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TECO DIAGNOSTICS

CREATININA
DIRECTA- PUNTO FINAL

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REACTIVO PARA CREATININA
El reactivo de creatinina es usado para la determinacin cuantitativa de
creatinina en suero humano.
INTRODUCCION.
La creatinina, un anhidro de creatina, es un producto de desecho formado por la
deshidratacin espontnea de los riones1. La mayora de la creatinina es
encontrada en el tejido muscular donde esta presente como creatina fosfato y
sirve como una reserva de energa para la conversin a ATP.
Independientemente de la dieta, la concentracin de la creatinina en suero
depende casi exclusivamente de la velocidad de excrecin del rin. Por esta
razn su elevacin es altamente especfica para enfermedades del rin 2. El
ensayo de creatinina se ha basado en la reaccin de Creatinina con picrato
alcalino como es descrito por Jaffe. Modificaciones posteriores han desarrollado
la reaccin de Jaffe en un ensayo cintico que es rpido, simple y evita
interferencias. En el mtodo de punto final, el acido actico es usado para
destruir el complejo de picrato de creatinina, resultando en la perdida de color,
los constituyentes en el suero de la no-creatinina retienen los colores derivados
de picrato y de esta manera, las diferencias en absorbancia dan la concentracin
de creatinina3, 4. Este procedimiento es modificado por Heinegard y Tidestorm 3
para eliminar la interferencia sin tratamiento acido.

3.- Los especmenes de orina de 24 horas deben preservarse con 15 gramos de


Acido Brico.
INTERFERENCIAS.
Un numero de sustancias afectan la precisin de la determinacin de la
creatinina, ver Young et.al5.
MATERIALES PROPORCIONADOS.
1.- Reactivo de Acido Pcrico para Creatinina.
2.- Reactivo Buffer.
3.- Estndar de creatinina.
MATERIALES REQUERIDOS Y NO PROPORCIONADOS:
1.- Instrumentos de pipeteo precisos.
2.- Reloj
3.- Tubos/Gradillas
4.- Tubos de prueba/gradilla.
5.- Vaso para combinar los reactivos (vidrio o plstico).
6.- Espectrofotmetro con cubeta trmica.
PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO.
No disponible.

PRINCIPIO.
lcali
Creatinina + Picrato de Sodio ------Creatinina Complejo de
Picrato
(naranja-amarillo)
La creatinina reacciona con el acido pcrico en medio alcalino para formar un
complejo de color que absorbe luz a 510 nm. El nivel de formacin de color es
proporcional a la creatinina en la muestra. En el mtodo de punto final, la
diferencia en las mediciones de absorbancia despus de la formacin de color
arroja un valor de creatinina corregido de sustancias de interferencia.
REACTIVOS.
1.- Reactivo de Acido pcrico para creatinina: Solucin con 10 mM de Acido
pcrico.
2.- Reactivo de Buffer de creatinina: solucin conteniendo 10 mM de Borato de
Sodio, 240 mM de hidrxido de sodio y surfactante.
*Nota importante: Si el reactivo de Buffer de creatinina ha sido sujeto a
temperaturas fras, podra formarse un precipitado blanco. Caliente el reactivo a
37C con agitacin para disolver todos los precipitados antes de usarse.
3.- Estndar de Creatinina (5.0 mg/dL): Una solucin de creatinina en acido
hidroclrico con preservativo.

PROCEDIMIENTO CINETICO.
1.- Combine volmenes iguales de reactivo de acido pcrico y Buffer. Mezcle
bien.
2.- Etiquete el tubo de prueba, blanco de reactivo, estndar, control y muestra.
3.- Pipetee 3.0 mL de reactivo de trabajo en los tubos de prueba.
4.- Transfiera 0.1 ml (100 L) de muestra a su tubo respectivo, agua destilada al
blanco de reactivo y mezcle.
5.- Coloque todos los tubos en el bao caliente a 37C por quince (15) minutos.
6.- Ajuste la longitud de onda del espectrofotmetro a 510 nm y ponga en ceros
el espectrofotmetro con el blanco de reactivo: Lea y registre las absorbancias de
todos los tubos (Rango de Longitud de onda de 500-520 nm)
7.- Calcule el valor de la Creatinina. Vea clculos.
VOLUMENES ALTERNOS:
Si el espectrofotmetro requiere de muestras menores a 3.0 ml para proporcionar
lecturas exactas, use 0.05 ml (50 L) de muestra y 1.0 ml de reactivo. Realice
como se describe anteriormente.
CALCULOS
El valor de la muestra de Creatinina se calcula comparando su cambio de
absorbancia con el estndar conocido.

PRECAUCIONES.
1.- Para uso diagnostico in Vitro solamente.
2. El acido pcrico es un agente altamente oxidante, evite el contacto con la piel.
Limpie cualquier derrame ya que el vapor del acido pcrico es explosivo.
3.- El reactivo Buffer de creatinina es un lcali, evite su ingestin y contacto.

mg/dL= Abs (no conocido) x Conc. Estndar


Abs (Estndar)

PREPARACION DEL REACTIVO.


Combine volmenes iguales de Acido Pcrico Creatinina y Buffer de creatinina,
mezcle bien.

Ejemplo.
Abs no conocido
Abs Estndar
Conc. Estndar

ALMACEN Y ESTABILIDAD.
1.- Ambos se almacenan a temperatura ambiente (18-25C).
2.- El reactivo de trabajo es estable hasta por una (1) semana si se cierra
hermticamente.

0.040 x 5= 1.3 mg/dL creatinina


0.150

DETERIORO DEL REACTIVO.


No se use si:
1.- Se presenta la turbidez; puede ser un signo de contaminacin.
2.- El reactivo falla en encontrar su linearidad o falla al recobrar los valores de
control en el rango indicado.
COLECTA Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA.
1.- Se recomienda usar suero.
2.- La creatinina en suero es estable por 24 horas en refrigeracin (2-8C), y por
varios meses en congelacin (-20C) y se protege de la evaporacin y la
contaminacin.

Donde:
Abs = Absorbancia

= 0.040
=0.150
= 5 mg/dL

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO CINETICO:


La albmina a concentraciones de 10.0 gm/dl contribuye 0.2 mg/dl al valor de
creatinina, la hemlisis moderada (0.2 gm/dL Hgb), las muestras lipmicas o
ictricas dan resultados elevados. El acetoacetato arriba de 10 mg/dL interfiere
con los resultados.
CALIBRACION
Use el estndar acuoso provedo (Tambin puede usar el calibrador TC para
reemplazar el estndar).

TECO DIAGNOSTICS

CREATININA
DIRECTA- PUNTO FINAL

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CONTROL DE CALIDAD.
La integridad de la reaccin debe monitorearse por el uso de sueros normal y
anormal con los valores de creatinina conocidos.
VALORES ESPERADOS6:
Suero:
Varn 0.9 1.5 mg/dL.
Hembra: 0.7 1.37 mg/dL
CARACTERISTICAS DE DESARROLLO.
1. Linealidad: 25 mg/dL.
2. Comparacin: Estudios realizados entre este procedimiento y otro similar
dieron un coeficiente de correlacin de 0.99 con una ecuacin de regresin de
y= 0.96 X 0.06. Las muestras de suero y control que se usaron en el estudio
tenan valores de creatinina que van de 0.9 a 8.3 mg/dL.
3. Precisin:
Entre pruebas
Media
1.9
8.2

D.E.
0.05
0.6

C.V. (%)
2.6
7.3

Media
2.0
8.2

D.E
0.2
0.4

C.V. (%)
10.6
4.6

Dentro de pruebas

REFERENCIAS
1. Henry. J.B., Clinical Diagnosis and Management by
Laboratory Method. 16th ed. Saunders. Philadelphia. PA. p.
263. (1974).
2. Vasilades. J. Clin. Chem. 22:1664 (1976).
3. Heinegard. D. and Tiderstrom. G., Clin. Chem. Acta 43:305
(1973).
4. Buffer. A.R.. Clin. Chem. Acta 59:227 (1975).
5. Young. D.S.. et al., Clin. Chem. 21(1975).
6. Tietz. N.W.. Fundamentals of Clinical Chemistry. W.B.
Saunders. R.S., Phila. p. 1211(1976).
C515: 12/01

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