INTRODUCCIÓN

La creatinina es un compuesto biológico y como muchos compuestos biológicos este es

incoloro por lo tanto no podemos obtener un análisis espectrofotométrico. Por esta razón
usamos unas reacciones para obtener un compuesto coloreado para así poder hacer el análisis
espectrofotométrico respectivo.

La creatinina es un compuesto orgánico generado a partir de la degradación de la creatina(que

es un nutriente útil para los músculos). Se trata de un producto de desecho del metabolismo
normal de los músculos que habitualmente produce el cuerpo en una tasa muy constante
(dependiendo de la masa de los músculos), y que normalmente filtran los riñones excretándola
en la orina.

EL compuesto que utilizaremos en la reacción es el picrato alcalino, compuesto que resulta de

la reacción de ácido pícrico e hidróxido de sodio. Este compuesto tiene color amarillo y es muy
fácil de oxidarse. Este será el reactivo en exceso en la reacción con la solución de creatinina,
luego de la desproteinización, cambiando su color de incoloro a un color anaranjado
haciéndolo más apropiado para el análisis espectrofotométrico.
Resultados:

Cuadro 1

Tubo Reactivo Tubo Tubo Tubo

Blanco Estándar Muestra
Sol Estándar de creatinina - 3mL -
Muestra clarificada (filtrado) - - 3mL
H2O destilada 3mL
Sol. de Picrato alcalino 1:1 1.5mL 1.5mL 1.5mL
Agitar y reposar 10min

Muestra Absorbancia Absorbancia Absorbancia

(Tubo blanco) (Tubo estándar) (Tubo muestra)
Mesa1 0.068 0.249 0.15
Mesa 2 0.039 0.202 0.261
Mesa 3 0.068 0.228 0.126
Mesa 4 0.055 0.206 0.123
Mesa 5 0.084 0.157 0.166
Mesa 6 0.065 0.186 0.115
Ῡ=0.067 Ῡ=0.221 Ῡ=0.13

Cuadro 2

Cálculos:
 Cálculos de los gramos de creatinina en dé una solución stock 100mg%
(Se halla la cantidad de creatinina para una alícuota de 0.6 ml)

100mg creatinina-------- 100mL

0.6mg = X gr creatinina---------- 0.6mL

En la alícuota hay 0.6 mg de creatinina, esta se disolverá en una fiola con agua para obtener
un volumen de 100ml que será la solución estándar y de esta es tomara otra alícuota que se
utilizara en el tubo estándar.

0.6mg --------- 100mL (Sol. St)

1.8 x 10-2mg = x -------- 3mL
Cantidad de creatinina en el tubo estándar= 1.8 x 10-2 mg
 Calculo de la concentración de creatinina en el tubo estándar.

1.8 x 10-2 mg --------- 4.5mL

0.4x 10-2 mg = x --------- 1mL (Sol. St)
𝐶𝑆𝑇 = 0.4x 10-2 mg/ml
  Calculo de la absorbancia
Cuadro 3

Absorbancia Tubo blanco Tubo estándar Tubo muestra

Picrato alcalino 0.067 0.067 0.067
Muestra(creatinina) - - 0.063
Creatina estándar - 0.154 -
Total 0.067 0.221 0.13

 Calculo de la concentración de creatinina de la muestra estándar

0.4x 10−2 𝑥 𝟎. 𝟎𝟔𝟑

𝑪𝑴 =
𝟎. 𝟏𝟓𝟒
𝑪𝑴 = 0.1636 𝑚𝑔/𝑚𝑙

 Calculo de creatinina en sangre

0.1636𝑥 10−2 𝑚𝑔---------1mL

0.7362𝑥 10−2 𝑚𝑔 = x --------- 4.5mL --------- 3mL (filtrado)

0.7362𝑥 10−2 𝑚𝑔 --------- 3mL (filtrado)

4.908𝑥 10−2 𝑚𝑔 = x --------- 20mL (filtrado) --------- 2mL (sangre)

4.908𝑥 10−2 𝑚𝑔 --------- 2mL (sangre)

𝑥 = 245.4𝑥 10−2 𝑚𝑔--------- 100mL (sangre)

Discusiones:
Existen varios reactivos que reaccionan con los aminoácidos de manera específica,
confiriéndoles características útiles para su detección, estos reactivos provocan la
aparición de derivados coloreados. Según A. Gómez (2007) el Ácido Pícrico como
oxidante, en la actualidad posee un interés exclusivamente histórico. En las tecnicas que
recurrían a este procedimiento se utilizaba al acido pícrico en solución alcalina. Este
método, que implica la reducción del ácido pícrico a una sal, de color rojo, de ácido
picranico que sirve para determinar la presencia de creatinina. La mayoría de reactivos
que se utilizan para la determinación de aminoácidos puede provocar la aparición de
interferencias debido a la presencia de proteínas ,que también pueden reaccionar con
ellos ,así pues para una correcta determinación de aminoácidos se debe de realizar una
previa desproteinizacion en el experimento de determinación de creatinina en sangre
se usó acido para desnaturalizar y se conoce como el método Folin Wu”,en el proceso
de preparación de la muestra de sangre se agregara agua destilada (14 ml ),2 ml de
sangre ,NaCuO2 (2ml) y H2SO4 (2ml) el orden es importante ya que si primero se coloca
el ácido se realizara una completa desnaturalización de todos los componentes de la
sangre y el experimento fallarla; esto ocurrió con las muestras de sangre de la mesa 2 y
 5 que realizaron la preparación en el orden incorrecto, por tal razón los datos tomados
por esas mesas no se incluyen en los datos experimentales.

La creatinina se forma a partir de arginina y glicina. Es un producto de desecho que se

forma en el músculo por la degradación de la fosfocreatina, en cantidad proporcional a
la masa y función muscular. La cantidad de creatina que se obtubo de la sangre de
muestra vacuna fue de 2.45 mg/dl.

Creatinina en sangre humana

La creatinina es un subproducto químico de la creatina, esta es un químico producido

por el cuerpo y que se utiliza para proporcionarle energía principalmente a los músculos.
Si la función renal es anormal, los niveles de creatinina se incrementan en la sangre,
debido a que se elimina menos creatinina a través de la orina. Según Israni y Kasiske
(2013) los valores normales un resultado normal es de 0.7 a 1.3 mg/dL para los hombres
y de 0.6 a 1.1 mg/dL para las mujeres. Las mujeres generalmente tienen niveles de
creatinina más bajos que los hombres, debido a que ellas normalmente tienen menor
masa muscular.Los niveles de creatinina varían de acuerdo con la talla y la masa
muscular de una persona.Los ejemplos de arriba son mediciones comunes para los
resultados de estos exámenes. Los rangos de los valores normales pueden variar
ligeramente entre diferentes laboratorios. Algunos laboratorios utilizan diferentes
mediciones o analizan muestras diferentes. (Israni y Kasiske, 2013)

Significado de los resultados anormales o superiores pueden deberse a:

 Obstrucción de las vías urinarias.

 Problemas renales, como insuficiencia o daño en el riñón, infección o reducción
del flujo de sangre.
 Pérdida de líquido corporal (deshidratación).
 Problemas musculares, como descomposición de las fibras musculares
(rabdomiólisis).
 Problemas durante el embarazo, como convulsiones, eclampsia o hipertensión
arterial causada por el embarazo (preeclampsia).

Además, si se encontrasen niveles inferiores a lo normal pueden deberse a:

 Afecciones que comprometen y los nervios que los controlan (miastenia grave).
 Problemas musculares, pérdida muscular avanzada (distrofia muscular).
 Existen muchas otras afecciones para las cuales se puede ordenar el examen,
como hipertensión arterial, diabetes o sobredosis de medicamentos (Israni y
Kasiske, 2013)

Creatinina en sangre de vaca

Los valores bioquímicos de referencia mencionados en Radostits et al. (2000) establecen un

rango de 1–2 mg/dL para ganado vacuno. La concentración de creatinina estimada es de 2,45
mg/dL para la muestra de sangre.
Las causas más probables del aumento de concentración son la glomerulopatias que se deben a
las distintas afecciones que sufre el riñon; entre otras causas, la miositis aguda y el traumatismo
muscular pueden aumentar los valores de creatinina.

Este compuesto es la forma de excreción de compuestos de creatina. La creatina es fosforilada

en el músculo, formando un reservorio de alta energía inmediatamente disponible. Dado que la
creatina está contenida en el músculo estriado, la cantidad de creatinina liberada está vinculada
a la masa muscular. Niveles altos en sangre (cerca del más del doble de los valores de
referencias) son indicativos de nefritis (Doornenbal et al, 1988).

Conclusiones

La obtención de la concentración de la creatinina se obtuvo por el método del factor de

calibración, el cual nos permite comparar dos solución, dada una constante en común, como
en este caso, la intensidad de luz absorbida.

Mientras más clarificada la muestra la lectura de absorbancia será exacta, esto es importante
dado que si tenemos errores podría diagnosticarse mal a una persona con déficit en el sistema
renal.

Los resultados indican que probablemente pertenezca a un hombre con gran masa muscular y
con graves problemas renales; en el caso de la procedencia de ganado vacuno, podría
pertenecer a una vaca con mucha masa muscular y/o problemas moderados en el
funcionamiento de los riñones.

Bibliografía
Andrews, R., Greenhaff, P., Curtis, S., Perry, A., and Cowley, A.J. 1998. The effect of dietary
creatine supplementation on skeletal muscle metabolism in congestive heart failure. EurHeart
J 19: 617 – 622

Doornenbal, H., Tong, A. K., & Murray, N. L. 1988. Reference values of blood parameters in
beef cattle of different ages and stages of lactation. Canadian Journal of Veterinary Research,
52(1), 99–105

Israni A, Kasiske B. 2013. Examen de Creatinina en la sangre. Universidad Nacional de Medicina

de Estados Unidos. Estados Unidos. Disponible en:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003475.htm Consultado:
23/05/15

Gómez. 2007. "Estudio comparativo en la determinación de los niveles de glucosa por método
automatizado de laboratorio y glucómetro en la U.M.F. no. 66”. Universidad Veracruzana
Facultad de Bioanalisis . disponible en :
http://cdigital.uv.mx/bitstream/123456789/35421/1/gomezalmanza.pdf Consultado:
23/05/15

Grupo Industrial Mexlab Sa de CV. S.F .“CREATININA (JAFFÉ CINÉTICA)” disponible en :

http://www.grupomexlab.com/quimica/pdf/8001214.pdf Consultado: 23/05/15.

Rocca P & Oliver J .2003. Bioquimica tecnicas y métodos . editorial hélice .capitulo 8 .
determinacion de aminoácidos totales . pg 107-108 Consultado : 23/05/15.

Radostits, O.M., Gay, C.C., Blood, D.C. & Hinchcliff, K.W. 2000. Veterinary Medicine, 9th edn,
W.B. Saunders, London, pp. 1819–182
 PROBLEMAS ENCARGADOS

1. Una disolución aislada de E. coli da una absorbancia de 0,7930 a 260 nm en una celda de 1 cm.
a pH 4,5. Si el coeficiente de extinción molar es 197 cm -1*mg-1. Calcular la concentración en
mg/mL.

De la Ley de Lambert y Beer, utilizamos la siguiente relación:

Absorbancia = ε.L.C

Donde:

ε = Coeficiente de extinción

L = espesor del recipiente

C = concentración de la solución

Aplicando esta expresión en el problema:

0,7930 = 197 cm-1 mg-1. (1 cm.). (C)

C = 0,00403 mg/mL

2. Calcule el coeficiente de extinción molar a 361 nm para la acuocobalamina en tampón fosfato

0,1 M a pH 7,0 a partir de los siguientes datos obtenidos en una celda de un 1 cm.

Solución Concentración (10-5 M) Io I

A 2,23 93,1 27,4

B 1,90 94,2 32,8

Nota: Halle el coeficiente de extinción molar para cada solución y luego el promedio de estos
valores.

Calculamos la absorbancia de las respectivas soluciones que se nos dan de dato, con la
siguiente fórmula:

Absorbancia = Log (Io/I)

Entonces se tiene para las soluciones A y B:

Solución A: AbsorbanciaA = Log (93,1/27,4)

AbsorbanciaA = 0,531

Solución B: AbsorbanciaB = Log (94,2/32,8)

AbsorbanciaB = 0,458
 Calculamos la extinción molar de las soluciones A y B, utilizando la siguiente relación de la
ley de Lambert y Beer:

Absorbancia = ε.L.C

Solución A: 0,531 = εA*(1 cm.)*(2,23*10-5 M)

εA = 23,821 cm-1. mM-1

Solución B: 0,458 = εB*(1 cm.)*(1,90*10-5 M)

εB = 24,115 cm-1. mM-1

Entonces, el coeficiente de extinción molar promedio es:

εprom = 23,968 cm-1. mM-1

3. En una determinación de glucosa se obtuvieron los siguientes resultados:

Glucosa (mg%) 50 75 100 125 150 175 200 250

Transmitancia 92,9 89,9 86,3 84,3 81,3 78,7 73,8 70,5

Halle el factor de calibración promedio y la concentración de dos muestras de suero que

resultaron con una transmitancia de 88,30% y 85,11%.
Calculamos los factores de calibración promedio de todas las muestras de glucosa:

 Glucosa 50 mg%: Fc = 50/(2-log(92,9)) = 1563,27

 Glucosa 75 mg%: Fc = 75/(2-log(89,9)) = 1621,96

 Glucosa 100 mg%: Fc = 100/(2-log(86,3)) = 1562,76

 Glucosa 125 mg%: Fc = 125/(2-log(84,3)) = 1685,26

 Glucosa 150 mg%: Fc = 150/(2-log(81,3)) = 1668,35

 Glucosa 175 mg%: Fc = 175/(2-log(78,7)) = 1682,28

 Glucosa 200 mg%: Fc = 200/(2-log(73.8)) = 1515,80

 Glucosa 250 mg%: Fc = 250/(2-log(70,5)) = 1646,79

Calculamos el factor de calibración promedio:

Fcprom = 1618,31

Calculamos las concentraciones de las soluciones problemas que se nos pide, mediante la
siguiente relación:

Cmp = Fc*Amp
 Donde:

Cmp: concentración de la muestra problema

Amp: absorbancia de la muestra problema

Fc: factor de calibración

Suero A: Transmitancia = 88,30%

Absorbancia = 0,054
ConcentraciónA = 87,45 mg%

Suero B: Transmitancia = 85,11%

Absorbancia = 0,070
ConcentraciónB = 113,31 mg%

4. Para evaluar un metabolito “x”, una muestra fue sometida a dilución tomando una parte de
ella con 4 partes de agua y luego comparada espectrofotométricamente con una estándar de
10 mg/mL obteniéndose las siguientes lecturas de absorbancia blanco = 0,023, estándar =
0,357 y muestra = 0,667. Calcule la concentración de la muestra en mg%.

Ordenamos los datos del problema colocándolos en el siguiente recuadro:

Solución Concentración Absorbancia Absorbancia - Blanco

Blanco 0 mg/mL 0,023 0,000

Estándar 10 mg/mL 0,357 0,334

Muestra ----- 0,677 0,654

Calculamos el factor de calibración del estándar:

Fc = 10/0,334 = 29,94

Con este dato calculamos el valor de la concentración de la muestra problema:

Cmp = Fc*Amp

Cmp = 29,94*0,654 = 19,58 mg/mL

Cmp = 1958 mg%

5. ¿Qué es el factor de dilución? Explique mediante un ejemplo

El factor de dilución es el número total de volúmenes al que se lleva un volumen dado de

muestra original, o parte alícuota. En otros términos, el factor de dilución también corresponde
a la división de la concentración de la muestra original sobre la concentración de la muestra
diluida.
 Ejemplo:
Si a una solución de azúcar le agregas más agua, se diluye (ya no sabe tan dulce), que tanto la
diluiste depende de que volumen tenias al principio y cuál es el volumen final.
Factor de dilución = Vf / Vi

6. ¿Qué es el factor de calibración? Explique mediante un ejemplo

El factor de calibración (Fc) es un término que relaciona la concentración de una sustancia con
su absorbancia. Con el factor de calibración se puede fácilmente determinar la concentración
de una muestra de concentración desconocida, si se conoce su absorbancia.
Factore de calibración = Cst / Ast
Ejemplo:
Si tenemos una solución estándar de creatinina y lo ponemos en el espectrofotómetro a 520nm,
nos da una absorbancia aproximada de 150, entonces mediante el factor de calibración
podemos encontrar fácilmente la concentración de creatinina.
7. Explique la preparación de la muestra problema (sangre) para la determinación de creatinina

Para la determinación de creatinina en la sangre, la presencia de proteínas perturba las

reacciones necesarias para su cuantificación, por ello es que debe realizarse un proceso previo
(desproteinización), con el cual además de remover las proteínas se logra:
 Disminuir o impedir turbidez y opacidad
 Evitar formación de espuma
 Evitar formación de precipitados
 Hacer posible la obtención de líquidos translúcidos (que absorben cierta cantidad de
radiación y dejan pasar otra)

El siguiente es un método químico de desproteinización que hace uso de ácido como

desproteinizante al desnaturalizar y precipitar la proteína por cambio brusco de pH. Este método
de desproteinización es conocido como “Desproteinización de Folin – Wu”. El agente
desproteinizante es el ácido túngstico obtenido mediante la siguiente reacción:
Na2WO4.2H2O + H2SO4  H2WO4 + Na2SO4
En esta reacción se observa que el ácido túngstico es el agente desproteinizante: En tubo de
prueba de 50mL de capacidad se coloca 7mL de agua destilada, adicionando 1mL de sangre
oxalatada (con anticoagulante), 1mL túngstato 10% y 1mL H2SO4 2/3N. Agitar el tubo después
de cada adición. Observar la precipitación de proteínas de la sangre por formación de un
precipitado marrón chocolate por formación de metahemoglobina oxidada. Filtrar lentamente
a través de papel filtro rápido. Desechar el precipitado y reservar el líquido filtrado como
muestra clarificada.
8. Diferencia entre una solución stock, solución estándar y solución trabajo

Solución stock. Es una solución concentrada, que se prepara disolviendo (cuando se trata de un
sólido) o diluyendo (cuando se trata de un líquido) una determinada cantidad (masa o volumen,
respectivamente) de la sustancia en cuestión en un solvente apropiado. A partir de la solución
stock se preparan soluciones de menor concentración, por dilución.
Solución estándar. Es una solución con concentraciones intermedias entre el stock y la de trabajo
 Solución de trabajo. Es una solución de concentración exactamente conocida normalmente
preparada por dilución conveniente de la solución intermedia y dentro del rango de
concentración establecida para el método a utilizar.
9. ¿Qué función bioquímica cumple la creatinina? Escriba su fórmula

La creatinina está presente en músculo, cerebro y sangre, se sintetiza a partir de los aminoácidos
glicina, arginina y metionina, y Mg+2 y aporte de energía. Se elimina diariamente como un
constituyente normal de la orina en cantidad constante para cada sujeto. Debido a su constante
concentración en la sangre es de interés diagnóstico y pronóstico en las nefropatías e
insuficiencia renal. La determinación de creatinina en la sangre es una de las principales pruebas
que nos habla de la buena operatividad del riñón que es encargado de su depuración. Los valores
normales de creatinina en suero son 0.8 – 1.4 mg/dL. El nivel sanguíneo de creatinina se
incrementa cuando se presentan fallas en la filtración glomerular e insuficiencia renal, y
disminuye durante el embarazo por aumento de la función renal.

10. ¿Qué papel cumplen los siguientes reactivos en la cuantificación de creatinina?

Tungstato de sodio Acido sulfúrico Acido pícrico

La creatinina reacciona con el ácido pícrico en medio alcalino dando un complejo color rojo que
se cuantifica mediante lectura fotométrica.
El tungstato de sodio y el acido sulfúrico forman el ácido túngstico, que es el agente
desproteinizante al desnaturalizar y precipitar la proteína, y si echamos este ácido al picrato de
creatinina, destruye al picrato de creatinina, pero no el color formado por los demás
compuestos, por lo tanto la diferencia entre la lectura fotométrica antes y después del agregado
del ácido, permite cuantificar la creatinina en forma específica.

11.El coeficiente de extinción molar de un complejo de yodo – glucógeno a 450 nm es 0.20. Calcule
la concentración del glucógeno en una solución de complejo en yodo que tiene una
absorbancia de 0.36, medida en una cubeta de 3cm.

De la Ley de Lambert y Beer, utilizamos la siguiente relación:

Absorbancia = ε.L.C
0.36 = 0.20x3cmxC
0.6 mg / mL = C