UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA N°7
DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE CREATININA

INTEGRANTES CÓDIGOS TAREA CUESTIONARIO

Cornejo Rodriguez, Cristian 20161435 Introducción y 1, 2 y 3
Objetivos

Martel Lezama, Fabrizzio 20160108 Materiales y 4 ,5 y 6

Métodos

Marapi Enriquez, Victoria 20161447 Resultados 7, 8 y 9

Quiñones Pastor, Marjhory 20161456 Discusiones y 10 y 11

Conclusiones

PROFESOR(A): Ana Kitazono Sugahara

MESA: N°6

2019
1. INTRODUCCIÓN
 La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi
exclusivamente por filtración renal. Su determinación en suero, así como el
clearance de creatinina endógena constituyen parámetros importantes para el
diagnóstico de diversas afecciones renales. Sin embargo, debido a los
problemas prácticos inherentes a la determinación del clea-rance (recolección
de orina en niños, etc.), la determinación de creatinina sérica es más utilizada
como índice de funcionalismo renal. La creatinina reacciona con el picrato
alcalino en medio tamponado, previa desproteinización con ácido pícrico,
obteniéndose un cromógeno que se mide a 510 nm (Biggs, H.G. & Cooper,
J.M., 1961).

La creatinina presente en el músculo, cerebro y sangre, se sintetiza a partir

de los aminoácidos, glicina, arginina y metionina, siendo necesaria la energía
del ATP, la presencia de iones Mg2+y de transaminasa. Se elimina
diariamente como un constituyente normal de la orina en cantidades
constantes para cada individuo, bajo la forma de creatinina, que es el
anhídrido de creatina (Briceño de Ascuña, 1979).

La creatinina se transporta desde los músculos por medio de la sangre hacia

el riñón. Los riñones filtran la mayoría de la creatinina y la eliminan en la
orina. Aunque es una sustancia de deshecho, la creatinina es una prueba
diagnóstica esencial, ya que se ha observado que su concentración en
sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la función renal. Si los
riñones no funcionan bien, no eliminan bien la creatinina y por lo tanto ésta se
acumula en la sangre. Por esto la creatinina puede avisar de una posible
disfunción o insuficiencia renal, incluso antes de que se presenten síntomas.
Por eso la creatinina suele figurar en los análisis de sangre que se realizan
comúnmente (Kaneko,J., 2002).

2. OBJETIVOS
- Observar aplicación directa y útil de la Ley de Lambert y Beer en los
métodos espectrofotométricos con uso de un único estándar,
particularmente para la cuantificación de creatinina.
- Determinar la concentración inicial de la solución estándar a partir de
las diluciones realizadas.

3. MATERIALES Y MÉTODOS
4. RESULTADOS
 TUBO REACTIVO BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA

AGUA DESTILADA 3 ml ---- ----

SOLUCIÓN ESTÁNDAR ---- 3ml ----

DE CREATININA

MUESTRA FILTRADA ---- ----- 3ml

PICRATO DE SODIO 1.5 ml 1.5ml 1.5 ml

Abs λ = 520 0.5ml 0.25 ml 0.30 ml

Abs CORREGIDA 0.25 -0.05 = 0.2 0.30 - 0.05 = 0.25

BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA

MESA 1 0.047 0.183 0.099

MESA 2 0.049 0.192 0.098
MESA 3 0.038 0.181 0.094
MESA 4 0.040 0.156 0.099
MESA 5 0.041 0.187 0.092
MESA 6 0.042 0.194 0.101

preparación de solución estándar:

● (en 100ml de solución estándar)

100 mg creatinina → 100 mL

x → 0.6 mL
x = 0.6 mg creatinina

● (en 4.5 ml tubo de solución estándar)

0.6mg → 100 mL
y → 3 mL

y = 0.018 mg creatinina

concentración de creatinina en tubo de solución estándar:

0.018 mg → 4.5 mL … (tubo)

x → 1 mL … (mg / mL)

x = 0.004 mg = CST (mg / mL)

concentración de creatinina en tubo con muestra:

CM = (CST/ AST) x AM

CM = (0.004 mg/mL) x(Abs muestra corregida / Abs sta.)

CM= 0.004 x (0.101 - 0.042) / (0.194 - 0.042)
CM=1.55 X10-3 mg/mL

concentración de creatinina en la muestra de sangre:

1.55 X10-3 mg creatinina -------------1 mL
q-------------4,5mL

q =0.00697 mg creatinina (tubo de muestra)

0.00697 mg --------------------3 mL (filtrado)

w --------------------20 mL (filtrado)

w = 0.04646 mg (filtrado)

0.04646mg ---------------------2 mL (sangre)

e ---------------------100 mL (sangre)

e =2.323 mg% (sangre)

5. DISCUSIONES

La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi

exclusivamente por filtración renal. Su determinación en suero, así como la
depuración de creatinina endógena constituyen parámetros importantes para el
diagnóstico de diversas afecciones renales (Cétola, 2000).

La creatinina reacciona con el picrato alcalino (reacción de Jaffe) produciendo un

cromógeno rojo. La velocidad de esta reacción, bajo condiciones controladas, es
una medida de la concentración de creatinina de la muestra puesto que se comporta
como una reacción cinética de primer orden para la creatinina. Por otra parte, se ha
demostrado que los cromógenos no-creatinina que interfieren en la mayor parte de
las técnicas convencionales, reaccionan dentro de los 30 segundos de iniciada la
reacción. De manera que entre los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al inicio
de la reacción, el incremento de color se debe exclusivamente a la creatinina
(Perazzi, et. al., 2011).

Los valores promedios del nivel de creatinina en vacas Holstein puro de 16 a 20

meses de edad el nivel es de 1.59 a 1.72 mg%, en vacas de 3 a 7 años de edad el
nivel es de 2.49 mg%, mas posee una desviación estándar de ±0.25. (Enciclopedia
Bovina).

Nuestra muestra poseía una concentración de 2.323 mg%, esto nos indica que está
ligeramente por debajo del rango medio en vacas de 3 a 7 años; esto puede
deberse a que la muestra no era fresca o que al momento de sacar la muestra, la
vaca no había consumido niveles altos de creatina, dado que la creatinina es un
producto residual del metabolismo de la creatina. Si los niveles de creatinina
hubieran sido mayores a los del rango indicado en la Enciclopedia Bovina de la
UNAM, esto se debería a fallas en el sistema excretor, específicamente en los
riñones, que son los órganos que filtran esta sustancia.
En caso que nuestra muestra hubiera pertenecido a sangre de un ser humano, los
niveles de creatinina estarían fuera del rango normal, por encima de este. Ello sería
un indicio de algún tipo de fallo renal, y debería tenerse precaución en estos casos.

Los valores más altos de 4 mg/dl se deben a un fallo renal importante. Puede
aparecer la creatinina elevada en sangre en: acromegalia, deshidratación, distrofia
muscular, eclampsia, glomerulonefritis, nefropatía diabética, obstrucciones renales,
pielonefritis y problemas cardiacos. Además puede aparecer la creatinina disminuida
en: distrofia muscular avanzada o miastenia gravis (Burtis & Ashwood, 1999).

6. CONCLUSIONES

● La ley explica que hay una relación exponencial entre la transmisión

de luz a través de una sustancia y la concentración de la sustancia.
Así a mayor concentración, mayor absorbancia, pero muchos
compuestos biológicos no presentan color o su coloración interfiere en
el análisis, para obtener compuestos coloreados estables se emplean
reacciones directas muy sensibles para la medición de sustancias.

● Al desproteinizar la muestra de sangre, se debe tomar con cuidado

durante el proceso del filtrado en el cual se trabajó con una solución
proveniente de la, “desproteinización de Folin-Wu”, donde se buscó
separar la creatinina de la presencia de glucosa, triglicéridos y
colesterol en la sangre oxalatada, para poder obtener una muestra
incolora. Durante este metodo un mal calentamiento y/o filtrado puede
dar valores no adecuados al usar el espectrofotómetro.
● los niveles bajos de creatinina como el caso de nuestra muestra
podrían ser indicadores de que la muestra no estaba fresca o que la
vaca no hubiera consumido niveles altos de creatina antes.
 7. CUESTIONARIO

1.

3. En una determinación de glucosa se obtuvieron los siguientes resultados:

Glucosa (mg%) 50 75 100 125 150 175 200 250

Transmitancia 92.9 89.9 86.3 84.3 81.3 78.7 73.8 70.5

Hallar el factor de calibración promedio, y la concentración de 2 muestras de

suero que resultaron con una transmitancia de 88.3 y 85.11.
 Fc 1 = 0.50 mg/ 0.032 = 15.625 mg
Fc 2 = 0.70 mg/ 0.046 = 15.217 mg
Fc 3 = 1.00 mg/ 0.064 = 15.625 mg
Fc 4 = 1.25 mg/ 0.074 = 16.892 mg
Fc 5 = 1.50 mg/ 0.090 = 16.667 mg
Fc 6 = 1.75 mg/ 0.104 = 16.827 mg
Fc 7 = 2.00 mg/ 0.132 = 15.152 mg
Fc 8 = 2.50 mg/ 0.152 = 16.447 mg

4. Para evaluar un metabolito “x”, una muestra fue sometida a dilución

tomando una parte de ella con 4 partes de agua y luego fue comparada
espectrofotométricamente con un estándar de 10 mg/ml obteniéndose las
siguientes lecturas de absorbancia: Blanco = 0.0023, Estándar = 0.357,
Muestra = 0.677. Calcule la concentración de la muestra en mg%.

Concentración ST = Concentración Muestra disuelta

Absorbancia ST Absorbancia Muestra disuelta

10 / 0.357 = C / 0.677
C = 18.96mg/ml

Concentración de muestra disuelta = 18.96 mg/ml

Concentración de muestra X (mg/ml) = 94.80 mg/ml
Concentración de muestra X (mg%) = 9480 mg%
5. ¿Qué es el factor de dilución? Explique mediante un ejemplo.

Cuando diluimos una disolución, es decir, preparar una disolución menos

concentrada a partir de otra más concentrada, llevamos una muestra de un volumen
inicial (Vi) a un volumen final (Vf). Mediante la ecuación de diluciones:
Ci x Vi = Cf x Vf
Dónde:
Ci: concentración inicial
Vi: volumen inicial
Cf: concentración final
Vf: volumen final
La cantidad (Vi/Vf) se denomina factor de dilución, el cual es una relación entre el
volumen inicial y el volumen final de una dilución. Esta relación procede
directamente de la ecuación de disoluciones y es un factor que facilita mucho los
cálculos de moles o litros en problemas de disoluciones.
Por ejemplo se tiene una disolución de 5ml de NaCl 2.08M, el cual se desea diluir a
un volumen de 100ml, hallar la concentración molar a dicho volumen:

Ci x F = Cf (F: factor de dilución, 5ml/100ml = 0.05)

2.08Mx0.05 = 0.104M es la concentración final

6. ¿Qué es el factor de calibración?

Es un término que relaciona la concentración de una sustancia con su absorbancia.

Con este se puede determinar la concentración de una muestra cuya concentración
es desconocida. Para que pueda considerarse válido debe mantenerse bajo
condiciones particulares de calibración (mantener el equipo, no cambiar por otros
reactivos).

7. Explique la preparación de la muestra problema (sangre) para la

determinación de creatinina.

Lo primero que se hará es separar las proteínas (ya que impiden la correcta medida
de la absorbancia). Para desproteinizar primero se mezclará la muestra de sangre
con agua y el tungsteno. Agitar en vortex, luego se agrega el ácido sulfúrico se agita
nuevamente en el vortex y se espera un minuto. Luego del minuto se pasa al filtrado
por medio de papel filtro y un embudo (recordar que el líquido debe salir
transparente sino cambiar a otro tubo).
Al conseguir la muestra debemos colorearla (reacción de Jaffe) para poder hallar su
absorbancia que nos permitirá hallar la concentración de creatinina.
8. Diferencias entre una solución stock, solución estándar y solución trabajo

Solución stock Solución estándar Solución trabajo

➢ Se denomina ➢ Son soluciones de ➢ Solución de
solución madre o concentración concentración
stock a conocidas. no conocida.
composiciones ➢ Suficientemente ➢ Realización de
concentradas de estable en el operaciones
nutrientes las cuales tiempo para matemáticas
están formuladas por determinar su en función de
sales minerales que concentración una la
se emplean en un vez (no se concentración
medio particular. necesita conocida de
➢ Debido al elevado determinar otra solución
número de nuevamente su para la
compuestos que concentración determinación
incluye y a que cada vez que se de la
algunos de ellos se utilice) concentración
emplean a muy baja ➢ Reacción rápida desconocida.
concentración, con el analito
resulta más práctico ➢ Reacción más o
preparar soluciones menos completa
madre o "stocks" para alcanzar el
concentrados. punto final.
➢ Hace más rápida la ➢ Reacción con el
futura preparación analito por medio
de medios y de una reacción
minimiza los errores, selectiva que
ya que La pueda ser descrita
composición de una por una ecuación
solución se debe química
medir en términos de balanceada.
volumen y masa.
9. ¿Qué función bioquímica cumple la creatinina? Escriba su fórmula.
El mejor parámetro bioquímico sanguíneo de la función renal es la creatinina. En
principio, cuanto mayor es el descenso de la función renal, tanto más elevado es el
valor de la creatinina sérica.
Los aminoácidos glicina, arginina y metionina forman en el hígado creatina, que por
fosforilación de la fosfocreatina, que circula por la sangre hacia el músculo y
cerebro, y solamente en cantidades traza se elimina por la orina. La fosfocreatina
acumulada en el músculo es un depósito de energía y con la pérdida del fósforo se
convierte en creatina, la cual por deshidratación pasa a creatinina. La creatinina es,
por tanto, el anhídrido de la creatina, la cual una vez que pasa a sangre no vuelve a
ser utilizada y se excreta de forma constante por la orina.

Fórmula de la creatinina

10. ¿Qué papel cumplen los siguientes

reactivos en la cuantificación de creatina?

Tungstato de sodio

Se utiliza para originar el ácido túngstico, que actúa como agente desproteinizante.
La desproteinización se da por medio de una desnaturalización causada por un
cambio brusco del pH. De esta forma se puede hacer precipitar fácilmente a las
proteínas de la sangre y cuantificar la concentración de creatina.

Ácido sulfúrico

También es parte de la reacciona que genera al ácido túngstico

Ácido pícrico

Es el resultado de agregar picrato alcalino a la solución con creatina. La

absorbancia de este ácido es la que se usa para la determinación indirecta de la
concentración de creatina.

11. El coeficiente de extinción molar de un complejo yodo-glucógeno a 450

nm es 0,20. Calcule la concentración del glucógeno en una solución de
complejo en yodo que tiene una absorbancia de 0,36, medida en una cubeta de
3 cm.
8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

● Briceño de Ascuña, Y. (1979). Bioquímica I Laboratorio manual de trabajos

prácticos. Lima.
● Biggs, H.G. & Cooper, J.M. - Clin. Chem. 7/6:655 (1961).
● Harris, D. 2001. Análisis Químico Cuantitativo. Segunda edición-Editorial
Reverté S.A. Barcelona-España.
● Posada, M. 2015. Análisis Bioquímico. Primera edición-Ediciones Paraninfo
S.A. Madrid-España.
● Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM). (2009). Manual de
Prácticas Bioquímica Clínica. Recuperado de:
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● Burtis, C.A. and Ashwood, E.R. (1999) Tietz Textbook of Clinical Chemistry.
3rd Edition, W. B. Saunders Co., Philadelphia, 29-150
● Perazzi, Beatriz, (2011). Creatinina en sangre: calidad analítica e influencia
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