PROBLEMAS 3:

CROMATOGRAFÍA
Antonio de Jesús Muñoz Escobar

ANÁLISIS INSTRUMENTAL
Dra. Alba Yadira Corral Avítia
 PROBLEMAS 3: CROMATOGRAFÍA
Análisis Instrumental Marzo 2018

1. Los siguientes datos corresponden a una columna para cromatografía de líquidos:

Longitud del relleno 24.7 cm, caudal 0.313 mL/min, volumen de la fase móvil 1.37
mL, Volumen de la fase estacionaria 0.164 mL. El cromatograma de una mezcla
de especies A, B, C Y D proporcionan los siguientes datos:

No 3.1 0
retenido
tR W
A 5.4 0.41
B 13.3 1.07
C 14.1 1.16
D 21.6 1.72

Calcular:
a) El número de platos.
𝑡𝑅 2
𝑁 = 16 ( )
𝑊
5.4 𝑚𝑖𝑛 2
𝑁𝐴 = 16 ( ) = 2775.49
0.41 𝑚𝑖𝑛

13.3 𝑚𝑖𝑛 2
𝑁𝐵 = 16 ( ) = 2472.04
1.07 𝑚𝑖𝑛

14.1 𝑚𝑖𝑛 2
𝑁𝐶 = 16 ( ) = 2363.97
1.16 𝑚𝑖𝑛

21.6 𝑚𝑖𝑛 2
𝑁𝐷 = 16 ( ) = 2523.31
1.72 𝑚𝑖𝑛

Media:
(2775.49 + 2472.04 + 2363.97 + 2523.31)
𝑁𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 =
4
(10134.81)
𝑁𝑃𝑟𝑜𝑚 =
4
𝑁𝑃𝑟𝑜𝑚 = 2533.70

La altura de plato de la columna.

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Análisis Instrumental Marzo 2018
𝐿
𝐻=
𝑁
24.7
𝐻= = 9.75 × 10−3
2533.70

b) Factor de retención.

(𝑡𝑅 − 𝑇𝑀 )
𝑘` =
𝑇𝑀

(5.4 − 3.1)
𝑘`𝐴 = = 0.742
3.1

(13.3 − 3.1)
𝑘`𝐵 = = 3.29
3.1

(14.1 − 3.1)
𝑘`𝐶 = = 3.55
3.1

(21.6 − 3.1)
𝑘`𝐷 = = 5.97
3.1

c) Coeficiente de distribución para cada compuesto.

𝑘`𝑉𝑚
𝐾=
𝑉𝑠

(0.742)(1.37)𝑚𝐿
𝐾𝐴 = = 6.198
0.164

(3.29)(1.37)𝑚𝐿
𝐾𝐵 = = 27.48
0.164

(3.55)(1.37)𝑚𝐿
𝐾𝐶 = = 29.66
0.164

(5.97)(1.37)𝑚𝐿
𝐾𝐷 = = 49.87
0.164

d) La resolución entre B y C.
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Análisis Instrumental Marzo 2018

2[(𝑡𝑅 )𝐶 − (𝑡𝑅 )𝐵 ]
𝑅𝑆 =
𝑊𝐵 + 𝑊𝐶
2[14.1 − 13.3]
𝑅𝑆 =
1.07 + 1.16
𝑅𝑠 = 0.72

e) El factor de selectividad entre estos dos compuestos.

𝐾𝐶
∝=
𝐾𝐵
29.66
∝=
27.48
∝= 1.08

f) La longitud de columna necesaria para tener una resolución de 1.5.

(𝑅𝑆 )1 √𝑁1
=
(𝑅𝑆 )2 √𝑁2

0.72 √2533.70
=
1.5 √𝑁2
0.72 2
𝑁2 = 2533.70 ( )
1.5
𝑁2 = 583.76
𝐿 =𝑁×𝐻
𝐿 = 583.76 × (9.75 × 10−3 )
𝐿 = 5.69 𝑐𝑚

g) Tiempo necesario para separar B y C con una resolución de 1.5.

(𝑡𝑅 )1 (𝑅𝑆 )12
=
(𝑡𝑅 )2 (𝑅𝑆 )22
14,1 (0.72)12
=
(𝑡𝑅 )2 (1.5)22
(14.1)(1.5)2
(𝑡𝑅 )2 =
(0.72)2
(𝑡𝑅 )2 = 6.2 𝑚𝑖𝑛
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h) La resolución entre C y D.

2[(𝑡𝑅 )𝐷 − (𝑡𝑅 )𝐶 ]
𝑅𝑆 =
𝑊𝐶 + 𝑊𝐷
2[21.6 − 14.1]
𝑅𝑆 =
1.16 + 1.72
𝑅𝑆 = 5.21

i) El factor de selectividad entre estos dos compuestos.

𝐾𝐶
∝=
𝐾𝐷
29.66
∝=
49.87
∝= .594

j) La longitud de columna necesaria para tener una resolución de 1.5.

(𝑅𝑆 )1 √𝑁1
=
(𝑅𝑆 )2 √𝑁2

5,21 √2533,70
=
1,15 √𝑁2
5.21 2
𝑁2 = 2533.70 ( )
1.5
𝑁2 = 30566.67

𝐿 =𝑁×𝐻

𝐿 = 30566.67 × (9.75 × 10−3 )

𝐿 = 298.03 𝑐𝑚

2. Con un cromatógrafo gas-líquido y con una columna de relleno de 40 cm se

obtuvieron los siguientes datos:
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tR min W
Aire 1.9 0
Metilciclohexano 10 0.76
Metilciclohexeno 10.9 0.82
tolueno 13.4 1.06

Calcular: el número de platos promedio.

Calcular la resolución para: Metilciclohexano y metilciclohexeno, Metilciclohexeno
y Tolueno, Metilciclohexano y Tolueno.
Si fuera necesaria una resolución de 1.5 para resolver metilciclohexano y
metilciclohexeno, a) ¿Cuantos platos se necesitarían?, b) ¿Que longitud debería
tener la columna si se utiliza el mismo relleno?, c) ¿Cuál sería el tiempo de
retención del metilciclohexeno en la columna con la longitud de (b)?
Si VS y VM para la columna fueron respectivamente 19.6 y 62.6 mL y el pico de
aire no retenido apareció a los 1.9 min. Calcular: a) El factor de retención para
cada uno de los compuestos, b) Coeficiente de distribución para cada compuesto,
c) El factor de selectividad para el metilciclohexano y metilciclohexeno, c) El factor
de selectividad para el metilciclohexeno y el tolueno.

Calcular: el número de platos promedio.

𝑡𝑅
𝑁 = 16( )2
𝑊
N metilciclohexano = 16 (10/0.76)2
N metilciclohexano = 2770.08

N metilciclihexeno = 16 (10.9/0.82)2
N metilciclihexeno = 2827.13

N tolueno = 16 (13.4/1.06)2
N tolueno = 2556.92
(2770.08 + 2827.13 + 2556.92)
𝑁𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 =
3
N= 2718.04

Calcular la resolución para: Metilciclohexano y metilciclohexeno, Metilciclohexeno

y Tolueno, Metilciclohexano y Tolueno.
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Metilciclohexano y metilciclohexeno

2 [ (𝑡𝑅)𝐵 – (𝑡𝑅)𝐴]
𝑅=
𝑊𝐴 + 𝑊𝐵
Rs = 2 [(10.9-10)] / (0.82 + 0.76)
Rs = 1.14

Metilciclohexeno y Tolueno

2 [ (𝑡𝑅)𝐵 – (𝑡𝑅)𝐴]
𝑅=
𝑊𝐴 + 𝑊𝐵
Rs = 2 [(13.4-10.9)] / (1.06 + 0.82)
Rs = 2.66

Metilciclohexano y Tolueno

2 [ (𝑡𝑅)𝐵 – (𝑡𝑅)𝐴]
𝑅=
𝑊𝐴 + 𝑊𝐵
Rs = 2 [(13.4-10)] / (1.06 + 0.76)
Rs = 3.74

Si fuera necesaria una resolución de 1.5 para resolver metilciclohexano y

metilciclohexeno
a) ¿Cuántos platos se necesitarían?
𝑡𝑅 2
𝑁 = 16 ( )
𝑊
2
N = 2718.04 x 1.5 / 1.14 2

N = 4172.03

b) ¿Qué longitud debería tener la columna si se utiliza el mismo relleno?

𝐿
𝐻=
𝑁
L=NxH

L= 4172.03 x 0.0147

L = 61 cm
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c) ¿Cuál sería el tiempo de retención del metilciclohexeno en la columna con la
longitud de (b)?

tR = 10.9 x 1.52 / 1.142

tR = 18.9 min

Si VS y VM para la columna fueron respectivamente 19.6 y 62.6 mL y el pico de

aire no retenido apareció a los 1.9 min.
Calcular:
a) El factor de retención para cada uno de los compuestos
𝑡𝑅𝐴− 𝑡𝑀
𝐾´ =
𝑡𝑀

K1 = (10-1.9) / 1.9

K1 = 4.26

K2 = (10.9-1.9) / 1.9

K2 = 4.74

K3 = (13.4-1.9) / 1.9

K3= 6.05

b) Coeficiente de distribución para cada compuesto,

K1 = 4.26 (62.6/19.6)

K1 = 13.6

K2 = 4.74 (62.6/19.6)

K2 = 15.13

K3 = 6.05 (62.6/19.6)

K3 = 19.32

c) El factor de selectividad para los compuestos,

α = [(tR)B -tM] / [(tR)A + tM]

α2.1 = (10.9-1.9) / (10-1.9)

α2.1 = 1.11
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α3.2 = (13.4-1.9) / (10.9-1.9)

α3.2 = 1.28

3. Calcular a) el factor de capacidad o de retención k, y b) la resolución Rs, de los

siguientes analitos en un sistema cromatográfico por HPLC, con los datos que
figuran en la siguiente tabla: tm= 1.12 min

Analito tr, min w, s

Propoxur 1.72 29
Carbaryl 5.52 39
1-naftol 7.34 30
Methiocarb 7.70 65

a) el factor de capacidad o de retención k

𝑡𝑅𝐴− 𝑡𝑀
𝐾´ =
𝑡𝑀

K1 = (1.72-1.12) / 1.12

K1 = 0.536

K2 = (5.52-1.12) / 1.12

K2 = 3.929

K3 = (7.34-1.12) / 1.12

K3 = 5.554

K3 = (7.70-1.12) / 1.12

K3 = 5.875

b) la resolución Rs, de los siguientes analitos en un sistema cromatográfico por

HPLC, con los datos que figuran en la siguiente tabla: tm= 1.12 min

Carbaryl

2 [ (𝑡𝑅)𝐵 – (𝑡𝑅)𝐴]
𝑅=
𝑊𝐴 + 𝑊𝐵
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Rs = 2 [(5.52-1.72)] / (0.483min + 0.65min)
Rs = 6.707

1- naftol

Rs = 2 [(tR)3 - (tR)2] / W 3 + W 2
Rs = 2 [(7.34-5.52)] / (0.64min + 0.5min)
Rs = 3.13

Methiocarb

Rs = 2 [(tR)4 - (tR)3] / W 3 + W 4
Rs = 2 [(7.70-7.34)] / (0.5min + 1.0833min)
Rs = 0.455

c) Indicar si los picos cromatográficos de los componentes de la muestra están

bien resueltos
Carbaryl: si
1-Naftol: si
Methiocarb:no

d) Calcular el número de platos teóricos efectivos para el 1-naftol.

𝑡𝑅 2
𝑁 = 16 ( )
𝑊
N = 16 (7.34/0.5)2
N= 3448

4. Una columna cromatográfica con una longitud de 50 cm y un diámetro interno de

6.22 mm se empaca con fase estacionaria que ocupa el 45.0 % del volumen. Si el
volumen de la velocidad de flujo es 1.20 mL/min.
a. ¿Cuál es el volumen de la columna?
𝑉 = 𝜋 × 𝑟2 × ℎ
𝑉 = 𝜋 × (0.311 𝑐𝑚)2 × 50 𝑐𝑚
𝑉 = 15.1928 𝑐𝑚3
b. ¿Cuál es el volumen de la fase móvil?
0.55 × 15.1928 𝑐𝑚3 = 8.3560 𝑐𝑚3
c. ¿Cuál es la velocidad de flujo lineal en cm/min?
𝐹 = 𝜋𝑟 2 𝑢0 𝜀
𝑢0 = 𝐹/𝜋𝑟 2 𝜖
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3
𝑐𝑚
1.20 min
𝑢0 = = 8.7760 𝑐𝑚/𝑚𝑖𝑛
𝜋 × (0.311)2 × 0.45
d. ¿Cuánto tiempo le toma al solvente salir de la columna?
50 𝑐𝑚
= 5.6973 𝑚𝑖𝑛
8.7760 𝑐𝑚/𝑚𝑖𝑛

5. El soluto requiere 12.0 min para pasar por una columna pero el solvente pasa en
1.5 min
a) Calcula el factor de retención, k’
tr − tm
k´ = tm

k´ = 12 - 1.5 / 1.5 = 7

b) Que fracción del tiempo está el soluto en la fase móvil conforme va pasando
por la columna.

ts = tr – tm = 12 – 1.5 = 10.5 min

c) El volumen de la fase estacionaria es un décimo del volumen en la fase móvil

en la columna (Ve=0.10Vm). Encuentra el coeficiente de reparto, K, para este
sistema.
𝐶𝐸
𝐾= 𝐶𝐸 ∗ 𝑉𝐸 = 𝐶𝑀 ∗ 𝑉𝑀
𝐶𝑀

𝐶𝐸 ∗ (0.1 𝑉𝑀 ) = 𝐶𝑀 ∗ 𝑉𝑀

𝐶𝑀 ∗ 𝑉𝑀 1 𝐶𝑀
𝐶𝑀 = 0.1 𝑉𝑀
= 0.1
= 10 𝐶𝑀

10 𝐶𝑀
𝐾= 𝐶𝑀

𝐾 = 10

6. Un solvente ocupa 25% del volumen de una columna cromatográfica la cual tiene
un diámetro interno de 1.250 mm. Si el volumen de la velocidad de flujo es 1.5
mL/min, encuentra la velocidad lineal de flujo, u.
𝐹
𝑢= 2
(𝜋𝑟 )0.25
1.5 𝑚𝐿
𝑢=
(𝜋0.06252 )0.25
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1.5 𝑚𝑙
𝑢=
3.067𝑥10−3 𝑚𝑙/𝑐𝑚
𝑢 = 491.8 𝑐𝑚/𝑚𝑖𝑛

7. Considera una columna cromatográfica en la cual VE= VM/8. Calcula el factor de

retención, k si K=4 y K=40.

𝐾𝐶 𝑉𝐸
𝑘′𝑠 =
𝑉𝑀
Si k=4
(4)(1)
𝑘′𝑠 = = 0.5
8
Si k=40
(40)(1)
𝑘′𝑠 = =5
8

8. El volumen de retención de un soluto es 66.2 mL para una columna con V M= 15

mL y VE = 8.5 mL. Calcula el coeficiente de reparto K y el factor de retención para
este soluto k.

Factor de retención
(𝑡𝑅 − 𝑇𝑀 ) = 𝑉𝑅 − 𝑉𝑀
𝑘` =
𝑇𝑀 𝑉𝑀

66.2 𝑚𝐿 − 15 𝑚𝐿
𝐾´ = = 3.41
15 𝑚𝐿

Coeficiente de reparto

nE VM nE
Kc   ks´
nM VE nM

15 𝑚𝐿
𝐾𝑐 = 3.41 (8.5 𝑚𝐿) = 6.017
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9. De acuerdo a los estudios de distribución las especies A y B tienen constantes de
distribución agua/hexano de 6.01 y 6.20 (K=[A]ac/[A]hex). Las dos especies se
deben separar por elución con hexano en una columna empacada con gel de sílice
que contiene agua adsorbida. La proporción Ve/Vm para el empaque es 0.422.
a. Calcular el factor de retención para cada soluto
K cVE
k s ´
VM
Factor de retención del soluto A (agua)
𝐾𝑠´ = (6.01)(0.422) = 2.536
Factor de retención del soluto B (hexano)
𝐾𝑠´ = (6.20)(0.422) = 2.616
b. Calcular el factor de selectividad
KB
 
KA

6.20
𝛼= = 1.0316
6.01

10. Una mezcla de benceno, tolueno y aire es inyectada en el cromatógrafo de gases.

El aire da un pico de 42 s, mientras que el benceno y el tolueno son eluidos
respectivamente a 251 y 333 s. Calcular el tiempo de retención corregido, el factor
de capacidad (o factor de retención) para cada soluto, así como el coeficiente de
retención relativa (o factor de selectividad) para los dos solutos.

tR min
Aire 0,7
a)benzeno 4,35
b)tolueno 5,55

k’ A=5.21
k’B=6.93

α=1.33
11. Considerando una columna con una altura de plato de 1.5 mm y con número de
platos de 333, por la que fluye el gas portador a un caudal de 3 mL•min-1, y
sabiendo que el volumen muerto es de 1.0 mL:
a) ¿Cuáles son el tiempo de retención y el volumen de retención cuando k es 1, 2
,5 y 10?
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F= 3 ml*min-1
Vm=1 mL

Despeje

=0.33 min.
Calculo de tiempo de retención y volumen de retención.

Despeje de formula

valor k VR Tr
1 2 0,44 min
2 3 0,78 min
5 6 1,78 min
10 11 3,44 min

b) ¿Cuál sería la anchura en la base de los picos a cada uno de los valores
anteriores de k?

12. En una columna de 122 cm de longitud y a una temperatura de 160ºC se

obtuvieron los siguientes tiempos de retención en minutos: pico del aire 0.90,
heptano 1.22 y octano 1.43. El ancho en la base de los picos fue de 0.14 min
para el heptano y de 0.20 min para el octano.
𝑡𝑅 W
Aire 0,9
Heptano 1,22 0,14
Octano 1,43 0,2

a) Calcular la retención relativa y la resolución para estos picos.

1.22 − 0.9
𝑘 ℎ𝑒𝑝𝑡𝑎𝑛𝑜 = = 0.36
0.9

1.43 − 0.9
𝑘 𝑜𝑐𝑡𝑎𝑛𝑜 = = 0.59
0.9

2(1.43 − 1.22)
𝑅𝑠 = = 1.24
0.2 + 0.14
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b) ¿Qué longitud debería tener la columna para obtener una resolución de 1.5?
𝑡𝑅 1.22 2
𝑁1 = 16( )2 = 16( ) = 1215
𝑊 0.14
𝑡𝑅 1.43 2
𝑁2 = 16( )2 = 16( ) = 817
𝑊 0.2
𝑁1 + 𝑁2
𝑁𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = = 1016
2
(𝑅𝑠 )1 √𝑁1
=
(𝑅𝑠 )2 √𝑁2
1.24 √1016
=
1.5 √𝑁2
1.5 2
𝑁2 = 1016( ) = 2034
1.06

13. Las sustancias A y B tienen tiempos de retención de 16.40 y 17.63 min,

respectivamente, en una columna de 30 cm. Una especie no retenida pasa a
través de la columna en 1.30 min. Las anchuras máximas (en la base) de A y B
son 1.11 y 1.21 min, respectivamente.
a. Dibuje el cromatograma a partir de los datos indicados y calcule

b. la resolución entre los compuestos A y B

2 [ (𝑡𝑅)𝐵 – (𝑡𝑅)𝐴]
𝑅=
𝑊𝐴 + 𝑊𝐵
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2 [ 17.63−16.40]
𝑅= = 1.060
1.21 + 1.11

c. el número medio de platos de la columna

𝑡𝑅 16.40 2
𝑁 = 16( )2 = 16( ) = 3492.70
𝑊 1.11
𝑡𝑅 17.63 2
𝑁 = 16( )2 = 16( ) = 3396.67
𝑊 1.21
3492.70 + 3396.67 2
𝑁𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = ( ) = 3444.68
2
d. la altura de plato

𝐿 30 𝑐𝑚
𝐻= = = 8.7 𝑥 10−3
𝑁 3444.68
e. la longitud de la columna necesaria para lograr una resolución de 1.5
(𝑅𝑠 )1 √𝑁1
=
(𝑅𝑠 )2 √𝑁2
1.06 √3444.68
=
1.5 √𝑁2
1.5 2
𝑁2 = 3444.68( ) = 6 897.94
1.06
f. el tiempo necesario para eluir la sustancia B en la columna que da un valor
de RS de 1.5
(𝑡𝑅 )1 (𝑅𝑠 )1 2 17.63 1.062
= = =
(𝑡𝑅 )2 (𝑅𝑠 )2 2 (𝑡𝑅 )2 1.52
17.63
(𝑡𝑅 )2 = = 35.30 𝑚𝑖𝑛
1.062
( )
1.52

14. La figura muestra el cromatograma de una mezcla de dos componentes en una

columna cromatográfica de líquidos empaquetada, de 25 cm. La velocidad de flujo
fue de 0.40 mL min-1.
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Las sustancias A y B tienen tiempos de retención de 16.40 y 17.63 min, respectivamente,
en una columna de 30 cm. Una especie no retenida pasa a través de la columna en 1.30
min. Las anchuras máximas (en la base) de A y B son 1.11 y 1.21 min,

a) Determina los factores de retención para los dos componentes

𝑡𝑅𝐴− 𝑡𝑀 30 − 5
𝐾 ´𝐴 = = =5
𝑡𝑀 5
𝑡𝑅𝐵− 𝑡𝑀 50 − 5
𝐾 ´𝐵 = = =9
𝑡𝑀 5

b) Calcula la resolución de los dos picos

2 [ (𝑡𝑅)𝐵 – (𝑡𝑅)𝐴]
𝑅=
𝑊𝐴 + 𝑊𝐵
2 [ 50−30]
𝑅= = 1.025
23 + 16

c) Halla la altura media de plato

𝑡𝑅 30
𝑁 = 16( )2 = 16( )2 = 56.25
𝑊 16
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𝑡𝑅 50
𝑁 = 16( )2 = 16( )2 = 75.61
𝑊 23
56.25 + 75.61 2
𝑁𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = ( ) = 65.93
2
𝐿 25 𝑐𝑚
𝐻= = = 0.379
𝑁 65.93

d) ¿Qué longitud de la columna se necesitaría para alcanzar una resolución de

1.75?

(𝑅𝑠 )1 √𝑁1
=
(𝑅𝑠 )2 √𝑁2
1.025 √65.93
=
1.75 √𝑁2
1.75 2
𝑁2 = 65.93( ) = 192.18
1.025
𝐿 = (𝐻)(𝑁) = (0.379)(192.18) = 72.83

e) Supongamos que la longitud de la columna se ha fijado a 25 cm y que el

material de empaquetamiento está fijo. ¿Qué medidas podría usted tomar a fin de
incrementar la resolución para lograr la separación en línea base?

Se pueden emplear las siguientes medidas:

-Cambiar de eluyente, utilizar otros disolventes con mayor capacidad de elución.
- Adición de sustancias a la fase acuosa, como tampones (cambio de pH y
naturaleza del tampón), pares iónico, ligandos formadores de complejos, etc.
-Variación de la temperatura.

f) ¿Hay alguna medida que usted pudiera usar para lograr una mejor separación
en menos tiempo con la misma columna que en el apartado anterior?

Si la columna no se puede modificar, entonces se podría actuar sobre lo siguiente:

- aumentando el caudal de la fase móvil
- elución en gradiente
- variando la temperatura
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