Bioquímica aplicada

Docente: Ricardo Alonso Hernández Escamilla

Semestre: Ene - Jun 2022
Practica de laboratorio #8
Digestión de lípidos
Fecha de desarrollo: 01/04/22
Fecha de entrega: 07/04/22
Integrantes:
Gaspar Zamarripa María Luisa 196216
Vital María Camila 205000
Gordillo Karina Denisse 195986
Lara Gutiérrez Alejandro 145796

Resumen digestión de lípidos (test de malabsorción grasa, de proteínas y

El intestino humano es un órgano
complejo de longitud variable, oscilando
entre 3 y 8 m, dependiendo de
características individuales y de las
técnicas empleadas en su medida. La
función principal del intestino es conseguir
una adecuada incorporación de nutrientes
al organismo, y esto se lleva a cabo a través
de los procesos de digestión y absorción de
nutrientes. Cuando estas funciones
fracasan, aparecen la mal digestión y la
Malabsorción, que presentan unos datos
clínicos característicos y que deberían ser
estudiadas mediante una serie de técnicas
específicas para cada uno de los pasos
digestivos y cada uno de los nutrientes
de hidratos de carbono).
La absorción de grasas es un proceso muy
eficiente de tal manera que
aproximadamente el 95% de los lípidos de
la dieta son absorbidos a nivel intestinal
con un máximo de unos 500 g/día3. La
digestión de los lípidos comienza en el
estómago con la lipasa gástrica y supone el
10% del total de la digestión de los lípidos.
En casos de insuficiencia pancreática la
actividad de la lipasa gástrica puede llegar
hasta el 90%. La lipasa gástrica actúa de
forma óptima con pH de 4-5,5, no necesita
cofactores y es resistente a la pepsina. En
presencia de un pH neutro o de ácidos
biliares, la lipasa gástrica se degrada
rápidamente. Los productos resultantes
son mono glicéridos y ácidos grasos de
cadena larga que son vertidos al intestino
delgado donde ocurre la digestión de las
grasas de forma mayoritaria. El paso de
hidrogeniones gástricos a la luz intestinal
estimula la secreción de secretina la cual
estimula la secreción pancreática de
bicarbonato.
Los productos resultantes de la digestión
de los lípidos necesitan ser solubilizados
en la luz intestinal, por lo que se unen con
ácidos biliares, los cuales son antipáticos
(con un dominio hidrosoluble y otro
liposoluble) y forman micelas mixtas. El
remanente de ácidos biliares es absorbido
de manera activa en el íleon terminal,
pasando a la circulación portal y son
vertidos de nuevo a la bilis, en lo que se
conoce como circulación entero hepática.
Aunque se pensaba que la absorción de
ácidos grasos era por difusión pasiva,
recientes estudios indican que en la
absorción de ácidos grasos participan
transportadores activos. Se ha identificado
un transportador de ácidos grasos, la
proteína FATP4, que pertenece a una gran
familia de proteínas transportadoras de
ácidos grasos presente en la membrana
apical del enterocito maduro del intestino
delgado. La caracterización de esta
proteína ha abierto nuevos campos en la
investigación de líneas de tratamiento para
la obesidad y la resistencia insulínica. Una
vez en el interior de la célula se unen a
proteínas y se dirigen al retículo
endoplásmico liso dónde se produce la
resíntesis de triglicéridos, fosfolípidos y
ésteres de colesterol. Éstos se unen a
apoproteínas (apo B, C y A) y forman
quilomicrones que salen del enterocito por
exocitosis y pasan a los capilares
linfáticos.
Introducción
1. Efecto de los ácidos biliares en la
absorción de las grasas.
Las sales biliares son moléculas anfifílicas
con extremos lipofílicos e hidrofílicos.
Cuando la concentración de sales biliares
en la cavidad digestiva alcanza una cierta
concentración, se adherirá a la superficie
de la grasa para su digestión y absorción,
entonces el extremo hidrófobo se vuelve
hacia el interior y el extremo hidrófilo se
vuelve hacia el exterior (ácido graso libre,
mono glicérido, colesterol y lecitina) para
formar una «micela mixta».
Para que las células epiteliales intestinales
absorban activamente la grasa, las micelas
mezcladas pueden pasar a través de la capa
de agua inmóvil de las células epiteliales
intestinales. En las células epiteliales
intestinales, los mono glicéridos y los
ácidos grasos libres se re esterifican para
formar triglicéridos, y junto con el
colesterol, las lipoproteínas y las lecitinas,
se ensamblan en quilomicrones para entrar
en la circulación hepática e intestinal.
Los ácidos biliares de laca juegan el papel
de emulsionar las grasas, activando la
lipasa y promoviendo la absorción de las
grasas. Los ácidos biliares tienen una
estructura biosurfactante para la grasa que
hace que la grasa se emulsione en gotitas
microscópicas. Esto aumenta
enormemente la superficie de la grasa,
haciéndola disponible para la digestión por
la lipasa. Los ácidos biliares pueden
cambiar la estructura de la lipasa al
combinarse en micelas para terminar el
proceso de hidrolización de la grasa, sólo
la combinación de ácidos biliares y ácidos
grasos, podría facilitar que los ácidos
grasos lleguen a la superficie de las
pequeñas vellosidades intestinales y
lleguen al torrente sanguíneo (Longchang,
S. 2019).
2. Definir emulsificación y
saponificación.
Emulsificación: Emulsionar es el proceso
de mezclar dos líquidos que son difíciles
de mezclar. El enfoque principal de
emulsionar es la dispersión de la fase
discontinua en gotitas preferentemente
finas. Las máquinas rotor-estator están
particularmente bien adaptadas para las
tareas de emulsificación. La combinación
de alto corte y fuerzas expansivas en el
cabezal mezclador permite obtener gotitas
muy finas. Las altas turbulencias también
permiten a las máquinas de rotor-estator
contribuir a un transporte rápido de
moléculas de emulsionante a las
superficies recién formadas (Direcciones
IKA. s. f., 2022)
Saponificación: La saponificación o
hidrólisis de éster es una reacción química
entre un lípido saponificable o ácido graso
y una base o solución alcalina. Como
consecuencia de la reacción, se obtiene
una sal de dicho ácido y como sub
producto, la glicerina (Noruega, I. B.
2021).
3. Características, origen y función de
las lipasas.
Características: Las lipasas son enzimas
con propiedades funcionales
interesantes que permiten su utilización
práctica en diversos campos de las
industrias agroquímica, farmacéutica, de
detergentes y alimentaria, así como en
química fina. Entre las aplicaciones más
importantes de estas moléculas
encuentran: la resolución de mezclas
racémicas, la obtención de compuestos
ópticamente puros y la bioconversión de
principios activos. En este trabajo se
presenta una amplia revisión del tema, que
abarca desde aspectos estructurales y
funcionales de las lipasas, hasta la
inmovilización de estas enzimas mediante
adsorción interfacial y su empleo en
biotecnología.
Origen: La lipasa pancreática es una
enzima (EC 3.1.1.3) que se produce en el
páncreas y se secreta en el intestino
delgado donde ayuda a descomponer las
grasas (lípidos) que comemos para
convertirlas en ácidos grasos y glicerol. El
páncreas constituye el origen principal y
primario de la lipasa sérica.
Función: Su función principal es catalizar
la hidrólisis de triacilglicerol a glicerol y
ácidos grasos libres. Las lipasas se
encuentran en gran variedad de seres
vivos. ... La función principal de esta
lipasa gástrica es ayudar a la absorción de
muy
grasas (ALEPH, Z. D. 2022).
4. Con que otro nombre se le conoce a
la lipasa gástrica y diga cuál es su
función durante el proceso digestivo.
La lipasa es una proteína (enzima)
se
secretada por el páncreas dentro del
intestino delgado. Ayuda a que el cuerpo
absorba la grasa descomponiéndola en
ácidos grasos (Navarro Gonzales, M. J.
2012).
5. Diga cuales son las diferencias entre inflamación de los ganglios linfáticos y
una lipasa y una estereasa. (ocasionalmente) de las articulaciones
adyacentes, distensión abdominal, tinte
Propiedad. Lipasa. Esterasa.
Saturados. Triglicéridos. Esteres castaño en la piel, anemia, plaquetas bajas
simples. y manchas amarillas en los ojos. Las
Activación Sí. No. personas afectadas de manera más grave
interfacial.
también pueden ser más susceptibles a las
Sustrato Alta. Alta o
infecciones. La enfermedad afecta tanto a
hidrofóbico. baja.
Enantioselecti Generalmente. Alta o hombres como a mujeres por igual (NIH,
vidad. baja. Z. D. 2022).
Estabilidad en Alta. Alta o
La enfermedad de Niemann-Pick es un
disolventes. baja.
grupo de trastornos autosómicos recesivos
ocasionados por la acumulación de grasa y
6. Mencione tres enfermedades en las colesterol en las células del hígado, del
cuales participen los triacilglicerol bazo, de la médula ósea, de los pulmones
en el transporte y almacenaje de y, en algunos casos, del cerebro. Las
lípidos. complicaciones neurológicas pueden
Enfermedades: La enfermedad de incluir ataxia (falta de coordinación
Gaucher, La enfermedad de Niemann-Pick muscular que puede afectar caminar
y La enfermedad de Fabry. firmemente, escribir y comer, entre otras
funciones), parálisis ocular, degeneración
La enfermedad de Gaucher es producida
del cerebro, problemas de aprendizaje,
por una deficiencia de la enzima
espasticidad, dificultades para alimentarse
glucocerebrosidasa. El material graso se
y tragar, habla arrastrada, pérdida del tono
puede almacenar en el cerebro, el bazo, el
muscular, hipersensibilidad al tacto y
hígado, los riñones, los pulmones y la
opacidad de la córnea debido a la
médula ósea. Los síntomas pueden incluir
acumulación excesiva de materiales. El
daño cerebral, aumento de volumen del
médico puede observar, con una
bazo y el hígado, disfunción hepática,
herramienta especial, un halo rojo cereza
trastornos esqueléticos y lesiones óseas
característico que se desarrolla alrededor
que pueden producir dolor y fracturas,
del centro de la retina en 50 % de las síntomas son aumento de volumen del
personas afectadas (NIH, Z. D. 2022). corazón, deterioro renal progresivo que
conduce a insuficiencia renal, dificultades
La enfermedad de Fabry, también
gastrointestinales, disminución de la
conocida como deficiencia de alfa-
sudoración y fiebre. Los angioqueratomas
galactosidasa A, produce acumulación de
(manchas pequeñas, no cancerosas,
material graso en el sistema nervioso
púrpura rojizas y elevadas en la piel) se
autónomo (la parte del sistema nervioso
pueden desarrollar en la parte baja del
que controla las funciones involuntarias
tronco del cuerpo y volverse más
como respirar o los latidos cardíacos), los
numerosos con la edad (NIH, Z. D. 2022).
ojos, los riñones y el sistema
cardiovascular. La enfermedad de Fabry 7. Qué diferencias hay entre los
es la única enfermedad de almacenamiento triacilglicerol y los fosfogliceroles,
de lípidos ligada al X. Los hombres son esfingomielina y glucoesfingolípidos.
los principales afectados, aunque es
Las esfingomielina están compuestas por
frecuente una forma más leve y variable en
la ceramida, un ácido orto fosfórico y una
las mujeres. Ocasionalmente, las mujeres
molécula con grupo alcohol, como un
afectadas tienen manifestaciones graves
amino alcohol. Los glucoesfingolípidos
similares a las vistas en hombres con el
están compuestos por la ceramida unida a
trastorno. El inicio de los síntomas es, por
un glúcido. Son moléculas abundantes en
lo general, en la infancia o la adolescencia.
las membranas de las neuronas. Los
Entre los signos neurológicos se
fosfoglicéridos son moléculas que
encuentran dolor quemante en brazos y
contienen glicerol, ácidos grasos, fosfato y
piernas que empeora en el clima caliente o
un alcohol (p. ej., colina). Un triglicérido
después del ejercicio y depósito de exceso
es un éster derivado de glicerol y tres
de material en las capas claras de la córnea
ácidos grasos. Los triglicéridos son los
(que produce opacidad sin cambios en la
principales constituyentes de la grasa
visión). El almacenamiento de grasa en las
corporal en los seres humanos y otros
paredes de los vasos sanguíneos puede
animales, así como la grasa vegetal
obstruir la circulación, lo que pone a la
(Proyecto Biosfera, Z. D. 2022).
persona en riesgo de accidente
cerebrovascular o ataque cardíaco. Otros
8. Indique cuales serían las La bilis contiene:
propiedades de las sales biliares.
 Principalmente colesterol
Es un líquido que es producido y secretado  Ácidos biliares (también llamados
por el hígado y almacenado en la vesícula sales biliares)
biliar.  Bilirrubina (un producto de la

La bilis ayuda a la digestión y ayuda a las descomposición de los glóbulos

enzimas en su cuerpo para descomponer rojos)

las grasas en ácidos grasos, que pueden La bilis contiene igualmente:

introducirse en el cuerpo a través del tracto
 Agua
digestivo (Proyecto Biosfera, Z. D. 2022).
 Sales corporales (como potasio y
sodio)
 Cobre y otros metales.

Protocolo
Método: Después de que cada matraz ha cumplido

Incubación y valoración acido-base su tiempo de incubación, retirarlo del

baño, adicionar 12.5 ml de alcohol 96
Procedimiento:
grados y 3 gotas de fenolftaleína
Preparar una serie de 8 matraces
(indicador), enseguida titular con KOH
Erlenmeyer de 125 ml de acuerdo con la
0.1N.
siguiente tabla:
Agite el matraz durante la titulación tan
MATRAZ T1 1 2 3 4 5 6 T2
LECHE 5. 5. 5. 5. 5. 5. 5. 5. rigurosamente como sea posible, ya que la
0 0 0 0 0 0 0 0
LIPASA --- 1. 1. 1. 1. 1. 1. --- proteína precipitada puede enmascarar los
PANCREATICA --- 5 5 5 5 5 5 ---
- ácidos grasos.
LIPASA 1. --- --- --- --- --- --- 1.
PANCREATICA 5 --- --- --- --- --- --- 5
CALENTADA - - - - Titular el matraz tan rápido como sea
BILIS --- --- --- --- 1. 1. 1. 1.
(DESOXICOLAT --- --- --- --- 5 5 5 5 posible (contra un fondo blanco), el color
O) - -
INCUBACION(37 45 15 30 45 15 30 45 45 por la lipasa continúa durante la titulación.
C) ´ ´ ´ ´ ´ ´ ´ ´

Tabla 5: actividad de la lipasa pancreática.

Resultados:

En la imagen 1 podemos apreciar los materiales que utilizamos.

Imagen 1

En la imagen 2 se observa la incubación a 35 grados centígrados por diferentes tiempos

posteriormente en la imagen 3 se comenzó con la titulación correspondiente a cada muestra.

Imagen 2 Imagen 3

En la imagen 4 se observan todas las muestras tituladas.

Imagen 4
Gasto de KOH:

T1= 4.5 ml

1= 4.6 ml

2= 3.5 ml

3= 5.2 ml

4= 5.5 ml

5= 6 ml

6= 6 ml

T2= 2.6 ml

Diferencia gasto de KOH: Tiempo de incubación:

T1-1= 4.5-4.6= 0.1 ml 15 min.

T1-2= 4.5-3.5= 1 ml 30 SEG

T1-3= 4.5-5.2= 0.7 ml 45 SEG

T2-4= 2.6-5.5=2.9 ml 15 SEG

T2-5= 2.6-6=3.4 ml 30 min.

T2-6= 2.6-6=3.4 ml 45 min.

1.2 3.4 3.4 3.5

1 3.4
1
3.3
Dif de gasto de KOH

0.8 0.7 3.2

3.1
0.6
2.9 3 S/BILIS
0.4 2.9 C/BILIS
2.8
0.2 0.1
2.7
0 2.6
15 min 30 min 45 min
Tiempo de incubación
Conclusión exhibiendo valores menores de gasto”
(Rodríguez, J. 2016).
La identificación de la Actividad de las
enzimas se realiza a través de una titulación La pérdida de la función de la vesícula biliar,

acido-base, ya que con la acción de las lipasas ya sea por colecistitis crónica o por

sobre los lípidos saponificables libera ácidos colecistectomía, incrementa las

grasos que pueden ser cuantificados. “La concentraciones de triglicéridos hepáticos y

titulación es un método para determinar la favorece la resistencia a la insulina, “Estas

cantidad de una sustancia presente en enfermedades crónicas representan en su

solución” (Margarita, A. R. A. 2018). Para conjunto la principal de morbilidad y

determinarlo, la grasa o aceite se saponifica mortalidad del adulto contemporáneo,

con un exceso medido de KOH etanolico y incluyendo la patología arterioesclerótica y

luego se valora el excedente de KOH diversos canceres muy prevalentes,

(hidróxido de potasio), la adición se detiene especialmente los digestivos” (Nervi, F.

cuando se ha agregado la cantidad de reactivo 2017).

determinada en función de un cambio de Después de la colecistectomía, el consumo de

coloración rosa, esto es producido por el grasa debe limitarse durante varios meses
indicador fenolftaleína. Esto nos demuestra para permitir que el hígado compense la
que ocurrió una neutralización de los ácidos ausencia de la vesícula. “La grasa debe
grasos libres y los ácidos grasos liberados de reintroducirse en forma gradual; es
los glicéridos, luego de su saponificación. conveniente evitarse las cantidades excesivas

Entonces para los tubos 4, 5, 6, y T2, donde de grasa en una comida. También deben

se utilizó desoxicolato de sodio junto con la incluirse hidratos de carbono no refinados. Si

lipasa pancreática, se pudo observar un se presenta diarrea persistente después de la

mayor gasto de KOH, a diferencia de los operación, hay que intentar fármacos

demás tubos donde solo agregamos lipasa antidiarreicos y una dieta alta en fibra para

pancreática, con esto podemos deducir que aumenta el volumen. El ácido ascórbico

“las grasas que contienen ácidos grasos de afecta el catabolismo del colesterol en ácidos

cadena corta consumen más KOH en su biliares y el desarrollo de la enfermedad

saponificación y las que poseen ácidos grasos vesicular, hay que complementar la dieta si es

de cadena larga consumen menos KOH

necesario con frutas y jugos cítricos o
complementos” (Escott Stump, S. 2005).
La evidencia sugiere que una dieta saludable
como la dieta mediterránea, protege frente al
síndrome metabólico, incluyendo está bajo
contenido en grasa saturada y trans; alto en
ácidos grasos mono insaturados y
poliinsaturados, ingesta balanceada de
hidratos de carbono y alto contenido en fibra,
frutas y vegetales. El tratamiento y el control
de cada uno de los pacientes pasa por la
modificación de los hábitos de vida.
Caso clínico
La esteatorrea es una manifestación indirecta
de la mal digestión de grasas en pancreatitis
crónica, y aunque la medición de grasa en
heces se considera el estándar de oro para el
diagnóstico de esteatorrea, su utilización en
la práctica clínica no es frecuente debido a la
incomodidad que representa la recolección de
la muestra. Aunque la prueba en aliento con
triglicéridos mixtos inicialmente se validó
como una alternativa indirecta para evaluar la
reserva pancreática exocrina, recientemente
se la ha propuesto como método sustituto a la
medición de grasa en heces. Se hizo con el
objetivo es evaluar la digestión de lípidos por
medio de la prueba en aliento con triglicérido
mixto13C en pacientes con pancreatitis
crónica. Se estudiaron pacientes con
pancreatitis crónica, a quienes se les realizó
evaluación clínica, pruebas bioquímicas que
incluyeron amilasa, lipasa y beta carotenos en
suero; medición de grasa en heces y
realización de la prueba en aliento con
triglicérido mixto (Arteaga, 2006).
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