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Aqu estn algunas de las Pruebas Bioqumicas ms frecuentes:

Fermentacin de la lactosa (Mc Conkey) Agar Hierro de Kliger (KIA) Prueba


del Indol Citrato de Simmons Agar Hierro Lisina (LIA) Agar Urea de
Christiansens Prueba de la Fenilalanina (PPA) Reduccin de los Nitratos
Movilidad RM - VP Oxidasa y Catalasa
Fermentacin de la lactosa (Mc Conkey)
El agar Mc Conkey es un medio slido, diferencial y selectivo. Se usa para la
discriminacin de bacterias con capacidad de fermentar la lactosa (Lac + y
-).Composicin g/l :
- Peptona 20.0 : fuente de nitrgeno y carbono para las Lac -.
- Lactosa 10.0 : fuente de carbono para las Lac +.
- Sales biliares 2.5 : le confiere carcter selectivo, inhibiendo el crecimiento de
Gram +.
- Cloruro sdico 5.0 : para mantener la tonicidad del medio (evitar osmosis).
- Rojo neutro 0.05 : indicador que va hacer que el medio vire de coloracin. Si
las bacterias son Lac +, producirn cidos derivados de la fermentacin que
darn al medio un aspecto rosceo; si por el contrario son Lac -, el medio se
basificar por el uso de la peptona y se tornar amarillo.
- Cristal violeta 0.001 : interfiere junto con las sales biliares en la selectividad
del medio.

- Agar-agar 15.0: da consistencia al medio.

Lac -

lac +

Agar Hierro de Kliger (KIA)


El agar Hierro de Kliger (KIA), es un medio slido y diferencial. El fundamento
se basa en la capacidad de fermentacin de dos azucares (glucosa y lactosa),
en la produccin de c. sulfhdrico y en la produccin de gas. Composicion g/l:
Extracto de carne 3.0

Extracto de levadura 3.0

Peptona 20.0

Lactosa 10.0

Glucosa 1.0

Cloruro sdico 5.0

Citrato frrico amnico 0.5

Tiosulfato sdico 0.5 : fuente de azufre, las


bacterias lo reducen produciendo c. sulfhdrico
(precipitado negro)

Rojo de fenol 0.03 : indicador, si vira a rosceo , indica basicidad del medio, si
es amarillo indica acidificacin (derivada de c. de la fermentacin)
Interpretacin del Kliger:
NC o SC: no cambio o sin cambio

LC, Alk o K : alcalinidad

H2S o subndice s: si produce c.


sulfhdrico

G: productora de gas

Ejemplo: A/As indica que es fermentador de glucosa, lactosa y productor de


sulfhdrico
1

Fermentador glucosa, productor c. sulfhdrico y de gas.

2
3

Fermentador glucosa, lactosa y productor de gas.

Prueba del Indol


Pone de manifiesto la presencia de la encima Triptofanasa en nuestras
bacterias, si esta presente degradar el triptofano y liberar al medio Indol,
para revelar su presencia usaremos el reactivo de Kovac; si hay indol se
formar un anillo rojo en la superficie, sino este ser amarillo. Para esto
sembramos en caldo con triptofano.

ndol+

Citrato de Simmons

Indol-

Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como


nica fuente de carbono y compuesto amoniacales como nica fuente de
nitrgeno. El medio contiene citrato sdico, fosfato de amonio y azul de
bromotimol como indicador; este se tornar azul cuando el medio se basifica.
Las bacterias que metabolizan el citrato liberan iones amonio al medio
(degradacin del fosfato amnico) lo que provoca que este se alcalinice y el
indicador vire azul.

cit +

Cit -

Agar Hierro Lisina (LIA)


Este medio pone de manifiesto:
- Si la bacteria posee la enzima descarboxilasa (LDC). el medio contiene como
indicador Purpura de Bromocresol, cuando la lisina se descarboxila, el medio se
acidifica y el indicador vira amarillo en el fondo.
- Si es productora de c. sulfhdrico, en cuyo caso el precipitado negro nos
impedir ver si es LDC + o -.
- Si es productora de gas.
1. LDC -, NO H2S, PRODUCTORA GAS.
2. LDC + -, PRODUCTROA H2S Y GAS.
3. LDC - , NO H2S, PRODUCTORA DE GAS

Agar Urea de Christensen


Pone de manifiesto la actividad de la enzima ureasa, para degradar la urea en
dos molculas de amoniaco. El medio lleva como indicador Rojo fenol, que se
torna amarillo cuando es negativo y rosa cuando es positivo. Hay que tener
precaucin por que tambin puede ocurrir que no se produzca cambio de
coloracin, en este caso es negativo. el medio posee un color rosceo (mucho
menos intenso que los verdaderos positivos) lo que puede llevarnos a error
(considerar falsos positivos).

Urea -

Urea +

Prueba de la Fenilalanina Desaminasa (PPA)


Determina la capacidad e la bacteria para desaminar el aminocido fenilalanina
en cido fenilpirvico por accin de la enzima Fenilalanina desaminasa, esto va
a producir una acidificacin del medio, que se va a poner de manifiesto
mediante la aplicacin de 0,2 - 0,3 mL de Cloruro frrico al 10 %, si hay en el
medio c. fenilpirvico aparece una coloracin verde-azulada.

PPA -

PPA +

Reduccin de Nitratos
Va a poner de manifiesto la capacidad de transformar los Nitratos en Nitritos.
Para esto inoculamos tres tubos en el medio para dicha prueba y los incubamos
24, 49 y 72 horas respectivamente. Tras 24 h. aadimos 2 o 3 gotas del
reactivo "A-B", si aparece coloracin rojo cereza indica que es positivo, si no
aparece coloracin es un presunto negativo, para confirmarlo basta con aadir
una punta de esptula de Zinc y si realmente es negativo se tornara rojo. Si el
ultimo da (72 h.) la bacteria da negativo, entonces podemos decir con
seguridad que no tiene capacidad para reducir los nitratos.

Positivo

Presunto negativo

Movilidad

Se realiza una siembra en picadura, y tras incubar 24 h. observamos si se ha producido


crecimiento entorno a la zona inoculada.
Positivo
Negativo

Rojo de Metilo - Voges Proskauer


Las enterobacterias son anaerobios facultativos que usan la glucosa en dos
fases: 1 Degradan la glucosa por la va oxidativa hasta que consumen el
oxigeno del medio. 2 Metabolizan la glucosa por la va fermentativa, que
puede ser de dos tipos:
- Fermentacin cido mixta: los productos finales son cidos orgnicos, que
disminuyen el pH del medio, lo que se manifiesta con el Rojo de metilo.
- Fermentacin butiln-gliclica: los productos finales, como butanodiol y
etanol, son neutros y producen como intermediarios acetoina, que puede
detectarse con el reactivo de Voges Proskauer, el react. A que es KOH, y el B
alfa-naftol, estos reaccionan con la acetoina originando coloraciones violceas.

Para realizar el ensayo, dividimos el medio inoculado y que ha incubado tres


das en dos tubos (la mitad en cada uno) y revelamos con los reactivos.

Rojo de metilo (posit. y negat.)

Voges Proskauer (negativo)

Prueba de la Oxidasa y la Catalasa


Ambas pruebas se caracterizan por poder realizarse de forma inmediata a
partir de nuestro cultivo problema.
La oxidasa, es una prueba que se usa para poner de manifiesto el sistema
citocromoxidasa, que se encuentra en organismos aerobios, anaerobios
facultativos y ocasionalmente en microaerfilos, careciendo los anaerobios
estrictos de esta. El mtodo ms frecuento es el indirecto, se realiza en un
trocito de papel de filtro, de forma que colocamos una gota del reactivo de
Kovacs en el papel y posteriormente tomamos parte de nuestra colonia con el
asa de siembra, que frotaremos sobre el papel. El resultado ser positivo se se
produce una reaccin de color a los pocos segundos.
La catalasa, va a degradar el peroxido de oxigeno que se produce como
consecuencia de la acumulacin de oxigeno. Para esto en un tubo de ensayo
colocamos 2 o 3 ml de peroxido de oxigeno, tomamos muestra con el asa de
siembra y la introducimos en el tubo, el resultado ser positivo si se observa la
produccin de pequeas burbujas.