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TRABAJO INDIVIDUAL 1

BIOTECNOLOGA
PARTE A.

PRESENTADO POR:

SANDRA M. RUEDA VELASCO


CDIGO: 63497339

PRESENTADO A:

FEDRA LORENA ORTIZ


DIRECTOR DE GRUPO

GRUPO: 305689_4

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD.


INGENIERIA DE ALIMENTOS
BIOTECNOLOGIA
MARZO 2 2016
I. Fundamentacin cientfica.

Cuestionario.

1. Realice el laboratorio virtual N. 1(Crecimiento microbiano y responda las


preguntas del cuestionario del laboratorio).
a) Qu fases de crecimiento puede diferenciar en la grfica?

Fase de Latencia
Fase de Aceleracin Positiva
Fase Exponencial
Fase Aceleracin Negativa
Fase Estacionaria

b) Explique el comportamiento de la grfica, desde el punto de vista metablico

Antes de que la clula se divida deben ocurrir muchas reacciones qumicas denominadas
metabolismo, estas reacciones metablicas se dividen en dos: reacciones catablicas que son
aquellas que rompen molculas para liberar energa y reacciones anablicas que son las que
almacenan energa.
La mayora de los microorganismos son capaces de sintetizar algunos compuestos que necesitan;
mientras que en algunos casos es necesario suministrarlos en el medio de cultivo.
Las vitaminas son factores necesarios para el crecimiento, muchas de estas funcionan formando
parte de coenzimas. La mayor parte de los microorganismos son capaces de sintetizar todos los
componentes de sus coenzimas, sin embargo muchos no son capaces y necesitan que les sean
suministrados en forma de vitaminas. Las principales vitaminas que requieren los
microorganismos son tiamina, biotina, piridoxina.
Los medios de cultivos son soluciones nutritivas que se usan para dar los micro y macro
nutrientes que ellos necesitan; estos permiten el buen crecimiento del microorganismo.

En la saccharomyces cerevisiae del estudio del primer laboratorio se observa que va creciendo su
metabolismo para produccin de etanol. A medida que va creciendo el microorganismo el etanol
va inhibiendo el crecimiento causando daos en el ADN mitocondrial de las clulas e inactiva
algunas de las enzimas como la hexoquinasa y la dehidrogenasa. Cuando la saccharomyces
cerevisiae crece en presencia de etanol incrementa la cantidad de cidos grasos insaturados como
una alternativa ante el estrs que se genera por la toxicidad del etanol.
En su etapa de crecimiento ella puede llevar a cabo un metabolismo respiratorio o fermentativo
segn la concentracin de oxgeno. Cuando esta se encuentra en condiciones anaerobiosis el
crecimiento celular es lento ocasionando una produccin de etanol alta.

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c) En el grfico es posible observar todas las fases de crecimiento? Explique su
respuesta

No, porque en el grfico solo se muestra la fase estacionaria, no se evidencia una fase de
Muerte.

d) Investigue otros mtodos con los cuales se pueda determinar la curva de crecimiento

Determinacin en continuo:
Hay administracin constante del medio de cultivo
El sustrato no es limitante
Depende de la tasa de dilucin

e) Cul es la aplicacin industrial de conocer la curva de crecimiento de un


microorganismo?

El conocimiento de la evolucin del cultivo a inocular o utilizarnos permite observar cmo va


desarrollndose el microorganismo, como va consumiendo el sustrato, como se va acumulando el
producto a partir de la fermentacin, cunto tiempo se demora en desarrollar el producto y
cunto tiempo se demora el microorganismo en morir. Teniendo estos datos la industria puede
realizar una proyeccin de la formulacin para la realizacin de los productos.

f) Que entiende por absorbancia

La absorbancia es la relacin directa de la cantidad de energa luminosa despus de pasar por un


material entre la cantidad de la energa luminosa antes de pasar, es decir: la intensidad de la luz
con una longitud de onda especfica y que es pasada por una muestra y es la intensidad de la luz
antes de que entre a la muestra.

g) Por qu es necesario utilizar una solucin blanco, cada vez que se hace una nueva
lectura en el espectrofotmetro?

Calibrarlo, que tenga un punto cero para poder hacer las lecturas.

h) Qu es lo que mide realmente el espectrofotmetro y como se relaciona esto con las


fases de crecimiento microbiano?

El espectrofotmetro mide la intensidad de luz y se relaciona con las fases del crecimiento
microbiano en cuanto a que el valor de la absorbancia se ve incrementado por el efecto pantalla
que logran hacer los microorganismos y la solucin.

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2. Cul es la diferencia entre la constante de la velocidad de crecimiento (k) de un
organismo y su tiempo de generacin (g).

La constante de velocidad es la tasa especfica de consumo del sustrato; es decir es la velocidad


con la que el organismo consume el sustrato. Cuan mayor es la tasa de consumo mayor ser la
constante de velocidad de crecimiento. Asimismo, cuan mayor sea el rendimiento del substrato
consumido, tambin mayor ser la tasa de crecimiento.

El crecimiento de los microorganismos es una parte fundamental de la mayora de los procesos


de fermentacin.
Cuando un organismo es inoculado en un volumen de medio dado, el cultivo pasa por una serie
de fases. Despus que se hace la inoculacin, existe una fase llamada latencia, en la cual el
organismo se adapta a las condiciones del medio; tras un cierto perodo de tiempo en el que la
velocidad de crecimiento de las clulas va en aumento gradualmente, las clulas crecen a una
velocidad constante mxima; esta fase se denomina exponencial o logartmica. A medida que el
crecimiento contina, los nutrientes se van agotando y los productos van siendo excretados por el
organismo, la velocidad de crecimiento disminuye y finalmente el crecimiento cesa, debido
frecuentemente al agotamiento de un nutriente esencial o a la acumulacin de algn producto
txico; esta fase se denomina estacionaria.

El tiempo de generacin de un organismo es el cambio en el nmero de las clulas por unidad de


tiempo, o bien sea es el tiempo requerido para duplicar una poblacin de clulas, en las cuales a
partir de una clula se forman dos clulas.

3. De acuerdo al modelo matemtico de crecimiento microbiano. Calcule el valor de g


y de k en un experimento de crecimiento en el que se inocul un medio con 10 x 10 6
clulas/ml de Escherichia colli y que despus de un perodo de latencia de 1 hora,
creci exponencialmente durante 15 horas alcanzando una poblacin de 15,4 x 10 9
clulas/ml.

logN logNo
N=No . 2n es igual n=
log2

9 6
log 15,410 log 1010
n=
log2
n=30,08 generaciones

t 15
G= = =1,5 h
n 30,08

4
ln 2 0,4986
m= = =1,3862
td 1,5

4. De acuerdo al captulo sobre metabolismo microbiano.Realice un cuadro


comparativo de las rutas metablicas utilizadas por los microorganismos,
diferencie de acuerdo al sustrato utilizado, mecanismo de obtencin de energa y
productos obtenidos.

FERMENTACIN RESPIRACIN
Sustrato utilizado Molculas orgnicas. Electrones tanto de
sustratos fermentables compuestos orgnicos como
simple (como azcar, por inorgnicos (oxidndose).
ejemplo) oxigeno molecular
Mecanismo de obtencin El sustrato da lugar a una Los electrones son
de energa serie de compuestos, unos transferidos a travs de una
ms oxidados y otros ms cadena transportadora de
reducidos; en el proceso electrones al final de la cual
fermentativo mantiene un existe un aceptor exgeno
estricto balance O-R. El oxidado (A), que se reduce.
nivel de oxidacin Si el aceptor final es el O2,
promedio de los productos hablamos de respiracin
finales es muy cercano al aerobia; Si el aceptor final
del sustrato. De ah que la es distinto del O2 (nitrato,
generacin de ATP asociada sulfato, etc.), respiracin
a la fermentacin se anaerobia.
denomina fosforilacin a la transferencia se da
nivel de sustrato ordenadamente, en la
El proceso ocurre en direccin de mayor
ausencia de oxigeno potencial redox positivo,
Productos obtenidos Lactato energa libre que se va a
Etanol, CO2 traducir en un potencial
Succinato, acetato, electroqumico de protones,
formiato, H2 cuya disipacin a travs de
Butilenglicol
ATP-asas de membrana
Acetona
Butirato origina ATP, conocindose
Butanol este proceso como
fosforilacin oxidativa

A este conjunto de procesos, se le conoce como metabolismo y consiste de un gran nmero de


reacciones qumicas destinadas a transformar las molculas nutritivas en elementos que

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posteriormente sern utilizados para la sntesis de los componentes estructurales; como pueden
ser las protenas. Otra parte importante del metabolismo es la de transformar y conservar la
energa que est contenida en una reaccin qumica en algn proceso que requiera de energa,
como puede ser el trabajo o el movimiento.
Metabolismo bacteriano.
El metabolismo de la bacteria est adaptado para el crecimiento veloz y transcurre entre
10 y 100 veces ms rpido que en las clulas humanas.
La bacteria tiene mayor versatilidad en cuanto al tipo de nutrientes que puede utilizar
para obtener energa.
La bacteria tiene mayor versatilidad en la utilizacin de oxidantes y no estn limitadas al
slo uso del O2.
Existe una gran diversidad de requerimiento nutricional entre las bacterias debido a que
ella no poseen todos los caminos biosintticos.

TIPOS DE METABOLISMO

Segn la forma en la que el organismo obtiene el carbono para la construccin de la


masa celular:
Auttrofo: El carbono se obtiene del dixido de carbono (CO2)
Hetertrofo: El carbono se obtiene de compuestos orgnicos (glucosa)
Segn la forma en la que el organismo obtiene los equivalentes reductores para la
conservacin de la energa o en las reacciones biosintticas.
Litotrofo: Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos inorgnicos.
Organotrofo: Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos orgnicos.
Segn la forma en la que obtiene la energa para vivir:
Quimiotrofo: La energa se obtiene de compuestos qumicos externos.
Fototrofo: La energa se obtiene de la luz.

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Catabolismo y Anabolismo
Catabolismo: Degradacin enzimtica de macromolculas, lpidos, hidratos de carbono y
protenas.

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Rutas Metabolicas

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5. Compare y seale las diferencias entre metabolitos secundarios y primarios, y d
un ejemplo de cada uno de ellos. Incluya al menos dos explicaciones de las bases
moleculares por las que algunos metabolitos son secundarios, envs de primarios.

Metabolitos primarios Metabolitos secundarios


Productos del metabolismo general Productos del metabolismo especial
Ampliamente distribu dos en plantas y Biosintetizados a partir del metabolismo
microorganismos primario
Indispensables para la vida Distribucin restringida a ciertas plantas,
microorganismos
Aminocidos de protenas, Distribucin taxonmica restringida (a
monosacridos, lpidos, cidos derivados veces caracterstico de un gnero dado o
del ciclo de los cidos tricarboxlicos, de una especie)
glcosidos, etc.
No indispensables para la vida
Alcaloides, terpenos, flavonoides,
esteroides, cumarinas, etc.

Metabolitos primarios: Se producen en el curso de las reacciones metablicas anablicas o


catablicas que tiene lugar durante las fases decrecimiento y que contribuyen a la produccin de
biomasa o energa por las clulas. Se producen principalmente en la trofofase o fase de
crecimiento.
Tener una funcin metablica directa
Ser compuestos esenciales intermedios en las vas catablica y anablica
Encontrarse en todas las plantas
Tratarse de carbohidratos, lpidos, protenas, cidos nucleicos o clorofilas.

Metabolitos secundarios Se producen por rutas anablicas especializadas cuando no hay


crecimiento. Pueden ser una estrategia para mantener en funcionamiento los sistemas metablisis
cuando no hay crecimiento; tambin sirven como indicativos de diferenciacin y se producen
durante la idiofase de los cultivos. Entre sus caractersticas comunes; tienden a producirse
cuando el crecimiento est limitado (cultivo continuo); se forman por enzimas especficos a
partir del metabolismo central; no son esenciales para el crecimiento o para el metabolismo
central y son especficos para cada especie, y a veces, de cada cepa. Ejemplo:
Primario: Formacin de alcohol a partir de azcar por la levadura
Secundario: Formacin de penicilina por el hongo penicillium chrysogenum

6. De acuerdo al mdulo identifique a partir de ejemplos la diferencia entre el trmino


fermentacin en Bioqumica y el trmino fermentacin en la Biotecnologa.

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La biotecnologa microbiana o como se llamaba anteriormente microbiologa industrial se refiere
a los procesos donde participan los microorganismos para la obtencin de productos o
metabolitos de inters humano. La microbiologa industrial comenz con los procesos de
fermentacin alcohlica por ej. La fermentacin del vino y de la cerveza. Ms tarde se
desarrollaron los procesos microbianos para la produccin de agentes farmacuticos como los
antibiticos, la produccin de aditivos alimentarios como los aminos cidos, para la produccin
de enzimas y sustancias qumicas industriales como el butanol, el cido ctrico, entre otros.
La fermentacin es el mecanismo ms simple y quizs el ms antiguo desde el punto de vista
evolutivo, de los procesos de obtencin de energa. Se suponen que en las condiciones del mundo
primitivo, donde no exista oxgeno libre, ni los rayos del sol llegaban a su superficie, los
primero organismos solo podan obtener la energa a partir de la contenida en los compuestos
orgnicos. Se puede definir entonces, la fermentacin como el proceso metablico de generacin
de ATP.

Desde un punto de vista bioqumico las fermentaciones se caracterizan por ser una suma de
reacciones, al final de las cuales los productos poseen un contenido energtico menor que el
inicial. Si analizamos la fermentacin a travs de la energa de enlace, tendremos que en ella se
producen reordenamientos moleculares en los que se pasa de funciones de mayor contenido a
funciones de menor contenido energtico. As, en la mayora de las fermentaciones se pasa de
grupos carbonilo e hidroxilo a grupos carboxilo de menor contenido energtico.

7. Estudie la ova sobre fermentacin, que se encuentra en el entorno de conocimiento de


la unidad uno y describa los problemas que se presentan en el escalado desde el punto
de vista de la aireacin, la esterilizacin y el control del proceso de fermentacin. Por
qu estn importante la estabilidad en un fermentador industrial?

El mantenimiento de un ambiente asptico y unas condiciones aerbicas son, probablemente, los


dos puntos de mayor relevancia que hay que considerar. Los fermentadores ms ampliamente
utilizados a nivel industrial estn provistos de mecanismos de agitacin, dispersin y aireacin
as como de sistemas para el control de la temperatura, pH y formacin de espuma.
En los reactores de tipo "air lift, el mismo aire inyectado promueve la agitacin. Bsicamente
consiste en dos cilindros concntricos y por la base de uno de ellos, por ejemplo el interior, se
inyecta aire. De este modo se genera una circulacin de lquido ascendente en el compartimento
interno y descendiente en el externo, lo que favorece el mezclado.

Factores fisicoqumicos que afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales


1.- Oxgeno
2.-Temperatura
3.- pH

Una adecuada agitacin de un cultivo microbiano es esencial para la fermentacin ya que


produce los siguientes efectos en las tres fases

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a. Incrementar la velocidad de transferencia de oxgeno desde las burbujas de aire al medio
lquido; los microorganismos no pueden utilizar oxgeno gaseoso, sino solamente el que se
encuentra en disolucin.
b. Aumentar la velocidad de transferencia de oxgeno y nutrientes desde el medio a las clulas.
Debido al movimiento se evita que las clulas creen reas estancadas con bajos niveles de
oxgeno y nutrientes.3 Impedir la formacin de agregados celulares.
c. Aumentar la velocidad de transferencia de productos metablicos de las clulas al medio.
d. Aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies
de refrigeracin del fermentador

8. Determine por medio de un esquema las etapas de un proceso fermentativo a nivel


industrial y explique cada uno de los pasos.

9. De acuerdo a la ova sobre fermentacin Realice un cuadro comparativo donde


diferencie los tipos de fermentacin industrial y los mecanismos de obtencin de productos
fermentativo.

Los tipos de fermentacin industrial se dan por la degradacin de alguna especie de


microorganismo dando como resultado productos finales que son diversos como: polisacridos
est el almidn, celulosa y quitina; disacridos como la lactosa y maltosa entre otros.

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Existen varios tipos de fermentacin como:
Fermentacin por excelencia (gluclisis)
Fermentacin a partir de piruvato
Putrefaccin
En funcin de los flujos de entrada y salida, la operacin de un biorreactor puede ser de tres
modos distintos

BATCH O DISCOTINUA ALIMENTADO O FED- COTINUO O


BATCH QUIMIOSTATO
Sistema cerrado Una mejora del proceso sistema abierto
cerrado discontinuo es la
fermentacin alimentada
A lo largo de toda la En los procesos alimentados, La solucin nutritiva estril se
fermentacin no se aade nada, los sustratos se aaden aade continuamente al
excepto oxgeno (en forma de escalonadamente a medida que biorreactor y una cantidad
aire), una gente antiespumante y progresa la fermentacin equivalente de solucin
cidos o bases para controlar el utilizada de los nutrientes, con
pH. los microorganismos

Cuando se ha alcanzado el nivel a formacin de muchos Opera por periodos largos;


deseado de reaccin, se vaca el metabolitos secundarios est tiempos muertos bajos.
reactor, se limpia y el proceso se sometida a represin catablica
repite (efecto glucosa)
En los procesos comerciales la Los elementos crticos de la El medio nutriente es inoculado
fermentacin frecuentemente se solucin de nutrientes se con el cultivo microbiano al
interrumpe al final de la fase aaden en pequeas entrar al reactor y los
logartmica (metabolitos concentraciones al principio de organismos llevan a cabo su
primarios) o antes de que la fermentacin y continan actividad a medida que el
comience la fase de muerte aadindose a pequeas dosis lquido fluye a travs del
(metabolitos secundarios) durante la fase de produccin. sistema y salen del sistema
junto con el medio.
Dificultad de controlar la til en procesos en los que el Los organismos pueden
velocidad de crecimiento, crecimiento celular y/o la separarse de la corriente que
excepto variando la composicin formacin de producto son lleva al producto y reciclarse
del medio o las condiciones de sensibles a la concentracin del para inocular el lquido de
proceso sustrato limitante alimentacin
Alta demanda de oxgeno puede Se emplea cuando se quieren Alto costo por alta calidad de
generar una limitacin debido a evitar fenmenos de inhibicin equipos y accesorios.-Requiere
una insuficiente capacidad del por sustrato y se requiere gran reservorio para

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reactor para transferir O2 al alcanzar una alta concentracin almacenamiento de medio o
medio de biomasa. suministro continuado de
sustrato
Inconvenientes para remover Limitar la demanda de O2 del El cultivo se mantiene con
calor. cultivo coeficientes de crecimiento
constante, crecimiento
balanceado, composicin
celular constante.
Tiempos muertos entre procesos Obtener altas concentraciones Generacin de biomasa
disminuye la productividad de sustrato evitando el efecto constante como productividad
osmtico y txico de nutrientes y conversin.-
Maximizar el crecimiento Volumen de reactor reducido
celular (efectoCrabtree en en comparacin a la
levaduras) productividad similar en
proceso por lotes
Se incrementa el riesgo de
contaminacin debido a la
amplia operacin
Posibilidad de mutacin,
incremento de fagos por los
cambios genticos debido a la
presencia de plasmidios e
incremento de estos

10. En la ova sobre fermentacin. Identifique los factores que pueden alterar la produccin
de enzimas de inters econmico a partir de microorganismos en un proceso industrial,
explique a travs de un ejemplo cada uno de ellos.

Existen varios problemas en el control de la temperatura, de la aireacin y de la humedad, por


ello se prefieren los cultivos sumergidos a los cultivos en superficie. Los cultivos en medio
lquido, profundos, agitados, son mejor adaptados a los diferentes controles mediante mtodos
modernos y reducen los riesgos de contaminacin. Adems se prestan mejor a las operaciones de
extrapolacin y de optimizacin necesarias para el paso del fermentador piloto de laboratorio al
fermentador industrial.

Los factores que pueden afectar la produccin de enzimas a partir de un proceso industrial son:

- La baja especificidad: Aunque en la industria las enzimas sean utilizadas para la hidrlisis de
macromolculas complejas en las cuales los sitios de acoplamiento con, frecuencia se

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desconocen, el efecto global que se busca involucra, generalmente, la utilizacin de un tipo
preciso de enzima.

- El valor de pH: Este factor tiene una influencia variable segn las enzimas; algunas de ellas,
como la proteasa alcalina an son activas a pH = 10, en tanto que las enzimas fngicas funcionan
an a pH = 3.

- El valor de la temperatura: Generalmente, quienes utilizan enzimas se interesan en poder


disponer de enzimas que soporten temperaturas elevadas, ya que estas temperaturas conservan en
parte la esterilidad del medio de fermentacin.

pH
Temperatura
Transporte de oxigeno
Interacciones alostricas
Inhibicin competitiva
Inhibicin no competitiva
Inhibicin irreversible

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BIBLIOGRAFIA

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DE UN SUSTRATO FERMENTABLE DE ORIGEN VEGETAL Y SU EVALUACION
CON CELULAS LIBRES DE saccharomyces cerevisiae. En:
http://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis285.pdf

PARCKER, JACK. (EDICION 10). BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS.


CAPITULO 2 Y 5.

GARCIA, CALUDIA. INGENIERIA DE FERMENTACIONES. PROCESOS DE


RECUPERACION DE PRODUCTOS EN LA FERMENTACION. EN:
https://prezi.com/lg9hehisgn1b/procesos-de-recuperacion-de-productos-en-la-fermentacion/

MATEO,F, PEDRO. DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA Y GENETICA.


CRECIMIENTO MICROBIANO EN:
http://webcd.usal.es/Web/educativo/micro2/tema07.html

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http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Finales_Investigaci
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https://www.academia.edu/2766150/Introducci%C3%B3n_a_la_Microbiolog
%C3%ADa_Predictiva_-_Manual_de_pr%C3%A1cticas_de_laboratorio

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