BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

DEPARTAMENTO DE FARMACIA

MANUAL DE PRÁCTICAS DE
LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA I
PRIMAVERA, 2022

M.C María del Rocío Pérez Rodríguez

Nombre del alumno: Bret Almazán Alisson

Sección: ______3_____ Día: Viernes
Equipo No. _____1___ Hora: 14:00-16:00
 Práctica No.5
INDUCCIÓN ENZIMATICA

Objetivos
1. El alumno determina el efecto de inducción enzimática sobre la Hipnosis
2. El alumno compara la magnitud de la inducción enzimática entre dos fármacos sobre el
efecto de Hipnosis.
3. El alumno analiza la importancia del efecto de inducción enzimática sobre la terapéutica.

Introducción
En el organismo los fármacos sufren cambios estructurales producto de reacciones
enzimáticas, estos suelen causar disminución o pérdida de la actividad farmacológica. Sin
embargo, no es la única posibilidad ya que a través de estas reacciones se puede formar un
metabolito farmacológicamente activo a partir de un precursor inactivo y también el
metabolito puede tener una acción totalmente diferente al precursor. El órgano más
relacionado con el metabolismo es el Hígado y muchas sustancias son sustratos para las
enzimas microsómicas, y la mayor parte de esas enzimas se encuentran localizadas en el
sistema retículo endoplasmático liso de los hepatocitos. En general el metabolismo del
fármaco disminuye su liposolubilidad, haciéndolo más polar y así facilitando su excreción.
Actualmente se pueden modificar la capacidad del hígado para biotransformar los
medicamentos. En el caso de aumentar la biotransformación de un fármaco por parte de las
enzimas micrósomicas con administraciones previas de este o de otro (s) fármacos se le
conoce como Inducción Enzimática. El pretratamiento con diversos agentes exógenos es
capaz de acelerar la biotransformación de fármacos y también el metabolismo de sustancias
endógenas a base de aumentar la cantidad total de enzimas micrósomicas.
Las enzimas micrósomicas, por carecer de especificidad pueden metabolizar sustancias de
diversa estructura química, pero solo catabolizan reacciones de compuestos liposolubles.
Experimentalmente se puede fragmentar el retículo endoplasmático rompiendo los
hepatocitos es posible separar estos fragmentos de otras partes de la célula mediante
centrifugación diferencial. El sedimento obtenido contiene fragmentos de retículo de
superficie lisa y enzimas asociadas, es decir las enzimas microsómicas.

Material
10 ratones (20-30 gramos)
Balanza para roedores
Pentobarbital sódico

Procedimiento

1. Pesa cada ratón.

2. Administra una dosis de 30 mg/kg de pentobarbital a seis ratones. La concentración inicial
del pentobarbital es de 63 mg/10 ml.
3. A los cuatro ratones restantes adminístrales solución salina estéril (SS) a razón de 0.1
mL/10 g.
4. Las administraciones serán por vía intraperitoneal, por 7 días en el horario de tu práctica
en el bioterio.
5. El octavo día (DÍA DE PRUEBA), se administrarán pentobarbital a una dosis de 45 mg / kg
en las mismas condiciones por vía intraperitoneal a cada uno de los ratones, incluyendo a los
ratones administrados con SS.
6. Observa durante 45 minutos y registra el tiempo de latencia de hipnosis (pérdida del
reflejo de enderezamiento) y el tiempo que duración del efecto en cada uno de los ratones.
Resultados del dia 8 (dia de prueba de la sección de laboratorio)
1. Completa la siguiente tabla:

Ratón Sustancia administrada Tiempo de Latencia Duración

Antes de la prueba/Día de la de la hipnosis del efecto
prueba (minutos) (minutos)
1 Pentobarbital/Pentobarbital 4.5 30
2 Pentobarbital/Pentobarbital 2.3 23
3 Pentobarbital/Pentobarbital 2.5 18
4 Pentobarbital/Pentobarbital 5.1 4
5 Pentobarbital/Pentobarbital 3.2 20
6 Pentobarbital/Pentobarbital 3.0 15
7 (control) Solución NaCl 0.9%/ Pentobarbital 10.2 +45
8 (control) Solución NaCl 0.9%/ Pentobarbital 13.4 +45
9 (control) Solución NaCl 0.9%/ Pentobarbital 9.6 +45
10 (control) Solución NaCl 0.9%/ Pentobarbital 11.7 +45

Tiempo de latencia de la hipnosis significa que perdió el reflejo de enderezamiento.

2. Realiza una gráfica de sustancia administrada contra el promedio de la latencia y otra de

sustancia administrada contra el promedio de duración del efecto e interpreta tus resultados.

Tiempo de latencia de la hipnosis

Promedio de los primeros 6 ratones= 3.433 min
Promedio de el grupo control= 11.225

Duración del efecto

Promedio de los primeros 6 ratones= 18.333
Promedio de el grupo control= +45 min
La duración del efecto fue menor en los primeros 6 ratones comparadas con el grupo
control, pues en la semana de administración del pentobarbital sodico desarrollaron
inducción enzimatica, es decir, se estimuló el aumento de enzimas que se encargan de
biotrasnformar/metabolizar al pentobarbital sodico, de tal forma que despues de su
administración luego de varios días la duración del efecto y tiempo de latencia es menor.
La inducción produce un metabolismo acelerado del sustrato (pentobarbital), y casi
siempre un descenso en la acción farmacologica del inductor y otros farmacos
administrados al mismo tiempo

3. Discuta los resultados.

El pentobarbital sódico es un fármaco inductor, es decir, induce la inducción enzimática,

por lo que teóricamente se esperaría que al aumentar la dosis de
pentobarbital/pentobarbital administrado, tenga como consecuencia el aumento del
metabolismo del fármaco afectando directamente el tiempo de duración del efecto y el
tiempo de hipnosis disminuyendo la duración del efecto farmacológico del fármaco y por lo
tanto su función en el organismo. En cambio, en los que se administra solución
salina/pentobarbital se esperaría que el fármaco tenga el tiempo de latencia y duración de
efectos normales. En ambos casos los resultados fueron acordes a la teoría existiendo un
efecto inductor del fármaco, afectando los tiempos de hipnosis y de duración del efecto
farmacológico, disminuyendo por el aumento del metabolismo en hígado, por parte de los
citocromos a consecuencia de un aumento de dosis, en los fármacos que se administró
solución salina los efectos fueron normales y la duración fue mayor a 45 minutos.

4. Concluya.

En la práctica se pudo observar que el pentobarbital induce su propio metabolismo al

momento de administrarlo, reflejando así intervalos de tiempo menores con respecto a los
ratones del grupo control, así como también en la duración del efecto. Con esto se puede
concluir que el incremento de la actividad enzimática como consecuencia de la síntesis de
nuevas enzimas, ante el incremento de la concentración del sustrato. Un fármaco puede
inducir su propio metabolismo o influenciar el de otro fármaco metabolizado por las
mismas enzimas.
5. Bibliografía.
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básica y clínica, 12e. McGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES, S.A. de
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 Penta-Hipnol. Anestésico general de tipo barbitúrico. Recuperado del sitio web:
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%C3%A1rmacos#:~:text=La%20velocidad%20del%20metabolismo%20de%20los
%20f%C3%A1rmacos%20en%20los%20distintos,inducci%C3%B3n%20o
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 Damaris Díaz, Ignacio Rodríguez. Citocromo P-450 ¿Qué, ¿cómo y para qué?
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http://www.actamedicacolombiana.com/anexo/articulos/02-2001-08.htm
 Tobella Sabater, J. Inductor enzimatico (2020) sitio web – Eugenomic. European
Specialist in Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, recuperado de
https://eugenomic.com/recursos/glosario/inductor/#:~:text=Un%20inductor
%20enzim%C3%A1tico%20es%20unf%C3%A1rmaco,enzimas%20por
%20acelerar%20su%20metabolismo.

Cuestionario

1. Explica la relación de la inducción enzimática con los efectos farmacológicos.

Para que se realice la inducción enzimática, un fármaco se debe unir a una enzima y le
induce un aumento de su actividad. Los fármacos que inducen enzimas hepáticas pueden
tener los siguientes efectos: _________________________
 Reducir la biodisponibilidad de otros fármacos que se metabolizan por las enzimas
por acelerar su metabolismo.
 Aumentar la biodisponibilidad de los medicamentos que requieren para su
activación del metabolismo, caso concreto que el principio activo afectado sea un
profármaco.

2.Explica cómo se produce la tolerancia farmacocinética del pentobarbital.

El estímulo o la inducción de la actividad enzimático microsomal en el hígado afecta

marcadamente la duración de la acción de barbitúricos. El supuesto desarrollo de la
tolerancia que ocurre después de que una breve exposición a dosis bajas de barbitúricos
es debido al realce de la actividad enzimático microsomal.

3. ¿Cuáles son los factores que modifican el metabolismo de fármacos, explica al menos tres
de estos factores?

 Temporales, como la edad.

 Genéticos, como el sexo y control genético de la dotación enzimática (diferencias
entre especies, diferencias genéticas entre una misma especie)
  Fisiológicos, como el embarazo, sexo, nutrición y hormonas
 Ambientales en función a la exposición de contaminantes.
 Dietéticos en función del tipo de dieta consumida y de los contaminantes
alimentarios.
 Estados patológicos, como la insuficiencia hepática y cáncer.
 Interacciones con otros fármacos capaces de modificar el metabolismo.
 Químicos como la posición de un determinado grupo funcional
 Farmacológicos como vía de administración, dosis, unión a proteínas plasmáticas,
pH e inhibidores de la biotransformación.

4. ¿Cuál es el mecanismo propuesto para las reacciones oxidativas de los fármacos?

Para realizar la conversión de un sustrato, las enzimas que pertenecen a este sistema
siguen una serie de pasos en los cuales, a través de un proceso que involucra la
transferencia de dos electrones y la incorporación de un átomo de oxígeno, se logra la
oxidación del compuesto.
En la imagen se muestra el mecanismo de reacción del sistema CYP-450. En una etapa
inicial del proceso, el sustrato se acopla al complejo hémico que contiene un átomo de
Fe+3. Por acción de la NADPH citocromo P450 reductasa este sistema es convertido a su
estado Fe+2; este complejo se encuentra en capacidad de aceptar el ingreso de 2 átomos
de oxígeno al sistema. Nuevamente la enzima NADPH participa donando un electrón con
la intervención del citocromo b5, permitiendo la transferencia de un átomo de oxígeno al
sustrato, con la posterior formación de un grupo -OH y una molécula de agua. El
compuesto así formado es más hidrosoluble y con mayor capacidad de excreción.
La primera etapa de la reacción es la unión del sustrato a la CYP450, produciéndose
simultáneamente la entrada del primer electrón, cuyo transporte es mediado por la
NADPHreductasa, generando el cambio en el estado de oxidación del átomo de hierro
férrico (+3) a ferroso (+2). La reacción oxidativa del sustrato se inicia con la unión de una
molécula de oxígeno (O2) al complejo CYP-450-Fe+2sustrato. Posteriormente se produce
la transferencia del segundo electrón, proceso que ocurre con la intervención del
citocromo b5; todos estos eventos favorecen el ingreso de un átomo de oxígeno dentro
del sustrato, con la formación de un grupo hidroxilo en el mismo. A partir del átomo de
oxígeno restante y como producto de la formación de estructuras de oxígeno estables, se
logra la liberación del sustrato oxidado más una molécula de agua, mientras que el
sistema se restaura al estado férrico inicial. Esta oxidación del sustrato produce una
sustancia más polar y con mayor capacidad de excreción. Algunas de las reacciones
oxidativas mediadas por este sistema son hidroxilaciones, tanto de cadena lineal como en
anillo aromático; N-, O-, y S-dealquilación, desaminación, deshalogenación, entre otras.
_______________________________________________________________________
5. ¿En qué lugares del organismo se lleva a cabo la biotransformación de los fármacos?
1. El hígado es el órgano que desempeña el papel más importante en los procesos de
biotransformación, tanto a nivel de las microsomas, mitocondrias como a nivel de las
enzimas del citosol.
2. El tubo digestivo como la inactivación de la eritromicina y de la penicilina G por el jugo
gástrico, la hidrólisis de la insulina por las proteasas, la decarboxilación de los
aminoácidos por la flora intestinal o la reducción de los pigmentos biliares en los
segmentos distales del intestino delgado.
3. La sangre se inactivan una gran cantidad de fármacos por hidrolasas como la
acetilcolina, succinilcolina, procaína y ácido acetilsalicílico.
4. El riñón se verifica la biotransformación de algunas sustancias como los nitritos.
5. El receptor o en su proximidad por ejemplo la acetilcolina es destruida por la
Acetilcolinesterasa verdadera y las catecolaminas metiladas por la catecol-O-metil
transferasa.
6. El sistema nervioso central y periférico se transforman los neurotransmisores y
sustancias análogas.

6. ¿Cuál es la importancia y función del hígado desde el punto de vista farmacológico y a

qué nivel celular ocurren los procesos de oxido-reducción de los fármacos en el hígado?
El sitio principal del metabolismo de los fármacos es el hígado. Aunque los fármacos
suelen inactivarse al ser metabolizados, los metabolitos de algunos de ellos presentan
actividad farmacológica, a veces incluso mayor que la de su precursor. Una sustancia
inactiva o débilmente activa que da lugar a un metabolito activo se denomina profármaco,
en especial cuando ha sido diseñada para dirigir más eficazmente la forma activa a su
destino.

Los transportadores hepáticos de fármacos están presentes en todas las células del
parénquima hepático y afectan el manejo, el metabolismo y la eliminación del fármaco por
parte del hígado. Los dos tipos principales de transportadores son los de influjo, que
translocan las moléculas al interior del hígado, y los de eflujo, que median la excreción de
fármacos en la sangre o la bilis. Los polimorfismos genéticos pueden afectar de manera
variable la expresión y la función de los transportadores hepáticos de fármacos para
alterar potencialmente la susceptibilidad del paciente a los efectos adversos de los
fármacos y a desarrollar una lesión hepática inducida por fármacos. Por ejemplo, los
portadores de ciertos genotipos de transportadores exhiben niveles sanguíneos elevados
de estatinas y son más susceptibles a la miopatía inducida por estatinas cuando estos
fármacos se usan para el tratamiento de la hipercolesterolemia.

7. Explica las fases por las cuales se lleva acabo los procesos de biotransformación.

Reacciones de fase I o no sintéticas:

En general aumentan la formación de grupos polares obteniendo metabolitos menos
liposolubles que los compuestos precursores por lo tanto se absorben con mayor
dificultad a nivel de barreras celulares y son eliminados. Las reacciones de
biotransformación que tienen lugar en la fase I son la:
- Oxidación
- Reducción
- Hidrólisis y
- Descarboxilación
Se llevan a cabo a nivel microsomal hepático por medio de un grupo de isoenzimas
llamadas citocromo P450. El sistema microsomal es una dependencia del retículo
endoplásmico liso desprovisto de ribosomas. Cuando se homogeniza un tejido se rompe
en fragmentos que se denominan microsomas los cuáles se separan por centrifugación
diferencial.
Se ha aislado un citocromo denominado P450 que desempeña un papel importantísimo
es inactivado por el monóxido de carbono con el que se forma un complejo que presenta
una banda de absorción característico a 450 nm de ahí su nombre. Los citocromos P450
constituyen una familia de isoformas de hemoproteínas enzimáticas que catalizan el
metabolismo oxidativo de muchas sustancias incluidos los fármacos.
Los Citocromos P450 están formados por dos proteínas diferentes, una tiene función de
reductasa y la otra es una hemoproteína con actividad de oxigenasa. La oxigenasa es una
proteína, que en estado reducido y monoxicarbonada, presenta un pico de absorción a
450 nm. Las enzimas del sistema microsomal requieren NADPH2 y oxígeno molecular.

Reacciones de fase II o sintéticas o de conjugación:

Se caracterizan porque incorporan una molécula al fármaco formando sustancias
muy hidrosolubles, ionizables y de fácil excreción. Las reacciones de biotransformación
son realizadas por el sistema microsomal, por las mitocondrias, enzimas solubles,
lisosomas y por la flora intestinal.
La Biotransformación Fase II, consiste en reacciones de conjugación, catalizadas por un
conjunto de enzimas (denominadas transferasas), la mayoría de ellas localizadas en el
citosol. Las reacciones consisten en agregar un grupo polar de tamaño relativamente
grande como un glucuronilo, a los productos de las reacciones de la Fase I. Los
donadores de los grupos polares tienen que ser compuestos de alta energía, ya que las
reacciones de conjugación no son termodinámicamente favorables. El resultado que se
logra con estas reacciones es un gran incremento de la solubilidad en agua del fármaco.
Las reacciones son:
 Glucuronidación: La reacción consiste en agregar un grupo glucuronil en un grupo
hidroxilo, amino o sulfhidrilo del tóxico.
 Sulfatación: La reacción consiste en la transferencia de un grupo sulfato de PAPS
(3fosfoadenosil-5´-fosfosulfato) a un grupo hidroxilo o amino en el fármaco.
 Aminoacidación: La reacción consiste en la formación de una unión peptídica entre
el grupo amino de un aminoácido, normalmente glicina, y un carboxilo en el
fármaco.
 Glutationización: La glutationización consiste en la adición de glutatión (GSH), a
través de su grupo sulfhidrilo (nucleofílico), con un carbón electrofílico del fármaco.
 Metilación: La metilación juega un papel menor en la biotransformación de
fármacos. La reacción consiste en la transferencia de un grupo metilo a un
hidroxilo, amino o sulfhidrilo.

8. La Glucoronil transferasa, ¿qué efectos causa sobre el metabolismo de fármacos?

La Glucoronil transferasa, es una enzima hepática que convierte la bilirrubina en una

forma que puede ser eliminada del cuerpo a través de la bilis. Esta enzima también
convierte algunas hormonas, medicamentos y toxinas en productos inofensivos.

9. ¿Cómo afecta la edad y el polimorfismo genético la biotransformación de fármacos?

________________________________________________________________________
Los polimorfismos genéticos pueden afectar de manera variable la expresión y la función
de los transportadores hepáticos de fármacos para alterar potencialmente la
susceptibilidad del paciente a los efectos adversos de los fármacos y a desarrollar una
lesión hepática inducida por fármacos.
La Edad es uno de los factores extrínsecos que influyen en la biotransformación, así pues,
en recién nacidos hay mayor riesgo de intoxicación, puesto que estos presentan una
metabolización escasa.