RECOPILADO POR: EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS

NMX-F-353/1-S-1980. CACAHUATE, OTRAS NUECES, GRANOS Y SUS PRODUCTOS. DETERMINACIN DE AFLATOXINAS. NORMAS MEXICANAS. DIRECCIN GENERAL DE NORMAS. Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretara del Patrimonio y Fomento Industrial.- Direccin General de Normas.- Depto. de Normalizacin Nacional.- Exp. No. 231.1. AVISO AL PBLICO Con fundamento en los Artculos 33, fraccin XX y Quinto Transitorio de la Ley Orgnica de la Administracin Pblica Federal, as como en los Artculos 1o., 2o., 4o., 5o., 6o., 23, 26, 27, 29, 39, 40, 42 y 43 de la Ley General de Normas y de Pesas y Medidas y en el Artculo 13, fracciones I, II, VII, X, XI, XVIII, XXI, del Reglamento Interior de la Secretara de Patrimonio y Fomento Industrial y en el Artculo 20 fraccin II del Reglamento Interior de la Secretara de Salubridad y Asistencia, esta Secretara ha aprobado la siguiente Norma Mexicana: Parte 1 "PREPARACIN DE LA MUESTRA Y OBTENCIN DEL EXTRACTO DE AFLATOXINAS EN CACAHUATE, OTRAS NUECES, GRANOS Y SUS PRODUCTOS". 1. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN La presente Norma Mexicana, establece el mtodo de preparacin de la muestra y de la obtencin del extracto de aflatoxinas en cacahuate y sus productos; para ser usado en la determinacin de aflatoxinas por el mtodo de cromatografa en capa fina. Es tambin aplicable a otras nueces, granos y sus productos. 2. REFERENCIAS Esta Norma se complementa con las siguientes Normas Mexicanas vigentes: NMX-F-163/2-S. Cromatografa en capa fina - Mtodo de preparacin de placas. (Mtodo de preparacin de placas para cromatografa en capa fina). NMX-F-163/3-S. Cromatografa preliminar y cuantitativa en capa fina. NMX-F-163/4-S. Patrones de aflatoxinas - Requisitos de pureza". (Requisitos de pureza de los patrones de aflatoxinas). 3. REACTIVOS Y MATERIALES 3.1 Reactivos Los reactivos que a continuacin se mencionan, deben ser grado analtico, a menos que se indique otra cosa. Cuando se mencione agua, debe entenderse agua destilada. 3.1.1 Tierra de infusorios o diatomeas (opcional).

3.1.2 Cloroformo (CHCl3.). 3.1.3 Sulfato de sodio (Na2SO4)anhidro. Gel de slice 60 para cromatografa en columna, 0.063-0.2 mm para muestras de 50 g: Activarlo secndolo duramente una hora a 378 K (105C); agregarle agua en proporcin de 1 cm por 100 g, sellar y agitar hasta mezclar completamente. Almacenar 15 horas o poco ms en un recipiente a prueba de aire. ter anhdro. Mezcla MeOH o CHCl3. (3:97). n-hexano.

Materiales 3.2.1 Matraces Erlenmeyer de 250 a 500 cm2 con tapn de vidrio esmerilado. 3.2.2 Papel de filtracin rpida. 3.2.3 Embudo Buchner (opcional). 3.2.4 Frasco vial de 10 cm2 provisto de tapn hueco de polietileno y tapa. 3.2.5 Lana de vidrio. 3.2.6 Columna para cromatografa de 2.2 cm de dimetro por 30.0 cm de longitud, con llave de tefln y reservorio de 250 cm2 (vase figura 1). 3.2.7 Material comn de laboratorio de qumica, no especificado de otra manera. 4. APARATOS E INSTRUMENTOS 4.1 Molino de martillo o cortador giratorio (tipo cutter) o molino de disco (buril) (o equivalente). 4.2 Balanza con 0.1 g de sensibilidad. 4.3 Agitador con accin de mueca 4.4 Equipo para filtracin al vaco (opcional). 4.5 Bao de vapor. 4.6 Licuadora 5. PROCEDIMIENTO Precaucin. Pulverizar las muestras secas puede ocasionar que se transmita polvo por el aire. Aunque no haya toxinas presentes, existe el peligro potencial de inhalar esporas del hongo o de reacciones alrgicas. Usar mscara o un recolector de polvo. 5.1. Preparacin de la muestra del lote. 5.1.1 La contaminacin de aflatoxinas en productos fragmentados como granos o nueces, es

posible que ocurra en zonas de alta concentracin, que posiblemente no estn distribuidas al azar. Efectuar el muestreo y la preparacin de las muestras teniendo en cuenta este factor. Debido a la posibilidad de zonas de contaminacin, incluir muestra totales de laboratorio en la preparacin de las muestras. Moler la mxima cantidad que sea prctica (1 kg mnimo) y hacer un mezclado completo para lograr una distribucin efectiva de las posibles porciones contaminadas antes de tomar la muestra de anlisis. Un cacahuate contaminado puede contener suficientes aflatoxinas para dar por resultado un nivel significativo, cuando se mezcle con 10,000 cacahuates (aproximadamente 5 kg). 5.1.2 Crema de cacahuate y harina de cacahuate: No necesitan preparacin antes de la extraccin si no contienen partculas grandes. 5.1.3 Harina de cacahuate con partculas grandes: Reducir sus partculas, molindola hasta obtener un polvo fino en un molino de martillo, un cortador giratorio o en un molino de disco (buril), o equipo equivalente. Se procede igual en el caso de otras nueces, granos y sus productos. 5.2 Muestra para anlisis: Sacarla con las mismas precauciones que se aplican a la muestra del lote. Siempre que sea posible, dividir agitando o por medio de cualquier procedimiento similar para dividir al azar, hasta que la subdivisin est cerca de la cantidad deseada. Cuando la subdivisin no sea prctica, formar nmeros de pequeas porciones tomadas al azar. Con los lquidos, suspender cualquier material particulado antes de sacar la muestra para anlisis. 5.3 Extraccin 5.3.1 En el caso de oleaginosas y sus productos: colocar 50 g en un vaso de licuadora, adicionarle 25 cm2 de agua, 25 g de tierra de diatomeas (opcional), 250 cm2 de cloroformo (CHCl3) y homogenizar entre 3 y 5 minutos a alta velocidad. En el caso que no se requiera terminar de homogenizar, pasar al inciso 5.3.2. 5.3.2 Colocar 50 g de la muestra preparada en un matraz Erlenmeyer con tapn de vidrio esmerilado, de 500 cm3. Agregarle 25 cm3 de agua, 25 g de tierra de diatomeas (opcional), 250 cm2 de cloroformo (CHCl3.) y asegurar el tapn con cinta adhesiva. 5.3.3 Agitar 30 minutos en un agitado de accin de mueca y filtrar a travs de papel estirado o si es lenta la filtracin, pasar a un buchner precubierto con una capa de 5 mm de la tierra de diatomeas y utilizar un vaco ligero. (Filtrar con vaco nicamente para filtraciones lentas, puesto que la evaporacin del cloroformo es rpida, ocasionndose la concentracin del extracto). 5.3.4 Recoger los primeros 50 cm3 de cloroformo filtrados y proceder como sigue :

5.4 Purificacin del extracto de aflatoxinas, por cromatografa en columna: Preparar la columna y correr el cromatograma con 50 cm3 del extracto de CHCl3 como se indica a continuacin, utilizando un promedio de flujo de 10 cm3 por minuto : 5.4.1 En el fondo de una columna para cromatografa, colocar una capa de lana de vidrio de aproximadamente 1 cm de espesor, cuidando que no quede muy compactada. 5.4.2 Agregar aproximadamente 5 g de Na2SO4 anhidro, para dar una base al gel de slice. 5.4.3 Agregar CH3Cl hasta la mitad de la columna. 5.4.4 Aadir 10 g de gel de slice para cromatografa en columna preparado como se indic en reactivos (vase 3.1). 5.4.5 Lavar los lados de la columna con 20 cm2 de CHCl3 y agitar para dispersar el gel de slice. 5.4.6 Cuando la proporcin de asentamiento sea ms lenta, drenar algo de CH3Cl para ayudar al asentamiento. Dejar de 5 a 7 cm de CHCl3 por encima del gel de slice. 5.4.7 Agregar lentamente 15 g de Na2SO4 anhidro. 5.4.8 Drenar el CHCl3 hasta el nivel del Na2SO4 anhidro. 5.4.9 A la columna as preparada (vase fig. 1), agregar los 50 cm3 del extracto de CHCl3 de la muestra, obtenidos segn 5.3.4. 5.4.10 Elur a velocidad mxima con 150 cm3 de n-hexano, seguidos por 150 cm3 de ter anhidro y desecharlos. 5.4.11 Elur las aflatoxinas con 150 cm3 de mezcla MeOH- CHCl3 (3:97), recogiendo esta fraccin desde el tiempo de adicin hasta que pare el flujo. 5.4.12 Evaporar casi hasta sequedad en un bao de vapor y opcionalmente con ayuda de una suave corriente de nitrgeno. 5.4.13 Transferir el residuo cuantitativamente a un frasco vial con ayuda de CHCl3. 5.4.14 Evaporar a sequedad, opcionalmente bajo una suave corriente de nitrgeno. 5.4.15 Sellar el frasco vial con un tapn hueco de polietileno y con su tapa, y protegerlo de la luz. 5.4.16 Guardar el extracto de aflatoxinas, para cromatografa en capa fina, en un congelador, continundose en el captulo 6 de la Norma NMX-F-163/3-S (vase 2). 5.4.17 Esta parte 1 "Preparacin de la muestra y obtencin del extracto de aflatoxinas en cacahuate, otras nueces, granos y sus productos" se complementa con las partes 2, 3 y 4 de la Norma NMX-F-163-S "Granos de cacao - Determinacin de aflatoxinas", aplicndose stas de manera exactamente igual a los extractos de aflatoxinas de muestras de cacahuate, continundose

en el captulo 6 de la Parte 3. 6. BIBLIOGRAFA Association of Official Analytical Chemists.- Official Methods Of Analisis (A.O.A.C) Twelfth Edition, William Horwits Editor, Washigton, D. C. 1975. Chapter 26, Natural Poisons. Alfatoxins, Method I (CB) parts 26.016, 26.003, 26.017, 16.018 (a). Mxico, D. F., a 27 de junio de 1980.- La Directora General de Laboratorios de Salud Pblica de la Subsecretara de Salubridad, Ma. de Lourdes Costarrica Gonzlez.- Rbrica.- El Director General, Romn Serra Castaos.- Rbrica.