Práctica

DRA. JESSICA BORBOLLA VÁZQUEZ

EXTRACCIÓN Y ENSAYO DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Introducción

Investigar

Objetivos

• Comprobar la reacción sobre el peróxido de hidrógeno por acción de papaína y bromelina.

• Estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimática, como la temperatura, el pH, la
concentración del sustrato, de la enzima y la presencia de inhibidores.
• Analizar mediante un ensayo enzimático la degradación de forma controlada de proteínas.

Materiales y reactivos

• Tubos de ensayo 9 y gradilla

• 5 vasos de precipitado de 250 o 200 ml (Los disponibles)
• Mechero o parrilla
• Agitadores
• Mortero y pistilo
• Piña (PEDACITO)
• Papaya (PEDACITO)
• Cuchillo
• Solución de peróxido de hidrógeno (AGUA OXIGENEDA)
• Hielo
• 3- 5 huevos (clara)
• Bradford (Coomassie Brilliant Blue G-250, Etanol 95%, Ácido fosfórico 85% )
 Práctica
DRA. JESSICA BORBOLLA VÁZQUEZ

Procedimiento.

1) Macerar a 4°C con el mortero y pistilo trozos de papaya y piña o licuarla (clara de huevo como sustrato)
y vortex procurando adquirir una mezcla homogénea y en frio para evitar la acción de las enzimas.

2) Verter las claras de huevo en un vaso de precipitado diluir si es necesario por la viscosidad de esta con 10
ml de agua.
3) Preparar reactivo Bradford únicamente 50 mL. Preparar este reactivo por 3 equipos (estándar hacer
cálculos para volumen deseado: pesar 100 mg de Coomassie Brilliant Blue G-250 y disolver con 50 ml de
Etanol 95%. Agregar 100 ml del Ácido fosfórico 85% y llevar a un volumen final de 1 litro con el Agua
destilada).
4) Agregar el macerado en tubos independientes de extracto de papaya y en otros tubos de piña y etiquetarlos
de 1 al 3 respectivamente. En donde cada tubo contendrá 5 mL del respectivo extracto 2 mL clara de
huevo. Entonces tendremos 6 tubos 3 de extracto de papaya y 3 de extracto de piña cada uno con 2 ml. De
albumina de huevo.
5) En cada tubo se le agregará 3 ml, de peróxido de hidrógeno y se homogenizará gentilmente. Se dejará
incubar en hielo el tubo 1. El tubo 2 se ebullirá a 84 °C. Y el tubo 3 se dejará a temperatura ambiente. Se
incubarán por 15 minutos.

6) Trascurrido el tiempo de incubación se agregará el Bradford preparado previamente y se foto

documentará.

7) Realizar una curva patrón de proteínas con diferentes concentraciones de proteínas (practica pasada).

8) Realizar una curva patrón de proteínas con diferentes concentraciones de proteínas (practica pasada) y si
se cuenta con suficiente cantidad de enzima bromelina o papaína, agregar 1 ml a cada tubo y dejar incubar
a temperatura ambiente.

Resultados.

Tomar foto documentación de cada tubo y serie de estos. Así mismo, comparar los tratamientos con las distintas
condiciones ambientales. También se realizará un cuadro comparativo y descripción de cada tratamiento.

Discusión.

Con base en los resultados obtenidos se realizará una investigación bibliográfica de que sucede en cada caso bajo
esas condiciones ambientales y se discutirá con los datos obtenidos.

Conclusiones.

Claras y concisas.

Bibliografía.