TEMA 3

INTRODUCCIN A LAS TCNICAS INSTRUMENTALES

INTRODUCCIN Los mtodos analticos suelen ser clasificados en: a) Clsicos

b) Instrumentales Los mtodos clsicos cuantitativos se basan en la medida de pesos o volmenes y dan lugar a las conocidas gravimetras y volumetras. Son de alta precisin pero con frecuencia de sensibilidad limitada. Los mtodos instrumentales son ms modernos y utilizan instrumentos ms o menos complejos para evaluar una propiedad fsica o fsico-qumica del sistema analizado. Entre las ventajas de las tcnicas instrumentales podemos considerar LA CALIBRACIN EN QUMICA ANALTICA La Qumica Analtica instrumental requiere del uso de equipos y aparatos que deben ser calibrados para poder relacionar la seal instrumental con la presencia y en su caso la concentracin del analito en la muestra. La calibracin se define como una serie de operaciones que establece bajo condiciones definidas la relacin entre los valores obtenidos con un instrumento o proceso de medida o de materiales de referencia y sus correspondientes valores obtenidos con patrones. Para una correcta calibracin es necesario el uso de materiales o substancias de los cuales al menos una propiedad tiene un valor lo suficientemente homogneo y bien conocido como para que pueda ser utilizado en la comprobacin del correcto funcionamiento de un aparato, de un mtodo de anlisis o para asignar valores a un material dado estos materiales o substancias suelen ser materiales de referencia o patrones y su valor es el valor de referencia. La calibracin con fines cuantitativos, consiste en establecer una funcin que permita calcular concentraciones o cantidades de analito en funcin de una seal instrumental. Adicionalmente la calibracin con fines cualitativos consiste en establecer una funcin que permita relacionar la presencia de un analito en una muestra con una seal instrumental (por ejemplo la identificacin de analitos segn su tiempo de retencin en cromatografa).

4.1 Tipos de calibracin Cuantitativa La calibracin con fines cuantitativos se divide entre directa e indirecta y ambos pueden afectar a equipos o a procesos Calibracin directa Calibracin de equipos Calibracin de procesos Calibracin indirecta Calibracin de equipos

Calibracin de procesos En la calibracin directa el valor de referencia se expresa en la misma cantidad que la medida instrumental. Por ejemplo el calibrado de una balanza con una pesa, o la de un espectrofotmetro con filtros de holmio.

4.1.1. Calibracin indirecta Este es el tipo de calibracin ms usado en QA. En este tipo de calibracin el valor de referencia se expresa en diferente cantidad que la cantidad medida. Requiere operaciones que determinen la relacin funcional entre valores medidos y cantidades de analito. Consiste en la traslacin de las unidades que proporciona el instrumento para una seal determinada a las unidades de cantidad de analito que deben ser determinadas. a) Calibracin indirecta de equipos Un ejemplo de calibracin indirecta de un equipo es la calibracin de un pH-metro con disoluciones tampn o la calibracin de un electrodo selectivo de fluoruro para la determinacin potenciomtrica de este anion en aguas. Los materiales de referencia o patrones son medidos directamente sin sufrir modificaciones. La mayor parte de los anlisis instrumentales requieren al menos una calibracin de este tipo. En este tipo de calibrado se establece la cantidad o concentracin de especies qumicas en funcin de la intensidad de la seal instrumental. Dependiendo del tipo de anlisis es esencial elegir el tipo de material de referencia. Este puede ser un MR puro cuya composicin es exactamente conocida (normalmente llamada sustancia patrn o estndar), o puede ser un material de referencia cuya composicin sea igual que la muestra a analizar (material de referencia (certificado o no)). Cuando se emplea un patrn puro pueden ocurrir errores sistemticos debidos al efecto que los dems constituyentes de la muestra pueden ocasionar en el instrumento de medida y que no tienen lugar cuando se mide el patrn. El uso de materiales de referencia con la misma composicin que las muestras evita este efecto. b) Calibracin de procesos Este tipo de calibracin no solo afecta a la etapa de medida sino tambin a otras etapas del anlisis como tratamiento de las muestras. En este tipo de calibrado el material de referencia sufre modificaciones, ya que se le realiza el mismo proceso que a las muestras. Es decir la medida se realiza a patrones o materiales de referencia modificados. Se usa cuando las etapas previas a la medida de la muestra pueden ocasionar errores sistemticos, por ejemplo en procesos de extraccin en fase slida conectados on-line con el equipo de medida. SPME-GC o desorcin trmica. 1.2 Grficas de calibracin en anlisis instrumental

Tres de las tcnicas o grficas de calibracin ms comnmente usadas son la curva o grfica analtica, el mtodo de adicin de estndar y el mtodo del estndar interno. Son diferentes formas de relacionar las seales instrumentales con la cantidad de analito. 4.2.1. Curva o grfica analtica Se preparan una serie de disoluciones patrn de forma que cubran un intervalo de concentraciones adecuado y que tengan una composicin en matriz ms o menos parecida a la de la muestra segn el

problema analtico. Tambin se prepara un blanco, este tiene igual composicin que los dems estndares pero sin el analito de inters. Su seal debera ser cero pero a veces por efecto del ruido de fondo no es as. Se representan las respuestas netas (las de los estndares menos la del fondo) en una grfica frente a las concentraciones de los estndares que las han proporcionado. Generalmente hay una relacin lineal entre la seal analtica (y) y la concentracin (x) y por ello los datos se ajustan a una recta por el mtodo de mnimos cuadrados segn y=ax+b, siendo y la seal instrumental, a la pendiente, b la ordenada en el origen y x las concentraciones de los estndares. Una vez obtenida la grfica, se interpola la seal de la muestra y se obtiene la concentracin de analito en la muestra. (Figura 3.1)

4.2.2 Mtodo de adicin de estndar Se usa cuando es imposible suprimir interferencias fsicas o qumicas en la matriz de la muestra. Se toman alcuotas iguales de muestra, se le aade a cada una por separado cantidades diferentes de patrn, excepto a una de ellas y se realiza la medida. La Figura 3.2 muestra la grfica resultante. La escala de concentracin (x) se define con las concentraciones de analito agregadas a las alcuotas de muestra, por tanto, la concentracin desconocida est dada por el punto en el cual la lnea extrapolada corta al efe de concentracin. La recta de regresin se establece mediante mnimos cuadrados. Aunque este mtodo evita efectos de interferencia causados por la matriz, tiene la desventaja que es un mtodo por extrapolacin, menos preciso que los de interpolacin, es difcil de automatizar y requiere mayores volmenes de muestra. Ejemplos tpicos son su uso en la determinacin de la concentracin de pesticidas en formulados comerciales y en mtodos electroqumicos de anlisis. 4.2.3. Mtodo del estndar interno En este mtodo una cantidad fija de una sustancia pura (estndar interno) se aade tanto a las soluciones muestra como a las soluciones de patrones. El estndar interno debe ser una sustancia de naturaleza similar a la del analito, con una seal fcilmente medible y que no interfiera con la respuesta del analito. Se determinan luego las respuestas del analito y del estndar interno, y se calcula el cociente de las dos respuestas. De esta manera si se vara algn parmetro que afecte a las respuestas medidas, dichas respuestas (del analito y estndar interno) se deben afectar por igual. Por tanto, el cociente de respuestas (del analito y del estndar interno) depende solamente de la concentracin de analito. Una representacin de la relacin o cociente de respuestas analito/estndar interno, como funcin de la concentracin del analito, da una grfica de calibracin (por mnimos cuadrados). Este mtodo se usa mucho en cromatografa de gases y absorcin atmica.

2.

LIMITES DE DETECCION Y CUANTIFICACION

El lmite de deteccin es la menor concentracin de analito en una muestra determinada que puede ser positivamente identificada con un mtodo analtico determinado.

Lmite de cuantificacin es la menor concentracin de analito en una muestra determinada que puede proporcionar una medida cuantitativa positiva, utilizando un mtodo analtico determinado. Otro concepto relacionado con los lmites es: Sensibilidad: Se refiere a la pendiente de la recta de calibrado resultante al representar concentracin de analito frente a seal. Un mtodo ser ms sensible cuanto mas pronunciada es la recta de calibrado, ya que esto significa que una pequea variacin en la concentracin de analito proporciona una elevada variacin en la respuesta instrumental.

5.1 Clculo de los lmites de deteccin y determinacin. Lmite de deteccin: La concentracin de analito que proporciona una seal instrumental significativamente diferente de la seal de una muestra en blanco. Es aquella concentracin de analito cuya seal es igual a la del blanco ms tres veces su desviacin estndar.

LOD = yB + 3SB
Donde yB es la seal del blanco y SB su desviacin estndar Lmite de cuantificacin: es la concentracin de analito que da una seal igual a la del blanco ms diez veces su desviacin estndar.

LOQ = yB + 10 SB
No obstante existen otras formas de considerar los lmites inferiores: Una de ellas tiene en cuenta la sensibilidad del mtodo analtico dividiendo los anteriores entre la pendiente de la recta de calibrado obtenida en un rango de concentraciones bajo. La otra forma considera la dispersin de las medidas en los niveles de concentracin ms bajos, estableciendo el lmite de cuantificacin en aquella medida que proporciona una precisin aceptable, de acuerdo con el objetivo del mtodo.

2.2 Seal-Ruido La seal analtica puede dividirse en dos partes, una causada por el analito y la otra por los dems componentes de la matriz de la muestra y por la instrumentacin utilizada en la medicin. Esta ltima parte de la seal se conoce como ruido. En la mayora de las medidas el valor promedio de la seal correspondiente al ruido se mantiene constante y es independiente de la magnitud de la seal total. Por esta razn para describir la calidad de un mtodo analtico o el funcionamiento de un instrumento, la relacin seal/ruido es un parmetro de calidad mucho mejor que el ruido solo. En la Figura se muestra el efecto del ruido sobre la seal. La diferencia entre ambas grficas corresponde al ruido asociado a este experimento. La capacidad de un sistema para discriminar entre seales y ruido se expresa, usualmente como la relacin seal ruido S/N.

S amplitud media de la seal = N amplitud media de ruido

As conforme las concentraciones disminuyen hacia el nivel traza, el problema de distinguir las seales respecto al ruido se hace cada vez ms difcil, lo que ocasiona una disminucin en la exactitud y en la

precisin de las mediciones a la vez que se aumenta el lmite inferior de la cantidad de analito que se puede detectar. En general la magnitud del ruido se define como la desviacin estndar (s) del valor de la seal medida, mientras que la seal viene dada por la media de la medida. Por tanto

S x 1 = = N s DER
Como norma general la deteccin cierta de una seal mediante un sistema visual resulta imposible cuando S/N < 2 3. Un aumento en la relacin S/N generalmente indica una reduccin del ruido y, por tanto, una medicin ms deseable. Los dos mtodos principales para reduccin del ruido son mediante: El uso de dispositivos electrnicos, como filtros para procesar seales mientras pasan a travs del instrumento o detectores sincrnicos que atenan el ruido sin afectar de manera significativa a la seal analtica. Posterior tratamiento matemtico de los datos con software adecuados que permitan extraer las seales de entornos ruidosos.