UNIVERSIDAD AUTNOMA

DEL ESTADO DE MXICO

<<Facultad de Qumica>>
Laboratorio Integral de Farmacologa
Reporte prctica #7:
EFECTO DE LA ADMINISTRACIN DE PENTOBARBITAL
SOBRE EL TIEMPO DE SUEO.

Equipo #2:
Esquivel Daz Olivia Guadalupe.
Jordn Salgado Ana Vernica.
Lagunas Ocampo Emmanuel Ricardo.
Lara Flores Ingrid Berenice.
Meja Paduano Alba.
Fecha de realizacin de la prctica: 14 de octubre de 2014
Fecha de entrega del reporte: 20 de Octubre de 2014.
OBJETIVO:
Demostrar las alteraciones sobre el tiempo de sueo que produce la
administracin previa de dosis pequeas de pentobarbital en ratones.

MARCO TERICO:
Los barbitricos son derivados del cido barbitrico (2,4,6-
trioxohexahidropirimidina) o malonilurea, producto sintetizado a partir del cido
malonico y urea. La sustitucin de sus tomos de hidrgeno en la posicin C-5
por diferentes radicales orgnicos da lugar a los diversos barbitricos. Las
distintas sustituciones en C-5 afectan la eficiencia clnica y producen diferencias
en la liposolubiblidad y en la semivida de los diferentes barbitricos.

Mecanismos de accin:
Farmacocintica: cuando se administran por va oral, la absorcin de los
barbitricos es completa, aunque variable y retrasada por la presencia de
alimentos en el estmago. La tasa de absorcin se relaciona con el grado
de liposolubilidad. La distribucin es amplia en todos los tejidos
alcanzando las concentraciones ms elevadas en el cerebro, el hgado,
los riones y el tejido adiposo. Atraviesan la barrera hematoencefalica y
la placenta y se encuentran en la leche materna. Los barbitricos se fijan
escasamente a protenas plasmticas y poseen un bajo volumen de
distribucin. Se metabolizan en el hgado y se excretan por va renal. Se
degradan a travs del sistema enzimtico microsomal heptico P-450. Al
ser inductores de la actividad enzimtica microsomal heptica acelera su
propia degradacin. Este efecto explica la tolerancia y la necesidad de
incrementar las dosis con la administracin crnica. Adems, aceleran el
metabolismo de otros frmacos cuya degradacin esta mediada por este
sistema enzimtico, razn por la cual las dosis de dichos frmacos deben
aumentarse cuando se administran conjuntamente. Las semividas de los
diferentes barbitricos son variables. Se incrementa con la edad, la
enfermedad heptica y la insuficiencia renal grave. La semivida de todos
ellos disminuye con la administracin crnica.
Farmacodinamia: los barbitricos poseen accin sedante, hipntica,
anticonvulsiva y anestsica. La mayora tienen una relacin dosis-
respuesta dependiente: las dosis bajas sedan y las altas anestesian.

El mecanismo de accin de los barbitricos implica al complejo receptor GABA-

receptor benzodiazepinico-canal de cloro. Los barbitricos intensifican la
actividad del GABA sobre el complejo del receptor GABA-A, incrementando las
acciones inhibidoras de este neurotransmisor. Hay datos que indican que los
barbitricos tambin podran reducir la neurotransmisin excitadora mediada por
el glutamato e inhibir la entrada de iones calcio en las terminaciones
presinpticas, reduciendo la liberacin de neurotransmisores.
Los barbitricos y el alcohol etlico en grandes dosis pueden provocar la apertura
del canal de cloro aun en presencia de GABA endgeno. Esto explica porque la
intoxicacin por barbitricos o alcohol etlico, cada uno por separado, puede
producir parada respiratoria y muerte.1

Su absorcin por va oral, parenteral y rectal es variable; la velocidad de

absorcin aumenta cuando se lo ingiere bien diluido con el estmago vaco. Los
efectos aparecen a partir de los 10 a 150 minutos por va oral o rectal, levemente
ms rpido por va intramuscular y casi al instante por va intravenosa. La
duracin de accin es de 3 a 4 horas. Pertenece a los barbitricos de accin
corta. La tolerancia al pentobarbital se desarrolla tras dos semanas de
administracin continuada, por lo que slo es til para tratamiento de corto plazo.
Se distribuye rpidamente a todos los tejidos y lquidos corporales y su
metabolismo se realiza casi exclusivamente en el hgado.2

Esta droga es ampliamente utilizada como sedante o hipntica para el

tratamiento del insomnio y como pre-medicacin quirrgica. En dosis
anestsicas por VI el pentobarbital tambin se encuentra indicado para el control
de ciertos sndromes convulsivos. Se piensa que este barbitrico reduce el flujo
sanguneo cerebral y en consecuencia reducira el edema cerebral, la presin
intracraneana o ambos parmetros.3

1
M. Salazar, C. Peralta, F. Pastor. Tratado de psicofarmacologa, bases y aplicacin clnica. 2 edicin.
Editorial Mdica Panamericana, Buenos aires Madrid. 2009. Pg. 373-375.
2
PR vademcum. Pentobarbital. (En lnea). Disponible en:
http://mx.prvademecum.com/droga.php?droga=765. Consultado el 18 de octubre de 2014.
3
Genaro Alfonso. Remington Farmacia. 20 Edicin Tomo I. Editorial. Mdica Panamericana, Buenos Aires.
2003. Pg. 1682.
ANIMAL DE EXPERIMENTACIN:
Dos ratones
MATERIALES
Jaula para el mantenimiento de los ratones
Jeringas de insulina
Algodn
Cronmetro o reloj
Tabla y estuche de diseccin
Desecador
Balanza para animales
Balanza analtica
Matraz volumtrico de 10ml
REACTIVOS
Pentobarbital
Solucin salina
ter
PROCEDIMIENTO
El da de la prctica, administrar a cada
uno de los ratones una dosis
Administrar por via intraperitoneal equivalente, nica de pentobarbital
0.16ml de pentobarbital 20ml/kg al raton necesaria para inducir el estado de sueo
problema, y 0.16ml de solucion salina al (50 mg/Kg). Registrar el tiempo que
raton testigo durante 5 dias previos a la tarda el ratn en quedarse dormido y el
practica. tiempo que permanece dormido,
registrar las diferentes etapas de
anestesia que cursa el ratn.

Realizar un grfico en el cual se compare

el tiempo de induccin del sueo y el
tiempo de permanencia de sueo entre
los ratones, comparando los resultados
promedio mediante una prueba de t de
student. Hacer lo mismo con los pesos
relativos de los hgados de los ratones.
Sacrificar a los animales bajo anestesia
con ter y realizar una necropsia para
disecar el hgado, observar y registrar la
apariencia del rgano y pesarlo, obtener
el peso relativo del rgano.

Discutir los resultados y elaborar las

conclusiones correspondientes
RESULTADOS:

Observaciones: En el ratn testigo se observ inicialmente prdida de control

motriz y de la orientacin, as como una ligera agitacin, posteriormente durante
el tiempo de sueo hubo movimientos involuntarios constantes, en los ltimos 15
minutos movimientos ms agresivos que solo cesaron cuando el ratn despert,
la recuperacin fue poco violenta.
El ratn problema presento prdida de control motriz y desorientacin menores
que el testigo, durante el tiempo de sueo los movimientos involuntarios tambin
estuvieron presentes, la recuperacin fue ms tardada y ms agresiva tras
despertar.

Ratones testigo

Ratn Tiempo de Tiempo de Peso del Peso del Peso

induccin sueo seg ratn hgado relativo
seg
1 150 3960 12.8 0.5338 4.17%
2 160 5180 10.6 0.6614 6.24%
3 139 3236 10.4 0.76 7.30%
4 510 5315 11.1 0.9862 8.88%
5 349 2186 13 0.4729 3.63%
6 240 3600 11.2 0.3125 2.79%
7 119 1320 14.7 0.997 6.78%
8 113 1729 8.9 0.6025 6.76%
Promedio 222.5 3315.75 5.82%
S 140.306807 1500.08445 2.0782
S2 19686 2250253.36 4.3192

Ratones problema

Ratn Tiempo de Tiempo de Peso del Peso del Peso

induccin sueo ratn hgado relativo
1 - - 11.2 0.472 4.21%
2 180 1658 10 0.7777 7.77%
3 291 330 11.5 0.8677 7.54%
4 454 2490 10.2 0.9598 9.41%
5 1800 - 10.6 0.5818 5.48%
6 390 1200 10 0.5765 5.76%
7 222 960 15 1.052 7.01%
8 1346 435 9.7 0.7377 7.6%
Promedio 669 1178.83333 6.84%
S 638.144446 808.814049 1.6256
 S2 407228.334 654,180.1659 2.6426

Tiempo de induccion del sueo

2000
1800
1600
1400
Tiempo (seg)

1200
1000 Raton testigo

800 Raton problema

600
400
200
0
Eq 1 Eq 2 Eq 3 Eq 4 Eq 5 Eq 6 Eq 7 Eq 8

Nota el ratn problema uno, jams se durmi, durante la prueba.

Como se observa en la grfica en la mayora de los ratones el tiempo de

induccin del sueo es mayor en los ratones problema que en los ratones testigo,
es decir los ratones que no haban sido previamente administrados con el
frmaco presentaron el efecto ms rpido.

Prueba T student.
Tiempo de induccin del sueo
Grados de libertad: 8+7 -2= 13
Ho= M1-M2=0

(8 1)19686 + (7 1)407228.334 1 1
= [ + ] = 230.61
8+72 8 7

(222.5 669) (0)

= = 1.9361
230.61
Considerando un erros de 5%, para una grfica de 2 colas, el valor de t debe
encontrarse entre -2.16 y 2.16., debido a que el valor de t se encuentra dentro
del rango se acepta la hiptesis nula, es decir no hay evidencia significativa en
los datos estadsticos que indique que el valor de las medias no es igual.

Tiempo de sueo
6000

5000

4000
Tiempo (min)

3000 Raton testigo

Raton problema
2000

1000

0
Eq 1 Eq 2 Eq 3 Eq 4 Eq 5 Ea 6 Eq 7 Eq 8

Nota: No se tiene registro de tiempo de sueo para los ratones problema 1 y 5.

En la grfica se muestra que el tiempo de sueo es mucho mayor para los

ratones que no haban sido inyectados anteriormente con el frmaco, que para
los ratones que ya haban sido inyectados.

Prueba T student.
Tiempo de sueo
Grados de libertad: 8+6 -2= 12
Ho= M1-M2=0

(8 1)2250253.36 + (6 1)654,180.166 1 1
= [ + ] = 679.96
8+62 8 6

(3315.75 1178.83333) (0)

= = 3.1426
679.96
Considerando un error de 5%, el valor de t debe encontrarse entre -2.179 y
2.179, ya que el valor de t no se encuentra dentro del rango establecido se
rechaza la hiptesis nula, es decir las medias de las 2 poblaciones no son
iguales, por lo que se establece que hay una lata variacin entre el tiempo del
sueo de los ratones problema y el tiempo de sueo de los ratones testigo.

Peso relativo del hgado de los ratones

10.00%
9.00%
8.00%
peso relativo en porcentaje

7.00%
6.00%
5.00% Raton testigo

4.00% Raton problema

3.00%
2.00%
1.00%
0.00%
Eq 1 Eq 2 Eq 3 Eq 4 Eq 5 Eq 6 Eq 7 Eq 8

En trminos generales se observa que el peso del hgado del ratn problema es
mayor que el peso del hgado del ratn testigo en todos los equipos.

Prueba t student
Peso relativo de los hgados del ratn
Grados de libertad= 14
Ho : M1-M1=0

(8 1)4.3192 + (8 1)2.6426 1 1
= [ + ] = 0.87022
8+82 8 8

(5.52 6.84) (0)

= = 1.5168
0.87022
Considerando un error alfa de 5%, para una grfica de 2 colas, el valor de t debe
estar entre -2.145 y 2.145. Es decir se acepta la hiptesis nula ya que -2.145 < t
< 2.145., es decir la dado que la hiptesis nula estableca que la diferencia de
medias era igual a 0, podemos concluir que no existe evidencia en contra de que
las medias de las dos muestras sean iguales, o bien, no se han encontrado
diferencias estadsticamente significativas, entre la variacin de los pesos de los
ratones testigo y problema.

DISCUSIN DE RESULTADOS:
En la prctica se observ que los ratones que presentaron fueron administrados
previamente con dosis bajas de pentobarbital mostraron un menor tiempo de la
induccin del sueo, y que los ratones que no haban recibido previamente
administracin del frmaco en cuestin presentaron menor tiempo de induccin
del sueo; la prueba t student no permite comprobar que la diferencia entre los
tiempos de induccin de las dos poblaciones haya sido significativamente mayor,
por otro lado, respecto del tiempo de sueo, se observa una mayor diferencia
entre las dos poblaciones, es decir los ratones previamente inyectados con
pentobarbital tienen un tiempo de sueo significativamente menor que el de los
ratones testigo.

Finalmente el peso relativo de los hgados de los ratones es ligeramente menor

para los ratones testigo que para los ratones problema, sin embargo a prueba t
de student establece que no hay una diferencia significativa estadsticamente.

Por ende se puede decir que lo ratones que han sido administrados previamente
presentan una cierta tolerancia a los efectos causados por el pentobarbital a
diferencia de los ratones que no han sido administrados previamente, el tiempo
de induccin de sueo indica que hay una mayor resistencia a la dosis, y el
tiempo de sueo que el efecto y el tiempo de vida media del frmaco son menor,
intuyendo que el organismo ha desarrollado un proceso de metabolismo del
frmaco ms rpido, o bien respuestas compensadoras de los efectos.
CONCLUSIONES:

Se demostr el desarrollo de tolerancia por el pentobarbital, un barbitrico con

efectos hipnticos, sedantes y anestsicos probando que administraciones de
dosis bajas del frmaco causan una tolerancia a la dosis que normalmente causa
el efecto, en este caso el efecto evaluado fue tiempo de induccin de sueo y
tiempo de sueo.
A su vez se observaron los efectos sedantes del pentobarbital, segn las
observaciones el sujeto administrado presenta prdida del control motriz y de la
orientacin, y a dosis mayores se induce el sueo, hay una recuperacin violenta
y efectos secundarios como movimientos involuntarios.

CUESTIONARIO:
1.- Describa los efectos que producen los barbitricos sobre el Sistema Nervioso
Central:
Los barbituricos a dosis bajas afectan en primer lugar a las partes del cerebro de
mayor complejidad, el neocortex, pero con dosis mayores sus efectos se
extienden a zonas mas inferiores del sistema nervioso central, hasta que
finalmente se deprimen los centros bulbares y la medula espinal. Su accion inicial
es exitadora, debido a que la corteza se libera de una inhibicion que sobre de
ella parece ejercer la formacion reticular. Mas tarde el control excitatorio cortical
de la formacion reticular disminuye y a continuacion se establece la somnolencia.
Los barbituricos originan un desequilibrio entre los mecanismos cerebrales
inhibidores y facilitadores actuando sobre la corteza y la formacion reticular que
son muy susceptibles a estos farmacos. A dosis mayores bloquean la actividad
de la formacion reticular. En el hombre, dosis bajas determinan una rapida
actividad del electroencefalograma, con dosis mayores aparece somnolencia y
sueo con ondas lentas dominantes y la aparicion de picos de sueo.
Entre las acciones farmacologicas de los barbituricos sobre el sistema nervioso
central destacan las siguientes: sedacion, hipnosis, anestesia general (a dosis
altas), efecto anticonvulsivante, analgesia, efectos sobre el comportamiento,
aparato respiratorio (depresion ligera de respiracion o incremento de esta
depresion dependiendo la dosis), aparato cardiovascular (a dosis bajas puede
producir ligera hipotension y discreta bradicardia), tracto gastrointestinal
(disminucion del tono de la musculatura intestinal y la amplitud de las
contracciones ritmicas) aparato urinario (a concentraciones anestesicas
disminuyen la diuresis), utero (en anestesia intravenosa prolona el parto).4

4
Velasco. A, lvarez. F. compendio de psiconeurofarmacologia. 1 edicin. Ediciones Daz de Santos,
S.A. Madrid. Pg. 104-107.
2.- Investigue que otros frmacos pueden presentar tolerancia metablica, el
mecanismo a travs del cual se produce y las consecuencias que esto tiene
sobre la actividad farmacolgica del compuesto.

La tolerancia se refiere a la disminucin de los efectos de un frmaco producida

por su consumo crnico; es decir. Para conseguir el mismo efecto que lo que se
daba anteriormente se tiene que aumentar la dosis.

Morfina: Se metaboliza fundamentalmente en el hgado mediante las enzimas

del citocromo P450 2D6, pero tambin se metaboliza parcialmente en el cerebro
y los riones. Los principales metabolitos son el 3-glucurnido, el 6-glucurnido
y el 3,6-glucurnido. Si se administran dosis muy altas de morfina, el 3-
glucurnido antagoniza los efectos de la morfina produciendo hiperalgesia y
mioclono. Este metabolito es el responsable del desarrollo de tolerancia a la
morfina.5 En una persona que no ha probado morfina, una dosis de 100mg puede
producir efectos sedantes e incluso la muerte, mientras que en una persona
tolerante se pueden consumir 4000mg sin mostrarse sedacin.
Diazepam: La tolerancia se produce por una desensibilizacin de los receptores
GABA y una sensibilizacin incrementada del sistema de neurotransmisores
excitadores glutamato tales como receptores de glutamato NMDA. Ocurren
como resultado del intento del cuerpo de superar los efectos del frmaco. Los
consumidores crnicos de benzodiacepinas se pueden hacer muy tolerantes:
partiendo de una dosis inicial de 5 a 10mg pueden llegar a consumir una dosis
de 1000mg/da para conseguir los mismos efectos.
Herona: El mecanismo de accin es en gran parte determinado por el perfil de
la morfina como tpico en un opioide, teniendo una alta afinidad a los receptores
opiceos 2 1. Se da rpidamente tolerancia a la capacidad de produccin de
euforia, pero ms lentamente a los efectos gastrointestinales, con lo cual se
pueden conseguir efectos peligrosos escalando la dosis. La dosis media pura va
de 5-10 mg de herona. Si una persona utiliz los opiceos durante mucho
tiempo, la dosis requerida de drogas puede aumentar hasta 4.2 veces hasta 20-
40 mg, la dosis para la administracin crnica puede aumentar indefinidamente
hasta la ocurrencia de muerte por enfermedad o por complicaciones
concomitantes.6

3.- Investigue que otras pruebas y mtodos sera necesario realizar, adicionales
al peso del hgado, para demostrar que efectivamente el efecto observado en el
sueo producido por el pentobarbital se debe a una induccin de los sistemas
microsomales presentes en el hgado y describa alguno de ellos.

5
VADEMECUM. Morfina. (En lnea) Disponible en:
http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma04/m061.htm. Consultado el 20 de octubre de 2014.
6
Ferrn. N, et al. Farmacologa y Endocrinologa del Comportamiento. 1 edicin. Editorial UOC.
Barcelona. 2012. Pg. 46-48.
Enzimas biliares, Fosfatasa alcalina: Localizada en las membranas
microsomales y en las que forman los canalculos biliares de los hepatocitos es
secretada normalmente en bilis y liberada en sangre en respuesta a colestasis y
a la induccin farmacolgica de pentobarbital.