Identificación y

cuantificación de tóxicos
no volátiles en una
muestra.
EQUIPO 1 Y 2
Objetivos

● Utilizar métodos de extracción ácida y básica para separar

tóxicos no volátiles de naturaleza ácida y básica en una muestra
problema.
● Emplear reacciones coloridas y cromatografía en capa fina (CCF)
para la identificación de tóxicos no volátiles en una muestra
problema.
● Cuantificar el ácido barbitúrico presente.
Problema
● Separar e identificar escopolamina,
paracetamol, ácido 4-hidroxibenzoico y
ácido barbitúrico de una muestra problema.
● Cuantificar el ácido barbitúrico presente.
Introducción

Extracción: proceso de separación en

el cual un soluto se reparte o distribuye
entre dos fases diferentes. En la
extracción líquido-líquido las dos fases
están constituidas por dos líquidos
inmiscibles, entre los que se reparte el
soluto.
 Escopolamina

● Es un alcaloide.
● De carácter básico, su solubilidad varía
en función del pH.

En forma de base son solubles en

disolventes orgánicos no polares; tales
como el benceno, éter etílico, cloroformo,
diclorometano, acetato de etilo, etc.
(S)-3-Hidroxi-2-fenilpropanoato
● pka= 7.6 de(1R,2R,4S,7S,9S)-9-metil-3-ox
a-9-azatriciclo[3.3.1.02,4]non-7-ilo
 Paracetamol

● pKa= 9.5

● Es un ácido débil debido a

su grupo hidroxilo
aromático.

N-(4-hidroxifenil)acetamida
Ácido 4- hidroxibenzoico

● Ácido muy soluble en

disolventes orgánicos polares
tales como alcoholes y acetona.

● pKa=4.54
Ácido barbitúrico.
● Ácido débil
● pKa=4.
● Es muy soluble hasta 11.45g por
litro debido a su tautomería.

Ácido
Barbiturico(2,4,6-trioxohexahidropirimidin
a)
Separación
Identificación
● Cromatografía en capa fina

Fase móvil

-Escopolamina
CH2Cl2-MeOH-NH4OH (9:1:0.1)
-Ácido Barbitúrico
AcOEt-MeOH-AcOH glacial (7:2:1)
-Paracetamol
CH2Cl2-MeOH (9:1)
-Ácido 4-Hidroxibenzoico
AcOEt-MeOH (9:1)+ 10 gotas de AcOH glacial
El eluyente ascenderá, por capilaridad por la placa y arrastrará los
componentes a lo largo de ésta produciendo "manchas" de los componentes.
En la cromatografía en capa fina (ccf), el grado de elución de las sustancias
depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente
utilizado.
RESULTADOS:
Tabla 1.

Tóxico no volátil Rf muestra Rf referencia

Paracetamol

Ác.Barbitúrico 0.541 0.567

Escopolamina 0.427 0.514

Ác. 4-hidroxibenzóico
Identificación
● Cromatografía en capa fina

Identificación
1 2 3 4 1. Escopolamina

2. Ácido Barbitúrico

3. Paracetamol

4. Ácido 4-Hidroxibenzoico
Pruebas de identificación coloridas.

Reactivo de Dragendorff: Se utiliza para determinar la presencia de

alcaloides, está formado por:
● 2.6 g de Carbonato de Bismuto
● 7.0 g de Yoduro de Sodio
● 25 mL Ácido Acético Glacial
● 8 mL Acetato de Etilo
- La reacción de Dragendorff produce sales de los alcaloides,
formando precipitados de color naranja-rojizo.
● Reacción colorida
○ Reacción de Dragendorff - Escopolamina
● Reacción colorida
○ Reactivo de Dille-Koppanyi - Barbitúricos

Reactivo de Dille-Koppanyi: se utiliza para la

identificación de Barbitúricos, esta consiste de la
mezcla de dos soluciones:

a) 0,1g de dihidrato de acetato de cobalto (ll)

b) isopropilamina al 5% (v/v) en metanol

La prueba es positiva si se observa la formación

de un complejo púrpura claro.
Resultados para pruebas coloridas.

Prueba Resultado

Dragendorff +

Dille-Koppanyi +
Cuantificación
 Tabla 1. Absorbancias de la curva patrón.

Concentración de ácido Absorbancia

barbitúrico [mg/ml]

0 0

0.45 0.029

0.9 0.049

1.8 0.112

2.4 0.151

Pendiente (m) 0.063

Ordenada al origen (b) -0.0017

Coeficiente de correlación (r) 0.997

Curva patrón de ácido barbitúrico
Para calcular la
concentración de ac. y= 0.063

barbitúrico en muestra:
m= 0.063
b= -0.0017

y= mx + b
● Curva patrón
● Ecuación de la recta donde: x= y-b / m
● y=absorbancia de la muestra x = 0.063+0.0017 / 0.063
● m=pendiente
● x= concentración de la muestra x = 1.027 mg/mL de ácido barbitúrico en
muestra.
● b=ordenada al origen
● Despejar x (equivalente a concentración)
● Resolver
 Conclusiones
Por medio de la extracción básica se logró separar los cuatro tóxicos no volátiles contenidos en la
muestra problema, con base en sus propiedades físico químicas ( ácido- base, densidad y
solubilidad).

Los Rf obtenidos en la Tabla 1, para cada tóxico extraído, muestran una similitud con sus Rf de
referencia. Si los tóxicos corren a la misma distancia que su referencia, es porque su polaridad es la
misma y por lo tanto es el mismo compuesto.

Mediante una curva patrón y espectrofotometría, se cuantificó correctamente el Ác.Barbitúrico en la

muestra, obteniendo una concentración final de 1.027mg/mL de Ác.Barbitúrico.
 Referencias
➔ http://farmacia.udea.edu.co/~ff/alcaloides.pdf
➔ Walton F., H.; Reyes, J. (2005). Análisis químico e instrumental moderno. España: editorial
Reverté.
➔ O’Neal, C. L., Crouch, D. J., & Fatah, A. A. (2000). Validation of twelve chemical spot tests
for the detection of drugs of abuse. Forensic Science International, 109(3), 189-201.
➔ de Faubert Maunder, M. J. (1975). An improved field test for barbiturates and hydantoins
with a modified cobalt (II) thiocyanate reagent. Analyst, 100(1197), 878-883.