperaturas conservan en
parte la esterilidad del medio de fermentación.

 pH
 Temperatura
 Transporte de oxigeno
 Interacciones alostéricas
 Inhibición competitiva
 Inhibición no competitiva
 Inhibición irreversible

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 BIBLIOGRAFIA

BUITRAGO, JOHANA CAROLINA; TENJO, DOLLY GISSELLE.(2007).OBTENCION

DE UN SUSTRATO FERMENTABLE DE ORIGEN VEGETAL Y SU EVALUACION
CON CELULAS LIBRES DE saccharomyces cerevisiae. En:
http://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis285.pdf

PARCKER, JACK. (EDICION 10). BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS.

CAPITULO 2 Y 5.

GARCIA, CALUDIA. INGENIERIA DE FERMENTACIONES. PROCESOS DE

RECUPERACION DE PRODUCTOS EN LA FERMENTACION. EN:
https://prezi.com/lg9hehisgn1b/procesos-de-recuperacion-de-productos-en-la-fermentacion/

MATEO,F, PEDRO. DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA Y GENETICA.

CRECIMIENTO MICROBIANO EN:
http://webcd.usal.es/Web/educativo/micro2/tema07.html

PRINCIPIOS DEL METABOLISMO MICROBIANO EN:

http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Finales_Investigaci
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https://www.academia.edu/2766150/Introducci%C3%B3n_a_la_Microbiolog
%C3%ADa_Predictiva_-_Manual_de_pr%C3%A1cticas_de_laboratorio

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