Cuantificacin de protenas por el

mtodo de Bradford (BioRad)

Mtodo de valoracin basado en el cambio de absorbancia (466nm a 595nm) de una
solucin cida de Coomassie Brillant Blue G250 (contenida en el reactivo de Bradford).
Material y Reactivos: Reactivo de Bradford (BioRad), patrones de BSA, tubos de 2.5 ml,
cubetas de plstico, espectrofotmetro de UV/VIS, parafilm, papel absorbente.
Obtencin de la recta patrn
- Diluir 1/5 el Reactivo Bradford (BioRad).
- Recta patrn: A partir del stock de BSA preparar cubetas con las concentraciones
de BSA indicadas en la tabla siguiente:
Tubo
1
2
3
4
5
6

Volumen
BSA
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml

Concentracin
BSA
0.5 g/ml
1 g/ml
2.5 g/ml
5 g/ml
10 g/ml
20 g/ml

- Aadir a cada tubo 1 ml del Reactivo de Bradford, diluido 1/5. Mezclar por
inversin.
- Incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente.
- Traspasar el contenido del tubo en una cubeta de lectura. Mezclar por inversin y
secar las paredes con papel absorbente.
- Realizar la lectura a 595nm, utilizando el auto cero con agua miliQ/desionizada.
Anotar la absorbancia.
- Obtener la ecuacin de la recta de regresin.

Plataforma de Protemica
Parc Cientfic de Barcelona
Baldiri Reixac, 10-12
08028 Barcelona
Tel. 93 403 46 53
Fax 93 403 72 06
E-mail: pproteomica@pcb.ub.es
Web: http://www.pcb.ub.es/plataforma/proteomica

Cuantificacin de la muestra
- Si a priori no se dispone de una estimacin del contenido proteico de la muestra,
habr de preparar distintas diluciones a ms del extracto directo.
- Siguiendo el esquema anterior, introducir en la cubeta de lectura, el volumen de
muestra y ajustar con agua miliQ hasta 1 ml.
- Aadir 1 ml del Reactivo de Bradford, diluido 1/5. Mezclar por inversin y secar las
paredes con un trozo de papel.
- Incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente.
- Traspasar el contenido en una cubeta de lectura, mezclar por inversin y leer la
absorbancia a 595nm.
- Calcular el contenido proteico en la muestra a partir de la ecuacin de la recta patrn.

Se recomienda realizar por lo menos dos rplicas, tan por el clculo de la

corva patrn como para la cuantificacin de la muestra.

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