FACTORES QUE CONTRIBUYEN A LA EFICACIA CATALTICA DE LAS ENZIMAS.

MECANISMOS DE CATLISIS

Muchas protenas unen ligandos, pero no tienen actividad cataltica, porque no transforman el ligando. La hemoglobina por ejemplo, solo transporta el oxgeno, pero no lo modifica, por lo que no tiene actividad cataltica. Qu factores hacen que una protena determinada se una al sustrato y luego que sea capaz de transformarlo? Factores que influyen a la eficacia cataltica de las enzimas: 1. Factor de proximidad y orientacin: Para que se lleve a cabo una reaccin determinada, las molculas tienen que chocar primero, colisionar. No siempre que chocan hay reaccin, porque se necesita una orientacin determinada. Por este hecho, no todos los choques son efectivos. Una enzima que va a catalizar una reaccin: como los sustratos tienen afinidad por los centros activos, se unirn a ellos, por lo que en los centros activos los sustratos se van a aproximar uno al otro, el equivalente a la colisin entre las dos molculas. Adems, cuando se unen al CA de la enzima, hace que los grupos que van a reaccionar entre los sustratos y los grupos catalticos de la enzima van a quedar en la orientacin apropiada para llevar a cabo la reaccin. En una reaccin enzimtica, todas las colisiones son productivas. La entropa del sistema disminuye, porque pasamos de un sistema con muchos grados de libertad a un sistema con los 3 componentes que tienen menos grados de libertad, lo que se traduce en una disminucin de entropa, compensada por un descenso de entalpia muy grande, debido a las

interacciones que se forman entre los sustratos entre si y entre el sustrato y la enzima.

Este factor de proximidad se puede evaluar con diferentes modelos. En el ejemplo del imidazol, se mide cmo aumenta la velocidad del p-nitrofenilacetato con respecto al tiempo.

Hay 2 situaciones: - El catalizador se encuentra libre en la solucin - El catalizador se encuentra unido covalentemente con el reactivo

En el segundo ejemplo, estn los 2 unidos.

Ambas reacciones tienen el mismo mecanismo, los sustratos son muy parecidos, pero la 2 va 25 veces ms rpida que la primera, porque en la primera los enlaces

se tienen que encontrar y orientar, mientras que en la segunda reaccin ya estn encontrados y orientados.

2. Factor de distorsin y de desestabilizacin:

Una enzima se puede unir al estado de transicin de la reaccin a la que cataliza con mayor afinidad que sus sustratos o productos. El concepto original de unin de estado de transicin propone que las enzimas someten sus sustratos a una fuerza mecnica que los fuerza hacia la geometra de estado de transicin a travs de sitios de unin en los que los sustratos no distorsionados no se ajustan de manera adecuada. Cuanto ms estrecha es la unin de la enzima en el estado de transicin de la reaccin respecto del sustrato, mayor es la velocidad de la reaccin catalizada respecto de la no catalizada, la catlisis resulta del enlace de preferencia y en consecuencia de la estabilizacin del estado de transicin respecto del sustrato

Lo que hace la enzima es distorsionar el sustrato. Las molculas, los sustratos van a estar sometidos a estrs. La enzima aporta la energa de activacin para que el sustrato llegue al estado transicional. En el modelo de llave cerradura, se acopla perfectamente el sustrato a la enzima y no necesita cambio. En el otro caso, el sustrato no se acopla perfectamente. Primero, el sustrato se une a la enzima y se produce un ajuste sistemtico y de deforma para un perfecto acoplamiento, es decir, le lleva al estado de transicin,

porque en muchos casos la enzima tiene ms afinidad por el sustrato en el estado de transicin que por el sustrato en el estado activo. Debido a esto, en el momento que el sustrato entre al centro activo, la enzima lo lleva al estado de transicin.

De esta manera, el sustrato se deforma, lo que quiere decir que el sustrato estar sometido a tensin, por lo que ser ms fcil de romper. Ejemplo: los anlogos del sustrato pueden ser inhibidores de enzima, pero los anlogos del sustrato en el estado de transicin son inhibidores muy potentes, porque la enzima tiene ms afinidad por el sustrato en el estado de transicin que por el sustrato en estado nativo.

En este tipo de enzima, incluso a poca concentracin son muy efectivas. La enzima va a someter a estrs el sustrato y lo deformar.

El sustrato, en estado nativo, es estable porque est rodeado por su esfera de solvatacin, al entrar en el CA entra solo y se desestabiliza porque el agua no puede entrar. Tendremos un sustrato inestable, por lo que ser ms fcil llevar a cabo la reaccin.

3. Catlisis por iones metlicos Algunas reacciones necesitan la presencia de iones metlicos, generalmente iones divalentes (Cu+2, Co+2, Fe+2, Zn+2etc.).

Estos iones pueden cumplir 3 papeles: a. Los iones estn cargados elctricamente, por lo que van a colaborar en la unin y en la concentracin de sustrato. Si el sustrato tiene carga -, al encontrarse con la carga +, se van a unir, orientar y llevarn a cabo la reaccin. b. Los iones pueden participar en reacciones de xido-reduccin. El dador o aceptor de electrones puede ser un ion metlico. c. Apantalla cargas negativas del sustrato. Ej.: glucosa + ATP G6P + ADP El ATP tiene 4 cargas negativas, procedentes del fosfato. El Mg por ejemplo, tiene 2 cargas positivas, por lo que podr apantallar parte de la carga negativa del ATP, por lo que el verdadero sustrato de la reaccin no es el ATP, sino un complejo ATP-Mg. Si en una reaccin como la indicada aadimos Mg, la reaccin no se lleva a cabo, porque el ATP no puede entrar en el CA, debido a la carga negativa.

4. Catlisis covalente (catlisis nuclefila) En algunos casos, la unin del sustrato y la enzima es mediante un enlace covalente, porque algunas enzimas pueden tener algunos aminocidos que en su cadena lateral tengan un grupo nuclefilo (tienen un exceso de electrones). Es la unin temporal del sustrato a la enzima mediante la formacin de un enlace covalente. La enzima cede un par de electrones para formar el enlace covalente. - Grupos nuclefilos: Grupo hidroxilo, grupo sulfhidrilo, grupo amino y grupo imidazol. - Grupos electrfilos: Protones, iones metlicos, etc.

Ejemplo de nuclefilo: un grupo amino, la lisina. La listirina, con un grupo imidazol. Como tienen un par de electrones desapareados, pueden usarlos para formar un enlace covalente. No todos los enlaces covalentes son iguales, hay desde 501000Kcal/mol, pues este enlace que se forma ser fuerte, pero no demasiado, de manera que se podr romper. Entra el sustrato en el centro activo, donde tengo el grupo nuclefilo que ataca al sustrato, rompiendo el enlace del sustrato, y el resto de sustrato queda unido a la enzima de manera covalente. Luego aparece el segundo producto, aparece el enlace y la molcula queda igual que al principio (mecanismo de ping-pong: 2 sustratos).

5. Catlisis general cida o bsica Catlisis especfica: la velocidad de la reaccin depende de la concentracin de protones o de hidroxilos. Este tipo de catlisis es la que se utiliza para acelerar una velocidad de reaccin, yendo a un pH muy cido, o, al contrario, muy bsico, aumentando la concentracin de OH-s. Las enzimas no pueden llevar a cabo este tipo de catlisis, porque se desnaturalizan y pierden la actividad por el pH extremo, pero, sin embargo, son capaces de llevar a cabo catlisis acida o bsica, porque en el centro activo tenemos un grupo que se va a comportar como una base de Lewis o un cido de Lewis. Esta catlisis se llevar a cabo a un pH cercano de la neutralidad.

Ej.: hidrlisis de un ster. Tenemos 2 sustratos (rotura de enlace con participacin de una molcula de agua).

Ester + agua. Aumento la concentracin, voy a un pH muy bsico. El hidrxilo hace que aumente la velocidad. Catlisis especifica bsica: Al aumentar la concentracin de hidroxilo, se forma un compuesto intermedio y al final tendremos el cido por un lado y el catalizador, tal y como estaba al principio. Ejemplo de catlisis por ion hidrxido: La base de Lewis acepta protones. La enzima lleva a cabo la reaccin a un pH neutro porque tiene un grupo que acta como base, y roba protones. En catlisis por base general, la enzima le cede un protn al sustrato, se modifica por perder el protn, da un producto intermedio, y al final obtendremos el cido por una parte, el alcohol y finalmente la enzima, tal y como estaba al principio.

No hay que confundir estos factores con los que modifican la velocidad de una reaccin enzimtica (concentracin sustrato, enzima, pH, temperatura). Estos factores explican por qu se lleva a cabo esa reaccin, modifican la velocidad de una reaccin que ya se est llevando a cabo.

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Estos factores explican por qu se lleva a cabo la reaccin, modifican la velocidad de una reaccin que ya se est llevando a cabo. Se controla la enzima que lleva a cabo la reaccin. Se hace de 2 maneras: 1. Aumentar la concentracin de enzima. Hay ms enzima, la reaccin es ms rpida. Es un mecanismo que requiere un cierto tiempo. El gen que codifica esa enzima se tiene que activar, transcribir, traducir para sintetizar la protena etc.

Este proceso es muy caro, porque hay que sintetizar la enzima. Mediante la activacin del gen correspondiente (regulacin de la expresin gnica) un gen se activa, transcribe y traduce.

2. La enzima que ya tengo presente en la clula, la puedo activar o inactivar. Como ya est all, puedo hacer que sea ms activa o menos. Es un mecanismo muy rpido, por lo que se regula la velocidad de accin regulando la actividad de la enzima que regula la reaccin.

CMO SE PUEDE REGULAR LA ACTIVIDAD DE UNA ENZIMA

1. Activacin enzimtica. Que se una un ligando a la enzima. 2. Inhibicin enzimtica. 3. Modificar la enzima de manera covalente. Se modifica la cadena lateral de un aminocido de esa enzima, por lo que esa enzima va a ser ms o menos activa. 4. Activacin por zymgenos. 5. Activacin por isoenzmas. 6. Enzimas alostricas.

1. Activacin enzimtica: que se una un ligando a la enzima. 2. Inhibicin enzimtica. Un inhibidor es cualquier molcula que al estar presente en la reaccin, hace que disminuya la velocidad de esa reaccin. Caso: una enzima, un sustrato, un inhibidor.

Hay 2 tipos de inhibicin, dependiendo de cmo se una el inhibidor: 1. Reversible: el inhibidor se une de manera reversible. 2. Irreversible:

1. REVERSIBLE: Aparecen 4 tipos de inhibicin reversible: a. Inhibicin competitiva: el inhibidor y el sustrato compiten por la enzima, de manera que si el inhibidor se une, el sustrato no se podr unir son auto-excluyentes.

La constante de equilibrio KI mide la afinidad de la enzima por el inhibidor. En presencia del inhibidor, la velocidad mxima queda constante. Para que el equilibrio vaya ms a la derecha, tengo que aumentar la concentracin de sustrato y los 2 equilibrios se desplazarn k2 a la derecha y KI hacia abajo. De esta manera, puedo alcanzar la velocidad mxima de la reaccin. Me hace falta

una concentracin ms alta de sustrato para llegar a la velocidad mxima. Depende de la afinidad del sustrato y de la concentracin.

Cuando est presente el inhibidor, la afinidad disminuye. A mayor KM, menor afinidad. Tenemos la enzima libre y la enzima unida al inhibidor. El sustrato puede unirse a la enzima libre, pero no al complejo enzima inhibidor. Por lo tanto, el sustrato no puede unirse, por lo que tendr afinidad 0. La KM aumenta y la afinidad ser 0.

Cunto aumenta KM? De la enzima con su sustrato cuando aparece un inhibidor se habla de APARENTE - Una molcula que modifica la VR

La constante de KM aumenta segn: a. La concentracin del inhibidor. A ms concentracin, ms b. Cuanto menor la afinidad, mayor ser el KI.

Cmo distinguir que es inhibidor competitivo? Por la representacin de Lineweaver-Burk. Es la ecuacin de una recta, para cada concentracin de inhibidor tendremos una recta diferente.

 Conforme aumenta la concentracin del inhibidor, la pendiente de la recta aumenta. En presencia de un inhibidor competitivo, tendra una familia de rectas. Cuanto ms aumento la concentracin de inhibidor, ms aumenta la pendiente de la recta. Conforme aumenta la concentracin del inhibidor, el inverso de Km disminuye. A partir de la constante de KMap=KM + [ ] puedo calcular KI, es una ser la

ecuacin de la recta, donde represento KMap frente a la [I] y pendiente.

b. Inhibicin no competitiva: El sustrato no compite con la enzima, de manera que la unin sustrato enzima es una unin independiente. La unin de sustrato enzima no modifica la unin inhibidor enzima y viceversa porque no se unen el mismo sitio. El sustrato, aparte de unirse a la enzima libre, tambin se une al E.I. con la misma afinidad al igual que el I a la E y ES. La unin de sustrato a la enzima no modifica la unin del inhibidor. La unin de enzima al sustrato no modifica la del inhibidor. La afinidad se queda constante en presencia del inhibidor. La velocidad mxima: va a disminuir, porque por ms que yo aumente la [S] y se una con la E, luego parte de ese complejo E-S se unir con I, formando un complejo ternario que ser inactivo. Constante de KM: no vara. La pendiente de la recta aumenta con la concentracin del inhibidor. Al aumentar la concentracin del inhibidor, la constante de Km se queda constante, mientras que la velocidad mxima disminuye.

a. La afinidad no se modifica ya que son uniones independientes, por lo que la constante no vara. b. La velocidad mxima de la reaccin disminuye. Su disminucin depende de la concentracin del inhibidor y de su afinidad por la enzima.

[ ]

[ ]

c. Inhibicin acompetitiva: El inhibidor se une nicamente al complejo enzima sustrato para darnos un complejo ternario inactivo. Como el inhibidor es capaz de unirse al sustrato, nunca se alcanzar la velocidad mxima. La KM disminuye y la afinidad aumenta aparentemente porque la afinidad de la enzima no cambia. Aparentemente aumenta porque el primer equilibrio, del inhibidor, se desplaza a la derecha, hacia el complejo ternario, como consecuencia del otro equilibrio, por lo que tiene que aumentar la presencia del complejo enzima-sustrato.

Todas las rectas son paralelas porque la pendiente de la recta no viene afectada por la concentracin de inhibidor, porque todas tienen la

misma pendiente. Al aumentar la concentracin de inhibidor, la recta se va para arriba. La constante de KM aparente disminuye porque aparece el inverso.

d. Inhibicin mixta: Se llama mixta porque es una mezcla de inhibicin competitiva y no competitiva. El sustrato se puede unir tanto a la enzima libre como al complejo. El inhibidor igual. (hasta aqu como en inhibicin no competitiva). Aqu, la unin del sustrato a la enzima no es independiente, por lo que la unin del sustrato afecta o modifica la unin del inhibidor, y la unin del inhibidor a la enzima modifica la unin del sustrato, y la unin del sustrato a la enzima modifica la unin del inhibidor. Cuando el inhibidor est presente, el sustrato se une con menor afinidad, por la presencia del sustrato. El factor es 1, porque el inhibidor dificulta la unin al sustrato. De la misma manera, el inhibidor se une al sustrato, KI. Disminuye la actividad por el complejo porque est el inhibidor. La velocidad mxima no se alcanza nunca.

Para distinguir de qu tipo es un inhibidor: Representamos los valores y vemos que si la velocidad mxima aparente disminuye y la constante no se modifica, es no competitiva. Observamos las grficas.

IRREVERSIBLE La velocidad mxima disminuye porque siempre hay una parte de la enzima que siempre va estar secuestrada por el inhibidor. La afinidad es constante, se puede confundir con la reversible no competitiva. Cmo podemos entonces distinguirlos? Mediante una dilisis, formamos un complejo Enzima-Inhibidor y realizamos la dilisis. Con ello observamos si la enzima posteriormente se encuentra activa o inactiva. Si es activa tiene una inhibicin reversible no competitiva.

 Si la enzima sigue siendo inactiva ser un inhibidor irreversible.

Otra manera es cinticamente, se representa la velocidad mxima frente a concentracin total de enzimas. En la reaccin sin inhibidor, tanto la velocidad como la concentracin crecen. Con inhibidor reversible no competitivo, tanto la velocidad como la concentracin pero en menor proporcin. En presencia de inhibidor reversible, al principio no hay reaccin, velocidad cero, porque la enzima est completamente inactivada, hasta que llega un

punto en el que aumento la concentracin de enzimas, aumenta la velocidad, hacindolo de la misma manera que una reaccin sin inhibidor.

Inhibidores suicidas porque la enzima se suicida tambin llamados inhibidores basados en el mecanismo cataltico de la enzima. La enzima lleva a cabo su accin cataltica se inactiva.

1. Modificar la enzima de manera covalente. Se modifica la cadena lateral de un aa, haciendo que la enzima sea ms activa o menos activa. Esta modificacin va a hacer que de una enzima inactiva sea activa o al contrario. Es un proceso reversible. La desmodificacin es la ruptura de un enlace covalente, un enlace fuerte. Pueden ser: Diapositiva 30 Grupos pequeos como fosfatos o metilo. Grupos grandes como acetilo o adenilo. o Ejemplos: Adenilacin, fosforilacin, ADP ribosilacin, etc.

2. Activacin por zimgenos. Este tipo la presentan las enzimas digestivas, se van a sintetizar como precursores inactivos, que son los proenzimas o zimgenos y se convierten en la forma activa por la prdida selectiva de un determinado nmero de aa. *Rojo forma inactiva *Verde forma activa La enteropeptidas es la enzima encargada de cortar los aa de la cadena de la proenzima. Esto ltimo es un proceso irreversible.

El pepsingeno es una enzima que se secreta en el estmago. El pepsingeno es inactivo, cuando se secreta al estmago con un pH bajo, la enzima pierde 42 aa del extremo amino-terminal y se convierte en pepsina que es la forma activa.

Por qu la clula gasta ms energa en construir una protena ms grande si luego se los va a quitar? Son enzima proteolticas, por lo que si se encuentran en forma activa en el pncreas, lugar de sntesis, destruiran el propio pncreas. Son tan peligrosas, que son almacenadas en los ganglios de zimgeno, lugar especfico por si hay una activacin espontnea quedan contenidos dentro de esa vacuola. El pncreas tambin sintetiza un inhibidor pancretico de la tripsina por si hay una activacin prematura en el pncreas, este inhibidor la inactiva. Es una de las uniones no covalentes ms fuertes que se conocen en bioqumica. 3. Regulacin por isoenzimas. Iso-enzima: Diferentes protenas que catalizan la misma reaccin. Iso-enzimas verdaderos son aquellos que: Protenas diferentes que catalizan a misma reaccin qumica. Heteropolmeros de 2 o ms cadenas polipeptdicas unidas no covalentemente. Enzimas codificadas por los diferentes alelos del mismo gen. Por qu un organismo sintetiza dos protenas con una misma funcin gastando menos energa? Permiten una regulacin muy fina del metabolismo. Por ejemplo en el corazn y en el hgado se lleva a cabo la misma reaccin pero llevada a cabo por distintas enzimas. o Ventaja: Una de ellas es la lactato deshidrogenasa LDH. Lleva a cabo la reaccin de piruvato en lactato y viceversa. La LDH tiene diferentes formas pero cada una de ellas es especfica de cada tejido. Diapositiva 32 El metabolismo del corazn y del hgado son completamente diferentes uno aerbico y otro anaerbico. No solamente presente reacciones especficas en un rgano, sino tambin podemos encontrar diferentes reacciones

dependiendo del estado de desarrollo del animal. El metabolismo del feto es completamente diferente al del adulto.

4. Enzimas alostricas. Caractersticas: Protenas oligomricas. Cintica sigmoide: No se puede hablar de la Km porque no siguen esa cinetica, hablamos de la K0,5 Adems del centro activo tiene otros sitios, que son los sitios alostricos. Su actividad se regula por la unin reversible y no covalente por unas molculas que llamamos efectores. o Si el efector aumenta la actividad de la enzima ser un efecto positivo o excitador alosterico, si es al contrario inhibidor alosterico. Estos efectos puede ser cualquier molcula diferente al sustrato, efector heterotrpico o puede ser el sustrato, efector homotrpico, por lo que el sustrato va a tener dos sitios de unin, uno donde se lleva a cabo la catlisis, por lo que el sustrato puede actuar como efector o sustrato. Estas enzimas presentan cooperatividad entre las subunidades porque lo sitios de unin no son independientes. o La enzima Michaelis-Menten no permite que se acumule el sustrato. o La enzima alostrica. A concentraciones bajas, la velocidad de la reaccin es muy muy lenta, nicamente cuando la concentracin de sustrato pasa de un valor, la enzima lo transforma. Regula la concentracin de ese sustrato, por lo que esa concentracin va a ser constante.

Podemos hablar de dos tipos de enzimas dependiendo del efecto del efector sobre la enzima. o Enzimas tipo k: Modifica la K0.5 sin modificar la velocidad mxima. Son las ms abundantes. Un efector positivo aumenta la afinidad por el sustrato. Un efector negativo disminuye la afinidad por el sustrato.

o Enzimas tipo V: El efector modifica la velocidad mxima sin modificar la afinidad

Efector positivo aumenta la velocidad.

CINTICA DE UNA ENZIMA ALOSTRICA.

- Ejemplo: Enzima con 4 sitios de unin. Cintica de una enzima con 4 sitios de unin:

1. Se une la primera molcula de sustrato 2. Al unirse a la subunidad, como los sitios de unin no son independientes, se modifica la afinidad de los sitios vacantes. (la afinidad aumenta o disminuye). 3. Cuando la segunda molcula de sustrato se une, lo hace con una afinidad diferente a la primera, por lo que la 2 molcula se puede unir ms fcilmente que la primera, porque al unirse la primera, la afinidad ha aumentado. EFECTO ACUMULATIVO o puede pasar el contrario, que se una con menor afinidad, si la afinidad de los sitios vacantes ha disminuido tras la primera unin. Cuando se habla de cooperatividad, pasa que: a. o bien se facilita (cooperatividad positiva) b. puede pasar por impedimentos que la afinidad disminuya (cooperatividad negativa). La ecuacin que describe una enzima con 4 subunidades que se van rellenando y cada vez van modificando su afinidad viene definida por la ecuacin:

Hacemos una simplificacin: asumimos que la cooperatividad es infinita (perfecta y todos los sitios estn ocupados). Que sea infinita significa que tras la primera unin la afinidad es tan grande que los otros sitios de unin se rellenan y tendremos solo 2 formas de enzima (enzima con los 4 sitios vacos o con los 4 sitios llenos). (la cooperatividad infinita no existe) Esta es la manera de definir una enzima con 4 sitios de unin, cooperatividad infinita y los sitios de unin todos rellenos. En el caso de una protena con n sitios de unin, tendremos la enzima con todos los sitios ocupados. Matemticamente, nos queda:

Si n=1, la ecuacin de Hill se transforma en la ecuacin de Michaelis-Menten. Si hacemos una transformacin de la ecuacin de Hill: la representacin de Hill:

Despejamos la Ks y tenemos logaritmo, por lo que nos queda:

n=nmero de sitios de unin, la pendiente de la recta. Ks = punto de corte [S]=0.5 A una enzima real le hago la representacin de Hill y me da por ejemplo 3.8. Eso quiere decir que la enzima no tiene cooperatividad perfecta (porque cooperatividad infinita no existe). Pero cuando haga la ecuacin, n ya no es el nmero de unin, sino lo que llamamos el coeficiente de Hill. Si n=4 (cooperatividad perfecta), asumimos que nos quedamos con la enzima libre y luego totalmente ocupada. El coeficiente de Hill no es un nmero entero en verdad, porque igual me puedo quedar con un sitio libre. a) Si nH (coeficiente de Hill) = 1. Es enzima de Michaelis Menten. Enzima no cooperativa. b) nH >1, es una enzima alostrica con cooperatividad positiva. me indica el nmero mnimo de sitios de unin que tiene esa enzima. c) nH <1 ( no menor que 0!) es una enzima con cooperatividad negativa.

El nmero mnimo de sitios de unin es el nmero entero, mayor y ms prximo al coeficiente de Hill. Por ejemplo, nH= 3.8, pondr 4. Cuanto ms se acerque el nH al nmero, ms cooperativa es la enzima.

Otros ejemplos: nH= 5,9. Numero mnimo: 6. Cooperatividad positiva (mayor que 1) y es muy buena, por estar cerca de 6. nH=5.5. numero mnimo: 6. Cooperatividad positiva y no est mal. nH=5.1 nmero mnimo: 6. Cooperatividad positiva pero muy mala. nH=1 para el nivel inferior a ese. Sitios de unin: 6. Cooperatividad 0. Es una enzima de Michaelis Menten. La diferencia es que en esta los sitios de unin son independientes.

En una enzima no alostrica, los sitios de unin no son independientes. El hecho de que se una al sustrato modifica los sitios vacantes. En una enzima alostrica con 6 sitios de unin, el comportamiento de la enzima da igual, que estn juntas o cada una por un lado, porque los sitios de unin son independientes.

! La Hb (hemoglobina) tiene nH 2.8. Sitios: 3. La Hb en su unin con el oxgeno se comporta como una protena que tiene 3 sitios de unin de alta cooperatividad, aunque tiene 4 sitios de unin. (el coeficiente de Hill dice que tiene 3).

Si hacemos la representacin de la concentracin con respecto a la velocidad, nos da una curva sigmoidea. Podemos hacer: 1. Una representacin de Lineweaver-Burk, para que nos d una lnea recta. Pero el problema es que estas enzimas alostricas se alejan de la linealidad. 2. Otra forma de calcularlo es sacndole el ndice de cooperatividad: calculo la concentracin de sustrato necesaria para alcanzar el 90% de la velocidad mxima:

Hay 2 modelos: 1. MODELO SECUENCIAL: propuesto por Koshland, Nemethy y Filmer.

a. Las protenas alostricas son oligomricas b. Hay dos estados conformacionales de la protena (A y B), y solamente una de estas formas es capaz de unir significativamente el sustrato (ligando). c. Cuando el sustrato se une a una de las subunidades, cambia la conformacin de esa subunidad. d. Como consecuencia, se modifica la afinidad de los sitios vacantes y al modificarse, es como aparece la sigmoidea de Koshland.

2. MODELO CONCERTADO O SIMTRICO: propuesto por Monod, Changeux y Whyman. a. Las protenas alostricas son protenas oligomricas, constituidas por subunidades idnticas organizadas simtricamente. b. Cada subunidad idntica posee un solo centro de unin para cada tipo de ligando (una para sustrato, uno para activador, uno para inhibidor). c. Existe un equilibrio entre (al menos) dos estados de la protena, denominados T y R. estas 2 formas existen independientemente de que se haya unido el sustrato o no. (en el otro modelo no pasa lo mismo). Estas dos formas se diferencian en su afinidad por los ligandos (la forma R tendra afinidad por unos ligandos y la T por otros). Tambin se diferencian en la actividad enzimtica (R activo, T inactivo). d. Hay un ligamiento preferencial de cada tipo de ligando a cada uno de los dos estados (se cree que los activadores se unen preferentemente a la forma R y los inhibidores se unen preferentemente a la forma T). e. Se conserva la simetra durante cualquier cambio conformacional. Todos los protmeros cambian de conformacin simultneamente (estn en la misma conformacin, o T o R, por lo que no hay hbridos, como en el otro modelo). f. La afinidad de cada ligando es independiente al nmero de sitios ocupados. La sigmoicidad de la curva es debida al desplazamiento del equilibrio entre las dos formas de la enzima debido al ligamiento preferencial de los ligandos.

SITUACIN REAL Los dos modelos son verdaderos pero ninguno es capaz de explicar cmo funciona completamente una enzima alostrica. Koshland es capaz de explicar la cooperatividad positiva y la negativa, la activacin alostrica pero no la inhibicin. El modelo Monod explica la activacin e inhibicin alostrica, tambin la cooperatividad positiva, pero no la negativa.