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Diseño de procesos

químicos y bioquímicos

María Eugenia Calderón
María Eugenia Calderón

BIOPROCESOS ELEMENTOS PARA EL DISEÑO CONCEPTUAL DE PROCESOS

Camino de reacción vs bioproceso

Sustratos
Sustratos
Célula (Metabolismo)
Célula
(Metabolismo)
Calor Productos químicos
Calor
Productos
químicos
Biomasa (células)
Biomasa
(células)

Adaptado de Biochemical Engineering. Blanch. H. p. 164

DISEÑO DE PROCESOS…

Sistema de control. Intercambio energético, red Subsistemas de separación Esterilización Definición de flujos,
Sistema de control.
Intercambio energético, red
Subsistemas de separación
Esterilización
Definición de flujos,
reciclos.
de control. Intercambio energético, red Subsistemas de separación Esterilización Definición de flujos, reciclos.
de control. Intercambio energético, red Subsistemas de separación Esterilización Definición de flujos, reciclos.

Procesos generalmente lentos

Bioproceso - Aspectos generales

Autocatalíticos.

Actividad de biocatalizadores baja en comparación con procesos químicos

Alta dependencia de condiciones ambientales.

Pueden presentar problemas de inhibición por producto o sustrato.

La naturaleza y actividad del biocatalizador tiempo.

Producción está en estrecha relación con las condiciones.

puede modificarse a través del

Entalpías de reacción relativamente bajas.

Temperatura y presión de operación moderadas.

Bioprocesos - Aspectos generales

Objetivos durante la fermentación:

Máximo rendimiento

Máxima productividad

Producto en concentración elevada Limitaciones:

Operación discontinua (en muchos casos).

Inhibición (producto o sustrato): estrategias de alimentación o retiro.

Concentración celular: recirculación, inmovilización.

Transferencia de masa: agitación, dispersión de gas.

Procesos vs bioprocesos Consideraciones preliminares

Manejo de un “ser vivo” Bacterias, hongos, levaduras, algas, virus

“ser vivo” Bacterias, hongos, levaduras, algas, virus Manejo de un “ser vivo” Agitación, aireación
“ser vivo” Bacterias, hongos, levaduras, algas, virus Manejo de un “ser vivo” Agitación, aireación

Manejo de un “ser vivo” Agitación, aireación

Condiciones de ESTERILIDAD

Separación y purificación (cantidades)

Control de proceso

Etapas generales del diseño de bioproceso

Selección (modificación ) del microorganismo

de bioproceso Selección (modificación ) del microorganismo Cultivo en pequeña escala Erlenmeyer Cultivo en biorreactor
de bioproceso Selección (modificación ) del microorganismo Cultivo en pequeña escala Erlenmeyer Cultivo en biorreactor

Cultivo en pequeña escala Erlenmeyer

) del microorganismo Cultivo en pequeña escala Erlenmeyer Cultivo en biorreactor a escala de prueba Cultivo

Cultivo en biorreactor a escala de prueba

escala Erlenmeyer Cultivo en biorreactor a escala de prueba Cultivo a escala piloto Condiciones operación escala

Cultivo a escala piloto

en biorreactor a escala de prueba Cultivo a escala piloto Condiciones operación escala industrial Recuperación y

Condiciones operación escala industrial

de prueba Cultivo a escala piloto Condiciones operación escala industrial Recuperación y purificación de productos

Recuperación y purificación de productos

de prueba Cultivo a escala piloto Condiciones operación escala industrial Recuperación y purificación de productos

Elementos del diseño de bioprocesos

Selección (modificación) del microorganismo

Selección (modificación) del microorganismo

Definición de condiciones de cultivo

Evaluación en cambio de escala

Biorreactor a escala piloto

Recuperación de

producto

Nivel de expresión del producto deseado

Estabilidad de la cepa

Sustrato (nutrientes, oxígeno concentraciones)

Temperatura, pH, agitación

Escala pequeña (erlenmeyer) Cinética (velocidad crecimiento y producción)

Manejo de variables en cambio escala

Efectos de la agitación Continuo vs discontinuo Variables escalado y viabilidad

1 a 2 litros

Control variables

Efectos del cambio de escala en productividad

100-1000 litros

Recuperación a escala laboratorio vs nivel industrial

Etapas generales del bioproceso

PREPARACIÓN DEL INÓCULO

PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO

PREPARACIÓN DEL INÓCULO PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO ESTERILIZACIÓN INOCULACIÓN PRODUCCIÓN EN BIORREACTOR

ESTERILIZACIÓN

INÓCULO PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO ESTERILIZACIÓN INOCULACIÓN PRODUCCIÓN EN BIORREACTOR SEPARACIÓN

INOCULACIÓN

DEL MEDIO DE CULTIVO ESTERILIZACIÓN INOCULACIÓN PRODUCCIÓN EN BIORREACTOR SEPARACIÓN (SÓLIDO- LÍQUIDO)

PRODUCCIÓN EN

BIORREACTOR

ESTERILIZACIÓN INOCULACIÓN PRODUCCIÓN EN BIORREACTOR SEPARACIÓN (SÓLIDO- LÍQUIDO) Intracelular? RUPTURA

SEPARACIÓN (SÓLIDO- LÍQUIDO)

Intracelular?
Intracelular?

RUPTURA CELULAR

(SÓLIDO- LÍQUIDO) Intracelular? RUPTURA CELULAR SEPARACIÓN DE CÉLULA (RESTOS) RECUPERACIÓN Y

SEPARACIÓN DE CÉLULA

(RESTOS)

(SÓLIDO- LÍQUIDO) Intracelular? RUPTURA CELULAR SEPARACIÓN DE CÉLULA (RESTOS) RECUPERACIÓN Y PURIFICACIÓN

RECUPERACIÓN Y PURIFICACIÓN

Elementos de estudio de bioproceso

BIOPROCESO

Elementos de estudio de bioproceso BIOPROCESO REACCIÓN CONTROL, AIREACIÓN, AGITACIÓN SEPARACIÓN -PURIFICACIÓN

REACCIÓN

CONTROL, AIREACIÓN, AGITACIÓN

SEPARACIÓN -PURIFICACIÓN

ESTERILIDAD

“Reacción”

Consideraciones sobre variables en procesos de crecimiento celular

Población de células Heterogeneidad entre células

Reacciones

complejas.

Variedad

componentes

múltiples,

de

y pluralidad

Mecanismos

de

control

interno propios. Variabilidad genética

Adaptabilidad.

Sustrato Productos
Sustrato
Productos
Calor
Calor

Condiciones del medio

Multicomponente

Reacciones en solución

pH y T variables

Cambio en las propiedades

reológicas

Varias fases

Distribución no uniforme en el

espacio.

Adaptado de Ingeniería Bioquímica. Casasblancas, G. p. 84

Camino de reacción vs bioproceso

Implica el consumo de sustratos (suministro de la energía y nutrientes necesarios para la síntesis del material celular y productos

del metabolismo).

En un medio de crecimiento, se produce variedad de productos (y se genera calor y biomasa)

En algunos casos es de interés la producción de biomasa

Los productos de interés pueden ser los metabolitos primarios o secundarios (no asociados directamente con el crecimiento) .

Los productos pueden excretarse (de la célula) y liberados al medio o acumularse intracelularmente.

Biomasa - sustrato

Masa Oxígeno consumido Microorganismo Sutrato
Masa
Oxígeno consumido
Microorganismo
Sutrato

Tiempo

Aspectos generales en procesos de crecimiento

celular

Una forma de evaluar los sistemas es a través del rendimiento de biomasa

Y

x

s

X

S

X es el incremento en la masa celular

S el consumo de sustrato

las unidades se derivan de la forma de medición de la biomasa y del

sustrato.

Aspectos generales en procesos de crecimiento celular

- productos

Otra forma de evaluar los sistemas es a través del rendimiento de productos.

Y

P

s

P

S

P es el producto

S el consumo de sustrato

las unidades se derivan de la forma de medición del producto y del

sustrato

Log X

Camino de reacción, cinética y bioproceso

Biomasa, fases de crecimiento celular (cultivo discontinuo)

Fase estacionaria Fase decreciente Fase de latencia
Fase estacionaria Fase decreciente Fase de latencia

Fase

Fase estacionaria Fase decreciente Fase de latencia
Fase estacionaria Fase decreciente Fase de latencia
Fase estacionaria Fase decreciente Fase de latencia

estacionaria

Fase decreciente

estacionaria Fase decreciente
estacionaria Fase decreciente Fase de latencia
estacionaria Fase decreciente Fase de latencia
estacionaria Fase decreciente Fase de latencia

Fase de latencia

Fase de muerte

Fase de

muerte

Fase de muerte
Fase de muerte

Fase

exponencial

Fase exponencial
Fase exponencial
Fase exponencial

Tiempo

Cinética del crecimiento celular

Durante la fase de crecimiento exponencial y decreciente:

=

r x es la velocidad de producción de biomasa (kg/m 3 s) x es la concentración de células viables (kg/m 3 ) es la velocidad de crecimiento.

ln

= ln

+

lnx 
lnx
lnx  t
t
t

Cinética del crecimiento celular

Fase

Descripción

Velocidad

específica

Adaptación

Adaptación celular al nuevo ambiente

 0

Poco crecimiento

Aceleración

Comienza el crecimiento

max

Crecimiento

El crecimiento alcanza velocidad máxima

 max

Desaceleración

El crecimiento se hace más lento por

 max

agotamiento del sustrato o por formación de

productos inhibidores

Estacionaria

Cesa el crecimiento

 0

Muerte

Las células pierden viabilidad

 0

es la velocidad de crecimiento.

Cinética del crecimiento celular

Efecto de la concentración de sustrato

Sustrato limitante del crecimiento

Cinética de Monod

= +

max : velocidad específica máxima de crecimiento

Ks: constante del sustrato

S concentración del sustrato limitante

 max /2
max /2
 max /2  max S
 max S
 max
S

Ks

Biomasa - productos

(cultivo discontinuo,)

Fase estacionaria Fase decreciente Fase de muerte Fase exponencial Fase de latencia Tiempo Log X
Fase
estacionaria
Fase decreciente
Fase de
muerte
Fase
exponencial
Fase de latencia
Tiempo
Log X

Cinética de formación de produc

Producto asociado al metabolismo energético:

Siendo:

= ( + )

r p velocidad volumétrica de formación de producto,

velocidad específica de formación biomasa (=r x / x

,

r x es la velocidad

volumétrica de formación de biomasa, x concentración biomasa)

Y PX rendimiento de producto a partir de biomasa

(kg prod/kg biomasa s) velocidad específica de formación de producto

m

debido al mantenimiento celular

x la concentración de biomasa

p

Producto no asociado al metabolismo energético: en algunos casos es

directamente proporcional a la biomasa, en otros es compleja y deben

establecerse las ecuaciones empíricas.

Medio de cultivo (incluye sustrato)
Medio de cultivo
(incluye sustrato)

de

cultivo influye en el crecimiento, la

morfología, fisiología.

La composición

del medio

Para el diseño se emplean técnicas

de diseño experimental: crecimiento

máximo o producción máxima del

metabolito de interés.

Camino de reacción vs bioproceso

Requerimientos nutricionales

H 2 O, fuente de energía (fotótrofos, quimiótrofos), carbono (autótrofos, CO 2 , heterótrofos), nitrógeno, vitaminas, sales (P, K, Fe, Mn, Ca )

Condiciones del medio

pH: ajuste y mantenimiento a condiciones del microorganismo que favorecen producción de

T: según sean psicrófilos, mesófilos o termófilos. Disponibilidad de gases: según sean aerobias, facultativas,

anaerobias

Agitación

Tipos de medio Estado: sólido, semisólidos, líquido (suspendido, inmovilizado). Composición: sintéticos, complejos, enriquecidos, selectivos, diferenciales, mantenimiento.

SELECCIÓN MICROORGANISMO

Tipo

Criterios

Selección del microorganismo

productor (célula)

Selección del microorganismo productor (célula) Metabolismo Tipo producto Sustratos Célula
Selección del microorganismo productor (célula) Metabolismo Tipo producto Sustratos Célula

Metabolismo

Tipo producto

productor (célula) Metabolismo Tipo producto Sustratos Célula (Metabolismo) Calor Productos
Sustratos
Sustratos
Célula (Metabolismo)
Célula
(Metabolismo)
Calor Productos químicos
Calor
Productos químicos
Biomasa (células)
Biomasa (células)

Adaptado de Biochemical Engineering. Blanch. H. p. 164

SELECCIÓN MICROORGANISMO INFORMACIÓN NECESARIA

Conocimiento del metabolismo y cinética de crecimiento y de producción .

Sustratos
Sustratos
Célula (Metabolismo)
Célula
(Metabolismo)
Calor Productos químicos Biomasa (células)
Calor
Productos químicos
Biomasa (células)

Adaptado de Biochemical Engineering. Blanch. H. p. 164

Quimiótrofos, aspectos generales:

La energía se obtiene a partir de la oxidación o degradación de sustancias (catabolismo).

La fuente de energía actúa como donador de electrones y requiere reacción de oxidación reducción

completa para que libere energía (aceptor electrones oxígeno, nitrito, nitrato, sulfato entre otros). Muchos emplean como fuente de energía y carbono monosacáridos, se pueden metabolizar por distintas

vías (glucólisis, hexosas monofosfato, etner Doudoroff y fosfocetolasa) para dar origen a precursores (catabolismo) y biosíntesis de unidades estructurales y macromoléculas (anabolismo).

Se producen metabolitos secundarios, no asociados con el crecimiento.

Selección microorganismo medio de cultivo y condiciones

Selección del microorganismo

medio de cultivo y condiciones Selección del microorganismo 1. 2. 3. 4. 5. Estabilidad genética de

1.

2.

3.

4.

5.

Estabilidad genética de la cepa y de fácil conservación por largos periodos sin pérdida

de características.

Cepa libre de contaminantes.

Su velocidad de crecimiento debería ser alta y llevar a cabo el ciclo fermentativo en tiempo corto.

Alto rendimiento del producto deseado

Facilidad de extracción de los productos.

Puede ser obtenido del medio natural por aislamiento

Puede ser obtenido del medio natural por aislamiento Conocimiento del microorganismo Metabolismo y cinética

Conocimiento del microorganismo

Metabolismo y cinética

Definición del medio de cultivo y condiciones del Sustrato: Fuentes de energía y otros requerimientos
Definición
del
medio de cultivo y
condiciones del
Sustrato: Fuentes de energía y otros requerimientos nutricionales;
concentraciones
Requerimientos de oxígeno y mecanismo de aporte
Condiciones de agitación, temperatura, pH
biorreactor
Estrategias de alimentación
de oxígeno y mecanismo de aporte Condiciones de agitación, temperatura, pH biorreactor Estrategias de alimentación

BIORREACCIÓN

TÉCNICA DE FERMENTACIÓN

ESTRATEGIAS DE ALIMENTACIÓN , MEZCLA, AGITACIÓN, AIREACIÓN, SELECCIÓN DEL BIORREACTOR, CONTROL

Fermentaciones en estado sólido:

Viable para el caso de hongos y levaduras, principalmente.

Ventajas

A) Medios de cultivo simples, generalmente subproductos agrícolas lo que los hace económicos.

B) La baja actividad del agua ayuda a evitar contaminaciones.

C) La concentración natural del sustrato permite utilizar reactores más pequeños.

Desventajas

A) Limitada a microorganismos que crecen en bajos contenidos de humedad.

B) La extracción del calor metabólico puede ser un problema.

C) Dificultad en medición de parámetros de la fermentación.

D) Los procesos de transferencia de masa son limitados por la difusión.

E) Muchos aspectos ingenieriles como el diseño de reactores y el escalado están muy poco caracterizados.

F) El tiempo de fermentación es mayor debido a que generalmente se utilizan microorganismos que presentan

bajas velocidades específicas de crecimiento.

BIORREACCIÓN

TÉCNICA DE FERMENTACIÓN

ESTRATEGIAS DE ALIMENTACIÓN , MEZCLA, AGITACIÓN, AIREACIÓN, SELECCIÓN DEL BIORREACTOR, CONTROL

Medio suspendido: el sustrato se encuentra diluido o suspendido en una gran cantidad de agua.

Ventajas:

A)

Los tiempos requeridos para el crecimiento y generación de metabolitos es menor.

B)

Se mejoran los procesos de transferencia de masa y de calor.

C) El control de las condiciones de proceso se facilita, entre otros pH, temperatura, disponibilidad de oxígeno,

entre otros.

D) Facilita la estandarización de procesos y el control de calidad de los productos.

Permite el desarrollo de estrategias de producción en cultivo continuo.

E) Desde el punto de vista ingenieril, existen avances en relación con las estrategias de diseño de reactores y

escalado.

Limitaciones:

a)

Concentración celular

b)

Manejo del flujo

c)

Reutilización de las células

d)

Operación continua

e)

Posibilidad de daño mecánico delas células

BIORREACCIÓN

TÉCNICA DE FERMENTACIÓN

ESTRATEGIAS DE ALIMENTACIÓN , MEZCLA, AGITACIÓN, AIREACIÓN, SELECCIÓN DEL BIORREACTOR, CONTROL

Fermentaciones con cultivo inmovilizado: localización del microorganismo en una región definida del espacio, manteniendo al mismo tiempo una actividad metabólica y viabilidad deseada.

Ventajas:

A) Posibilidad de usar de manera continua el microorganismo, queda retenido en el biorreactor; ingreso de

sustrato y salida de productos continua.

B) Los biorreactores pueden operar con flujos mayores a los correspondientes en cultivos libres.

C) Las células se protegen por daños mecánicos producidos por la agitación.

D) En operación discontinua, la inmovilización facilita la reutilización de la biomasa.

E) Suelen reducirse los efectos de contaminación accidental del proceso.

BIORREACCIÓN

ESTRATEGIAS DE ALIMENTACIÓN , MEZCLA, AGITACIÓN, AIREACIÓN,

SELECCIÓN DEL BIORREACTOR, CONTROL

CARACTERÍSTICA

BIOPROCESO

Transferencia de masa

Inhibición por sustrato

Inhibición por producto

Concentración celular baja:

Tipo de producto vs

inhibición, vs

comportamiento diáuxico

ESTRATEGIAS

Agitación (dispersión gas o mecánica), técnica de fermentación.

Alimentación (lote alimentado) y

Mezcla completa.

Eliminación del producto en la medida en que se forma

Inmovilización, recirculación.

Técnicas de alimentación

Eliminación de productos

Mantenimiento pH, T.

Etapas en la fermentación

BIORREACCIÓN

MEZCLA, AGITACIÓN, AIREACIÓN, SELECCIÓN DEL BIORREACTOR

CARACTERÍSTICA A DEFINIR

Mezcla

Transmisión de calor

Aporte O 2

Estrategias de alimentación, retiro de

FACTORES ASOCIADOS

Viscosidad del caldo de

cultivo

Tipo de mezclador

Necesidades de esterilización

Necesidades de

refrigeración

Aerobio vs. anaerobio

Tipo de producto Metabolismo, inhibición

CONSIDERACIONES

Variación características reológicas en el tiempo. Concentración celular

Morfología, crecimiento filamentos, pellets.

Flexibilidad (P osmótica) Concentración de sustratos. Concentración productos extracelulares.

Tanques agitados con rodetes.

Tanques agitados rodetes, deflectores

Aire insuflado. (aeróbicas) Tener en cuenta control espuma

Mecanismo de esterilización (vapor de caldera) Filtros

Mantenimiento de temperatura (30-37°C, más general) Retiro Q R

Especie microorganismo y fase crecimiento

Fuente de carbono. Necesidad de difusores, coalescencia (sales)

Formación espuma

Etapas en la producción, Formas de operación, Alimentación Separación in situ