Bioquimica Practica N - 5

UNMSM LABORATORIO DE BIOQUIMICA
GENERAL
PRACTICA DE BIOQUIMICA GENERAL
AISLAMIENTO DE LECITINA - EMULSIFICACION DE GRASAS
HIDRLISIS DE GRASAS POR ACCION DE LIPASA PANCREATICA

PRACTICA N 5: AISLAMIENTO DE LECITINA. EMULSIFICACION E HIDRLISIS DE GRASAS
1
GENERAL
I. INTRODUCCION
Las grasas ms abundantes dentro de nuestra dieta son las llamadas grasas
neutras, tambin conocidas como triglicridos. Los triglicridos constituyen la
principal reserva energtica del organismo animal como grasas y en los
vegetales aceites. Adems son buenos aislantes trmicos y dan proteccin
mecnica. Sin embargo, el exceso de lpidos no solo es almacenado en los
tejidos adiposos, sino que viajan a travs de nuestra sangre, depositndose en
2
GENERAL
lugares no apropiados. Para evitar el exceso de grasa, el organismo realiza
diversas actividades como la hidrlisis y emulsificacin de las mismas. El
objetivo de esta prctica es conocer tanto las vas de degradacin de los
triglicridos a partir de enzimas del tracto digestivo como el aislamiento de la
lecitina, ejemplo importante, cuyo procedimiento puede ser interpolado con el
aislamiento de otros fosfolpidos.
3
4
UNMSM
GENERAL
GRASAS DIGESTION DE LAS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
GENERAL
II. MARCO TEORICO
1. AISLAMIENTO DE LECITINA
La lecitina es
tambin fosfatidilcolina
o
5
GENERAL
polienilfosfatidilcolina, es uno de los principales constituyentes de las
bicapas lipdicas de las membranas celulares y tambin es un fosfolpido
que, junto con las sales biliares, ayuda a la solubilizacin de los cidos
biliares en la bilis.
6
GENERAL
La bilis es una sustancia formada por colesterol, bilirrubina y lecitina

entre otras sustancias, es sintetizada por el hgado y vertida al intestino
delgado a travs de un conducto denominado coldoco. Tiene una gran
7
GENERAL
importancia en la digestin ya que se encarga de emulsionar los
lpidos que ingerimos en la dieta.
Este nutriente ayuda a proteger los rganos y las arterias de la

acumulacin de grasa, mejora el funcionamiento del cerebro y facilita la
DETERGENTE DE LAS
absorcinLECITIN
de algunas vitaminas del complejo B y de la vitamina A.
A
8
GENERAL
Promueve la reduccin de los niveles de colesterol y triglicridos en la
sangre.
La fosfatidilcolina o lecitina es producida naturalmente por el hgado y

se puede obtener de ciertos productos alimenticios, principalmente la
soja y la yema del huevo.
9
GENERAL
2. EMULSIFICACION DE GRASAS
El proceso de digestin de grasas empieza a nivel del estmago. Una

pequea cantidad de triglicridos es digerida hasta en un 10% por la
10
GENERAL
Lipasa Lingual, una enzima producida en la boca y transportada en la
saliva al estmago, para luego pasar al intestino delgado. El intestino
delgado se encarga de la emulsificacin de las grasas. La grasa no
digerida se encuentra a nivel intestinal como grandes gotas, producto del
movimiento del alimento en el estomago, las cuales deben ser
fragmentadas en partes ms pequeas con la finalidad de que enzimas
digestivas hidrosolubles puedan actuar sobre las mismas, alcanzando su
11
GENERAL
objetivo final por accin de la bilis. La bilis no contiene enzimas
digestivas, pero si grandes cantidades de sales biliares as como lecitina.
Este proceso hace que las gotas de grasa reduzcan su

tensin superficial, y al ser agitadas en el intestino
delgado se fragmenten fcilmente. Pero debemos
recordar que a medida que los dimetros de las gotas
de grasa se reducen por la fragmentacin y la agitacin
12
GENERAL
La bilis posee una funcin adicional adems de la emulsificacin. En

una concentracin suficiente las sales biliares tienen la propiedad de
formar las llamadas micelas. Las micelas son gotas esfricas y cilndricas
de tres a seis nanmetros de dimetro compuestas de 20 a 40 molculas
de sales biliares.
Las micelas actan tambin como un medio de

transporte de cidos grasos libres y
monogliceridos para su posterior absorcin en el
borde en cepillo de las clulas epiteliales
13
14
UNMSM
GENERAL
GENERAL
3. HIDRLISIS DE TRIGLICERIDOS
La digestin de las grasas comprende la hidrlisis de los triglicridos a

cidos grasos libres y glicerol para que puedan ser captados por las
clulas.
La lipasa es una enzima que se usa en el organismo para disgregar
las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber. La
mayora de las lipasas del organismo se sintetiza en el pncreas, aunque
15
GENERAL
una parte se secreta tambin en la saliva. La pancreatina (HPL)
contiene lipasa y otros dos grupos de enzimas: proteasas y amilasa.
Este proceso comienza en el estmago, mediante la lipasa gstrica
que es secretada por las clulas principales que tambin secretan
pepsina. La lipasa pancretica es esencial para la absorcin normal de
las grasas, pues en casos en que el pncreas no funcione en ms de un
70%, la grasa no se absorbe.
16
GENERAL
ACCION DE LA LIPASA
GRASA
ACIDO GRASO GLICEROL

17
18
UNMSM
GENERAL
19
UNMSM
GENERAL
GENERAL
III. DISCUSIN Y RESULTADOS
EXPERIENCIA N 1: Aislamiento de Lecitina
1. Resultados y Discusin
Al cabo de aproximadamente una hora,

podemos observar un precipitado blanquecino,
que es la fosofaidilcolina (lecitina). La
20
GENERAL
fosfatidilcolina se precipita debido a que el
coeficiente dielctrico de la acetona es menor
que el del etanol, es decir que la acetona es
menos polar que el etanol. Es por eso que en el
alcohol no se observaba precipitado y en la
acetona s.
21
GENERAL
EXPERIENCIA N 2: Emulsificacin de Grasas
1. Resultados
- Luego de realizado el experimento, procedemos a elaborar la siguiente

tabla en base a la caracterstica mayor presencia de micelas de
forma descendiente. La tabla se muestra a continuacin.
22
GENERAL
Nmero de Reactivo
tubo
2 Sol. Sales biliares
4 Sol. Jabn
3 Sol. Protena
6 Sol. Lecitina
5 Bicarbonato
1 Agua destilada
23
GENERAL
2. Discusin
- La solucin incolora del tubo 02 con sales biliares, indica una mayor
presencia de micelas pequeas y muy continuas entre s; esto
demuestra que la secrecin biliar es necesaria para la emulsificacin
de las grasas y formacin de micelas, para su prxima absorcin.
24
GENERAL
- En el tubo 04, la presencia del jabn, que contiene una mezcla de
grupos polares y apolares, logr separar al aceite en una fase dispersa;
el nmero de gotas es semejante a las aparecidas en tubo 02. Se
observa que las gotas tienden a agruparse con el fin de aumentar su
tamao y disminuir la tensin superficial.
25
GENERAL
- Con la solucin de protenas y lecitina, la formacin de micelas se
observa en menor cantidad, pero a su vez stas son ms pequeas,
aunque an manifiestan cierta tendencia a la agrupacin.
- Los resultados obtenidos en la solucin de bicarbonato mostraron la
presencia de micelas pequeos en comparacin a los anteriores, la
fase lquida no estaba totalmente ocupada por las micelas, lo que
26
GENERAL
demuestra que la prevencin de coalescencia esta en un nivel
intermedio.
- Finalmente, el tubo 01 es el tpico caso de agua y aceite. Lo que se
puede observar es que las micelas solo estn presentes los primeros
segundos luego de la agitacin. Su tamao es de regular a pequeo y
desaparecen en cuanto la fase lquida recobra su estabilidad (no
movimiento). Son casi imperceptibles.
27
GENERAL
EXPERIENCIA N 3: Hidrlisis de triglicridos por accin de Lipasa
1. Resultados
En esta experiencia demostraremos in vitro la accin de la enzima

lipasa, la cual tiene la funcin de degradar las grasas a glicerina y
cidos grasos. La formacin de cidos grasos libres en nuestros tubos
de ensayo se evidenciara a la hora de titularlos con NaOH 0.01N, ya
28
GENERAL
que estos cidos grasos deben de disminuir el pH (aumentar la acidez)
de la solucin.
Para ello, utilizamos tres tubos de ensayo, en los cuales vertimos lo

componentes de esta manera:
B Buffer pH 8 (2ml) 1
Sustrato aceite neutralizado (1ml)
Sales biliares (2ml) Buffer pH 8 (2ml)
Agua destilada (1ml) Agua destilada (1ml)

Lipasa pancretica (1ml) Lipasa pancretica (1ml)
29
GENERAL
2 Sustrato
aceite
neutralizado
(1ml)
Sales biliares
(2ml)
Agua destilada
(1ml)
Lipasa
pancretica
(1ml)
30
31
UNMSM
GENERAL
GENERAL
*Las sales biliares que se administraron a dos de los tubos sirve para
activar la lipasa.
Una vez incubados por 40 minutos, se obtuvo la siguiente imagen:

32
33
UNMSM
GENERAL
GENERAL
Donde se muestra, en algunos, formacin de precipitado (2fases)

como resultado de la accin de la lipasa sobre las molculas de grasas
que componen el aceite. La fase menos densa vendra a ser los cidos
grasos. La fase ms densa que precipita, seria la glicerina.
34
GENERAL
- En el tubo B, se observa una fase homognea ya que no se
administro el sustrato sobre el que acta la enzima.
- Para el tubo 1 se administro sustrato y la enzima pero no sales
biliares, lo que no contribuye a la activacin de la lipasa. As que el
tubo 1 puede mostrar un pequeo porcentaje de actividad
enzimtica pero no mas, pues no hay agente que active la enzima.
Es decir, una pequea diferenciacin de fases.
35
GENERAL
- En el tubo 2, se encuentran presentes el sustrato y la enzima, as
como el activador de esta (las sales biliares). De esta forma, la
actividad enzimtica es grande; se pueden observar 2 fases muy
marcadas y gruesas.
Para corroborar la accin de la enzima procedemos a calcular la

acidez de las muestras contenida en cada uno de los tubos. Para ello
vaciamos en contenido de estos en vasos descartables y aadimos
36
GENERAL
fenolftalena de acuerdo a la cantidad indicada en clase. Con ayuda de
una bureta con NaOH 0.01N y un soporte, titulamos.
Obtuvimos los siguientes resultados:
B 1 2
Normalidad de la 0.01 0.01 0.01
base N N N
37
GENERAL
Volumen de la base 0.3 0.45 0.4
ml ml ml
Volumen del acido 6 ml 6 ml 6 ml
38
39
UNMSM
GENERAL
GENERAL
Determinamos la concentracin de la muestra (acido), y luego con

esta el pH de a muestra presente en cada tubo:
N base V base=N cido V cido

40
GENERAL
0.01 0.3
- Tubo B:
N B= =0.0005
6
pH=log [ H ] =log [ N B ]=3.30
0.01 0.4
- Tubo 1:
N 1= =0.00067
6
41
GENERAL
pH=log [ H ] =log [ N 1 ]=3.18
0.01 0.6
- Tubo 2:
N 2= =0.001
6
pH=log [ H ] =log [ N 2 ] =3
42
GENERAL
Tal como lo habamos previsto:
- El tubo B presenta una menor acidez que el tubo1, y este a su vez

una acidez menor que la del tubo2. Esto se debe a que en el tubo 2
esta actuando en forma activa y continua la lipasa produciendo una
gran cantidad de cidos grasos libres los cuales ocasionan una
disminucin del nivel de pH.
43
GENERAL
- El tubo uno al contener la enzima, de seguro logro actuar por su
cuenta sin necesidad de la activacin por el acido biliar, pero de
esta manera su actividad no es rpida y apenas debe de haber
llagado a utilizar las pocas enzimas activas que tenia (ayudado por
la temperatura y el pH del buffer para el medio).
- El tubo B no tuvo reaccin alguna a pesar de la presencia de lipasa
pues no se encontraban los lpidos a los que tena que hidrolizar.
44
GENERAL
Aqu el orden de acidez de la muestra contenida en cada tubo:
tubo B<tubo1<tubo 2
45
GENERAL
IV. BIBLIOGRAFIA
- Bioqumica. Stryer, Lubert; Berg, Jeremy M.; Tymoczko, John L. Edicion; 5

Capitulo: 12
- Principios de Bioquimica. Lehninger, Albert L. Capitulo 13.
- http://cbi.izt.uam.mx/iq/Laboratorio%20de%20Operaciones
%20Unitarias/Practicas%20Laboratorios/PRACTICA2.pdf
- file:///C:/Documents%20and%20Settings/clases/Escritorio/Hidrolisis%20de
%20grasas%20-%20Tesis%20y%20monograf%C3%ADas.htm
46
47
UNMSM
GENERAL

Bioquimica Practica N - 5

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Bioquimica Practica N - 5

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNMSM LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRACTICA DE BIOQUIMICA GENERAL

AISLAMIENTO DE LECITINA - EMULSIFICACION DE GRASAS

HIDRLISIS DE GRASAS POR ACCION DE LIPASA PANCREATICA

GRASAS DIGESTION DE LAS

II. MARCO TEORICO

La bilis es una sustancia formada por colesterol, bilirrubina y lecitina

Este nutriente ayuda a proteger los rganos y las arterias de la

La fosfatidilcolina o lecitina es producida naturalmente por el hgado y

El proceso de digestin de grasas empieza a nivel del estmago. Una

Este proceso hace que las gotas de grasa reduzcan su

de grasa se reducen por la fragmentacin y la agitacin

La bilis posee una funcin adicional adems de la emulsificacin. En

Las micelas actan tambin como un medio de

La digestin de las grasas comprende la hidrlisis de los triglicridos a

ACIDO GRASO GLICEROL

EXPERIENCIA N 1: Aislamiento de Lecitina

Al cabo de aproximadamente una hora,

- Luego de realizado el experimento, procedemos a elaborar la siguiente

EXPERIENCIA N 3: Hidrlisis de triglicridos por accin de Lipasa

En esta experiencia demostraremos in vitro la accin de la enzima

Para ello, utilizamos tres tubos de ensayo, en los cuales vertimos lo

Agua destilada (1ml) Agua destilada (1ml)

Una vez incubados por 40 minutos, se obtuvo la siguiente imagen:

Donde se muestra, en algunos, formacin de precipitado (2fases)

Para corroborar la accin de la enzima procedemos a calcular la

Obtuvimos los siguientes resultados:

Determinamos la concentracin de la muestra (acido), y luego con

N base V base=N cido V cido

pH=log [ H ] =log [ N B ]=3.30

- El tubo B presenta una menor acidez que el tubo1, y este a su vez

- Bioqumica. Stryer, Lubert; Berg, Jeremy M.; Tymoczko, John L. Edicion; 5

También podría gustarte