PROBLEMAS DE BIOQUIMICA. Curso 08/09.

PROBLEMAS DE CINETICA ENZIMATICA.

1. Una enzima cataliza una reaccin con una velocidad mxima de 5 moles por
minuto, siendo su Km para el sustrato de 0,5 mM. Si la ponemos en presencia de una
concentracin 500 mM de sustrato, Qu cantidad de sustrato se lograr transformar en
10 min?
Sol.: 50 moles
2. La Km de una hexoquinasa para la glucosa es 10-4 M. Si la concentracin de glucosa
en el medio de reaccin es 1,8 g/ml, cul ser la relacin [E]/[ES]? (Pm glucosa=
180).
Sol.: 10.
3. La Km para el etanol de la alcohol deshidrogenasa de levadura es de 1,3 x 10-2 M. Si
la concentracin de alcohol en el medio de reaccin es de 59,8 g/ml, qu proporcin
de enzima estar libre y qu proporcin estar combinada con el sustrato? (Pm etanol=
46).
Sol.: [ES]= 9,1%; [E]= 90,9%
4. Calcular qu velocidad se obtendr en una reaccin enzimtica si la velocidad
mxima es igual a 100 y la concentracin de sustrato es igual: a) 10 Km y b) Km/3.
Sol.: a) v= 90,9; b) v= 25
5. Calcular qu concentracin de sustrato, expresada en funcin de la Km, nos dar una
velocidad de reaccin enzimtica igual al 60% de la velocidad mxima.
Sol.: [S]= 1,5 Km.
6. Calcular la relacin entre la concentracin de sustrato necesaria para una velocidad
90% de la velocidad mxima y la requerida para una velocidad 10% de la velocidad
mxima, es decir [S]90/[S]10, para una enzima cuya cintica de saturacin sigue una
hiprbola.
Sol.: [S]90/[S]10= 81.
7. Una enzima cuya Km= 2,4 x 10-4 M se ensaya con las siguientes concentraciones de
sustrato: a) 2 x 10-7 M; b) 6,3 x 10-5 M; c) 10-4 M. La velocidad medida en la reaccin
con 5 x 10-2 M de sustrato fue de 0,128 moles/min. Calcular las velocidades iniciales
en los otros casos.
Sol.: a) 0,107 moles/min; b) 26,61 moles/min; c) 27,6 moles/min.
8. Una enzima cataliza una reaccin a una velocidad de 35 moles/min cuando la
concentracin de sustrato es 0,01 M. La Km para el sustrato es 2 x 10-5 M. Cul ser
la velocidad inicial a las concentraciones de sustrato: a) 3,5 x 10-3 M; b) 4 x 10-4 M; c)
2 x 10-4 M; d) 2 x 10-6 M y e) 1,2 x 10-6 M?.
Sol.: a) 34,8 moles/min; b) 33,3 moles/min; c) 31,8 moles/min;
d) 3,18 moles/min; e) 1,98 moles/min.

9. A partir de los siguientes datos obtenidos para una reaccin catalizada

enzimticamente, calcular grficamente la Km y la Vmax de dicha enzima
Sustrato (mM)
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0

Velocidad (moles/min)
1,00
1,67
2,40
2,50
2,78
3,00

Sol.: Km= 2 mM; Vmax= 5 moles/min

10. 25 l de una preparacin enzimtica se llevan a ensayo a un volumen de reaccin
estndar de 1 ml y a temperatura y pH ptimos, pero con distintas concentraciones
iniciales de sustrato, obtenindose las velocidades iniciales que se indican:
Sustrato (mM)
Velocidad (nmol/min)
-3
303 x10
120,0
149 x10-3
98,0
128 x 10-3
92,6
100 x10-3
83,3
-3
80 x 10
74,6
a) Determnese la Km de la enzima y la velocidad mxima que se puede conseguir con
la concentracin de enzima utilizada.
b) Qu cantidad de enzima, expresada como U/ml, contiene nuestra preparacin
enzimtica?.
Sol.: a) Km= 0,083 mM y Vmax= 153,8 nmoles/min; b) 6,152 U/ml.
11. La descarboxilacin enzimtica de un -cetocido procede con las velocidades
iniciales para las concentraciones que se citan:
[cetocido] (mM)
Velocidad (moles CO2/2 min)
2,500
0,588
1,000
0,500
0,714
0,417
0,526
0,370
0,250
0,252
A partir de estos datos calcular Vmx y Km de esta reaccin enzimtica.
Sol.: Vmx= 0,35 moles/min; Km= 0,4 mM.
12. Un sustrato fue hidrolizado por una enzima y la velocidad inicial de desaparicin
fue medida para distintas concentraciones del mismo. Calcular la Km y la Vmx a partir
de los datos que se resumen a continuacin:
Sustrato (mM)
Velocidad (moles/min)
2,3
0,95
3,0
1,13
4,5
1,42
12,0
2,14
38,0
2,64
Sol.: Km= 5 mM; Vmx= 3 mol/min.

13. A partir de los siguientes valores determinar grficamente Km y Vmx para una
reaccin enzimtica:
Sustrato (mM)
Velocidad (moles P/2 min)
5,000
0,392
2,000
0,330
1,420
0,278
1,052
0,246
0,500
0,170
Sol.: Km= 1 mM; Vmx= 0,48 moles/2 min
14. Qu informacin puede obtenerse a partir de una representacin de LineweaverBurk cuando la recta obtenida, convenientemente extrapolada, corta al eje de abscisas
en -40 litros/mol?
Sol.: Km= 25 mM
15. Qu informacin puede obtenerse de una representacin de Lineweaver-Burk
sabiendo que cuando (1/[S]) x 10-2= 2,5 M-1, 1/v=0.
Sol.: Km= 4 mM.
16- Al representar por el mtodo de Lineawer-Burk una cintica enzimtica se obtienen
una recta que corta al eje de ordenadas en 1/v= 3 x 105 min/mol. Qu informacin
podra obtenerse de este dato?
Sol.: Vmax= 3,33 moles/min
17 Calcular la Km y Vmax de una enzima sabiendo que la recta obtenida en una
representacin de Lineweaver-Burk corta al eje de ordenadas en 5 x 103 (moles/min)-1,
y que la pendiente de dicha recta es 120 min/litro
Sol.: Km= 24 mM; Vmax= 2 x 10-4 moles/min.
18. A partir de una representacin de Lineweaver-Burk para una reaccin enzimtica
cuya recta corta al eje de ordenadas en 1/v= 25 h/mol y extrapolando al eje de abcisas
en 1/[S]= -1,3 x 102 (moles/l)-1, calcular Vmx y la Km.
Sol.: Vmx= 4 x 10-2 moles/h; Km= 7,69 mM.
19. Al representar por el mtodo Lineweaver-Burk los datos obtenidos con una
determinada enzima se encontr que las rectas cortaban los ejes de coordenadas en los
puntos indicados a continuacin:
Sin inhibidor
Con inhibidor (1mM)
-1
Corte 0Y (mol/min)
0,2
0,2
-1
Corte 0X (mM)
-2,0
-0,5
Se pide: a) Calcular la Vmax y Km de dicha enzima en ausencia y presencia de
inhibidor; b) De que tipo de inhibidor se trata?; c) En ausencia de inhibidor y con una
concentracin inicial de sustrato de 0,1 M Qu cantidad de sustrato se habr
consumido al cabo de 4 minutos de reaccin?
Sol.: Vmax= 5 moles/min; Km= 0,5 mM; Km'= 2 mM;
b) Inhibicin competitiva; c) 19,9 moles.

20. Una reaccin enzimtica se lleva a cabo a diferentes concentraciones de sustrato, en

ausencia y presencia de dos inhibidores diferentes: (Ia)=(Ib)= 1.5 mM. La siguiente
tabla muestra los datos obtenidos:
Sustrato (mM)
v (moles/min)
va (moles/min)
vb (moles/min)
0.2
1.67
0.625
0.83
0.4
2.86
1.176
1.43
0.8
4.44
2.110
2.22
1.6
6.15
3.480
3.08
3.2
7.62
5.160
3.81
Se pide: a) Determinar todos los parmetros cinticos de la enzima. b) Qu tipo de
inhibidores son Ia e Ib?
Sol.: a) Km=Km'b= 1mM; Km'a= 3 mM; Vmax= Vmax'a = 10 moles/min;
Vmax'b = 5 moles/min; Kia = 0.75 mM; Kib = 1.5 mM. b) el inhibidor "a" es
competitivo, mientras que el "b" es no competitivo.
21. Una reaccin enzimtica se lleva a cabo con distintas concentraciones de sustrato,
en ausencia y presencia de un inhibidor. Los datos obtenidos se representan en unos
ejes de coordenadas segn el mtodo de Lineweaver y Burk. Las rectas obtenidas
cortan a los ejes de coordenadas en los siguientes puntos, en ausencia y presencia de
inhibidor, respectivamente, corte en abscisas (mM-1) = -3,7 y -0,2 y corte en ordenadas
(moles/min)-1 = 0,01 y 0,01. a) De qu tipo de inhibicin se trata? b) Calcular la Km
y Vmax en ausencia y presencia de inhibidor c) Determinar la concentracin de
inhibidor sabiendo que Ki = 2,6 10-1 mM
Sol.: a) Inhibicin competitiva; b) Km= 0,27 mM; Km'= 5 mM; Vmax= Vmax'=
100 moles/min; c) [I]= 4,55 mM
22. Al representar por el mtodo de Lineweaver y Burk los resultados obtenidos en tres
experimentos, al emplear una misma cantidad de enzima y sustrato, en las condiciones
que se explican en la tabla adjunta, se encontraron los puntos de corte con los ejes
indicados en la tabla:
Sin adiciones
+ 5 mM A
+ ? mM B
-1
Corte OY (moles/min)
0,5
0,5
0,8
Corte OX (mM)-1
- 5,0
-2,5
-5,0
Se pide: a) Calcular Vmax y Km en ausencia y presencia de A. Qu efecto produce
este compuesto sobre la actividad enzimtica? b) Idem que en "a" pero en el compuesto
"b". c) En ausencia de A o B y con una concentracin inicial de sustrato de 0,2 M,
calcular la cantidad de sustrato que se habr consumido al cabo de 5 minutos de
reaccin. d) Calcular la Ki del compuesto A. e) Calcular la concentracin de B en el
tercer experimento, sabiendo que su Ki = 5 mM
Sol.: a) Km = 0,2 mM; KmA = 0,4 mM; Vmax= VmaxA = 2 moles/min;
Inhibidor competitivo; b) KmB= 0,2 mM; VmaxB= 1,25 moles/min;
Inhibidor no competitivo; c) 10 moles, d) 5 mM; e) 3 mM
23. Al representar por el mtodo de los dobles inversos la cintica de la enzima
fosfatasa alcalina (en una resuspensin de 8 g/ml) y en presencia de p-nitrofenil
fosfato, se obtiene una recta que corta al eje de ordenadas en 1/300 min/M, y una
pendiente de 0,05 min. Calcular: a) Vmax; b) Km; c) Nmero de recambio si el Pm de
esta enzima es de 80000 daltons. Por otro lado, al ensayar en presencia de 60 M de
glicerol fosfato, y haciendo la misma representacin grfica, el punto de corte con el eje
de ordenadas es el mismo, mientras que la pendiente es de 0,1 min, d) De qu tipo de

inhibidor se trata?; e) Calcular Km', Vmax' y Ki; f) Determinar el grado de inhibicin

en estas circunstancias si estamos en presencia de 45 M de p-nitrofenil fosfato.
Sol.: a) 300 M/min; b) Km= 15 M; c) N de recambio= 3000 min-1;
d) Inhibidor competitivo; e) Km= 30 M, Vmax= 300 M y Ki= 60 M;
f) 20%.
24. Al estudiar la cintica de inhibicin de cierto enzima se han obtenido los resultados
de la tabla siguiente:
__________________________________________________________
Sustrato (mM)
v (mol/min)
______________________________________________
[I]= 0
[I]= 0,1 mM
[I]= 1 mM
__________________________________________________________
0,02
2,90
2,52
1,18
0.05
5,00
4,02
1,43
0.10
6,67
5,02
1,54
0.20
8,13
5,72
1,60
0.50
9,09
6,25
1,64
__________________________________________________________
Determinar grficamente: a) el tipo de inhibicin; b) el valor de Km del enzima; c) la
velocidad mxima y d) el valor de Ki
Sol.: a) Inhibicin acompetitiva; b) Km= 0,05 mM; c) Vmax= 10 moles/ min;
d) Ki= 0,2 mM
25. La glutamina sintetasa (GS) cataliza la siguiente reaccin:
L-Glu + NH3 + ATP L-Gln + ADP + Pi
Cuando las concentraciones de NH3 y de ATP son saturantes, el enzima
manifiesta una cintica michaeliana respecto al cido. glutmico. Sin embargo, cuando
a un preparado enzimtico se le aade L-serina de modo que su concentracin resulte
ser 16 mM, se observa que tanto Km com Vmax disminuyen hasta alcanzar 1/3 del
valor primitivo. Indicar: a) qu tipo de inhibicin ejerce la serina? y b) cul ser el
valor de su Ki?.
Sol.: a) Inhibicin acompetitiva, b) Ki = 8 mM
26. La deshidrogenasa de Spirulina mxima es capaz de oxidar el metilviolgeno
reducido liberando hidrgeno, segn la ecuacin:
Hidrogenasa
Metilviolgeno --------------------------> colorante oxidado + H2
En presencia del in cianuro (CN-) a concentracin 2,5 10-4 M, se observa que
el enzima mantiene invariable su Km pero su velocidad mxima disminuye en un 20%.
Averiguar: a) qu tipo de inhibicin ejerce el cianuro? y b) cul ser el valor de su
Ki?.
Sol.: a) Inhibicin no competitiva y b) Ki= 10-3 M
27. En una cuba de fermentacin con 25 l de capacidad que contiene un sustrato a una
concentracin inicial de 0,08 mM, se obtienen una velocidad Vmx de reaccin de 0,4
mmoles/min. La enzima responsable del proceso funciona a mitad de dicha velocidad
cuando [S]= 20 M. Por error, un operario aade 1,5 mmoles de un compuesto txico a

dicha cuba al comienzo de la fermentacin, observndose un descenso del nmero de

recambio de la enzima. Suponiendo que el compuesto slo pudiese ser un inhibidor
competitivo o no competitivo y que su Ki fuese igual a 100 M. Calcular: a) Km
expresada en M. b) Vmax (en mmoles/min) de la enzima inhibida c) Grado de
inhibicin que provoca la presencia del inhibidor.
Sol.: a) 20 M; b) 0,25 mmoles/min; c) 37,5%
28. Se ensaya una enzima con su sustrato especfico en presencia de un inhibidor
competitivo. Si la velocidad mxima de la reaccin no inhibida es de 55 moles/min,
calcular la velocidad inicial de la reaccin inhibida y el grado de inhibicin, sabiendo
que: [S]= Km= 2 x 10-4 M y que [I]= Ki= 2,5 x 10-3 M
Sol.: v'= 18,33 moles/min y grado de inhibicin= 33,35%
29. Una enzima tiene, en ausencia de inhibidores, una Km para su sustrato de 6,7 x 10-4
M y su Vmx es de 300 moles/min. Calcular la Ki para un inhibidor competitivo
sabiendo que con una [S]= 2 x 10-5 M y una [I]= 10-5 M, se obtiene una velocidad
inicial (v') de 1,5 mol/min.
Sol.: Ki= 2 x 10-6 M.
30. a) Calcular el grado de inhibicin de la reaccin enzimtica en las condiciones
anteriormente citadas; b) Si [S] incrementa 20 veces mientras [I] permanece constante y
c) [S] incrementa 100 veces mientras [I] permanece constante.
Sol.: a) 82,76%; b) 75,57%; c) 55,35%.
31. Calcular la concentracin de un inhibidor competitivo (Ki= 10-7 M) necesaria para
inhibir en un 20% la velocidad de una reaccin enzimtica (Km= 1,6 x 10-4 M) cuando
la concentracin de sustrato es 0,4 mM.
Sol.: 0,875 x 10-7 M.
32. Qu concentracin de inhibidor competitivo se requiere para conseguir una
inhibicin del 10% de una reaccin enzimtica, si la concentracin de sustrato es 1,5
mM, la Km para el sustrato es 0,29 mM y la Ki para el inhibidor 2 x 10-5 M?.
Sol.: [I]= 1,36 x 10-5 M.
33. Una enzima se ensaya en presencia de una concentracin de sustrato 2,5 x 10-4 M.
La Vmax de la reaccin es 25 moles/l/min y su Km es 4 x 10-5 M a) Qu velocidad se
observar en presencia de 4,5 x 10-4 M de un inhibidor no competitivo?. b) Cul ser
el grado de inhibicin? Ki = 3 10-4 M
Sol.: a) 8,62 moles/l/min; b) 60%
34. Una cierta enzima cataliza la transformacin de 0,4 mmoles de sustrato en 5
minutos cuando la concentracin de ste es saturante. Si se ensaya la enzima con una
concentracin de sustrato de 60 M la velocidad de la reaccin es de 40 moles/min y,
si adems se aade un inhibidor competitivo a concentracin 30 M, el grado de
inhibicin resulta ser del 75%. Calcular la Km de la enzima y la Ki del inhibidor.
Sol.: Km= 60 M y Ki= 5 M

35. Calcular la concentracin de un inhibidor competitivo, cuya Ki= 10-7 M, necesaria

para inhibir en un 80% la velocidad de una reaccin enzimtica, sabiendo que la Km de
la enzima es 1,6 10-4 M y que la concentracin de sustrato es de 40 M
Sol.: 5 x 10-7 M