Universidad Nacional del Nordeste Facultad de Medicina Ctedra de Bioqumica REGULACION DE LA EXPRESION GENETICA

Brandan, Nora Profesora Titular. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE. Juaristi, Julin Profesor Titular. Ctedra de Bioqumica. Carrera de Enfermera. Facultad de Medicina. UNNE. Aguirre, Victoria Profesora Adjunta. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE. Romero Bentez, Margarita Jefa de Trabajos Prcticos. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE.

INTRODUCCION NIVELES DE REGULACION DE LA EXPRESION PROTEICA EN EUCARIONTES 1) CONFORMACION Y ESTRUCTURA DEL ADN Compactacin diferencial de la cromatina Modificaciones covalentes del ADN 2) CONTROL TRANSCRIPCIONAL DE LA EXPRESION GENETICA Regulacin en CIS Regulacin en TRANS PROTEINAS DE UNION AL ADN: CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES 1- MOTIVO HELICEGIRO-HELICE (HLH: Helix- loop-helix ) 2-DEDOS DE ZINC 3- CIERRE DE LEUCINA (Leucine zipper) Otros modos de control transcripcional de la expresin gentica 3)- CONTROL POST-TRANSCRIPCIONAL DE LA EXPRESION GENETICA SITIOS DE POLIADENILACION ALTERNATIVA: SPLICING ALTERNATIVO: EDICIN DEL ARN (Mutagnesis dirigida del ARN): TRANSPORTE DEL ARN AL CITOPLASMA: 4)- CONTROL TRADUCCIONAL DE LA EXPRESION GENETICA 5)- CONTROL POST- TRADUCCIONAL DE LA EXPRESION GENETICA Protelisis limitada: poliprotenas Control sobre la estabilidad de las protenas BIBLIOGRAFIA 2002

INTRODUCCION
Los organismos multicelulares complejos estn compuestos de diferentes tejidos cuyas caractersticas individuales dependen de las protenas especficas expresadas por sus tipos celulares. La diferenciacin, el desarrollo y la funcionalidad de los tejidos especficos dependen del conjunto de protenas selectivamente expresadas por cada clula. Estas protenas expresadas en forma diferencial pueden funcionar como componentes estructurales de las clulas, enzimas reguladoras del metabolismo, factores de transcripcin, receptores celulares, componentes intracelulares de sealizacin, etc. La expresin incorrecta de tales protenas, su expresin en lugares equivocados, a destiempo, o la produccin en cantidades anormales de protenas especficas o de protenas de funcin anmala subyace a toda patologa celular de base gentica. Por consiguiente el conocimiento de los mecanismos de regulacin de la expresin proteica en eucariontes contribuir al conocimiento de las bases moleculares de diversas patologas.

NIVELES DE REGULACION EUCARIONTES

DE

LA

EXPRESION

PROTEICA

EN

En las clulas eucariotas, la capacidad de expresar protenas biolgicamente activas resulta de diferentes niveles regulatorios.

1) CONFORMACION Y ESTRUCTURA DEL ADN

Compactacin diferencial de la cromatina

La compactacin de la cromatina afecta la capacidad de unin de las enzimas y factores transcripcionales de genes especficos. La cromatina se puede dividir en dos clases segn su patrn de tincin. La eucromatina se tie suavemente y se corresponde con regiones del genoma que estn disponibles para la transcripcin. Por otro lado, la heterocromatina, se tie intensamente y se corresponde a regiones del genoma que estn densamente compactadas e inaccesibles para el aparato transcripcional. Se pueden distinguir dos clases de heterocromatina: la constitutiva y la facultativa. La constitutiva hace referencia a cromosomas o parte de ellos que son heterocromticos en todas las clulas de una misma especie, mientras que la facultativa implica zonas de cromosomas que se pueden descompactar tornndose en eucromatina en algunas clulas de un mismo organismo. Como la heterocromatina no puede ser transcripta, la expresin gnica en los eucariontes se puede reprimir por condensacin de eucromatina en heterocromatina. Todava no se conocen todos los factores que modulan la descompactacin de la cromatina. Ciertamente hay protenas que reconocen secuencias especficas del DNA y una vez unidas, transmiten la seal de descondensacin de cerca de 10000 pares de bases correspondientes a un bucle de la cromatina. Las acetilaciones y desacetilaciones de histonas son modificaciones covalentes frecuentes en estos fenmenos de descompactacin cromatnica. Un ejemplo tpico de este tipo de regulacin ocurre en la acetilacin de coactivadores involucrados en las transcripciones genticas moduladas por las hormonas tiroideas. Las acetilaciones se producen en los residuos de lisina de los extremos aminoterminales de las histonas, reduciendo su carga positiva y por lo tanto su afinidad de unin al ADN cargado negativamente. La desacetilacin de las histonas, mediada por desacetilasas provoca el efecto contrario (recompactacin). Secuencias caractersticas de organizacin del DNA como los palndromes as como la disposicin espacial del DNA Z han sido relacionados con sealizaciones para el sitio de inicio de la transcripcin.

Modificaciones covalentes del ADN

Metilaciones de residuos de desoxi citidina: La metilacin de los restos de citosina en el ADN, especialmente en los sitios promotores, dificultan la transcripcin. Por ejemplo: los genes de globina estn ms metilados en clulas no productoras de hemoglobina que en los eritroblastos. Las metilaciones se producen en secuencias especficamente reconocidas ( 5--- m CpG ---3) que generalmente se agrupan en islotes ricos en GC, con frecuencia dentro o cerca de regiones reguladoras de la transcripcin. La metilacin puede inhibir la transcripcin de los genes al interferir en la capacidad de los factores de transcripcin para reconocer los sitios de unin al ADN o alterando las conformaciones del ADN dificultando la polimerizacin de la ARN polimerasa. Uno de los ejemplos ms espectaculares de la metilacin ocurre durante el fenmeno de impresin genmica. As, el conjunto de cromosomas heredados del progenitor masculino no es funcionalmente equivalente al conjunto de cromosomas heredados de la madre.Existen por lo menos 100 genes sometidos a esta expresin diferencial. Las versiones activas e inactivas de los genes difieren en sus patrones de metilacin. Las diferencias en los alelos se originan durante la gametognesis. Modificacin del nmero y de la estructura de los genes:

La eliminacin total o parcial de genes impide la formacin de ARNm y de la protena correspondiente, los glbulos rojos son un caso extremo donde una vez sintetizadas las protenas estructurales y funcionales, la eliminacin del ncleo en la etapa de eritroblasto ortocromtico produce una clula incapaz de sintetizar toda otra protena de novo presentando un 90% del contenido proteico total como hemoglobina. Otro caso es la recombinacin somtica de la lnea germinal de los linfocitos B. En este tipo particular de regulacin de la expresin de gentica, los genes codificantes de las cadenas pesadas y livianas de la inmunoglobulinas sufren un rearreglo independiente de la presencia del antgeno. All, se produce el corte y empalme al azar de diversos fragmentos gnicos de manera irreversible que dan origen al variado repertorio de las inmunoglobulinas. Por otra parte, la presencia de genes en tandem, implica la presencia de de mltiples copias de un gen que aumentan la capacidad de produccin de la protena requerida en grandes cantidades. Es el caso de los genes codificantes de histonas y ARN 5S. La regulacin gnica se puede regular tambin en funcin de la disponibilidad del DNA incrementando el nmero de copias de un gen accesible. Este mecanismo de regulacin se conoce como amplificacin gnica. Una forma de amplificacin es la repeticin sucesiva de la replicacin de una secuencia especfica del ADN. Este fenmeno se observ en la amplificacin de ciertos genes cuyos productos son necesarios para el desarrollo de algunos insectos y anfibios. Como ejemplo puede citarse el ARN ribosmico en la rana Xenopus laevis, donde los gnes que codifican los ARN r 5.8 S, 18S y 28 S se amplifican de 500 a 2 millones de copias.

2) CONTROL TRANSCRIPCIONAL DE LA EXPRESION GENETICA

Constituye uno de los modos ms importantes de regulacin de la expresin proteica en eucariontes. En esta categora estn includos los promotores, la presencia de secuencias regulatorias potenciadoras (enhancers), y la interaccin entre mltiples protenas activadoras o inhibidoras que actan mediante su unin a secuencias especficas de reconocimiento al ADN. Las regulaciones pueden ser de tipo CIS o TRANS. Cuando el elemento regulador transcripcional es parte de la cadena polinucleotdica donde se localiza el gen a regular, se denomina regulador CIS. Evidentemente se tratan de secuencias especiales del ADN (promotores y enhancers). Cuando los elementos regulatorios son de naturaleza y origen diferente a la secuencia gentica a controlar, la regulacin es de tipo TRANS (aqu se incluyen a los factores de transcripcin generales, histoespecficos y todas las protenas regulatorias con capacidad de unin al ADN).

Regulacin en CIS
Promotores El paso inicial de la sntesis de los tres tipos de ARN es la ubicacin de las ARN polimerasas junto a una secuencia del ADN a la altura del denominado promotor del gen a ser transcripto. La ARN polimerasa I sintetiza los ARN r (excepto el 5S), la de tipo II sintetiza los ARN m y algunos ARN sn involucrados en el proceso de corte y empalme del transcripto primario (splicing), mientras que la ARN polimerasa III sintetiza el ARN r 5S y los ARN t.El ms complejo de los procesos regulatorios es el que comprende a los genes de clase II o codificantes de ARN m. Casi todos los genes codificantes de protenas contienen promotores basales de dos tipos y un nmero variable de dominios regulatorios transcripcionales.

El promotor es una secuencia que define el sitio de iniciacin de la transcripcin del ARN. Los promotores ms frecuentes son los de tipo CCAAT y TATA , denominados motivos o cajas por su alta conservacin evolutiva. La caja TATA est localizada 20-30 pb corriente arriba del sitio de inicio de la transcripcin . Numerosas protenas identificadas como TF IIA,B,C, etc. (factores regulatorios de la ARN polimerasa II) interaccionan con la caja TATA. El promotor CCAAT reside 50-130 pb corriente arriba del sitio de inicio transcripcional. La protena denominada C/EBP (CCAAT-box /enhancer/binding/protein) se une a esta secuencia. Otra secuencia regulatoria incluye a la caja GC. Si bien los promotores estn preferentemente localizados corriente arriba (5) del inicio transcripcional, algunos pueden ubicarse corriente abajo (3) o bien ser de tipo intragnicos. El nmero y tipo de eleemntos regulatorios varan segn cada ARNm. La naturaleza de los promotores y la combinatoria de las protenas interactuantes con ellos es uno de los principales mecanismos de regulacin en los genes de tipo inducibles. Secuencias regulatorias potenciadoras (enhancers):

Existen adems secuencias del ADN que pueden localizarse corriente arriba o abajo del gen a regular situadas a miles de pares de bases con respecto al promotor. Las zonas de ADN sobre las cuales se ejercen acciones activadoras son llamadas potenciadoras o aumentadoras (enhancers en ingls). En trminos generales una secuencia regulatoria potenciadora o enhancer regula la frecuencia con la que se realiza el proceso transcripcional. Para un mismo gen pueden existir varias secuencias regulatorias. Tambin existen reguladores de accin opuesta (silenciadores o amortiguadores de la transcripcin). La explicacin ms simple del fenmeno regulatorio a distancia es propone que la molcula de ADN se dobla en asa para permitir la aproximacin de estas zonas alejadas de la doble hlice y ubica a la protena activadora unida al enhancer".

Regulacin en TRANS
Factores transcripcionales: A diferencia de las ARN polimerasas bacterianas, las eucariticas no hacen contacto directo con el ADN promotor sino que son reclutadas hacia este por complejos de protenas especficas para cada tipo de ARN polimerasas. Estos complejos se han denominado SL1 para la ARN polimerasa I, TFIID para la ARN pol, II y TF IIIB para la RNA pol III respectivamente. No hay duda alguna que los factores transcripcionales de los genes codificantes de protenas son de crucial importancia en el control del crecimiento y la diferenciacin

de las clulas. Muchos de ellos estn codificados por protooncogenes, que al activarse pueden alterar la tasa transcripcional o la calidad de las protenas fisiolgicas desencadenando un proceso oncolgico. Se pueden distinguir los denominados factores de transcripcin generales (componentes del complejo de transcripcin basal) y los factores de transcripcin histoespecficos (que se unen a regiones especficas promotoras/reguladoras de los genes y regulan el grado de transcripcin desde el complejo de transcripcin basal). Ambos tipos de protena se unen a secuencias en el surco mayor del ADN. Para montar la transcripcin basal en un promotor dependiente de la ARN polimerasa II, se reclutan secuencialmente factores de transcripcin generales. El primer factor de transcripcin general que se une al promotor es el TFIID, que entra en contacto directo con la caja TATA a travs de la protena fijadora de TATA (TBP). Una vez unido el TFIIB los otros factores de transcripcin generales (GTF, del ingls: general transcription factors) se unen secuencialmente y por ltimo se reclutan la ARN polimerasas II y los factores asociados. Este conjunto conformado por ADN, factores de transcripcin generales y ARN polimerasa II se denomina complejo de transcripcin basal. Este acta como objeto de activacin o represin transcripcional por la accin de protenas regulatorias especficas de tejido. Estos factores de transcripcin histoespecficos se unen especficamente a otras secuencias de ADN en las zonas de control de los genes intercalndose en el surco mayor y comandan la interaccin del complejo de transcripcin basal con el ADN, lo que provee una expresin gnica regulada histoespecfica. Adems de su dominio de unin al ADN, las protenas reguladoras de la transcripcin pueden tener dominios para la interaccin reversible, no covalente de una protena con otra, denominados dominios de dimerizacin. La interaccin de dos protenas a travs de estos dominios puede ser un requisito para su unin al ADN. Por lo tanto, la unin de factores de regulacin es a menudo de tipo cooperativa Mientras muchos factores dimricos poseen dos protenas de la misma especie (homodmeros), otros estn formados por dos protenas de diferente naturaleza (heterodmeros). Es evidente que este tipo de protenas poseen adems de dominios de dimerizacin, dominios de fijacin al ADN y dominios de activacin transcripcional.

PROTEINAS DE ESTRUCTURALES

UNION

AL

ADN:

CARACTERISTICAS

1- MOTIVO HELICEGIRO-HELICE (HLH: Helix- loop-helix )

Constituye una zona proteica o dominio compuesto por dos regiones de alfa hlice separadas por una de longitud variable que forma un rulo o bucle entre ellas. Los dominios alfa helicoidales son similares estructuralmente y necesarios para la interaccin con secuencias de la protena que permiten una conformacin simtrica respecto de un eje. Esta clase de protenas a menudo contiene una regin rica en aminocidos bsicos localizada en el extremo amino terminal que le permite su unin a secuencias del ADN reconocidas especficamente. Los dominios HLH son necesarios para la homo y heterodimerizacin. Ejemplos para las protenas de unin al ADN con motivos HLH son: Myo D, c-Myc y Max. Varias protenas que no contienen la zona rica en aminocidos bsicos no se unen al ADN y actan como represores de la transcripcin por esta causa. As, estas protenas HLH reprimen la actividad de otras HLH por formacin de heterodmeros y bloqueo de la unin al ADN.

2-DEDOS DE ZINC

Este motivo consiste en espaciamientos especficos conformados por residuos de cistenas e histidinas que permiten la unin de cationes Zn2+ a la protena, producindose un enlace coordinativo del metal en el centro de ellos. Este fenmeno confiere al dominio aspecto de un dedo, por lo cual es llamado comunmente dedo de zinc. Estos dominios pueden encajar en los surcos mayores del ADN. El acople de estos factores regulatorios abarca la mitad de una vuelta de la doble hlice del ADN. Los ejemplos ms tpicos son el factor de transcripcin de la ARN polimerasa II (TFIIIA) y las protenas de la superfamilia de receptores de las hormonas permisivas (esteroideas, tiroideas, etc).

3- CIERRE DE LEUCINA (Leucine zipper)

Es un motivo que se origina por la distribucin repetitiva de residuos de leucina espaciados por 7 aminocidos en una distribucin alfa helicoidal de la protena. Estos residuos de Leu terminan en una zona con residuos R que protruyen con respecto a la zona helicoidal. Los grupos R se interdigitan con grupos R de otros dominios de este tipo, estabilizando as la homo o heterodimerizacin. Los dominios de cierre de lueucina estn presentes en protenas tales como: c-myc, c-fos, c-jun y C/EBP. La tasa de expresin de un gen es la resultante de la interaccin de varios de estos factores de transcripcin especficos que inducen o impiden la formacin del aparato basal de transcripcin (compuesto por los factores de transcripcin generales). Los factores de transcripcin especfica pueden de unin al ADN pueden activar o bloquear la transcripcin si se fijan a secuencias reguladoras consenso cercanas a la regin del promotor. Si estas protenas se fijan a enhancers distantes de la regin del promotor pueden aumentar o disminuir la tasa transcripcional de un gen que se est transcribiendo. La actividad de estos factores de transcripcin puede regularse a su vez a travs de modificaciones covalentes mediadas por cascadas de quinasas/fosfatasas y en algunos casos por induccin/represin, dependiendo en todos los casos de seales externas. Esto es muy importante para coordinar las funciones biolgicas de la clula y su interaccin con el medio.

Otros modos de control transcripcional de la expresin gentica

SITIOS ALTERNOS DE INICIO DE LA TRANSCRIPCION: Un gen puede codificar para varias protenas al poseer dos exones 5 diferentes ej: el gen de la amilasa y la cadena ligera de miosina del ratn, la glucoquinasa y la alcohol deshidrogenasa en la rata y la actina en la mosca de la fruta. PIEDRAS DEL CAMINO: Una vez iniciada la transcripcin, la velocidad del movimiento de la RNA polimerasa puede reducirse e incluso detenerse por periodos breves. Se asume que esto tiene que ver con el encuentro de la polimerasa con determinadas secuencias del ADN llamadas piedras del camino por su cualidad de detener la polimerasa. Se sabe que determinados factores de transcripcin favorecen el paso de la enzima por estos sitios y otros provocan la liberacin del aparato de transcripcin de la plantilla, determinando la finalizacin abrupta de la transcripcin al interaccionar con estos sitios.

3)- CONTROL POST-TRANSCRIPCIONAL DE LA EXPRESION GENETICA

Aunque el inicio de la transcripcin es el sitio primario de la regulacin de la expresin de genes, la sntesis del transcripto primario no es el nico momento en que las clulas controlan la produccin adecuada de protenas.

SITIOS DE POLIADENILACION ALTERNATIVA:

Puede ocurrir algo similar a la ocurrencia de sitios alternativos de inicio de la transcripcin pero en el extremo 3. En este caso hallndose sobre un mismo gen

varios sitios susceptibles de ser poliadenilados como es el caso del gen para la cadena pesada de inmunoglobulina. Dependiendo del sitio 3 poliadenilado, la protena resultante puede anclarse a membrana o ser secretada, de acuerdo al estado de desarrollo en que se encuentra la clula.

SPLICING ALTERNATIVO:
Es un mecanismo muy difundido, que permite que un solo gen pueda codificar para ms de una protena. En muchos de estos casos se conoce ms de una va para procesar el transcripto primario obteniendo protenas estructural y funcionalmente diferentes o bien isoformas de una protena. Los cortes sobre el RNAhn deben producirse con absoluta precisin. Puede ocurrir que uno ms exones sean removidos (dando una protena ms corta), o que uno o ms intrones no sean removidos (dando una protena ms larga). Se conoce una familia de 6 protenas llamadas ASF (factores de splicing alternativo) responsables de reconocer y seleccionar los lugares para los cortes alternativos, poseen la caracterstica de contener dominios ricos en serina y arginina por lo que se las llama tambin proteinas SR. El mecanismo por el cual la clula selecciona los sitios no est claro. Los siguientes son algunos ejemplos de genes cuya expresin puede regularse por splicing alternativo: la tropomiosina: esta se codifica a partir de un mismo gen pero con una secuencia primaria diferente a partir de ARNm diferentes especficos en 7 tejidos. el gen de la tirosinhidroxilasa humana: Esta enzima expresa 4 isoformas diferentes, es decir similar actividad biolgica con diferentes propiedades, en este caso se expresan todas en mdula suprarrenal y cerebro. El gen contiene 14 exones, al cortar y empalmar de diferente manera, la isoforma 2 tiene 12 nucletidos ms que la isoforma 1, la isoforma 3 tiene 81 ms y la isoforma 4 tiene 93 nucletidos ms que la isoforma 1. Los RNAm de las cadenas livianas de inmunoglobulinas sufren corte y empalme alternativo, esto contribuye, como veremos en inmunologa, a ampliar el repertorio de anticuerpos, es decir a reconocer ms antgenos (elementos no propios) a los que pueda ser expuesto el organismo. As como permite mejorar la respuesta inmune a un antgeno en particular. Un mismo gen como el que codifica para la hormona calcitonina interviniente en la regulacin de los niveles de Calcio plasmtico- al ser expresado en las clulas parafoliculares de la tiroides cuando se expresa en las neuronas hipotalmicas produce una protena llamada CGRP (Producto relacionado al gen de calcitonina) que acta como neurotransmisor.

La fibronectina que cuando es sintetizada por el fibroblasto y liberada a la matriz extracelular expresa dos intrones que no son expresados cuando la protena es sintetizada en los hepatocitos y secretada al plasma. Algunos genes codificantes para factores de transcripcin en clulas en etapas del desarrollo pueden ser ensamblados alternativamente, la produccin de una u otra variante determinar la va de diferenciacin adoptada por la clula. En la mayor parte de los casos, la diferencia entre los productos de splicing alternativo sobre un mismo ARN difieren en regiones claves que pueden afectar a la protena en propiedades como: la compartimentalizacin, el tipo de ligandos al que se unir, la afinidad con que lo har y si es una enzima su actividad cataltica.

EDICIN DEL ARN (Mutagnesis dirigida del ARN):

Si bien el splicing alternativo es la forma mejor estudiada y ms habitual de regulacin de la expresin gentica a nivel de procesamiento del ARN, no es la nica. La mutacin puntual de una base en el ARNnh o en el ARNm, puede alterar el producto. Esto no constituye un error sino que es una herramienta utilizada por la clula para lograr una determinada protena. En el ser humano este es el caso de las apoprotenas B100 y B48. Ambas son codificadas por el mismo gen y contienen en el ARNnh los mismos exones e intrones. Cuando el gen se expresa en el hepatocito, el ARNnh no sufre ningn tipo de modificacin y el RNAm procesado se traduce en ApoB100. En cambio, cuando el gen se expresa en el enterocito se produce una mutacin puntual que convierte C por U en el ARNm configurando un codn de terminacin que codifica para la ApoB48.

TRANSPORTE DEL ARN AL CITOPLASMA:

Los primeros estudios sobre el ARNnh probaron que una fraccin de ste es desdoblada en el ncleo por completo antes de generar ARNm. Si bien an los mecanismos no se conocen con certeza, los estudios actuales sugieren que la clula puede controlar que un ARNnh sea o no procesado. Este es el caso de la porcin proteica de una ribonucleoprotena, la U1A. Cuando sta se expresa en cantidades altas se puede ligar a su propio ARNnh e inhibir su poliadenilacin de modo que el mensajero resultante tiene baja estabilidad y disminuye as tu tasa de expresin.

ESTABILIDAD DEL ARNm: A diferencia de los ARNm procariotas, cuyas vidas medias rondan los 1-5 minutos, los ARNm eucariontes varan ampliamente en su estabilidad. Por ejemplo: el ARNm de c-fos tiene una vida media de entre 10 y 30 en cambio el de las cadenas de globina es de ms de 24 hs. La longitud de la cola de poli A est directamente relacionada a la estabilidad citoslica del ARNm y esto se asocia a la proteccin que ejerce esta secuencia al competir con el resto de la cadena por la unin a nucleasas citoslicas. La cola de poli A se halla ligada a una protena llamada Protena de Enlace de Poli A (PEPA) que protege a la secuencia de la accin de nucleasas generales y la sensibiliza para nucleasas especficas de poli A. A medida que estas nucleasas actan la cola de poli A se acorta hasta que ya no puede ligar a PEPA y el ARNm se vuelve susceptible a las nucleasas generales y es rpidamente degradado. Ciertos transcriptos inestables poseen secuencias predominante pero no exclusivamente, en las regiones 3 que constituyen seales de rpida degradacin para las nucleasas citoplasmticas. Estas secuencias se llaman secuencias desestabilizadoras, constan de unos 50 nucletidos y son ricas en A y U. Un grupo de nucleasas citoplsmicas que se conocen como ribozimas y poseen un ARN pequeo en su sitio activo pueden aparear con estas secuencias del extremo 3 de manera especfica, acelerando la degradacin del ARNm. Como ejemplo de estos transcriptos hallamos a la mayora de los ARNm para factores de crecimiento (caracterizados por una vida media muy corta) Ejemplos de control de la estabilidad del ARNm en el citosol: En el organismo humano los nicos mensajeros no poliadenilados son los mensajeros de las histonas, que se sintetizan constantemente a lo largo de todo el ciclo celular pero no se transcribe debido a su gran inestabilidad (vida media de unos pocos minutos). Cuando se progresa en G1/S lo que se incrementa es la tasa de transcripcin de los ARN de modo que al haber una gran cantidad disponible. se alcanza a traducir. Una vez que la clula ha ingresado a la fase S la vida media del ARNm de histonas se prolonga hasta 1 hora, posiblemente por la baja actividad de nucleasas en este momento del ciclo celular. La casena, una protena de la leche se produce por la glndula mamaria en respuesta a prolactina. Aunque no se conoce con certeza el mecanismo, bajo la accin de prolactina no se aumenta la tasa transcripcional sino que se prolonga la estabilidad del mensajero. La tubulina consta de dos subunidades ( y ) que heterodimerizan. Cuando este dmero de tubulina alcanza determinada cantidad en el citosol se une al extremo N terminal de los pptidos de tubulina nacientes activando una nucleasa especfica para los mensajeros de tubulina, ejerciendo as un control de retroalimentacin negativa sobre su propia expresin. La expresin de receptores de transferrina tambin se maneja por estabilidad del mensajero. En este caso particular, cuando las concentraciones citoslicas de hierro son bajas, el mensajero liga en su extremo 3 a la enzima aconitasa llamada tambin IRF (Factor de respuesta al Hierro) Esto protege al ARNm de la accin de nucleasas. Cuando la concentracin citoslica de hierro aumenta, este compite con el mensajero por la IRF se une al hierro y libera el extremo 3 del mensajero del receptor de transferrina. Este extremo 3 posee 5 bucles con secuencias desestabilizadoras que son rpidamente reconocidas por ribozymas. De este modo se reduce la traduccin de la protena y con ello el ingreso de ms hierro innecesario- a la clula. Se descubri tambin que los mensajeros no se ubican al azar en el citosol En los fibroblastos humanos el 75% de los ARNm poliadenilados se localizan en la interseccin entre filamentos de actina del armazn del citoesqueleto. Si bien no se

conoce claramente la significacin de este hecho, en experimentos en la mosca de la fruta se comprob que esta disposicin no azarosa tiene un papel muy importante en el proceso de la fecundacin.

4)- CONTROL TRADUCCIONAL DE LA EXPRESION GENETICA

Casi una tercera parte del ARNm citoplsmico no est unido a ribosomas an cuando ms del 90% de los ribosomas se encuentre en actividad. Se puede regular la velocidad con que los mensajeros son traducidos y el nmero de veces que debe traducirse. Existe un control general, global o inespecfico de la traduccin ejercido sobre los factores del complejo de traduccin. Por otro lado se conocen casos especficos o control particular de la traduccin de ciertos ARNm. CONTROL GENERAL DE LA TRADUCCIN: Todos los ARNm celulares tienen cap con la guanosina metilada y esa estructura aumenta la traduccin. Cuando por alguna razn de disposicin espacial del extremo 5 del ARN el cap no queda disponible para su interaccin el factor de iniciacin Ife4E la traduccin disminuye. Puede controlarse tambin la actividad de los factores de iniciacin: IFe2B, IFe3, IFe4B e IFe4F. La actividad de estos factores se controla por fosforilacin. Esta fosforilacin a su vez responde a diversos estmulos que pueden ser fisiolgicos (factores activadores de cascadas de quinasa) o no ( desnutricin severa, hiperosmolaridad, infeccin viral o shock trmico) El IFe2B parece ser entre ellos el ms importante desde el punto de vista del control de la traduccin. En el caso particular del IFe2B es la subunidad la susceptible de ser fosforilada por una proteinquinasa independiente de AMPc que responde a seales de estrs y se inactiva evitando la formacin del complejo 40S. El IFe4F puede ser fosforilado por Insulina y Cascadas de quinasa activadas por mitgeno en este caso la fosforilacin activa al factor promoviendo un aumento en la traduccin. Existen 2 protenas (4E-BP1 y 4E-BP2) que se ligan al IFe4F inactivndola. La insulina y los factores de crecimiento pueden fosforilarlas liberando al IFe4F y dejando disponibles los sitios de fosforilacin para potenciar la estimulacin de la actividad del factor y con ello la sntesis de protenas. CONTROL PARTICULAR DE LA TRADUCCIN : Depende de sustancias reguladoras que modifican la configuracin de un tramo de nucletidos no traducibles localizados en el extremo 5 entre el cap y el codn de iniciacin. Un ejemplo de este tipo de regulacin lo proporciona la traduccin del mensajero de la Ferritina que se une al hierro para su depsito intracelular. Cuando las concentraciones citoslicas de hierro aumentan la sntesis de ferritina se produce a altas velocidades, el hierro se liga a la aconitasa o IRF. En cambio, cuando estas concentraciones disminuyen la IRF queda libre y se liga al ARNm de la ferritina formando un bucle en el extremo 5 que impide el ligado de IFe4F y con ello el ensamblaje del aparato de traduccin, bloqueando de esta manera la produccin innecesaria de protena. Otro ejemplo podemos verlo en los reticulocitos en que la sntesis del hem est controlada por el propio grupo hem. Cuando hay suficiente hem, este activa a la proteinquinasa de IFe2B regulada por hem que inactiva al factor por fosforilacin. En los ltimos aos se han descubierto nuevos procesos en cuanto a control de la traduccin que operan en algunas clulas en particular. Ellos son CAMBIO DEL MARCO DE LA TRADUCCIN: es decir, el ribosoma cambia la pauta de lectura en algn punto de su movimiento a lo largo del ARNm desplazndose un nucletido hacia atrs o hacia delante, pudiendo, un mismo mensajero dar origen a dos protenas. SALTO DEL CODN DE TERMINACIN: el ribosoma pasa por alto el codn de terminacin y contina leyendo la secuencia de nucletidos.

PASO POR ALTO DE LA TRADUCCIN: el ribosoma salta una secuencia de nucletidos en el mensajero de modo que queda un mensajero ms largo que la protena porque resta una porcin interna del mensaje sin traducir, pudiendo nuevamente un mismo mensajero dar origen a dos protenas EMPALME DE PROTENAS: Al modo del splicing se conocen casos en que un segmento especfico del polipptido se secciona y los dos bordes se unen en forma covalente.

5)- CONTROL POST- TRADUCCIONAL DE LA EXPRESION GENETICA

El pptido naciente del ribosoma puede sufrir diversas modificaciones acorde con su funcin biolgica posterior incluyendo, remocin del extremo amino terminal, agregado se secuencias seal para exportacin, acilaciones, metilaciones, sulfataciones, glicosilaciones, prenilaciones, modificaciones dependientes de vitamina C, carboxilaciones dependientes de vitamina K como en el caso de los factores de coagulacin- o bien clivajes post-traduccionales para tornarse activas (lo cual es un modo de controla su actividad como en el caso de algunas enzimas y hormonas peptdicas) Todas estas modificaciones pueden ser controladas por seales internas (pH intracelular, actividad de chaperonas moleculares) o externas (cascadas de quinasa que controlan fosforilaciones) Cualquier problema en estas modificaciones posttraduccionales puede desencadenar alteraciones en la fisiologa de la clula. La actividad post-traduccional se controla a travs de la regulacin de la actividad de las enzimas intervinientes en los procesos citados. Cualquiera sea la estructura y funcin de la protena es indispensable un correcto plegamiento post-traduccional de los pptidos ya que la formacin de estructuras 2, suprasecundarias y 3, as como las oligomerizaciones sern las responsables de que la protena sea funcional.

Protelisis limitada: poliprotenas

Algunos mensajeros codifican para poliprotenas. stas son productos transitorios que se escinden en varias protenas, cada una con estructura y funcin diferente. Un ejemplo de poliprotena es el producto del gen POMC (Proopiomelanocortina) que puede escindirse en modo diferencial segn sea que est en las clulas adrenocorticotropas del lbulo anterior de la hipfisis generando ACTH y lipotrofina- o en las clulas de la pars intermedia donde genera endorfina, lipotrofina y hormona estimulante de Melanocitos en sus dos formas MSH y MSH.

Control sobre la estabilidad de las protenas

Las clulas pueden controlar el tiempo de supervivencia de las protenas una vez que han sido sintetizadas y modificadas post-traduccionalmente. Aunque no se trata directamente de la regulacin de la expresin de genes, es una extensin del tema. Los mecanismos que controlan la estabilidad proteica no estn bien comprendidos, aunque se sabe que en las protenas que en el extremo amino terminal son ricos en metionina, serina, alanina, treonina, valina y glicina son estables por ms de 20hs en cambio los que son ricos en fenilalanina, cido asprtico, lisina y arginina tienen una vida menor a 5. Esto se llama Regla del Extremo N. Las ltimas secuencias mencionadas se llamas Secuencias PEST por la nomenclatura internacional de aminocidos- y son altamente sensibles al reconocimiento por ubiquitina y con ello su degradacin en el proteasoma.

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