PROYECTO PRUEBA ANÁLISIS QUÍMICO

71_DF_WSC_PP_ANÁLISIS QUÍMICO_2018
Competencia Regional 2018

Elaborado por:
Experto Regional Diomer Hernán
Subjefe de expertos Frank Alberto Cuesta González

Proyectó: Diomer Hernan Aristizabal

Revisó: Frank Alberto Cuesta González 12/4/18 Página 1 de 5
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 Módulo 3
Título del DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES TOTALES EN PANELA
Proyecto UTILIZANDO EL METODO DNS POR ESPECTROFOTOMETRÍA UV -VIS

Tiempo máximo 5 horas

Puntos Máximos 40

Método DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES TOTALES EN PANELA

UTILIZANDO EL METODO DEL ACIDO 3,5 DINITROSALICILICO (DNS)
POR ESPECTROFOTOMETRÍA UV -VIS

1. Principio Químico

El método DNS (técnica de miller) es una técnica colorimétrica que emplea ácido 3,5
dinitrosalicílico para la hidrólisis de polisacáridos presentes en una muestra. Determina las
absorbancias por medio de un espectrofotómetro a 540nm en 1mg/ml. Esta técnica sirve para
cuantificar los azucares reductores producidos durante una fermentación o para cuantificar los
productos de una reacción enzimática. La curva de calibración es la representación gráfica en un
eje de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas: Y) frente a la Concentración (eje de
abscisas: X). Se debe preparar soluciones de concentración conocida y se determinan sus
absorbancias, construyéndose la curva de calibrado, que es una recta. La concentración de una
solución problema (desconocida), se averigua por interpolación de la Abs de la solución en la curva
de calibración, o a través de la ecuación de la recta (y = mx + b) donde: Absorbancia (y) =
constante (m) x concentración + absorbancia del blanco. Fundamento. El DNS reacciona
únicamente con los azúcares reductores. La sacarosa es un disacárido no reductor, pero tras su
hidrólisis en medio ácido se liberan glucosa y fructosa que sí son reductores y reaccionan con el
DNS generando un producto coloreado. La intensidad del color, que se puede medir por métodos
espectrofotométricos es proporcional a la concentración de sacarosa.

2. Materiales y equipos

Matraz aforado 50 mL (8)

Matraz aforado 100 mL (3)
Matraz aforado 250 mL (1)
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Vaso de precipitado 50 mL (3)
Vaso de precipitado 600 mL (1)
Vaso de precipitado 100 mL (2)
Pipeta aforada 10 mL (1)
Pipeta graduada 5 mL (2)
Pipeta graduada 1 mL (2)
Gotero (1)
Microespatula (1)
Espátula (1)
Agitador de vidrio (2)
Pipeteador de cremallera(1)
Frasco lavador (1)
Plancha de calentamiento con agitación
Equipo UV -VIS
Celdas de vidrio
Agitador magnético
Baño de María
Balanza analítica
Papel de arroz
Gradilla (1)
Tubos tapa rosca de 20 mL (10)

3. Reactivos

DNS (ácido 3,5 dinitrosalicilico)

Glucosa anhidra
Tartrato de sodio y potasio
Hidróxido de sodio

Procedimiento

Preparación de la muestra.
Para efectos de este ensayo, la muestra a analizar ha sido recibida a satisfacción según plan de
muestreo y cadena de custodia, requiere pesar 0,5 g de muestra de panela, disolver y completar a
100 mL con agua destilada en balón aforado.

Preparación de 50 mL de DNS (ácido 3,5 dinitrosalicílico):

1. Pese los reactivos en un vaso de precipitado de 150 mL, así 0,5 g de DNS, 15 g de tartrato de Na-
K y 0,8 g de NaOH

2. Disolver el NaOH en 20 mL de agua tipo III.

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3. Añadir en constante calentamiento y agitación el tartrato de Na-K lentamente, completar
volumen a 40 mL.
4. Añadir el ácido 3,5 dinitrosalicilico lentamente y dejar en constante agitación y reposo.
5. Transfiera cuantitativamente a un matraz aforado de 50 mL.
6. Lleve a un volumen con agua tipo III a 50 mL.
7. Homogenice por inversión, y rotule.

Preparación de 250 mL de solución madre de glucosa (10 mg Glucosa/mL) a partir de reactivo

sólido.
1. Realice los cálculos para preparar la solución indicada a partir de glucosa anhidra ( C6H12O6)
sólido seco.
2. Pese el reactivo en un vaso de precipitado de 100 mL.
3. Disuelva completamente en agua tipo I
4. Transfiera cuantitativamente a un matraz aforado de 250 mL.
5. Lleve a volumen con agua tipo III
6. Homogenice por inversión
7. Rotule.

Preparación de la curva de calibración

1. Realice los cálculos para preparar 50 mL de patrones a 0,2 mg/mL, 0,4 mg/mL, 0,6 mg/mL, 0,8
mg/mL 1,0 mg/mL, 1,2 mg/mL y 1,4 mg/mL.
2. Mida cuantitativamente los volúmenes requeridos a partir de solución patrón de glucosa.
3. Transfiera cuantitativamente los volúmenes requeridos a matraces aforados de 50 mL.
4. En tubos de ensayo adicione 0,5 mL de la solución patrón y 0,5 mL de la solución de DNS.
5. Lleve a baño de maría 100°C por 5 minutos.
6. Deje en reposo mínimo 10 minutos, a temperatura ambiente.
7. Adicione 10 mL de agua destilada tipo III.
9. Mida la absorbancia de cada patrón en un espectrofotómetro a 540 nm, ajustando el cero de
absorbancia con el blanco de reactivos.
10. Construya la curva de calibración “Absorbancia vs Concentración de Glucosa”.
11. Obtenga la ecuación de la recta pendiente.

Azucares reductores en panela. (Realice el ensayo por triplicado)

1. Pese 0,5 ± 0,0001 g de muestra en un vidrio de reloj (puede utilizar cuchillo para rayar).
2. Transfiera cuantitativamente a un vaso de precipitado de 50 mL.
3. Transfiera cuantitativamente a un matraz aforado de 100 mL.
4. Lleve a volumen con agua tipo III
5. Homogenice por inversión
6. Rotule.

Desarrollo de color en las muestras

1. Tome una alícuota de 0,5 mL de la muestra de panela en un tubo de ensayo.
2. Adicione 0,5 mL de la solución de DNS.
3. Lleve a baño de maría por 5 minutos a 100°C.
4. Deje en reposo mínimo 10 minutos, hasta temperatura ambiente.
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5. Adicione 5 mL de agua destilada.
6. Mida la absorbancia de las muestras en un espectrofotómetro a 540 nm.
7. Realice los cálculos correspondientes, expresando los resultados como % Glucosa (azúcar
reductor)
8. Realice el análisis estadístico de los resultados obtenidos, consígnelos en el formato entregado.

NOTA: Señor competidor si usted llega a la zona de balanzas y encuentra otro competidor debe
esperar (no se detiene el tiempo)

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