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Stevia rebaudiana
Lirged Delgado*, María Angélica Torres**, Carlos Andrés Pérez G.***, Álvaro
Calero****
RESUMEN
Director Centro de Investigaciones en Ciencias Básicas, Ambientales y Desarrollo Tecnológico (CICBA) y del
***
Grupo de Investigación en Biotecnología y Medio Ambiente (GIBMA), es Biólogo con énfasis en Genética, especialista
en Simulación Molecular, maestría en Bioinformática, estudios avanzados y doctorales en Biotecnología. Profesor de
dedicación exclusiva de la Universidad Santiago de Cali. caperez@usc.edu.co
Profesor programa de Química, Codirector del Grupo de Investigación en Biotecnología y Medio Ambiente
****
(GIBMA), Es Químico, maestría en Biotecnología, exdirector de Investigaciones de la USC, coordinador del área de
bio-remediación, acalero@usc.edu.co
Biólogo Universidad del Valle (1998), Mejor trabajo de investigación en biología molecular para estudiante de
*****
ABSTRACT
This research was performed to realize a new extraction methodology for the Stevia
Rebaudiana, and characterize its glucosides. Several methods were researched: solvent
based, ion exchange, absorption chromatography, and pressurized fluids; analyzing
each procedure, adjusting it to a new extraction method and with reagents of easy
acquisition, basing it on the researched glucoside extractions. After performing several
extraction trials (Soxhlet, Reflux), with solvents at different concentrations, temperature
and pressure variations, the conditions yielding the best mixture purity were chosen. The
process steps are: Drying, extraction, precipitation, clarification, and purification. The
Soxhlet extraction allowed for a good deal of the sweetening power to remain intact
during the purification step, as opposed to the reflux extraction. The process was
controlled using thin plate chromatography and IR. To identify the glucosides present in
the Stevia sample, their infrared standards were looked up. In this case the stevioside
and rebaudioside A infrared standards were found, which can be compared with the
produced extract's spectrum.
INTRODUCCIÓN
Sus hojas tienen un intenso sabor dulce, propiedad que se debe al contenido de
glicósidos, de los cuales el esteviósido es el que se halla en mayor proporción, seguido
del rebaudiósido A, B, C, D, E, dulcósido A y B, esteviol 2. Presentan características de
estabilidad al calor (198-200°C), al pH en un rango de tres a nueve, no se fermentan, y
son de 200 a 300 veces más dulce que la sacarosa.3
Además, desde hace tiempo se sabe que el rebaudiósido A es el que tiene mejor
propiedades sensoriales (es más dulce y menos amargo) de los cuatro4.
1
Alicia Ester Soto1 y Susana Del Val2. Extracción de los principios edulcorantes de la stevia rebaudiana.
URL: http://www2.uca.edu.ar/esp/sec-fagrarias/esp/docs-revista/volumenes/pdf/vol20_1.pdf
2
LAURA DAYANA LÓPEZ TORRES y LUIS GUILLERMO PEÑA GUEVARA. Plan Estratégico Para La Creación De
Una Empresa, Dedicada A La Producción Y Comercialización De Edulcorante A Base De stevia. Tesis De Grado.
Biocomercio sostenible. “Stevia Rebaudiana Bertoni” Instituto de Investigación de Recursos Biológicos Alexander von
Humboldt. 2002. URL: http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ingenieria/tesis17.pdf
3
David I. Habeych; Catalina Giraldo1; Luz D. Marín. Universidad EAFIT. Departamento de Ingeniería de Procesos.
Desarrollo de un proceso de extracción y purificación de glicósidos de Stevia rebaudiana. En: XXIII Congreso
Colombiano de Ingeniería. Química. ...
URL: http://www.eafit.edu.co/NR/rdonlyres/16CF7453-10B0-468D-801AD E561FF5A1F 5/0/Cuaderno41.pdf
4
Eustas, European stevia association: componente botanic de stevia.
URL: http://www.eustas.org/esp/botanic_esp.htm
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El consumo de Stevia es cada vez mayor, por lo cual se debe investigar y desarrollar
una alternativa de extracción económica y socialmente viable, favoreciendo así su
consumo regional y nacional. Además, existen motivos para a nivel de la salud para su
consumo, por ejemplo: puede ser consumida por personas con diabetes, obesidad,
ayuda a la prevención de caries, etc. La planta ha llamado la atención en un momento
de incremento en la demanda de los alimentos alternativos bajos en calorías y se ha
demostrado resultados prometedores en investigaciones médicas en el tratamiento de la
obesidad y presión arterial. La Stevia no tiene ningún efecto en el azúcar en sangre, y es
por esta razón, que resulta un edulcorante natural atractivo para el uso de pacientes
diabéticos y los que se encuentran bajo dietas con control de hidratos de carbono5.
Por tanto, es necesario buscar un endulzante como la Stevia, que cumpla con las
necesidades actuales de las personas, y que ante todo no tiene efectos tóxicos. En
Argentina y en Colombia su uso esta avalado tanto por la Liga Argentina de Protección
al Diabético como por la Federación Diabetológica Colombiana respectivamente6.
1. MATERIALES Y METODOS
5
Todo sobre stevia. Instituto de Estudios Salud Natural de Chile. IESN-Chile. Informe del IESN - Noviembre 2001.
URL: http://www.geocities.com/iesnchile/todostevia.html
6
LAURA DAYANA LÓPEZ TORRES y LUIS GUILLERMO PEÑA GUEVARA. Plan Estratégico Para La Creación De
Una Empresa, Dedicada A La Producción Y Comercialización De Edulcorante A Base De stevia. Tesis De Grado.
Biocomercio sostenible. “Stevia Rebaudiana Bertoni” Instituto de Investigación de Recursos Biológicos Alexander von
Humboldt. 2002. 18. URL: http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ingenieria/tesis17.pdf
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Posteriormente se pasa a triturar a un molino de cuchillas tipo Willey Mill con el objetivo
que durante la extracción se obtenga la mayor parte de los glicósidos responsable del
sabor dulce.
El extracto obtenido, pasa por rotoevaporación recuperando parte del etanol utilizado,
luego le sigue un proceso de purificación con sal de calcio que se utiliza para precipitar
las impurezas que dan el sabor amargo y se filtran al vacío.
El producto de la filtración pasa aun reflujo por unos 15 minutos con carbón activado que
ayudara a remover algunos pigmentos y sustancias de alto peso molecular, aclarando el
extracto; seguido de una filtración.
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Reflujo. Al balón del equipo a reflujo, se le agrega 40g de hojas molidas secas, con
798mL de alcohol, y se deja cinco horas trabajando.
El extracto obtenido, pasan por un proceso de filtración al vació para remover partículas
en suspensión y posteriormente se pasan a rotoevaporar cuyo objetivo, es el de
recuperar el etanol utilizado y dejar la muestra libre de este solvente.
Luego el extracto, es tratado con una sal de calcio, y se pasa a filtrar al vació. El
producto del proceso descrito anteriormente, se mezcla con carbón activado; para mejor
remoción de sustancias no deseadas, se coloca a reflujo la muestra, por unos 15
minutos, seguido de una filtración. Después la muestra es sometida de nuevo a
procesos de purificación y una segunda rotoevaporación, que eliminara ahora el exceso
de agua en el extracto.
Para aclarar aun más las muestras, se somete a un proceso fotocatalitico en muy poca
cantidad. El contiguo es realizar los análisis de caracterización (espectroscopia de
infrarrojo), que servirán para la identificación de grupos funcionales y el tipo de glicósido
presente.
2. RESULTADOS
2. Rotaevaporación soxhlet
Condición de rotoevaporación: temperatura de 50ºC el baño de maría y a una
presión de 131mmHg
Cantidad de alcohol recuperado: 33.5mL
Cantidad de extracto obtenido: 23Ml
3. Rotaevaporación reflujo
Condición de rotoevaporación: temperatura de 60ºC el baño de maría y a una
presión de 190mmHg
Cantidad de alcohol recuperado: 538mL
Cantidad de extracto obtenido: 50mL
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6. Purificación
La utilización de carbón activado, logro precipitar aun más impurezas y aclarar aun mas
el extracto, pero igual que el procedimiento anterior pierde algo de dulzor el producto.
Hay que tener en cuenta, que una cantidad mayor a 2g de carbón activado, logra aclarar
completamente el extracto, pero a la vez hace perder todo su dulzor. Por ello se
necesita utilizar poca cantidad de este reactivo.
7. Segunda rotoevaporación
Rotaevaporación soxhlet
Cantidad rotoevaporada: 100mL de extracto
Condición de rotoevaporación: temperatura de 45ºC el baño de maria y a una
presión de 250mmHg.
Cantidad de H2O recuperada: 37mL ~ 37%
Cantidad de extracto total obtenido: 40mL
Rotaevaporación reflujo
Cantidad rotoevaporada: 100mL
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8. Proceso fotocatalítico
Este procedimiento a base de TiO2 se utilizo para aclarar el extracto, y dio un muy buen
resultado, el color paso a ser de un amarillo mucho mas claro del que se había obtenido.
Se debe tener cuidado al utilizar el reactivo ya que el exceso de este, en la muestra
produce la desaparición completa del sabor dulce.
Vale la pena señalar, que se utilizó otro método para eliminar lo que todavía existía
de agua en el extracto; con un desecador al vacio con sulfato de magnesio (MgSO 4)
y otra prueba con sulfato de sodio (NaSO4); pero estos procedimientos, modificaron
el sabor dulce del extracto dando un sabor desagradable.
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De acuerdo a los resultados del análisis, se plantea por similitud de los espectros de
la figura 3 y el estándar de rebaudiósido A, la presencia del rebaudiósido A en la
muestra obtenida. La similitud de la figura 2 con la figura 3, permite plantear la
presencia de componentes dulces en la planta.
Rendimiento de la reacción
% de rendimiento x 100
rendimiento teórico
3. CONCLUSIONES
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Alicia Ester Soto1 y Susana Del Val2. Extracción de los principios edulcorantes de la
Stevia rebaudiana.
URL:http://www2.uca.edu.ar/esp/secfagrarias/esp/docsrevista/volumenes/pdf/vol20_1
.pdf
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PAYZANT John Donald et al. “Method of extracting selected sweet glycosides from
the Stevia rebaudiana plant.”Canadian Intellectual Property Office. 1999.
URL: http://www.freepatentsonline.com/5962678.html
Todo sobre Stevia. Instituto de Estudios Salud Natural de Chile. IESN-Chile. Informe
del IESN - Noviembre 2001.
URL: http://www.geocities.com/iesnchile/todostevia.html