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2016-I
UNIVERSIDAD NACIONAL
``PEDRO RUIZ GALLO``
I
N
D
U
S
T
R
I
A
S
CURSO:
INTEGRANTES:
Cspedes Durand Romael
Flores Vsquez Paola
Gil Prez Isabel
De La cruz Baldera Ivn
A
L
I
M
E
N
CICLO ACADMICO
T
A
DE SUSTRATOS
R Franks A. Carrasco Solano
I
A
S
CINTICA DE CONSUMO
1
2016-I
2016-I
FECHA
09/06/16
Dedicatoria
A Dios
Por la sabidura e inteligencia
que me da da a da.
Por iluminarme durante este trabajo
y por permitirme finalizarlo con xito
A nuestros profesores:
Quienes son nuestros guas en el aprendizaje,
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AGRADECIMIENTO
CINTICA DE CONSUMO
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NDICE
NDICE
CARATULA
DEDICATORIA
CINTICA DE CONSUMO
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AGRADECIMIENTO
INTRODUCCIN
OBETIVOS
FUNDAMENTO TERICO:
1. VELOCIDAD DE CONSUMO DE SUSTRATO (rsx) PARA EL
CRECIMIENTO
1.1. VELOCIDAD DE CONSUMO DE SUSTRATO (RSX)
1. Aplicando Yx/s (rendimiento celular)
1.1.2. Aplicando r x (velocidad de crecimiento celular)
1.1.3. Aplicando q sx (velocidad especifica de consumo de substrato)
1.2. VELOCIDAD ESPECFICA DE CONSUMO DE SUSTRATO (QS)
2. MANTENIMIENTO CELULAR
3.1. Concepto.
3.2. Velocidad de consumo de la fuente de carbono y energa
3.3. Relacin entre los rendimientos Yx/s y Yx/s
3. REQUERIMIENTO DE OXIGENO
4.1.
Velocidad de consumo de oxigeno (ro2)
4.2.
Velocidad especifica de consumo oxigeno (q o2)
4.3. Concepto de concentracin critica de oxgeno disuelto (Cc)
CONCLUSIONES
LECTURAS RELACIONADAS BIBLIOGRAFA
BIBLIOGRAFA
CINTICA DE CONSUMO
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INTRODUCCIN
Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los
mismos comienzan a dividirse activamente empleando los nutrientes que le
aporta el medio de cultivo para fabricar nuevos microorganismos. Este proceso
contina hasta que algn nutriente del medio de cultivo se agota, este sera el
sustrato limitante. Consecuentemente el crecimiento se detiene. Tambin puede
detenerse el crecimiento por acumulacin de alguna sustancia inhibidora formada
por las mismas clulas como puede ser una alta concentracin de alcohol. Si se
supone que en este caso se detiene el crecimiento a causa del agotamiento del
sustrato limitante, se puede considerar dos aspectos fundamentales que definen
al crecimiento microbiano. Estos aspectos serian, por un lado el estequiomtrico,
ya que la concentracin final de microorganismos obtenidos depender de la
concentracin y composicin del medio de cultivo, y por la otra parte el de tipo
cintico, el que dir con qu velocidad se lleva a cabo el proceso.
OBJETIVOS
Conocer los parmetros ms importantes que se utilizan en la cintica de
consumo de sustrato.
Conocer las velocidades de consumo de sustrato (rs) y las velocidades
especficas de consumo de sustrato para los clculos de crecimiento celular
en un cultivo microbiano.
Aprender a calcular el requerimiento de oxigeno necesario en cultivos
sembrados en el laboratorio.
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(Rendimiento Celular):
Yx/s
= - dx / ds
Yx/s
Despejando:
(24)
- ds / dt
dx / dt
/ - ds / dt
- ds / dt
1 / Yx/s
. dx /dt
1 / Yx/s
rx
donde: rs = velocidad de
rx = velocidad de
crecimiento celular
Reordenando
(25)
rsx =
Yx/s
rx /
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rS
en la
rX / Yx/s
rsx
= x/
Yx/s
rsx
qsx
x
1.2. VELOCIDAD ESPECIFICA DE CONSUMO SUSTRATO ( qsx )
1.2.1. Comparando rS (velocidad de consumo de sustrato):
Comparando las Ec. (26) y (27),
(26) y (27)
x / Yx/s
qSx . x
Despejando qS
qSx
x / Yx/s . x
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(28)
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qsx =
Yx/s
Si:
= m ;
se tendr:
qxx
qsm;
qsxm =
Yx/s
m /
(28b)
Ks
m
Yx/s.
Estos dependen tanto del microorganismo como del medio de cultivo
empleado, por lo que su evaluacin debe realizarse para cada caso
particular.
Las velocidades especficas suelen brindar informacin acerca de cul es la
actividad metablica del microorganismo (o de la biomasa) durante el cultivo, ya
que el estar referidos a la unidad de biomasa cualquier modificacin en el valor de
, qs, etc. estar indicando que "algo" est ocurriendo en el metabolismo del
microorganismo en cuestin.
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La clula necesita del sustrato para dos cosas para crecimiento y va a necesitar
sustrato para mantenimiento, cuando esa clula se est consumiendo ese
sustrato, se los est consumiendo a una velocidad determinada regida por las
velocidades volumtricas de crecimiento celular, hay una velocidad de consumo
de sustrato asociado al crecimiento celular, y estaba en funcin de miu/Yxs,
tambin destina parte del sustrato para mantenerse, mantener su pH, nutrirse,
intercambiar compuestos con el exterior.
Segn el modelo del metabolismo endgeno el crecimiento observado de un
microorganismo es el resultado neto de dos procesos: un proceso que
corresponde a la sntesis de nuevas clulas donde se genera biomasa a partir de
los sustratos (etapa de crecimiento) y un proceso donde la propia biomasa es
empleada como fuente de energa para el mantenimiento (metabolismo
endgeno). Cuando el sustrato se agota la velocidad de destruccin de clulas
excede a la de sntesis de nuevas clulas observndose una disminucin de la
concentracin de biomasa (fase de respiracin endgena) (Ramalho, 1993):
Crecimiento
S
metabolismo endogeno
X
productos
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2. MANTENIMIENTO CELULAR
Una de las principales caractersticas de una clula viva es su capacidad de multiplicarse
y sta fue muchas veces el criterio para decidir si el microorganismo estaba vivo o no.
Los primeros trabajos realizados sobre cultivos de microorganismos se llevaron a cabo en
sistemas batch en los cuales la poblacin crece durante gran parte del cultivo a su
mxima velocidad y en un ambiente que cambia permanentemente. Bajo estas
condiciones y en presencia de una nica fuente de C y energa los microorganismos
toman dicha fuente de C a una velocidad que es proporcional a la de crecimiento:
qs
1
Yx / s
(1)
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qs Vs. D
g sust/g biom /h
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
D (h'1)
Fig. 1
El consumo de sustrato observado cuando la velocidad de crecimiento es nula
representara la fraccin de la fuente de C y energa destinada a producir energa
no asociada al crecimiento. La misma representa el consumo de sustrato que
no redunda en un aumento de biomasa sino en el mantenimiento de otras
funciones vitales. Segn Fig. (1) qs podra entonces expresarse como:
qs qcrecimiento qmantenimiento
qs
ms x
Y x / s
(2)
(3)
donde,
Yx/s = rendimiento terico
ms = coeficiente de mantenimiento celular, [g sustrato/g biomasa/h]
Los destinos de esta energa de mantenimiento constituyen: el recambio de ARN
(se recambia hasta 4 veces en un t g) recambio de enzimas, protenas,
componentes de pared celular, transporte de iones, mantenimiento de gradientes
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+
Yx / s Y x / s
(4)
O2
H2O
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ATP
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Otras funciones
Fte. De C
y Energ
Esqueletos
Carbonados
polmeros
biomasa
Fte. N
Sales
Vitaminas, etc.
El ATP representado en el esquema de la Fig. (2) es el proveniente tanto de las
reacciones de fosforilacin a nivel de sustrato, como de la fosforilacin oxidativa
(cadena respiratoria).
Este esquema sugiere que la fuente de C y energa que entra a la clula es
catabolizada para producir poder reductor y esqueletos carbonados (metabolitos
intermediarios). Una porcin de los equivalentes de reduccin es oxidado por los
componentes de la cadena respiratoria resultando la sntesis de ATP, y parte de
ste junto con otra fraccin de poder reductor, es utilizado para convertir los
metabolitos intermediarios en polmeros y biomasa. Otra fraccin del ATP formado
es destinado a otras funciones vitales.
Este modelo demuestra tambin que solo cuatro componentes medibles
experimentalmente estn asociados a la formacin de energa que son: la fuente
de C y energa, el O2, el ATP y el CO2. De modo que existen tres sustratos a los
cuales es posible aplicarles las ecuaciones (3) y (4):
rx
rs =
ms X
Y x / s
(5)
rO2 =
rATP =
rx
+ mo X
Y x / o
rx
Y x / ATP
(6)
mATP X
(7)
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rCO2 =
rx
Y x / CO2
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+ mCO2 X
(8)
ms
s
4
(9)
Hasta el momento hemos considerado el crecimiento de microorganismos en
aerobiosis y hemos despreciado la formacin de productos. Los productos que
pueden formarse pueden ser clasificados en (a) los que se encuentran
asociados a la formacin de biomasa, es decir son productos finales del
catabolismo o metabolismo energtico y (b) aquellos que no estn asociados al
crecimiento. Los productos del tipo (a) (generalmente producidos en
anaerobiosis) no requieren gastos extras de consumo de sustrato para la
formacin del producto, por lo que la ecuacin de Pirt sigue siendo vlida. Para los
productos del tipo (b) (producidos por lo general en aerobiosis) la ec. (3) debe ser
corregida:
rs =
rx
rp
+
+ ms X
Y x / s
Y p / s
(10)
Donde Yp/s es el rendimiento terico para la formacin de producto. Son los g producto / g
sustrato consumido, si todo el sustrato se transforma en producto.
Factores que afectan el mantenimiento celular
El valor del mantenimiento celular depende del microorganismo utilizado y puede
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ser modificado por factores del entorno como, pH, fuerza inica, temperatura. En
la Tabla 1 se encuentran algunos ejemplos de cmo vara el mantenimiento
celular con algunos parmetros del entorno.
Como se mencion anteriormente, si bien ms se considera desde el punto de vista
tecnolgico como un parmetro constante, es importante sealar que desde el
punto de vista fisiolgico no es as, ya que vara con la velocidad de crecimiento.
Despejando yx/s de la ec. (4), se obtiene:
+ y x / s
yx / s =
+ ms y x / s
Yx/s
Es importante observar
que el mantenimiento celular se
hace importante a velocidades
espec. de crecimiento bajas.
Es decir que la fraccin de fte de
C y E destinada a la formacin
de biomasa es menor a bajos
valores de .
yx/s
(h-1)
Tabla 1. Factores que afectan el mantenimiento celular
Factor
Microorganis
mo
Condiciones
de cultivo
Aerobacte
cloacae
aerobio.
Glucosa
como sust. limit.
Saccharomices
cerviceae
aerobio.
Sacarosa
como sust. limit.
Sacarosa.
NaCl 1M
Microorganis
mo
Presin
osmtica
Saccharomices
cerviceae
ms
(g sust./
g biom/h)
0.094
0.036
0.36
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Azotobacter
vinalandii
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0.15
PO2= 0.21 at
1.5
pH= 6.5
0.025
pH=4.5
0.089
T = 18 C
0.022
T = 21 C
0.052
T = 27 C
0.078
(fijador de N2)
pH
Temperatura
Klebsiella
pneumoniae
Kluiveromyces
lactis
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glutamina sintasa
glutamina + ADP + Pi
glutamato sintasa
2glutamato +
NADP
glutamina sintasa
glutamina + ADP
+ Pi
glutaminasa
Glutamina
ATP
glutamato + NH3
ADP + Pi
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De modo que, el trmino ciclo ftil describe una situacin en la cual la clula
posee la maquinaria para llevar a cabo una transformacin irreversible de un
proceso de transformacin en una direccin y en la direccin opuesta. Si ambas
funcionan a distinto tiempo, el metabolismo es eficiente. Sin embargo si actan
simultneamente no habr ninguna transformacin neta, ms que la disipacin de
energa.
Otro gasto de fuente de C y energa no destinada al crecimiento es lo que se
conoce como el metabolismo de sobreflujo (overflow metabolism, o spilling
reactions o spillover). Existen entornos bajo los cuales los microorganismos
actan como si el entorno en el que se encuentran representara un suministro
permanente de recursos, y la filosofa es gastar los recursos ms que
conservarlos para el futuro. Las clulas toman las fuentes de C y E la utilizan
hasta cierto grado y luego la excretan an cuando no ha sido utilizada
completamente. Por ejemplo, si a cultivos limitados en glucosa los liberamos de
dicha limitacin temerariamente, no habr una inmediata aceleracin de la
velocidad de crecimiento, sin embargo el exceso de glucosa es oxidado
parcialmente y se liberan al medio un nmero importante de metabolitos
intermedios. El hecho que las bacterias no siempre regulan precisamente la
velocidad de consumo de los excesos de fuente de carbono se observa ms
claramente en el crecimiento de bacterias en cultivos continuos limitados por
otros sustratos distintos a la fuente de C y energa.
La Tabla 2 muestra las velocidades de consumo de glucosa y formacin de
algunos productos en cultivos de Klebsiella pneumoniae limitados por distintos
sustratos operados Este llamativo consumo de fuente de C y eliminacin de
intermediarios que an podran ser utilizados es un modo econmico de defensa
desde la perspectiva que es rpido, sencillo.
Existen otros destinos para la energa de mantenimiento que el bioqumico o
fisilogo podra encasillar dentro de lo que se denomina mantenimiento celular.
Uno de ellos es la puesta en marcha por parte de la clula de mecanismos que le
permiten mantenerse en guardia frente a posibles ataques de otras bacterias,
virus, compuestos qumicos txicos, etc...Tambin frente a importante
fluctuaciones del entorno, las bacterias pueden desarrollar modos de protegerse a
si mismas, por ejemplo a travs de la formacin de endosporas. No importa cul
sea el costo energtico que represente este proceso, la bacteria lo llevar a cabo
an a costa de sacrificar su crecimiento, es decir, gastar energa a fin de
proteger la longevidad de la especie.
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Velocidades
especficas
Carbono
Nitrgeno
Azufre
Biomasa
(h-1)
0.17
0.17
0.17
Glucosa
qs (mmol/g/h)
2.1
6.1
5.6
CO2
qCO2(mmol/g/h)
5.3
6.9
7.1
Acetato
qp(/g/h)
0.7
1.6
Piruvato
qp2(g g/h)
0.6
2.5
Succinato
qp3mmol/g/h)
0.2
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3. REQUERIMIENTO DE OXIGENO
OXIGENO
Es un elemento que juega un papel muy importante en el crecimiento bacteriano,
a tal grado que su presencia puede inhibir el crecimiento de unas bacterias o
tambin su ausencia puede inhibir el crecimiento de otras. En funcin de la
necesidad del oxgeno, existen 5 grupos bacterianos.
Si se considera una simplificacin del proceso biolgico y se representa por la
siguiente ecuacin:
C5H7NO2 + 5O2 5CO2 + 2H2O + NH3
113 grs 160 grs
Donde C5H7NO2 es una forma simple de representar la composicin qumica de
un conjunto de clulas o biomasa, entonces la cantidad de oxigeno que requieren
de acuerdo a la estequiometria de la reaccin es de 160/113=1.42 grs. de
oxigeno/gr de biomasa o de clulas. La cantidad de oxigeno demandada o
requerida para la oxidacin bioqumica, sera la que se necesita para la oxidacin
del material orgnico menos la que se requiere en las clulas o lodos de desecho
producidos en el sistema.
O2 Requerido=Qo (So-S)-1.42 (Px)
La cantidad de aire que se suministra debe ser suficiente para:
Satisfacer la DBO a remover.
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4. CONCLUSIONES
Conocimos los parmetros ms importantes que se utilizan en la cintica de
consumo de sustrato.
Conocimos las velocidades de consumo de sustrato (rs) y las velocidades
especficas de consumo de sustrato para los clculos de crecimiento celular
en un cultivo microbiano.
Aprendimos a calcular el requerimiento de oxigeno necesario en cultivos
sembrados en el laboratorio.
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5. LECTURAS RECOMENDADAS
6. BIBLIOGRAFIA
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