Clase 18/3/22

Exposiciones prueba MIO

La tripteina aporta gran cantidad de triptófanos sustrato de la enzima triptodanasa a partir
de la cual se forma el lindol que puede ser revelado para formar un compuesto rojo.
Glucosa- hidrato de carbono fermentable
Ornitina- sustrato para la detección de la enzima ornitina descarboxilasa.
Purpura de bromocresol: indicador de pH medio alcalino de color purpura y en medio
acido de color amarillo
Agar: agente solidificante (medio semisólido) por la cantidad que se le pone
Extracto de levadura: Obtenido de las levaduras rompiendo las células de la levadura,
tiene composición pared compuesta de polisacáridos, proteínas, aminoácidos.
Peptona: Polipéptidos le confiere alimento al medio de cultivo
Tripteina: sustrato a partir del cual se forma el indol
Clorhidrato de L-ornitina: funciona como sustrato para la detección de la enzima ornitina
carboxilasa la ornitina es un aminoácido.
pH final 6.5+- 0.2
Siembra:
A partir de un cultivo puro de un microorganismo que vamos a estudiar se siembra por
punción profunda utilizando aguja de inoculación, se incuba en medio aerobio de 33 a
37°C durante 18-24hrs
Interpretación de los resultados:

- observa movilidad y color del medio

- Movilidad: positiva presencia de turbidez
- Negativo: cuando el crecimiento esta solo en la línea de siembra o no hay
crecimiento
- Ornitina descarboxilasa: Resultado positivo produce color purpura, resultado
negativo color amarillito.
Prueba SIM
Medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de
hidrogeno por los microorganismos.
Se utiliza para diferenciar miembros de la familia enterobacterias.
Formula (en gramos por litro)

- Tripteina……20.0
- Peptona……6.1
- Sulfato de Hierro y amonio…0.2 formación de un compuesto negro para la
formación de sulfuro
- Tiosulfato de sodio…0.2
- Agar…3.5

pH final: 7.3+-0.2
Siembra
Se realiza por punción profunda utilizando aguja de inoculación recta.
Se inocula el centro del tubo u la punción debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio
de cultivo desde la superficie. Se incuba e aerobios de 33 a 37°C durante 18-24hrs.
Interpretación de los resultados
Se debe observar la movilidad y el color del medio de cultivo, luego realizar la prueba de
indol.
Para movilidad.
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra.
Resultado negativo: Crecimiento solamente en la línea de siembra.
Producción de SH2
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo a lo largo de la línea de siembra
o en todo el medio.
Resultado negativo: El medio permanece sin cambio de color
Prueba del indol.
Resultado positivo: Color rojo
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillo
Hidrolisis del almidón
Agar citrato de SIMMONS.
En esta prueba la única fuente de carbono ofrecida es el citrato.
Las bacterias que son capaces de sobrevivir bajo estas condiciones metabolizan el citrato
de forma rápida por una vía alterna a la tradicional, utilizando el ciclo del acido
tricarboxilico o el ácido de fermentación de citrato.
Modo de inoculcación:
El medio de citrato de Simmons debe ser ligeramente inoculado en cola de pescado
usando asa recta o aguja e incubarse durante 24 hrs a 35-37°C.
El sembrado se realiza únicamente en la superficie del agar. No hacer punción.
Indicador del medio:
El medio de citrato de Simmons consiste en un caldo que contiene fosfato de sodio,
fosfato de amonio, fosfato monopotásico, sulfato de magnesio y citrato de sodio.
Fuente de carbono: Citrato
Fuente de nitrógeno: Fosfato de amonio
Prueba positiva: Si había turbidez en el medio (No precisa “turbidez no especifica”)
Simmons agrego agar y azul de bromotimol.
Reacción que se lleva a cabo:
El fosfato monoamónico es la fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la fuente de
carbono. Componentes necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato
forman un sistema buffer, el magnesio es el cofactor enzimático. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico, el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al
color azul en medio alcalino y el agar es el agente solidificante.
Las bacterias poseedoras de citrato permeasa metabolizan el nitrato a través del ácido
tricarboxilico.
El desdoblamiento del citrato genera progresivamente, oxalacetato y piruvato.
El piruvato, en medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como
fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira
al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.

 Hay que recordar que el ciclo de los ácidos tricarboxilicos es el llamado ciclo de
Krebs.
Prueba positiva:
La prueba positiva cuando las bacterias del citrato positivas se vuelven azul en el medio y
a menudo dan un crecimiento abundante.
Usos:

Agar citrato Simmons

Microorganismos:

- Enterobacterias
- Escherichia coli
- Gram negativos
Caldo de malonato eq5
Fundamento: consiste en que la prueba es evidenciar aquellas bacterias que son capaces
de usar el malonato de sodio como única fuente carbono y el sulfato de amonio como
fuente hidrogeno la mayoría de las enterobacterias que no utilizan el malonato son
capaces de crecer en este medio tomando como nutrientes la dextrosa y el extracto de la
levadura.
En este medio usado para hacer la determinación Contiene una alta concentración de
malonato de sodio, extracto de levadura y una cantidad muy pequeña de glucosa para
promover el crecimiento de organismos que de lo contrario son lentos para responder.
Como fundamento. Se añaden tampones para esterilizar el medio a un pH de entre 6 y 7,
también se añade un colorante azul de bromotimol que es verde en medio no inoculados
para determinar cualquier cambio en el pH si un organismo no logra utilizar malonato se
logra fermentar una pequeña cantidad de glucosa que puede tornar el medio ligeramente
amarillo o dejarlo incoloro y si el organismo utiliza malonato este cambiaria el medio de
verde a azul.
Propósito: el malonato fue originalmente para diferenciar escherichia que no crecerá en el
medio y enterobacteria su uso como medio diferencial tiene ahora ampliado para incluir
otros miembros enterobacteriace
Modo de inoculación: se prepara la cantidad de gramos que especifique el inserto de la
taza comercial elegida y los gramos pesado se suspenden en 1L de agua destilada se
caliente y se coloca 3ml en tubos de ensaye con tapa de algodón, se esteriliza en
autoclave y se deja enfría antes de usar.
Indicador: Azul de bromotimol
Reacción que se lleva a cabo: alcalinización de peptona=inhibición por los ácidos de
fermentación de la dextrosa.
Color verde=negativa
Color amarillo=negativa
Color azul=positiva
Microorganismos que dan positivo a la prueba

Clase 23/03/22
Exposiciones
Prueba licuefacción de gelatina
determinar la capacidad de pseudomonas sp de producir enzimas de tipo proteolíticos
(gelatinasas) es aquella que es capaz de degradar a los colágenos es una enzima
Equipo 3
Prueba de rojo de metilo y Vogues proskauer
Equipo
Caldo nitrato

Si se le agrega alfa natil amina y acido sulfanilico y hay presencia de nitritos dará una
reacción positiva formándose un color rojo, si no hay presencia no hubo reducción y no
hay color.
Formula de los nitratos
NO3 y se reduce a NO2 esa prueba me sirve para ver si hay reducción de nitratos a
nitritos
Tubo Durham es un tubo pequeño se colocan dentro de la muestra de forma invertida
para el momento de la producción de gas penetren las burbujas en el tubo Durham y se
vean dentro del tubo Durham o inclusive el tubo flota por la presencia de gas
Clase 1 abril de 2022

Microflora
Depende del tipo de agua de donde se encuentre y presenta la flora que hay en el aire y
el suelo los desechos de las industrias, de los hogares, plantas animales muertos nos
indica que el agua contendrá microorganismos de todas las clases, se pueden encontrar

algas bacterias, virus.

Bacterias naturales o propias del agua

Se pueden encontrar microorganismos de casi todas las clases, pero la mayoría

encuentra condiciones desfavorables y mueren si no hay materia orgánica, pero si esta el
agua corriendo (rio) la bacteria no encontrará alimento y morirá.
Estas bacterias se caracterizan por se aerobias y escasamente anaerobias
No son patógenas las naturales las que vienen del aire o del suelo, pero las que vienen de
la materia orgánica o de los productos intestinales son:

 Saprofitas
 Cromógenas
 Psicrófilos
 No son patógenas
Entre las especies
predominantes tenemos:

 Pseudomonas fluorescentes porque florece

 Serrattia plymuthio
 Chromobacterium violaceum da un color violeta
 Micrococus luteus
La prueba positiva se encontrará en las primeras diluciones
Canpana durham para ver si hay produccion de gas

Se le agrega 10ml tienen una concentracion doble de caldo lauril triptosa para deteccion de
coliformes

4/10, 3/1 y 1 de 0.1 para coliformes totales

4,4 y 3
Clase 4 de abril del 2002
Bacterias del suelo
Importancia: llevan a cabo la degradación de la materia orgánica, los fertilizantes pueden
provocar un suelo erosionado debido al cambio de pH, loa microorganismos mueren por
la pérdida de equilibrio