FIJACION DEL CO2

INTRODUCCION

Descubrimiento del ciclo. Ciclo de Calvin. Fases carboxilativa, reductiva y

regeneradora. Regulación del ciclo de Calvin. Rutas metabólicas a partir
del ciclo de Calvin. Intercambio de sustancias entre cloroplasto y
citoplasma.

OBJETIVOS:

• Conocer el funcionamiento del ciclo fotosintético de reducción y

asimilación del CO2.
• Entender las rutas metabólicas que siguen los productos
foosínteticos.
• Razonar los procesos de regulación que permiten el correcto
funcionamiento del ciclo.

INTRODUCCION

La asimilación del CO2 tiene lugar en la denominada fase oscura

de la fotosíntesis. Es afótica indirectamente, no necesita luz para su
desarrollo pero si los intermediarios obtenidos en la fase luminosa, poder
asimilatorio, que son el ATP y poder reductor en forma de NADPH.
Los procesos implicados en la asimilación tienen lugar en el estroma de
los cloroplastos, mientras que la fase luminosa ocurre en la membrana
de los tilacoides.

El proceso global de conversión del CO2 en carbohidratos fue

descubierto por Calvin y Benson en 1949 y se le conoce como ciclo de
Calvin.

DESCUBRIMIENTO Y METODOLOGÍA DEL CICLO DE CALVIN

El mecanismo más frecuente para la fijación del CO2 fue

identificado por una serie de experimentos de Calvin, Benson y Bassham
en 1949, que llevaron al descubrimiento de los distintos pasos del
proceso global de conversión de CO2 en carbohidratos.
En 1949 se logró disponer de CO2 marcado radiactivamente con el
isótopo de 14C. Aquellos intermediarios que llevaban este isótopo
después de exponer la maquinaria fotosintética al 14CO2 se podían
detectar sensiblemente por su radiactividad. Se desarrolló también la
técnica de cromatografía en papel para separar los distintos
intermediarios, identificándolos por su migración comparándolos con
otros compuestos patrones en cromatografías paralelas. Al revelar estas
cromatografías en papel fotográfico sensible, se podía detectar la
radiación beta emitida por el 14C.
Cuando la exposición del material era muy breve, sólo aparecen
marcados radiactivamente los primeros intermediarios. A tiempos de
exposición más prolongados se marcan (Fig.1. Fig. 11-2) los sucesivos
intermediarios.
Calvin y colaboradores, usaron cromatografía bidimensional en papel
para separar los intermediarios. Realizaron los experimentos con el alga
Chlorella y a distintos tiempos de exposición al 14CO2. Tomaban
fracciones del cultivo líquido de Chlorella y las añadían a etanol al 80 por
100, hirviendo, con lo cual rápidamente mataban las células y paraban
el proceso fotosintético. Extraían los metabolitos intermediarios y
sometían el extracto a cromatografía. Al cabo de un minuto de
exposición, un gran número de productos se marcaban y cuando la
exposición era de sólo dos segundos, la mayor parte del marcaje
radiactivo aparecía sólo en el ácido 3-fosfoglicérico (3-PGA). Este era el
primer compuesto que resultaba de la incorporación del 14C del 14CO2 en
la materia orgánica.
Para conocer el precursor del 3-PGA sometieron el experimento a
ausencia de CO2 y se vio que en estas condiciones disminuía el marcaje
de 3-PGA pero aumentaba el de ribulosa-1,5-difosfato (RuDP) lo cual era
debido a que ésta no se podia transformar en 3-PGA al faltar CO2. Sin
embargo, si en lugar de suprimir el CO2, se sometía a periodos de
oscuridad (Fig.2. Fig.-10.4) ocurría lo contrario, desaparecía RuBP y
aumentaba 3-PGA. Como conclusión sacaron que era un proceso cíclico,
donde una molécula de CO2 se combinaba con una de 5 átomos de
carbono par dar 2 moléculas de 3 átomos de carbono, el 3-PGA. Al
prolongar el experimento en el tiempo, la mancha de radiactividad de 3-
PGA se hacía cada vez mayor, esto también implicaba que el proceso
era cíclico ya que cada vez había más carbonos marcados.
 Fig. 1. Consecuencias de las cromatografías en tiempos de Calvin

Fig. 2. Variación en las concentraciones de 3-PGA y de la RuBP en una suspensión de algas unicelulares
al apagar y encender la luz.

FUNCIONAMIENTO DEL CICLO DE CALVIN.

El ciclo de calvin básicamente se divide (Esquema 1) en tres

etapas:
• Fase de carboxilacion: unión del CO2 a la RuDP.
 • Fase de reducción.
• Fase de reorganización o regeneración de la RuDP.

La fijación del CO2 se produce en tres fases:

1.Carboxilativa: El CO2 se fija a una molécula de 5C, la

ribulosa 1,5 difosfato, formándose un compuesto inestable
de 6C, que se divide en dos moléculas de ácido 3
fosfoglicérico conocido también con las siglas de PGA

2.Reductiva:El ácido 3 fosfoglicérico se reduce a

gliceraldehido 3 fosfato, también conocido como PGAL
,utilizándose ATP Y NADPH.

3.Regenerativa/Sintética: Las moléculas de gliceraldehido 3

fosfato formadas siguen diversas rutas; de cada seis
moléculas, cinco se utilizan para regenerar la ribulosa 1,5
difosfato y hacer que el ciclo de calvin pueda seguir, y una
será empleada para poder sintetizar moléculas de glucosa (vía
de las hexosas), ácidos grasos, amoinoácidos... etc; y en
general todas las moléculas que necesita la célula.

Esquema 1. Resumen de las fases de fijación

Fase de carboxilacíon

Se produce la incorporación del CO2 a la RuDP. Este proceso esta

regulado por un enzima, la ribulosa-1,5-bifosfato carboxilasa/oxigenasa
(rubisco). Este enzima (Fig. 3) tiene un centro activo por el que compiten
el O2 y el CO2. Esta fase será carboxilasa preferentemente.
 RUBISCO

Fig. 3. Papel oxidativo y carboxilativo de RUBISCO

El CO2, catalizado por la rubisco, se incorpora a la RuDP de 5 átomos de

carbono generando una molécula de 6 átomos de carbono. Esta
molécula a través de un proceso específico da lugar a una molécula
hidratada que se hidroliza dando un fosfoglicerato (de 3 átomos de
carbono) y una molécula intermedia que por proteolización da lugar a
otro fosfoglicerato.

Fase de reducción.

Es igual que la glucolisis pero en sentido inverso. Hay una adición

de fosfato por una quinasa para pasar el 3-fosfoglicerato a 1,3-
bifosfoglicerato. Este paso tiene un gasto de energía de 1 ATP. El 1,3-
bifosfoglicerato se reduce a gliceraldehido-3-fosfato (GAP) catalizado por
una deshidrogenasa y consumiendo poder reductor en forma de NADPH.
De cada 6 moléculas de GAP, una es derivada a la síntesis de
carbohidratos y 5 participan en regeneración de RuDP.

Fase de reorganización o regeneración.

La finalidad de esta etapa (Fig.4) es volver a generar la RuDP. De
GAP se genera de nuevo el aceptor disponible para la próxima fijación
de CO2.
Fig.4. Fases del ciclo de Calvin y gasto de poder asimilatorio.
 REGENERACIÓN 6 RuDP + 6 H2O

6 CO2

6 ADP 6 ATP
12 Ácido 3-fosfoglicérico

12 ATP 12 ADP
6 Ribulosa 6-fosfato
12 Ácido 1,3-difosfoglicérico
FIJACIÓN
CARBOXILACIÓN
REDUCCIÓN
Ruta de las
12 NADPH 12 NADP+
Pentosas
fosfato 12 Gliceraldehido-3-fosfato

12 Pi

GLUCOSA

Fig. 5. Balance del ciclo.

REGULACIÓN DEL CICLO.

Durante la noche, el ATP y NADPH disminuyen pero no hasta

valores despreciables, ya que al llegar el día sería un gran gasto de
energía volver a iniciar el proceso. Siempre hay un nivel mínimo de ATP
Y NADPH en la oscuridad, que se producen por otros mecanismos. Así
pues, debe haber procesos de regulación específicos.

REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD RUBISCO.

Está formada (Fig. 6) por 8 subunidades grandes y 8 pequeñas.
Éstas están reguladas por el genoma nuclear y cloroplástico.
 Fig. 6. Organización de Rubisco

La cantidad de luz afecta vía fitocromo a la expresión de los genes del

cloroplasto que codifican a las subunidades grandes, que son las que
tienen los centros activos. El genoma nuclear regula a las pequeñas. El
ensamblaje de las subunidades y la expresión de los mensajeros están
regulados por luz incidente sobre el genoma nuclear o cloroplástico.
La actividad de la rubisco está controlada por luz debido, entre
otros motivos, a que el enzima necesita un pH óptimo ligeramente
alcalino y requiere Mg2+. El enzima se encuentra en el estroma y es allí
donde se produce una subida del pH, que activa a la RuDP carboxilasa,
producida por el transporte electrónico fotosintético activado por la luz.
Este transporte determina la entrada de protones al interior de los
tilacoides y va acompañado de una salida de Mg2+.
Para que la rubisco sea activa (Fig.7) debe sufrir una
carbamilación, tiene que tener carbamilado un residuo de lisina del
centro activo del enzima. La carbamilación está catalizada por una
activasa que requiere ATP y CO2. La carbamilación, para que se dé,
necesita elevadas concentraciones de CO2 y Mg2+ así como un pH
elevado, condiciones que se producen, precisamente, en presencia de
luz.
Fig.7. Regulación de Rubisco

REGULACIÓN DE OTROS ENZIMAS

La regulación de los enzimas que catalizan las reacciones

unidireccionales está asociada a la existencia de grupos tiol en este tipo
de enzimas. Esta activación se basa en la reducción a grupos –SH los
puentes disulfuro de los enzimas a activar (Fig. 8). Los electrones
necesarios proceden de una cadena de transporte, estos electrones son
excitados por la luz y proceden en último caso del agua. La luz hace
funcionar el transporte de electrones, la ferredoxina se reduce, ésta
mediante ferredoxina-tiorredoxina reductasa reduce a la tiorredoxina y
ésta a grupos –SH los puentes disulfuro del enzima. Así, el enzima
reducido será activado. La forma oxidada será inactiva.
Fig. 8. Regulación
de enzimas
asociadas
RUTAS METABÓLICAS A PARTIR DEL CICLO DE CALVIN.

En la Fig.9. Fig.10.14 se observan todas las salidas del

metabolismo fotosintético del carbono, asociadas todas al ciclo de
calvin. El transporte de electrones en los tilacoides proporciona ATP y
NADPH al ciclo de calvin o al mecanismo de fijación del CO2 en la
fotosíntesis de las C4. También proporciona reducción, vía tiorredoxin,
para la activación por luz de enzimas. Las triosas-P generadas en el ciclo
de calvin pueden ser utilizadas para la síntesis de productos, como
almidón en los cloroplastos o sacarosa en el citoplasma, esto genera
fosfato inorgánico, el cual es devuelto al cloroplasto para ser usado en la
fotofosforilación. El carbono es usado también para la respiración
mitocondrial o biosíntesis de ácidos grasos, aminoácidos, lípidos… vía
PEPcarboxilasa. La RuBP puede tener actividad oxigenasa,
produciendose así la fotorrespiración.
 Fig.9. Integración del metabolismo fotosintético del carbono en
hojas

SÍNTESIS DE SACAROSA Y ALMIDÓN.

Las triosas fosfato que se forman en el ciclo siguen distintas vías, o

bien la síntesis de sacarosa o bien la síntesis de almidón. Estas dos vías
ocurren en lugares distintos, la síntesis de sacarosa tiene lugar en el
citoplasma de la célula mientras que la síntesis de almidón ocurre en el
estroma del cloroplasto. La síntesis de ambos (Fig.10) es similar, solo
difieren en los dos últimos pasos.

Fig.10. Síntesis de sacarosa y almidón

SÍNTESIS DE SACAROSA.

La síntesis de sacarosa tiene lugar en el citoplasma de la célula,

por lo que la triosa fosfato es transportada al citoplasma a través de un
transportador de membrana interno denominado translocador de
fosfato. Su funcionamiento viene descrito en el apartado “Intercambio
de sustancias entre cloroplasto y citoplasma” que se expondrá a
continuación.
La sacarosa sirve para mantener energéticamente los procesos
metabólicos y además va a ser el vehículo de transporte de carbono
para tejidos o células no fotosintetizantes.
El transporte de triosas fosfato va a ser simultáneo con un
antitransporte de grupos fosfato. La presencia de grupos fosfato por
encima de concentraciones óptimas, tanto en el estroma como en el
citoplasma va a ser inhibidor de la biosíntesis de productos finales.

SÍNTESIS DE ALMIDÓN.

El exceso de triosas fosfato que no se utilizan en la síntesis de

sacarosa se convierten en almidón, que actúa como sustancia de
reserva. Esta síntesis y posterior almacenamiento tiene lugar en el
estroma del cloroplasto, donde se acumula durante el día para ser
movilizado y exportado por la noche. Así, el aporte de carbono reducido
al resto de la planta, se produce tanto de día como de noche.
En muchas plantas los polisacáridos de reserva se acumulan en
forma de fructanos y no de almidón. Estos fructanos resultan de
adiciones de residuos de fructosa a una molécula de sacarosa. Parece
ser que están asociadas a plantas que necesitan una resistencia al frío.

INTERCAMBIO DE SUSTANCIAS ENTRE CLOROPLASTO Y

CITOPLASMA
En el cloroplasto se encuentra transportadores de triosas que
permiten la intercomunicación entre el cloroplasto y el citoplasma. En el
estroma cloroplástico, se liberan triosas fosfato durante la fotosíntesis,
que son transportadas al citoplasma para la síntesis de sacarosa
mediante el translocador fosfato (Fig. 11). La síntesis de sacarosa
produce un fosfato inorgánico que es intercambiado con el cloroplasto
por una triosa fosfato destinada a la síntesis de sacarosa. Ese fosfato
puede ser usado en la fotofosforilación.
 Fig. 11. Funcionamiento del traslocador de fosfato de los cloroplastos

Todo lo descrito hasta ahora corresponde a plantas C3, ya que por la

fijación del CO2 en el ciclo de calvin se obtienen moléculas de tres
átomos de carbono.

BALANCE GLOBAL DEL CICLO

El balance global del ciclo hasta hexosas-fosfato nos da la reacción
global:

6CO2 + 6H2O + 18ATP + 12NADPH

hexosa-P + 12 H+ + 18 ADP + 17 Pi + 12 NADP+
 El coste de fijar 1 CO2 =3 ATP + 2NADPH.
 Se gastan 2 ATP y 2 NADPH en la fase de reducción por cada
molécula de CO2 fijado y 1ATP más en el último paso de la fase de
regeneración para de RuDP.

Jorge de la Rosa de Saa (2005-06)