ÍNDICE

PRÁCTICA 1: Determinación de ácido úrico……………………………………………....……...2

PRÁCTICA 2: Determinación de creatinina………………………………………………….…….5
PRÁCTICA 3: Determinación de la bilirrubina………………..
PRÁCTICA 4:
PRÁCTICA 5: Tira bioquímica de orina

1
 PRÁCTICA Nº1: DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO

INTRODUCCIÓN ¹,²

El ácido úrico es el producto final de la degradación de las purinas la cual se realiza en el

hígado.
La mayor parte del ácido úrico se excreta diariamente por vía renal, el resto se elimina en el
tracto gastrointestinal.

La excreción de ácido úrico en orina representa el 10% , en plasma se presenta como urato
monosódico el cual es insoluble por lo que a concentraciones superiores a 6,4 mg/dl
produce la formación de cristales de urato que precipitan.

En orina, a un ph menor de 5,75, el ácido úrico es la forma predominante y a altas

concentraciones formaría cristales de ácido úrico.

La uricemia depende de la producción y de la excreción de uratos.

Su principal fuente es el metabolismo endógeno de las purinas. Las dietas ricas en purina
pueden modificarla.

Varía mucho entre individuos y está influida por el sexo, función renal, factores genéticos y
ambientales.

La hiperuricemia es causada por una menor excreción renal del ácido úrico, un aumento de
la producción de ácido úrico o combinación de las dos anteriores.

En relación a los niveles de ácido úrico podemos encontrarnos otras dos enfermedades muy
frecuentes. En primer lugar, la gota, la cual está causada por una respuesta inflamatoria al
depósito de cristales de urato monosódico en las articulaciones. En segundo lugar, los
cálculos renales, los cuales se producen cuando existe una producción excesiva de urato
junto con una hiperexcreción de ácido úrico, se pueden formar cálculos renales de ácido
úrico en orinas ácidas.

El ácido úrico puede medirse en plasma, suero u orina. en este caso la medición se va a
realizar sobre el plasma. La determinación consiste en 2 reacciones consecutivas del ácido
úrico catalizadas por diferentes enzimas que dan como producto final la quinonimina, la cual
se medirá en el espectrofotómetro.

La quinonimina es un compuesto rosado cuya concentración es proporcional a la de ácido

úrico en plasma.

OBJETIVO

Determinar la concentración de ácido úrico en plasma.

2
MATERIAL

● Plasma. ● Cubetas para el

● Tubos eppendorf. espectrofotómetro.
● Pipetas. ● Espectrofotómetro.
● Reactivos. ● Guantes.

METODOLOGÍA²

1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . ….. . . . . . . . .520nm(490-550)
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . ..1 cm paso de luz
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .37ºC / 15-25ºC.

2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

3. Pipetear en una cubeta:

BLANCO PATRÓN MUESTRA CONTROL CONTROL

(PLASMA) NEGATIVO POSITIVO

REACTIVO 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml

PATRÓN 25 μL

MUESTRA 25 μL
(PLASMA)

CONTROL 25 μL
NEGATIVO

CONTROL 25 μL
POSITIVO

4. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC ó 10 min. 15-25ºC.

5. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al blanco de reactivo. El color es
estable como mínimo 30 minutos.
6. Realizar los cálculos en suero o plasma:
(𝐴)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝐴)𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
(𝐴)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛 (𝐴)𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
×6 (Conc. Patrón) = mg/dL de ácido úrico en la muestra

Es un indicador de deterioro del reactivo: Absorbancia (A) del blanco a 520 nm≥0,16.

VALORES DE REFERENCIA EN SUERO O PLASMA

Muestra: 3,6-7,7 mg/dL en HOMBRES, 2,5 - 6,8 mg/dL en MUJERES.

VALORES DE REFERENCIA DE LOS CONTROLES

Control normal 5,37-6,85 mg/dL
Control patológico: 8,62-22,00 mg/dL
RESULTADOS

3
 MUESTRAS BLANCO PATRÓN MUESTRA CN CP

ABSORBANCIA 0,059 0,214 0,183 0,219 0,155

Tabla 1: resultados obtenidos de absorbancia al medir las muestras en el espectrofotómetro

CÁLCULOS DE LOS RESULTADOS

(𝐴)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝐴)𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 0,183−0,059

➔
(𝐴)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛 (𝐴)𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
×6 →
0,214−0,059
×6 = 5,13 mg/dL → concentración de la

muestra de plasma

(𝐴)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝐴)𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 0,219−0,059

➔
(𝐴)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛 (𝐴)𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
×6 → 0,214−0,059
×6 = 6,00 mg/dL → concentración del control
negativo

(𝐴)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝐴)𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 0,155−0,059

➔
(𝐴)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛 (𝐴)𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
×6 → 0,214−0,059
×6 = 4,34 mg/dL → concentración del control
positivo

CONCLUSIÓN

La práctica se desarrolló según lo previsto, sin ninguna dificultad y realizando todos los
pasos indicados.
Todos los resultados entran dentro de los valores establecidos, excepto el del control
negativo.
En otras prácticas daríamos los resultados como no válidos y realizaríamos la prueba otra
vez, sin embargo, esta vez identificamos rápidamente nuestro error.
La detección de ácido úrico se basa en un método colorimétrico, por lo que al mezclar los
reactivos con la muestra y controles la solución debe cambiar a un tono rosa-rojizo.
Todas nuestras muestras se cambiaron, en mayor o menor medida, a ese color, excepto
una, el control negativo. Decidimos esperar a pesar de que, al comparar nuestro control con
el de otros grupos, el color del nuestro fuera demasiado claro.
Una vez obtenidos los resultados nuestras sospechas se confirmaron, había un error de
pipeteo en el control negativo haciendo que este se coloreara menos y dando un resultado
menor al medirlo al espectrofotómetro.
Por lo tanto concluimos que los resultados obtenidos son válidos, no obstante se podría
repetir la prueba para asegurarnos de que el error ha sido nuestro y el paciente no presenta
ninguna enfermedad.

BIBLIOGRAFÍA
1. Apuntes
2. [Internet]. Spinreact.com. 2021 [cited 26 February 2021]. Available from:
https://www.spinreact.com/files/Inserts/Bioquimica/BSIS45_URIC_LIQ_2016.pdf

4
 PRÁCTICA Nº2: DETERMINACIÓN DE CREATININA

INTRODUCCIÓN¹,²

Es una prueba que mide los niveles de creatinina en la sangre o en la orina. La creatinina es
un producto de desecho generado por los músculos como parte de la actividad diaria.
Normalmente, los riñones filtran la creatinina de la sangre y la expulsan del cuerpo por la
orina. Cuando hay un problema con los riñones, la creatinina se puede acumular en la
sangre y sale menos por la orina. Los niveles anormales de creatinina en la sangre (suero o
plasma) o en la orina (orina 24h) pueden ser signo de enfermedad renal.

La prueba de creatinina se usa para averiguar si los riñones están funcionando bien. A
menudo, se solicita junto con otra prueba de riñón llamada prueba de nitrógeno ureico en
sangre (NUS) o como parte de un panel metabólico completo. Un panel metabólico
completo es un grupo de pruebas que entrega información sobre diferentes órganos,
aparatos y sistemas del cuerpo. Se suele incluir como parte de un chequeo de rutina.

Los valores normales en plasma en hombres va de 0.7 a 1.3 mg/dL , y en mujeres de 0.6 a
1.1 mg/dL
En orina 24 horas, en hombres va de 10 - 20 mg/Kg/24 h, y en mujeres de 8 -18 mg/Kg/24 h

Las mujeres con frecuencia tienen niveles de creatinina más bajos que los hombres. Esto se
debe a que ellas frecuentemente tienen menor masa muscular. El nivel de creatinina varía
con base en la talla y la masa muscular de una persona.

El ensayo de la creatinina está basado en la reacción de la creatinina con el picrato de sodio

descrito por Jaffé.
La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de
tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias
conocidas del método.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de creatinina en la
muestra ensayada.

OBJETIVO

Determinar la concentración de creatinina en plasma y en orina.

MATERIALES

● Plasma. ● Cubetas para el

● Orina. espectrofotómetro.
● Tubos de ensayo. ● Espectrofotómetro.
● Pipetas. ● Guantes.
● Reactivos.

5
METODOLOGÍA²

1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 492 nm (490-510)
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz
Temperatura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente al blanco de reactivo.
3. Pipetear en una cubeta:

BLANCO PATRÓN MUESTRA CONTROL CONTROL

(PLASMA) NEGATIVO POSITIVO

REACTIVO 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml

PATRÓN 100 μL

MUESTRA 100 μL
(PLASMA)

CONTROL 100 μL
NEGATIVO

CONTROL 100 μL
POSITIVO

4. Mezclar y poner en marcha el cronómetro.

5. Leer la absorbancia (A1) al cabo de 30 segundos y al cabo de 9 segundos (A2) de la
adición de la muestra.
6. Calcular: ∆A= A2 – A1 .
(𝐴)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
x 2 (Conc. Patrón) = mg/dL de creatinina en la muestra
(𝐴)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛

Indicadores de deterioro de los reactivos:

- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancia (A) del Blanco a 492 nm ≥ 1,80

VALORES DE REFERENCIA EN SUERO O PLASMA Y ORINA 24H:

PLASMA
Hombres: 0.7 a 1.3 mg/dL (de 61.9 a 114.9 µmol/L)
Mujeres: 0.6 a 1.1 mg/dL (de 53 a 97.2 µmol/L)

ORINA 24H
Hombres 10 - 20 mg/Kg/24 h 88 - 177 µmol/Kg/24 h
Mujeres 8 -18 mg/Kg/24 h 71 - 177 µmol/Kg/24 h

VALORES DE REFERENCIA DE LOS CONTROLES:

6
Control Normal: 1,66 - 2,20 mg/dL
Control Patológico: 4,65 - 6,15 mg/dL
RESULTADOS

MUESTRAS BLANCO PATRÓN MUESTRA MUESTRA CN CP

ORINA PLASMA

ABSORBANCIA 1 0,280 0,023 0,000 0,176 0,148 0,345

ABSORBANCIA 2 - 0,100 0,011 0,200 0,180 0,434

ΔA 0,280 0,077 0,011 0,024 0,032 0,089

Tabla 1: resultados obtenidos de absorbancia al medir las muestras en el espectrofotómetro a 60 segundos (absorbancia 19 y
90 segundos (absorbancia 2). Se incluye el sumatorio de las dos absorbancias (resta de la primera absorbancia a la segunda).

CÁLCULOS DE LOS RESULTADOS

(𝐴)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 0,011
➔
(𝐴)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛
×2 →
0,077
×2 = 0,30 mg/dL x 50* = 15mg/dL→ concentración de la

muestra de orina

(𝐴)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 0,024
➔
(𝐴)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛
×2 → 0,077
×2 = 0,62 mg/dL → concentración de la muestra de plasma

(𝐴)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 0,032
➔
(𝐴)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛
×2 → 0,077
×2 = 0,83 mg/dL → concentración del control negativo

(𝐴)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 0,089
➔
(𝐴)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛
×2 → 0,077
×2 = 2,31 mg/dL → concentración del control positivo

*Se multiplica la concentración de orina por 50 para hallar la concentración total, debido a
que antes de realizar la práctica que ha diluido a 1/50

ACLARAMIENTO DE LA CREATININA

Cl creatinina= [Creatinina] en orina x V orina (ml/min) = 0,91x15 = 22,01

[Creatinina] en plasma 0,62
Orina 24h: 1,3 L
mL/min: 0,91

CONCLUSIÓN

La práctica se desarrolló según lo previsto. A pesar de esto los únicos valores que nos
entran dentro de los valores de referencia son las muestras de plasma y orina, los controles
no.
El hecho de que no salgan los controles dentro de los rangos normales nos puede indicar
un reactivo en mal estado o un fallo humano por nuestra parte (mal pipeteo, mal medición..)
A pesar de que lo fácil sería atribuirnos el fallo a nosotras; el hecho de que las muestras
salgan dentro de los valores, nos hace pensar que el fallo está en los controles. Es decir,

7
que los controles estén en mal estado y por tanto no reaccionen de manera correcta con el
reactivo.
Aun así esta práctica se daría como no válida y habría que repetir de nuevo todo el proceso
para confirmar los resultados. Eso sí, se repetiría utilizando un reactivo nuevo, unos
controles nuevos y la misma muestra de plasma y orina.

BIBLIOGRAFÍA
1. Principal P, médica E, sangre E. Examen de creatinina en la sangre: MedlinePlus
enciclopedia médica [Internet]. Medlineplus.gov. 2021 [cited 26 February 2021]. Available from:
https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003475.htm
2. [Internet]. Spinreact.com. 2021 [cited 26 February 2021]. Available from:
https://spinreact.com/files/Inserts/SERIE_SPINLAB_180/Bioquimica/BSIS62_Crea-J_2016.pdf

8
 PRÁCTICA Nº3: DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA

INTRODUCCIÓN¹,²

La bilirrubina es un pigmento de color amarillo-anaranjado que se encuentra en la bilis y que

prod¡cede, en su gran mayoría, del catabolismo de la hemoglobina que está presente en el
interior de los eritrocitos.
Los eritrocitos son degradados gracias a los macrófagos del sistema mononuclear fagocítico
liberando así la hemoglobina de su interior.
la hemoglobina se degrada gracias a una enzima dando lugar a la biliverdina que se
degrada a su vez dando lugar a la bilirrubina.
Esta bilirrubina es insoluble por lo que necesita unirse a la albúmina para poder ser
transportada.
Podemos encontrar bilirrubina en una concentración de hasta 1,10 mg/dL.
Una hiperbilirrubinemia da lugar a una ictericia que se manifiesta otorgando un color
amarillento a la piel y la esclerótica ocular. Puede haber una hiperbilirrubinemia de
bilirrubina conjugada como no conjugada.
Cuando es la bilirrubina conjugada la que se encuentra aumentada se denomina ictericia
posthepática y por lo tanto hay un fallo en la excreción.
Si, por el contrario, es la bilirrubina no conjugada la que se encuentra aumentada es una
ictericia prehepática, se produce más de lo que se puede excretar.
Para deteminar la bilirrubina utilizaremos un método colorimétrico basado en la reacción de
la bilirrubina y el ácido sulfanílico diazotizado.
Haremos una determinación de la bilirrubina directa (ya que no poseemos cafeína para
poder medir la indirecta) y la bilirrubina total.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de bilirrubina presente en
la muestra ensayada.

OBJETIVO

Determinar la concentración de bilirrubina directa y total en plasma.

MATERIALES

● Plasma. ● Cubetas para el

● Tubos de ensayo. espectrofotómetro.
● Pipetas. ● Espectrofotómetro.
● Reactivos. ● Guantes.

METODOLOGÍA²

1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .540nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …….. . .1 cm paso de luz
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15-25ºC.

2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

9
3. Pipetear en una cubeta:

REACTIVO 1 REACTIVO 2 ClNa REACTIVO 3 MUESTRA

(μL) (gotas) (mL) (mL) (μL)

BLANCO* 200 2 200

BILIRRUBINA 200 1 2 200

TOTAL

BILIRRUBINA 200 1 2 200

DIRECTA

CN
BILIRRUBINA 200 1 2 200
TOTAL

CP
BILIRRUBINA 200 1 2 200
TOTAL

CN
BILIRRUBINA 200 1 2 200
DIRECTA

CP
BILIRRUBINA 200 1 2 200
DIRECTA

4. Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a 15-25ºC.

5. Medir la absorbancia (A) del calibrador y la muestra.
6. Realizar los cálculos teóricos con factores teóricos ya que no tenemos calibrador:

Cálculo: (A) Muestra – (A) Blanco Muestra x Factor = mg/dL de bilirrubina

Factor Bilirrubina Total: 13,8
Factor Bilirrubina Directa: 10,4

Indicadores de deterioro son la turbidez, partículas y desarrollo del color en el reactivo.

* Se le añade muestra al blanco por si contienen alguna otra sustancia como lípidos, etc.
Que pudieran interferir en los resultados obtenidos.
Se tara con agua para disminuir el error.

VALORES DE REFERENCIA DE LAS MUESTRAS:

Bilirrubina total en adulto→ hasta 1,10 mg/dL
Bilirrubina total en el recién nacido→ < 12,00 mg/dL
Bilirrubina directa→ hasta 0,25 mg/dL

VALORES DE REFERENCIA DE LOS CONTROLES PATOLÓGICOS:

Bilirrubina total→ 4,68-6,62 mg/dL
Bilirrubina directa→ 2,12-3,00 mg/dL

10
VALORES DE REFERENCIA DE LOS CONTROLES NORMALES:
Bilirrubina total→ 1,37-1,93 mg/dL
Bilirrubina directa→ 0,92-1,30 mg/dL

RESULTADOS

Muestras Blanco Bilirrubina Bilirrubina CN bil. CN bil. CP bil. CP bil.

total directa directa total directa total

Absorbancia 0,156 0,196 0,064 0,094 0,068 0,259 0,286

(A)
Tabla 1: datos obtenidos de absorbancia al medir las muestras en el espectrofotómetro.

CÁLCULOS BILIRRUBINA TOTAL:

➔ (A) Muestra – (A) Blanco Muestra x Factor; 0,196-0,156 x 13,6 = 0,552 mg/dL →
bilirrubina total.
➔ (A) C. normal – (A) Blanco Muestra x Factor; 0,094-0,156 x 13,8 = -0,855 mg/dL→
control normal.
➔ (A) C. patológico– (A) Blanco Muestra x Factor; 0,259-0,156 x 13,8 = 1,421 mg/dL→
control patológico.

CÁLCULOS BILIRRUBINA DIRECTA:

➔ (A) Muestra – (A) Blanco Muestra x Factor; 0,064-0,156 x 10,4 = -0,956 mg/dL →
bilirrubina directa.
➔ (A) C. normal – (A) Blanco Muestra x Factor; 0,068-0,156 x 10,4 = -0,915 mg/dL →
control normal.
➔ (A) C. patológico – (A) Blanco Muestra x Factor; 0,268-0,156 x 10,4 = 1,164 mg/dL →
control patológico.

CÁLCULOS BILIRRUBINA INDIRECTA:

Bilirrubina total = bilirrubina directa + bilirrubina indirecta; bilirrubina indirecta= bilirrubina
total - bilirrubina directa; bilirrubina indirecta = 0,552 - (-0,956); bilirrubina directa= 1,508
mg/dL

11
CONCLUSIÓN
Para la realización de esta práctica necesitamos una muestra de plasma, esto es importante
destacarlo ya que el plasma que teníamos estaba hemolizado pudiendo influir en los
resultados obtenidos.

Como podemos observar ninguno de los resultados entran dentro de los valores
establecidos, e incluso alguno sale con valor negativo.
Intentamos hacer los cálculos cambiando los resultados a positivo ya que a veces el
espectrofotómetro sufre de efecto fatiga y los valores pueden salir alterados.
A pesar de intentar remediarlo de esta manera los resultados obtenidos seguían estando
muy alejados de los valores normales.

Otro aspecto a mencionar, y por el cual no damos la práctica y los resultados como válidos,
es que ningún valor de los controles entra dentro del rango. Si estos valores fueran
correctos podríamos intentar hacer una aproximación diagnóstica de los valores de
bilirrubina, pero como los controles tampoco tienen un resultado válido se debe realizar la
práctica de nuevo entera.

Intuimos que los resultados obtenidos pueden ser por un error humano en el pipeteo, fallos
a nivel del espectrofotómetro y la utilización del plasma hemolizado. Por otro lado,
descartamos que el reactivo estuviera en mal estado ya que no se observan ninguno de los
indicativos de deterioro que se mencionan anteriormente en el apartado de metodología.

BIBLIOGRAFÍA
1.Apuntes
2. [Internet]. Spinreact.com. 2021 [cited 26 February 2021]. Available from:
https://www.spinreact.com/files/Inserts/Bioquimica/BSIS03_T&D_J_2011.pdf

12
 PRÁCTICA Nº4: DETERMINACIÓN DE LAS TRANSAMINASAS

INTRODUCCIÓN¹

Las transaminasas son enzimas que se producen en las células de distintas partes del
cuerpo, sobretodo en el hígado, pero también en los músculos, los riñones, el corazón o el
cerebro. Su función es la de intervenir en la producción de diversos aminoácidos, las
pequeñas moléculas de las proteínas que son necesarias para el desarrollo del organismo.
Aunque su trabajo se realiza dentro de las células también son liberadas a la sangre.

La alanina aminotransferasa (ALT) inicialmente llamada transaminasa glutámico pirúvica

(GPT) cataliza la transferencia reversible de un grupo amino de la alanina al -cetoglutarato
con formación de glutamato y piruvato. El piruvato producido es reducido a lactato en
presencia de lactato deshidrogenasa (LDH) y NADH:

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determinado

fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de ALT en la muestra
ensayada.

La prueba de la enzima alanina aminotransferasa (ALT, por sus siglas en inglés) suele
formar parte de las pruebas de cribado inicial que se practican para detectar enfermedades
hepáticas.
El hígado desempeña varias funciones importantes: almacena la energía procedente de los
alimentos, fabrica proteínas y ayuda a eliminar las toxinas del organismo. El hígado también
fabrica bilis, un líquido que ayuda a hacer la digestión. Existen unas proteínas,
denominadas “enzimas”, que ayudan al hígado a construir y a descomponer otras proteínas.
La enzima ALT (alanina aminotransferasa), es una de esas enzimas. Se encuentra en
grandes cantidades en el hígado y desempeña un papel fundamental en el metabolismo, el
proceso que transforma los alimentos ingeridos en energía.
Por lo general, la enzima ALT se encuentra en el interior de las células hepáticas. Pero,
cuando el hígado se inflama o se lesiona, libera esta enzima en el torrente sanguíneo. La
determinación de la concentración de ALT en sangre proporciona a los médicos una
información importante sobre el funcionamiento del hígado, al permitirles saber si una
enfermedad, un proceso inflamatorio, un medicamento u otro tipo de problema están
afectando a dicho órgano

El rango normal es de 4 a 36 U/L.

La aspartato aminotransferasa (AST) inicialmente llamada transaminasa glutamato

oxaloacética (GOT) cataliza la transferencia reversible de un grupo amino del aspartato al
-cetoglutarato con formación de glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido es
reducido a malato en presencia de malato deshidrogenasa (MDH) y NADH:

13
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determinada
fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de AST en la muestra
ensayada. La AST es una enzima intracelular, se encuentra en niveles altos en el músculo
del corazón, las células del hígado, las células del músculo esquelético y en menores
cantidades en otros tejidos. Aunque un nivel elevado de AST en suero no es específico de
enfermedad hepática se emplea principalmente para su diagnóstico y seguimiento, junto
con otras enzimas como la ALT y ALP. También se emplea en el control post-infarto, en
pacientes con desórdenes del músculo esquelético, y en otras afecciones. El diagnóstico
clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

Cuando hay transaminasas altas quiere decir que está en curso un proceso inflamatorio en
el hígado. La inflamación en el hígado implica que hay destrucción de las células hepáticas
encargadas de liberar estas enzimas a la sangre.

OBJETIVO

Determinación de las transaminasas GPT y GOT en plasma sanguíneo.

MATERIALES

● Plasma. ● Cubetas para el

● Tubos de ensayo. espectrofotómetro.
● Pipetas. ● Espectrofotómetro.
● Reactivos. ● Guantes

METODOLOGÍA

1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340 nm
Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz
Temperatura constante: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25ºC / 30ºC / 37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:

GPT REACTIVO MUESTRA GOT REACTIVO MUESTRA

TOTAL TOTAL

PLASMA 1 100 PLASMA 1 100

CN 1 100 CN 1 100

CP 1 100 CP 1 100

4. Mezclar, incubar 1 minuto.

5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y leer la
absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto (A/min)

14
RESULTADOS

MUESTRA CN CP

0 1,237 1,287 1,298

1 1,198 1,288 1,293

2 1,195 1,287 1,289

3 1,193 1,283 1,288

Tabla 1: resultados obtenidos al medir la absorbancia de la enzima GPT (ALT) en el espectrofotómetro a distintos tiempos.

∆𝐴=(0'−1') + (1'−2') + (2´'−3')

CÁLCULOS: × 1750 = 𝑈/𝐿
3
∆𝐴=(1,237−1,198) + (1,198−1,195) + (1,195−1,193)
∆𝐴 𝑀𝑈𝐸𝑆𝑇𝑅𝐴 =
3
× 1750=
0, 014 × 1750 = 24, 5 𝑈/𝐿
∆𝐴=(1,287−1,288) + (1,288−1,287) + (1,287−1,283')
∆𝐴 𝐶𝑂𝑁𝑇𝑅𝑂𝐿 𝑁𝑂𝑅𝑀𝐴𝐿 =
3
× 1750 =
0, 001 × 1750 = 1, 75 𝑈/𝐿
∆𝐴=(1,298−1,293) + (1,293−1,289) + (1,289−1,288)
∆𝐴 𝐶𝑂𝑁𝑇𝑅𝑂𝐿 𝑃𝐴𝑇𝑂𝐿Ó𝐺𝐼𝐶𝑂 =
3
× 1750 =0, 003 × 1750 = 5, 25 𝑈/𝐿

MUESTRA CN CP

0 1,243 1,269 1,268

1 1,173 1,265 1,268

2 1,158 1,265 1,165

3 1,156 1,265 1,245

Tabla 2: resultados obtenidos al medir la absorbancia de la enzima GOT (AST) en el espectrofotómetro a distintos tiempos.

∆𝐴=(0'−1') + (1'−2') + (2´'−3')

CÁLCULOS: × 1750 = 𝑈/𝐿
3
∆𝐴=(1,243−1,173) + (1,173−1,158) + (1,158−1,156)
∆𝐴 𝑀𝑈𝐸𝑆𝑇𝑅𝐴 =
3
× 1750=
0, 029 × 1750 = 50, 75 𝑈/𝐿
∆𝐴=(1,269−1,265) + (1,265−1,265) + (1,265−1,265)
∆𝐴 𝐶𝑂𝑁𝑇𝑅𝑂𝐿 𝑁𝑂𝑅𝑀𝐴𝐿 =
3
× 1750 =
0, 0013 × 1750 = 2, 33 𝑈/𝐿
∆𝐴=(1,268−1,268) + (1,268−1,165) + (1,165−1,245)
∆𝐴 𝐶𝑂𝑁𝑇𝑅𝑂𝐿 𝑃𝐴𝑇𝑂𝐿Ó𝐺𝐼𝐶𝑂 =
3
× 1750 =0, 007 × 1750 = 13, 41 𝑈/𝐿

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CÁLCULOS A 25ºC: multiplicamos los resultados por el factor de conversión que es 0,55
para GPT y 0,48 para GOT.
∆𝐴 𝑀𝑈𝐸𝑆𝑇𝑅𝐴 𝐺𝑃𝑇 =24, 5 𝑈/𝐿 × 0, 55 = 13, 47 𝑈/𝐿
∆𝐴 𝑀𝑈𝐸𝑆𝑇𝑅𝐴 𝐺𝑂𝑇 =50, 75 𝑈/𝐿 × 0, 48 = 24, 36 𝑈/𝐿
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFÍA
1. ¿Qué son las transaminasas? [Internet]. infosalus.com. 2021 [cited 26 February 2021].
Available from:
https://www.infosalus.com/salud-investigacion/noticia-son-transaminasas-20150831080032.ht
ml

16
 PRÁCTICA Nº5: TIRA REACTIVA DE ORINA

INTRODUCCIÓN

Las tiras reactivas de urianálisis (orina) son tiras de plástico en las cuales se han fijado
parámetros en áreas separadas de reactivos. La prueba es para la detección
semi-cuantitativa de uno o más de los siguientes analitos en la orina. Las Tiras Reactivas de
Urianálisis (Orina) pueden ser leídas visualmente y automáticamente con un analizador de
orina.

La orina sobrelleva muchos cambios durante periodos de enfermedad o disfunción corporal

antes que la composición de la sangre sea alterada en una extensión significativa. El
Urianálisis es un procedimiento útil como indicador de Salud o Enfermedad, y por lo tanto,
es una parte de despistaje rutinario para la salud. Las tiras reactivas de Urianálisis (orina)
pueden ser usadas para una evaluación general de la salud, y como ayuda en el
diagnóstico y monitoreo de enfermedades metabólicas o sistémicas que afectan la función
renal, desórdenes endocrinos y enfermedades o desórdenes del tracto urinario.

Gravedad Específica: El color varía de azul oscuro-verde en orina de baja concentración a

verde y verde amarillento en orina de alta concentración de iones. Orina coleccionada de
adultos sanos con dieta normal y alimento fluido debe tener una Gravedad Específica de
1,016-1,022. En casos de daño renal severo, la Gravedad Específico se fija en 1,010 del
glomerular filtrado.
pH: La gama de colores va desde naranja a amarillo y desde verde a azul. El rango
esperado para especímenes de orina normal en neonatos es de pH 5-7.4 El rango esperado
para otras personas normales es de pH 4,5-8, con un resultado promedio de pH 6.4
Leucocitos: Esta prueba revela la presencia de granulocitos esteraseos.
Nitritos: Esta prueba depende de la conversión del nitrato a nitrito por la acción de las
bacterias Gram negativas, o infecciones del tracto urinario comunes causando organismos
como la E. coli en la orina. No se puede detectar nitrito en orina normal.
Proteinas: El rango de colores va de amarillo a amarillo-verde para resultados negativos y
de verde a verde- azulado para resultados positivos. Esta prueba es particularmente
sensible a la albúmina.
Glucosa: Esta prueba no es afectada por la presencia de Cetonas o el pH de la orina. Esta
prueba es un método basado en la reacción especifica de glucosa–oxidasa/peroxidasa
(GOD/POD).
Cuerpos Cetónicos: Los Cuerpos Cetónicos normalmente no se encuentran presentes en
la orina. Niveles detectables de Cuerpos Cetónicos pueden ocurrir en orina durante
condiciones de tensión fisiológica como ayuno, embarazo ejercicios extenuantes.
Urobilinógeno: El Urobilinógeno es uno de los mayores compuestos producido en heme
síntesis y es una sustancia normal en la orina. El rango normal esperado en orina con esta
prueba es 0,2-1,0 mg/dl (3,5-17 µmol/l).3 Un resultado de más de 1.0 mg/dL (17 µmol/L)
debe ser estudiado más al fondo.
Bilirrubina: La variación de los niveles de Bilirrubina produce un color rosado-tostado
proporcional a la concentración en orina. En orina normal no se detecta bilirrubina aún por
los métodos de mayor sensibilidad. Los resultados atípicos pueden indicar que los

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pigmentos biliares derivados de la Bilirrubina están presentes en el espécimen de orina y
que posiblemente están enmascarando la reacción de la Bilirrubina.
Sangre: Cualquier mancha verde o el desarrollo de un color verde en el área reactiva en 60
segundos es significativo y el espécimen de orina debe seguir siendo examinado. La sangre
frecuentemente se puede encontrar, pero no invariablemente, en mujeres cuando
menstrúan.

OBJETIVOS

MATERIALES

● Tira de orina
● Bote donde se encuentran las tiras para

METODOLOGÍA*

Depositar una gota de orina en cada cuadrito de la tira reactiva.

*Se puede realizar también sumergiendo la tira reactiva en el bote de orina pero nosotras
decidimos hacerlo con gotas para poder ir cronometrando el tiempo mejor ya que el
cuadradito reactivo tiene un tiempo diferente.

RESULTADOS E INTERPRETACIÓN

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CONCLUSIÓN

En base a los resultados tan aumentados que obtuvimos pensamos que el diagnóstico
podría ser una posible infección, tal y como se detalla en la interpretación de la tira de orina,
e intuimos que dicha infección podría venir dada por un traumatismo en los riñones u otros
órganos excretores.

Otra de nuestras opciones para explicar tales resultados era que el paciente tuviera alguna
patología o fallo renal o tuviera diabetes.

Tras discutir en clase todos los resultados de los grupos y casi convencidos de que el
paciente tenía varias patologías como una infección y diabetes, la profesora nos confesó
que era una orina adulterada con sangre, glucosa y otros elementos.
En base a este nuevo dato los resultados que obtuvimos concordaban con esos
compuestos y por tanto la realización de la práctica se había realizado de manera correcta.

BIBLIOGRAFÍA

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