DESARROLLO DE Saccharomyces cerevisiae ATCC 4126 POR CULTIVO POR LOTES

I.

MARCO TERICO

Para un cultivo de biomasa ya sea levadura o bacterias se necesita un reactor o fermentador la cual ser la
herramienta principal para la produccin de esta. ste provee todas las condiciones necesarias para el
cultivo, tales como agitacin, regulacin de temperatura, suministro de oxgeno, entradas para adicin de
nutrientes, control del pH, etc. Estas diversas condiciones de crecimiento fueron realizadas por distintos
grupos en el laboratorio, condiciones las cuales se pueden encontrar los efectos de la temperatura, sub
ptima (o ambiente), temperatura crtica (shock trmico), concentraciones de azcares, medios
enriquecidos, limitacin de oxgeno, entre otros.
La evolucin del cultivo en el tiempo, sigue una curva tpica la cual recibe el nombre de curva de
crecimiento en batch. Los sucesos que tienen lugar durante la misma pueden separarse en cuatro fases
perfectamente diferenciables. En primer lugar existe una fase donde prcticamente no hay divisin celular
pero s aumento de la masa individual de los microorganismos (fase lag o fase de retardo). Le sigue una
etapa donde el crecimiento ocurre a velocidad especfica () mxima y constante = m (fase exponencial).
Al final de esta fase se alcanza la mxima concentracin microbiana. Posteriormente hay un rpido
perodo de desaceleracin donde 0 y se entra en la fase estacionaria la cual es causada por
agotamiento de algn nutriente (el sustrato limitante) o bien por acumulacin de inhibidores. Durante esta
fase la concentracin microbiana (o de biomasa) permanece constante. Finalmente se llega a una ltima
etapa donde la concentracin de biomasa disminuye por autolisis o como consecuencia del metabolismo
endgeno (fase de decaimiento).
La duracin de cada una de estas fases es funcin del microorganismo en estudio y de la
composicin del medio de cultivo. En particular la fase lag depende adems de la fase de crecimiento en
que se encuentran las clulas en el momento de ser sembradas y de la composicin del medio de cultivo
en que fueron crecidas. Si ste es igual a la composicin del medio en que se van a sembrar y las clulas
estn en fase exponencial, la duracin de la fase lag, en general se acorta y puede llegar a desaparecer, lo
cual es deseable ya que constituye tiempo perdido.

II.
-

OBJETIVOS
Disear y realizar una experiencia de cultivo celular por lotes empleando una cepa de S.
cerevisiae ATCC 4126.

III.

PROCEDIMIENTO

1.
2.
3.
4.
5.
6.

1.
2.

Actividades
Diseo del medio de cultivo
Activacin celular y desarrollo del inculo
Determinacin de la cintica de crecimiento de la biomasa
Determinacin de la cintica de consumo de la fuente de carbono
Determinacin del umax y de Y x/s en clulas.
Evaluar el valor del pH durante toda la cintica de cultivo.
CONSIDERACIONES
Para el diseo:
Usar el volumen de medio entre 10% y 20% del volumen del matraz.
Usar sacarosa, fructuosa o glucosa con una concentracin de 10 g/l respectivamente cmo fuente

1.
2.
3.
4.

de carbono
CONSIDERACIONES GENERALES
Preparacin del medio de mantencin (Agar, nutriente y esterilizacin)
El resembrado de clulas en medio de mantencin
Preparacin y esterilizacin de medio para inoculacin con asa bacteriolgica.
Diseo y preparacin de medio de activacin y fermentacin para cintica de crecimiento

5.
6.
7.

microbiano.
Esterilizacin de materiales de vidrio necesarios.
Determinacin de curvas de calibracin por tcnicas analticas.
Inoculacin de medios y seguimiento de cintica de crecimiento microbiano.

Tomando en cuenta las consideraciones ya mencionadas anteriormente se procedi a utilizar un

matraz de 1 L en dnde se realizar nuestra cintica de crecimiento, siendo un volumen
aceptable de 150 ml. de medio.

Diseo de medio de mantencin

Nutriente
Extracto de levadura
Peptona
Glucosa
Agar

Diseo de medio de Activacin

Nutriente
Sacarosa
Extracto de levadura
Extracto de malta
Solucin de sales

Sales
CaCl2. 2H20
ZnSO4. 7H20

Concentracin (g/l)
10
20
20
20

Concentracin
10 g/l
3 g/l
3 g/l
5 ml/l

Composicin de la solucin de sales 100 veces concentrado

Concentracin (g/l)
1.2
0.11

FeSO4. 7H20
CuSO4. 5H20
CoCl2. 6H20
MoO3
MgCl2. 6H20
NaCl

0.06
0.05
0.01
0.005
27 mg/l
0.028

Consideraciones finales
Para una Xf=1.8 g/l
Umax=0.37 h^-1
Temperatura = 35C
Agitacin: 200 rpm

Diseo del medio de fermentacin

Fuente
C
N
Mg
K
P

Nutriente
Sacarosa
(NH4)2SO4
MgSO4. 7H20
KH2PO4
HH2PO4

% MO
45
9
0.4
0.5
2

% Elemento
42.1
21.201
9.86
28.92
22.26

Y x/s
0.561
2.355
24.65
57.84
11.13

So (g)
3.2
0.994
0.095
0.0404
0.21